掌握硫酸铵分级盐析的基本操作技术原理
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法The manuscript was revised on the evening of 2021蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼；绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀；还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长……幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。
本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。
-------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一我是超级蜘蛛精看我有劲儿不？冲啊，我是美国队而我是一只冷静的科研小蜗牛这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。
硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。
蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。
每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。
硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。
各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。
在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。
（1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液；例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH到。
生物化学实验 实验五 血清IgG粗品的制备
一、目的：
掌握盐析法分离蛋白质的基本操作。
二、原理：
蛋白质的分离纯化是一项十分重要的实验技术。 盐析法是经典的蛋白质沉淀分离方法之一，其原 理是利用中性盐类能破坏蛋白分子表面的水膜， 从而使蛋白质凝聚，并从溶液中沉淀析出。沉淀 不同蛋白质所需盐类的浓度不同。例如，50%饱 和的硫酸铵能使血清中的球蛋白沉淀，而33%饱 和的硫酸则使γ-球蛋白沉淀。因此，可根据所要 分离的蛋白质，选择不同饱和度的硫酸铵溶液进 行盐析。用硫酸铵分级盐析蛋白质时，盐析出某 种蛋白质成分所需的硫酸铵浓度一般以饱和度来 表示。实际工作中将饱和硫酸铵溶液的饱和度定 为100％。盐析某种蛋白质组分所需硫酸铵数量 折算成100％饱和度的百分之几，即称为该蛋白 盐析的饱和度。
沉淀用0.4 ml PBS溶解，再滴加饱和硫酸 铵溶液0.4 ml, 冰上静置10 min，使之充分 盐析，以5000 r/min离心5 min，去掉上 清液，沉淀为IgG粗品，加0.5 ml PBS。20℃保存备用。
五、结果及பைடு நூலகம்析
1、盐析沉淀蛋白变性了吗？可以重新溶解 吗？
2、样品为什么放在冰上？
磷酸盐缓冲溶液(Phosphate-buffered saline, PBS)：NaH2PO4-H2O 0.256 g、Na2HPO4-7H2O 2.248 g、NaCl 8.76 g，加蒸馏水至1000 ml，pH7.3。
四、步骤：
取血清0.4 ml，滴加饱和硫酸铵0.4 ml，注 意边加边混合，以防止硫酸铵局部过饱和。 混合时不要过于剧烈，以免导致蛋白质变性。 冰上静置10 min，使之充分盐析，以5000 r/min离心5 min，去掉上清液，沉淀为IgG 及杂蛋白。
硫酸铵分级沉淀原理及实验方案
一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。
各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
掌握硫酸铵分级盐析的基本操作技术原理
材料用具
鲜牛奶
醋酸钠、优级纯醋酸、95%乙醇、乙醚、蒸馏水、0.2mol/L pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液其配制如下： ①配A液：0.2mol/L醋酸钠溶液，称NaAc· H2O 5.44g 溶至200ml。 ②配B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优级纯醋酸2.4g溶 至200ml。 ③取A液约17.7ml，B液约12.3ml混合，用酸度计调得 pH 4.7醋酸-醋酸钠缓冲液30ml。
（三）pH
有机溶剂沉析时适宜的pH，要选择在样品稳定 的pH范围内，而且尽可能选择样品溶解度最低 的pH，通常是选在等电点附近，以提高该沉析 的分辨能力。但应注意的是有少数生物分子在 等电点附近不稳定，影响其活性；同时尽量避 免目的物与杂质带相反电荷而加剧共沉现象的 发生。
（四）离子强度
在有机溶剂和水的混合液中，当离子强度很小， 物质不能沉析时，补加少量电解质即可解决。 盐的浓度太大(0.1～0.2mol／L以上)，就需大量 的有机溶剂来沉析，并可能使部分盐在加入有 机溶剂后析出。同时盐的离子强度达一定程度 时，还会增加蛋白质或酶在有机溶剂中的溶解 度。所以一般离子强度在0.05或稍低为好，既 能使沉析迅速形成，又能对蛋白质或酶起一定 的保护作用，防止变性。
操作方法
等 电 点 沉 析 制 备 酪 蛋 白
5、在沉淀中加入20ml乙醇，搅拌片刻。 将全部的悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。 用乙醇-乙醚混合液洗沉淀2次。最后用 乙醚洗沉淀2次，抽干。 6、将沉淀摊开在表面皿上，风干得酪蛋 白纯品。 7、准确称量，计算含量和收率。 含量=酪蛋白g/100mL牛乳
有机溶剂沉析的应用
（一）有机溶剂沉析的特点
优点：分辨能力比盐析高,即一种生物分子或其他溶质只 在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉析；沉析不用脱 盐，过滤比较容易。 缺点：是某些具有生物活性的大分子容易引起变性失活， 操作需在低温下进行。
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法
蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析之袁州冬雪创作还能想起那些在荧屏中曾震撼过我们，具有超才能的英雄么？蜘蛛侠，火速，矫捷迅速飞流直下，忽闪直冲高楼；绿伟人浩克，力气，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀；还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长……幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物布景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即即是相同的实验步调，每一个人做出来的成果也不尽相同，不同在哪？反复操练，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超才能”吧.本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步调，供大家参考.-------锻炼属于我们自己的实验“超才能”之一我是超等蜘蛛精看我有劲儿不？冲啊，我是美国队长而我是一只岑寂的科研小蜗牛这次，我们所要分享的即是一种很罕见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧.硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常常使用的纯化和稀释蛋白的技术.蛋白质的溶解度和盐浓度紧密亲密相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的连系蛋白概况的水分子，破坏蛋白概况的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下堆积形成沉淀.每种蛋白质的溶解度分歧，因此可以用分歧浓度的盐溶液来沉淀分歧的蛋白质.硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会连系大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，别的，其温度系数小，不容易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采取层析技术进一步纯化蛋白，效率更高.硫酸铵沉淀法是常常使用的分离免疫球蛋白的方法.各种分歧蛋白质盐析需要分歧浓度的硫酸铵溶液.在实验中建议配置分歧梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度.（1）参照如下表格配置分歧浓度的硫酸铵溶液；例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH到7.0.（2）沉淀蛋白将样品离心，去除沉淀，保存上清液并丈量体积；一边搅拌一边渐渐的加入硫酸铵.接着，将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 h，或者4 ℃，搅拌过夜，使蛋白质充分沉淀.加入硫酸铵有两种方式，一种是直接加入硫酸铵固体，在操纵上速度缓慢，不容易太快，否则会造成蛋白变性；另外一种方式是加入饱和的硫酸铵液体，但若需要较高浓度的硫酸铵溶液，需要加入较大体积的饱和硫酸铵溶液，在后续实验操纵中，因蛋白质上清液和硫酸铵饱和溶液的体积之和过大，离心机无法离心，因此根据需要加入的硫酸铵饱和溶液的体积选择合适的方法.别的，每种蛋白质沉淀所需要的硫酸铵溶液的浓度也分歧，因此在每次实验中应该做好观察记录，积累经历值.分享来自网上的一种简单的方法来估计蛋白沉淀所需要的硫酸铵溶液的浓度范围，供大家参考：将蛋白质溶液分成5份，每份分别加入硫酸铵至浓度分别为20%、30%、40%、50%、60%，离心，弃蛋白质沉淀，留取上清，再向上清液中加入硫酸铵，使得浓度从原先的20%升高到30%，30%的浓度升到40%，40%的浓度升为50%.......，离心保存沉淀，分析沉淀中是否含有目标蛋白，以此确定沉淀目标蛋白所需要的最佳硫酸铵溶液的浓度.（3）透析除去硫酸铵将蛋白质溶液离心沉淀，弃上清保存沉淀.加入10-20 ml的PBS-叠氮化钠溶液溶解蛋白质，叠氮化钠不于蛋白质反应，但能防止蛋白质变性.蛋白沉淀溶解之后，放入透析袋中透析24-48 h，每隔5 h 更换透析液除去硫酸铵.收集透析液，离心，测定上清中蛋白质的含量.友情提示：成长中的实验达人：从未犯错的人，从未试图创新.--------爱因斯坦所以做好详细的实验步调，实验成果的分析，不竭测验测验，不竭总结吧.。
硫酸铵盐析
硫酸铵盐析1.盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，溶液pH值越接近蛋白的等电点，蛋白质越容易沉淀。
2.盐析一般用的硫酸铵，容易吸潮，因而在使用前，一般先磨碎，平铺放入烤箱内60摄氏度烘干后再称量，这样更准确。
3.在加入盐时应该缓慢均匀，搅拌也要缓慢，越到后来速度应该更注意缓慢，如果出现一些未溶解的盐，应该等其完全溶解后再加盐，以免引起局部的盐浓度过高，导致酶失活。
4.盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。
3.5为了避免盐对酶的影响，一般脱盐处理后再测酶活性。
5.盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理，以免变性，透析较慢，一般可用超滤或者G-25，G-50 处理。
6.一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸铵浓度在70%左右。
盐析法①原理：盐析法对于许多非电解质的分离纯化都是适合的，也是蛋白质和酶提纯工作应用最早，至今仍广泛使用的方法。
其原理是蛋白质、酶在低盐浓度下的溶解质随着盐液浓度升高而增加（此时称为盐溶）；当盐浓度不断上升时，蛋白质和酶的溶解度又以不同程度下降并先后析出，称为蛋白质的盐析。
这一现象是由于蛋白质分子内及分子间电荷的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，由于盐类离子与水分子对蛋白质分子上的极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。
但盐浓度增加到一定程度时，蛋白质表面的电荷大量被中和，水化膜被破坏，于是蛋白质就相互聚集而沉淀析出。
盐析法就根据不同蛋白质和酶在一定浓度的盐溶液中溶解度降低程度的不同而达到彼此分离的方法。
②盐的选择：蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。
其中应用最广的是硫酸铵，其优点是温度系数小而溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L,即767g/L;0℃时饱和溶解度为3.9mol/L，即676g/L），在这一溶解度范围内，许多蛋白质和酶都可以盐析出来，而且硫酸铵价廉易得，分段效果比其他盐好，不容易引起蛋白质变性。
应用硫酸铵时，对蛋白氮的测定有干扰，缓冲能力比较差，故有时也应用硫酸钠，如盐析免疫球蛋白，用硫酸钠的效果也不错，硫酸钠的缺点是30℃以上溶解度太低。
硫酸铵沉淀原理
硫酸铵沉淀原理
硫酸铵沉淀法的基本原理:这是一种从大量粗制品中提取并部分提纯蛋白质的方法。
主要是通过将免疫球蛋白从试样中分离，通常采用的方法是：高浓度的盐离子蛋白溶液和蛋白质的水分子发生竞争，导致其水和蛋白质分子减弱，通过溶解度从溶液沉淀出来。
因不同的蛋白质溶解度相同，所以用相同的盐溶液进行沉淀，称为盐析。
盐的含量一般用饱和度来表示，而硫酸铵由于具有较高的溶解度，较低的温度系数，容易引起蛋白的变性，因此得到广泛的应用。
硫酸铵分级沉淀的原理【硫酸铵分级沉淀原理及实验方案】
硫酸铵分级沉淀的原理【硫酸铵分级沉淀原理及实验方案】一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。
用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。
乳酸盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从氢氧化钠中沉淀出来。
各种脂肪酸的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来氢氧化钾沉淀不同的蛋白质。
这种方法称之为盐析。
盐浓度通常用饱和度来表示。
硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使弯果而应用最为广范。
二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清成品或腹水等2. 硫酸铵（ NH 4 ） SO 43. 饱和硫酸铵溶液（ SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含 0.2g /L 叠氮钠 )6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养选种上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。
各种不同的免疫球蛋白所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。
通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为 33% — 50% 。
（一）配制饱和硫酸铵溶液（ SAS ）1.将 767g （ NH 4 ） 2 SO 4 边蒸馏边慢慢加到 1 升蒸馏水中。
用氨水或硫酸吴萸到硫酸pH7.0 。
此即饱和度为 100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 ° C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的酿制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′ g 离心 30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.烘烤边搅拌边慢慢加入等体积的 SAS 到上清液中，终浓度为1 ： 1 （4.将溶液磁力放在磁力搅拌器上所搅拌 6 小时或搅拌过夜（ 4 °C ），使大分子充分沉淀。
（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′ g 离心 30 min （4 ° C ）。
弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（ 10-20ml ） PBS -0.2g /L 叠氮钠中。
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影响有机溶剂沉析的因素
（一）温度 大多数生物大分子如蛋白质、酶和核酸在有机 溶剂中对温度特别敏感，温度稍高就会引起变性， 且有机溶剂与水混合时产生放热反应，因此有机 溶剂必须预先冷至较低温度，一般在0℃以下，操 作时要在冰盐浴中进行，加入有机溶剂必须缓慢， 并不断搅拌以免局部浓度过浓。温度越低，得到 的生物活性物质越多，而且可以减少有机溶剂的 挥发。
（二）盐析的主要应用
盐析是最早使用的生化分离技术之一，由于易产 生共沉作用，故其分辨率不是很高，但配其他手段 完全能达到很好的分离效果。由于成本低，操作安 全简单，对许多生物活性物质具有很好的稳定作用， 常用于蛋白质、酶、多肽、多糖、核酸等物质的分 离纯化。
二、有机溶剂沉析
原理
（一）亲水性有机溶剂本身的水合作用降低了 自由水的浓度，使溶质分子周围的水化层变薄， 导致脱水而相互聚集析出，也就是降低了溶质 的溶解度。 （二）有机溶剂的介电常数比水小，加入有机 溶剂后，整个溶液的介电常数降低，带电的溶 质分子之间库仑引力增强，使溶质分子相互吸 引而聚集。
第四章 沉淀分离技术
• 盐析 • 有机溶剂沉析
• 等电点沉析 • 有机聚合物沉析 • 其他沉析技术
一、盐析 原理
• 溶液加入高浓度中性盐后，盐离子与生物分子表 面的带相反电荷的离子基团结合，中和了生物分子 表面的电荷，降低了生物分子与水分子之间的相互 作用，生物分子表面水化膜逐渐被破坏，当盐浓度 达到一定的限度时，生物分子之间的排斥力降到很 小，此时生物分子很容易相互聚集，在溶液中的溶 解度降得很低，从而形成沉淀从溶液中析出。 • 产生盐析的另一个原因是大量盐离子自身的水合 作用降低了自由水的浓度，使生物分子脱去了水化 膜，暴露出疏水区域，由于疏水区域的相互作用， 使其沉淀析出。
2、加盐的方法
（1）直接加入固体硫酸铵法
（2）加入饱和硫酸铵溶液法
3、盐析操作注意事项 （1）盐析反应完全需要一定时间，一般硫酸 铵全部加完后，应放置30min以上才可进行固液分离。 （2）经过一次分级得到的盐析沉淀，能否进 行第二次盐析要靠试验确定。 （3）盐析操作时加入盐的纯度、加量、加入 方法、搅拌的速度、温度及pH等参数应严格控 制。
（四） pH值 在盐析时，如果要沉析某一成分，应将溶 液的pH值调整到该成分的等电点，如果希望 某一成分保留在溶液中不析出，则应使溶液 的pH值偏离该成分的等电点。 （五）温度 多数物质的溶解度会受温度变化的影响。
盐析的操作与应用
（一）盐析的操作
1、盐的处理 硫酸铵使用时要求纯度较高，生产 时为降低成本，一般选用化学纯的硫酸铵，在使 用前应进行预处理，可通过化学法将重金属除去 （如通入H2S后过滤），再将硫酸铵重结晶备用。
有机溶剂沉析的应用
（一）有机溶剂沉析的特点
优点：分辨能力比盐析高,即一种生物分子或其他溶质只 在一个比较窄的有机溶剂浓度范围内沉析；沉析不用脱 盐，过滤比较容易。 缺点：是某些具有生物活性的大分子容易引起变性失活， 操作需在低温下进行。
（二）应用
有机溶剂沉析技术经常用于蛋白质、酶，多糖 和核酸等生物大分子的沉析分离。使用时先要 选择合适的有机剂，然后注意调控样品的浓度、 温度、pH和离子强度，使之达到最佳的分离效 果。沉析所得的固体样品，如果不是立即溶解 进行下一步的分离，则应尽可能抽干沉析物， 减少其中有机溶剂的含量，如若必要可以装透 析袋透析脱除有机溶剂，以免影响样品的生物 活性
（五）金属离子
在用有机溶剂沉析生物高分子时还应注意到某 些金属离子的助沉作用，一些金属离子如Zn2+、 Ca2+等可与某些呈阴离子状态的生物高分子形 成复合物。这种复合物的溶解度大大降低而不 影响生物活性，有利于沉析形成，并降低有机 溶剂的耗量，0.005～0.02mol／L的Zn2+可使有 机溶剂用量减少l／3至1／2,使用时要避免会与 这些金属离子形成难溶盐的阴离子(如磷酸根) 的存在。
影响盐析的因素
（一）盐离子浓度 在低盐浓度时，盐离子能增加生物分子 表面电荷，使生物分子水合作用增强，具 有促进溶解的作用，称盐溶现象。当盐浓 度达一定值后,盐浓度升高，生物分子溶解 度不断降低,产生了盐析作用,不同的生物分 子，“盐溶”与“盐析”的分界值不同。
（二）生物分子种类 生物分子的分子结构不同，其分子表面亲水基 团与疏水基团不相同，不同生物分子产生盐析现 象所需中性盐的浓度（离子强度）亦不同。 （三）生物分子浓度 溶液中生物分子的浓度对盐析的效果有很大的 影响，要得到理想的沉析效果，必须将生物分子 的浓度控制在一定的范围内。一般对于蛋白质溶 液，其浓度为2%～3%比较合适。
（二）生物样品的浓度
与盐析相似，样品浓度低时增加有机溶剂投入量 和损耗，降低了溶质回收率，易产生稀释变性， 但共沉的作用小，有利于提高分离效果。反之， 对于高浓度的生物样品，节省了有机溶剂，减少 了变性的危险，但共沉作用大，分离效果下降。 一般认为，对于蛋白质溶液0.5%～2%起始浓度 较合适,对于粘多糖以1%～2%为起始浓度为宜。
（三）pH
有机溶剂沉析时适宜的pH，要选择在样品稳定 的pH范围内，而且尽可能选择样品溶解度最低 的pH，通常是选在等电点附近，以提高该沉析 的分辨能力。但应注意的是有少数生物分子在 等电点附近不稳定，影响其活性；同时尽量避 免目的物与杂质带相反电荷而加剧共沉现象的 发生。
（四）离子强度
在有机溶剂和水的混合液中，当离子强度很小， 物质不能沉析时，补加少量电解质即可解决。 盐的浓度太大(0.1～0.2mol／L以上)，就需大量 的有机溶剂来沉析，并可能使部分盐在加入有 机溶剂后析出。同时盐的离子强度达一定程度 时，还会增加蛋白质或酶在有机溶剂中的溶解 度。所以一般离子强度在0.05或稍低为好，既 能使沉析迅速形成，又能对蛋白质或酶起一定 的保护作用，防止变性。
（4）盐析时生物分子浓度要合适，应充分考虑共 沉及稀释后收率、盐量和固-液分离等问题。一般 低浓度硫酸铵可采用离心分离，高浓度硫酸铵常 用过滤方法，因为高浓度硫酸铵密度太大，要使 蛋白质完全沉降下来需要较高的离心速率和较长 的离心时间。 （5）盐析后溶液应进行脱盐，常用的办法有透析、 凝胶过滤及超滤等。