水中细菌总数的检测
平板菌落计数法水中微生物的检测
2、由于细菌易吸附玻璃器皿表面，菌液加入后应 尽快倒培养基，立即摇匀；
3、倾注平板时的培养基温度冷却至45℃左右。 4、计数时，30―300个菌落的稀释度计算每毫升
的菌数最为合适 5、同一稀释度的三个重复的菌数不能相差很悬殊
菌落计数方法及原则：
1）若只有一个稀释度的平均菌落数在30-300范围 时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。
2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在 30~300之间，则视二者之比值来决定，若 其比值小于2应报告两者的平均数。若大于 或等于2则报告其中较小的菌落总数。
3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300， 则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释 倍数报告之
水中细菌总数的测定
——平板菌落计数法
一、细菌总数测定的意义
水中细菌总数往往同水中有机物污染的程度呈 正相关，它是评价水质污染程度重要指标之一
细菌总数：指水样在一定条件下培养后，1mL水样 所含菌落的总数。
我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细 菌总数不得超过100个/ml
含细菌10-100个/ml的水体为极清洁
代表性：多采几个部位，液体样品需经过震摇，以 获得均匀稀释液。
2 水样的10倍稀释
第一步 稀释 水样 第二步： 接种平板
注意：稀释 度的选择
平板混合分离法： 将菌液分离样品摇匀，用无菌移液管取1 ml的
菌液移至无菌培养皿中，然后将融化，凉至45℃ 左右的培养基，在每个培养皿内各倒入约15 ml， 摇匀，凝固，制成平板。
4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀 释倍数报告之
水质检测菌落总数标准
水质检测菌落总数标准水质检测菌落总数标准水质检测是保障人民饮用水安全的重要手段，而菌落总数是其中一个重要的指标。
菌落总数是指在一定体积的水样中，培养基上生长出的菌落总数。
在水质检测中，菌落总数可以反映出水中微生物的数量，进而评估水质卫生状况。
因此，菌落总数标准的制定对于保障人民饮用水安全至关重要。
目前，我国对于不同用途的水质标准都有相应的规定，其中菌落总数标准也有所不同。
以下是我国常见的几种用途的水质标准中菌落总数的要求：1. 饮用水对于饮用水，我国规定菌落总数不得超过1000CFU/mL。
这是因为饮用水是人们直接饮用的水源，如果其中微生物数量过多，可能会对人体健康造成影响。
2. 洗浴用水对于洗浴用水，我国规定菌落总数不得超过5000CFU/mL。
洗浴用水是人们接触最多的一种水源，如果其中微生物数量过多，可能会对皮肤造成刺激和影响。
3. 工业用水对于工业用水，我国规定菌落总数不得超过20000CFU/mL。
工业用水通常用于生产过程中的冷却、清洗、输送等环节，如果其中微生物数量过多，可能会影响生产效率和产品质量。
4. 农业用水对于农业用水，我国规定菌落总数不得超过100000CFU/mL。
农业用水通常用于灌溉和养殖等环节，如果其中微生物数量过多，可能会影响农作物生长和动物健康。
需要注意的是，不同地区、不同场所对于菌落总数标准的要求也有所不同。
例如，在一些敏感地区或特殊场所（如医院、食品加工厂等），对于菌落总数的要求可能会更加严格。
因此，在进行水质检测时，需要根据具体情况制定相应的菌落总数标准。
除了菌落总数外，还有其他一些指标也可以反映出水质卫生状况，如大肠杆菌、氨氮、亚硝酸盐等。
因此，在进行水质检测时，需要综合考虑多种指标，以全面评估水质卫生状况。
总之，菌落总数标准是保障人民饮用水安全的重要手段之一。
在制定和执行标准时，需要根据具体情况进行调整和优化，以确保水质检测能够更好地服务于人民群众的健康和生活。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
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水质 细菌总数的测定
水质细菌总数的测定
水质是指水中所含有的各种物质的性质和数量，其中包括细菌总数。
细菌总数是指水中细菌的数量，是评价水质的重要指标之一。
细菌总数的测定可以反映水中细菌的污染程度，为保障人们的健康提供了重要的依据。
细菌是一类微生物，它们广泛存在于自然界中，包括水体中。
有些细菌对人体有害，如致病菌，会引起各种疾病。
因此，水中细菌总数的测定对于保障人们的健康至关重要。
测定水中细菌总数的方法有多种，其中最常用的是培养法。
培养法是将水样放入含有营养物质的培养基中，使细菌在培养基上生长繁殖，然后通过计数器或显微镜等设备进行计数。
这种方法简单易行，但需要一定的实验室设备和技术。
除了培养法外，还有一些快速检测方法，如流式细胞术、荧光定量PCR等。
这些方法可以快速准确地测定水中细菌总数，但需要更高的实验室设备和技术。
水中细菌总数的标准是由国家制定的，不同的水质标准对细菌总数的要求也不同。
例如，生活饮用水的细菌总数标准为1000个/mL 以下，而游泳池水的标准为200个/mL以下。
如果水中细菌总数超过标准，就说明水质存在问题，需要采取相应的措施进行处理。
维护水质是保障人们健康的重要措施之一。
通过测定水中细菌总数，
可以及时发现水质问题，采取相应的措施进行处理，保障人们的健康。
因此，对于水质的监测和管理，应该引起足够的重视。
实验10 水中细菌总数的测定
一、目的要求
❖ 学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的 方法；
❖ 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。
二、实验材料
❖ 水样 ❖ 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 ❖ 1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等
饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总 数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升 水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后 所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的 总菌数不得超过100个。
三、基本原理
❖ 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一 个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉眼可见的子 细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计 数方法。
❖ 将样品进行不同稀释，使微生物分散并以单细胞 存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养 后，每一个活细胞即能形成一个菌落。统计菌落 的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算 出样品中的含菌数。
❖ 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入 融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml， 置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而 又不使培养基荡出或溅到皿盖上。
❖ 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养 24h。
❖ 菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。
若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数。
水 中 细 菌 总 数 的 检 测
水中细菌总数的检测一、试验的目标请求1.进修并控制水的细菌学检测办法2.懂得水质状态与细菌数目在饮用水检测中的重要性.二.试验道理细菌总数是指1ml水样在养分琼脂造就基中,于37℃经24h造就后,所发展的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染程度的重要卫生指标.我国现行的生涯饮用水尺度磨练办法GB5750—85划定水样中细菌总数测定是1ml水样在通俗养分琼脂造就基中37℃经24小时造就所发展的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多解释水被生涯放弃物污染,但不克不及解释污染的起源.是以必须联合总大肠菌群数来断定水污染的起源和安然程度.本试验运用平板计数技巧测定水中细菌总数.因为水中细菌种类繁多,它们对养分和其他发展前提的请求不同很大,不成能找到一种造就基在一种前提下,使水中所有的细菌均能发展滋生,是以,以必定的造就基平板上发展出来的菌落,盘算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.今朝一般是采取通俗牛肉膏蛋白胨琼脂造就基.平板菌落计数法的长处：能测出样品中的活菌数.此法经常运用于某些成品和生物成品检定以及食物.水源的污染程度的检定等.缺陷：手续较繁,并且测定值常受各类身分的影响.生涯饮用水细菌卫生尺度我国饮用水卫生尺度：≤ 3个大肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三.试验仪器和材料1.高压蒸汽灭菌锅.恒温箱.冰箱.无菌接种间.2.消毒酒精.消毒水.3.试管.三角瓶.平皿.刻度吸管.涂布器等（试验前包扎灭菌处理好备用）4.造就基蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备办法：按照现实的须要量,按上述配方称取各成分混杂后,加热消融,调剂pH为,,分装于玻璃容器中,用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min,倒制成平板后储存于冷处备用.5.水样：自来水.中水.四.试验内容：（一）.造就基的制备：试验前事先预备好造就基平板（办法见上）,每小组2-4个平板.（二）.取水样：1.自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭,再用酒精灯火焰灭菌,打开龙头放水1-2分钟,用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2.纯清水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后,先放走部分水,再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3.池水.河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中掏出,最好立刻检讨,不然需放入冰箱中保管.（三）.接种造就：（请求无菌操纵）用无菌吸管汲取1毫升水样,参加平板中（每个水样平行做两个平板）,用无菌涂布器涂抹平均,在造就皿正面标注清晰后,置于37℃恒温箱内经24h-48小时造就后,统计细菌菌落的总数.（四）.菌落记数：菌落计数及陈述办法作平皿菌落计数时,可用眼睛直接不雅察,须要时用放大镜检讨以防漏掉.在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步盘算时运用.在求同稀释度的平均数时,若个中一个平皿有较大片状菌落产生时,则不宜采取,而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数散布又很平均,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五.试验留意事项六.试验陈述内容;1.记载试验办法和步调.2.列表解释检测成果.（1）自来水（2）饮用水3.思虑题：（1）从自来水的细菌总数成果来看,是否合乎饮用水的尺度？（2）你所测的水样污秽程度。
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建筑
水中细菌总数的检测
1.实验目的
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数 standard plate-count bacteria
水样在营养琼脂上、有氧条件下 37°C培养 48 h后，所得 1 mL水样所含菌落的总数。
细菌
总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污
因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
染。
由于结果不能说明污染的来源，
3.培养基与试剂
2.1营养琼脂成分
2.2制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。
），经 10
3.43 kPa（121°C,15 lb）湿热灭菌 20 min，储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料
仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。
材料：灭菌平皿（直径 9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、
试管架等。
放大镜或菌落计数器、 pH计或精密 pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集
自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水 3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。
纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水
样 200毫升。
地表水的取样：应取距水面10— 15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸
入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，
最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤
生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取 1 mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约 15 ml已融化并冷却到 45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋
摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，
同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。
待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36°C±1° C条件下连续培养 48 h，进行菌
落计数，即为 1 ml水样中的菌落总数。
水源水：以无菌操作方法吸取 1 ml充分混匀的水样，注入盛有 9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈 1:10稀释液。
吸取 1:10稀释液 1 ml，注入盛有 9 ml灭菌生理盐水的试管中，混匀呈1:100稀释液。
按同
法依次稀释成 1:1000、1:10000稀释液备用。
如此递增稀释一次，必须更换一支刻度吸管。
用灭菌吸管吸取 1 ml未稀释的水样和 2~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌培养皿内，
建筑
其余操作同 6.1生活饮用水的 检验步骤。
7.菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。
在记下各平皿的
菌落数后，应求出同稀释度的 平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的 平均数时， 若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，
则不宜采用，而应以无片状菌落产生的 平皿作为该 稀释度的 平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的 一半， 而其余一半中菌落数分布又很均匀， 则 可将此半皿计数后乘
的 选择及报告方法
2以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的 平均菌落数。
不同稀释度 首先选择平均菌落数在 30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的 平均菌落数符合此范
1中实例 1）。
围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表
若有两个稀释度，其生长的 菌落数均在
30~300之间，则视二者之比值来决定：若其比值小
于 2，应报告两者的 平均数（如表 1实例 2）；若比值大于 2，则报告其中稀释度较小的 菌 落数（如表 1实例 3）。
若等于 2亦报告其中稀释度较小的 菌落数（见表
1实例 4）。
若所有稀释度的 平均菌落数均大于
300，则应按稀释度最高的 平均菌落数乘以稀释倍数报告 30，则应按稀释度最低的 平均菌落数乘以稀释倍数报告 之（见表 1中实例 5）。
若所有稀释度的 平均菌落数均小于
之（见表 1中实例 6）。
3
若所有稀释度的 平均菌落数不在
30~300之间，则应以最接近 30或 300的 平均菌落数乘以 稀释倍数报告之（见表 1中实例 7）。
若所有稀释度的 平板上均无菌落生长，则以“未检出”报告之。
如果所有平板上都菌落密布，不要用“多不可计”报告，而应在稀释度最大的 平板上，任 意数其中 2个平板 1 cm2中的 菌落数，除 2求出每平方厘米内平均菌落总数， 63.6 cm2，再乘以其稀释倍数报告之。
100以内时，按实有数 报告；大于 100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的 数值，以四舍五入法计算； 10的 指数来表达（见表 1“报告方式”列。
）
8.生活饮用水卫生标准规定：菌落总数不超过 100 CFU/ml 。
乘以皿底面积 菌落计数的 报告：菌落数在 为了缩短后面的 零数，也可以用
建筑
列表说明检测结果。
（ 1）自来水
（2）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？。