水中细菌总数的检测
微生物综合性实验__水中细菌总数的测定
微生物综合实验水中细菌总数的测定一、实验目的1．学习水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。
2．了解和掌握平板菌落计数的原则。
3．复习、巩固微生物实验的各单元操作。
二、实验原理水中细菌总数的测定是进行水质检验的必要项目之一，主要作为判定饮用水、水源水、地表水等被污染程度的标志。
本试验采用平板菌落计数技术来测定水中的细菌总数。
该法是根据在固体培养基上所形成的菌落来进行计数。
菌落总数是指在一定条件下，1 mL水样所生长出来的细菌菌落的总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其它生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基和在一种条件下，使水中的所有细菌均能生长繁殖，因此，这种方法所得到的结果只是一种近似值。
目前一般采用营养琼脂培养基，在需氧条件下，37℃培养36-48 h，所得到的细菌绝大部分是腐生性的嗜中温性需氧菌和兼性厌氧菌。
三、实验材料1．检样：矿泉水等饮用水、河水、湖水、井水等。
2．培养基：营养琼脂培养基（附录Ⅱ-1.3）3．仪器与其它用具：三角烧瓶，广口瓶，吸管，培养皿，试管，培养箱等。
四、实验步骤1. 水样的采集与处理⑴饮用水：采样前，先用酒精棉球擦拭瓶口灭菌，以灭菌移液管或移液枪取水样。
⑵河水、湖水、池水：应取距水面10 cm~15 cm的深层水样。
先将已灭菌的带玻璃塞的广口瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来使瓶口向上，拔去瓶塞，待水盛满后，将瓶塞盖好，再将瓶子从水中取出。
在一定深度采水样时，需要用特制的采水器（图14-14）。
采水器是一金属框，内装玻璃瓶，其底部装有重沉坠，可按需要坠入一定深度。
瓶盖上系有一绳索，拉吊绳索即可打开瓶盖，待水样瓶中水盛满后，放松绳索，即自行盖上瓶盖。
水样采集后，将水样瓶取出，并立即用无菌棉塞或灭菌胶塞塞好瓶口，以备检验。
水样采集后应立即检验，如需要保存或运送，应采取冰镇措施，但一般要求不得超过4 h。
图14-14 采水器1-开瓶绳索2-铁框3-瓶盖4-水样瓶5-沉坠2. 细菌总数的测定⑴饮用水：①用灭菌吸管吸取0.2 mL水样，涂布于事先准备好平板中，共做2个平皿。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定在正确制备培养基的基础上，能正确运用平板接种法正确举行细菌总数的测定；把握饮用水、水源水的细菌总数测定办法、步骤和要点。
一、养分琼脂培养基(供细菌总数的测定) 称取：蛋白陈2.5g，牛肉膏0.75g, NaCl1.25g于500ml烧杯中，加150ml蒸馏水溶解，另称取琼脂5g加100ml蒸馏水溶解，待所有溶解后，混匀，加10％ NaOH，调pH =7.4～7.6，熟化1h，除垢，用棉花过滤，分装，在121℃条件下，灭菌20min，备用。
二、仪器 1．高压蒸汽灭菌器。
2．干热灭菌(烘箱)。
3．水浴隔热培养箱。
4．冰箱。
5.培养皿(直径9ml)。
6．吸管(10.0ml、1.0m1)。
三、菌落计数原则 1．一个平皿有较大片菌落生长时，不宜采纳； 2．无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数； 3．成片状菌落不到平皿的一半，其余一半的菌落数分布匀称，则将半皿计数×2报告之。
四、注重事项 1．检验中所用玻璃器皿应洗净后采纳干热灭菌法(160℃，2h)举行灭菌； 2．培养基的pH值调整要正确； 3．培养基配制和储存是以2周为限； 4．培养基不宜反复多次灭菌，防止pH值下降； 5．灭菌间隔时光普通不超过4h; 6．培养基如发觉产气、混浊、有菌膜、变色、有菌落、沉淀等应废弃； 7．平皿菌落计数时，肉眼观看，须要时可用放大镜，以防遗漏，计下各平皿的菌落。
[任务实施] 一、生活饮用水 1．取三个培养皿，分离是一个空白、另两个加1.0ml水样； 2．浇养分琼脂培养基(冷却至45℃～50℃，无菌操作)2～3 mm，冷却至室温、凝固后倒置； 3．在37℃，培养24小时后，观看结果并记录。
二、水源水 1．用无菌水稀释水样分离为0.1、0.01、0.001 ml的稀释比； 2．取四个培养皿，分离是空白、0.1、0.01、0.001ml的稀释比的水样加1.0ml水样； 3．浇养分琼脂培养基(冷却至45～50℃，无菌操作)2～3mm，冷却至室温、凝固后倒置； 4．在37℃，培养24h后，观看结果并记录。
实验水中细菌总数的测定
实验水中细菌总数的测定前言水是我们生活的重要组成部分，无论是生命的起源，还是人类生活和生产都与水密不可分。
但是随着工业化进程的加快，水质越来越受到污染，水中细菌总数也成为常见的水质指标之一。
本文将介绍如何进行水中细菌总数的测定实验。
实验目的1.掌握测定水中细菌总数的方法；2.熟悉细菌结构及其生长条件；3.加深对水质检测的认识。
实验原理水中的细菌一般通过卫生污染途径进入自来水、地下水、河流等水体，污染水源后就会对人们的生活、工作和生产带来很大的危害。
痢疾、霍乱、伤寒、腹泻等疾病多是由于口腔、消化系统中的有害菌群外移至消化道。
测定方法主要是基于发酵方法，通过统计水中微生物的数量，其基本依据在于微生物在适宜的温度和环境下，利用某些碳水化合物发酵而产生可测定的气体。
常用的指标为断氧时间（DT），根据氧的量来判断细菌数量的多少，一定程度上可以反映出水的卫生状况。
实验步骤1.取水样：从自来水水源处取出应检样品，需注意的是要使用无菌容器，最好是预先消毒过的。
在取水样前，最好流动5分钟以上方可取样，避免得到不实际的结果；2.加入营养元素：滤上滤膜后，再将约5ml的最少粉末培养基、4-5滴的氯化甲烷胺（1%）和约200ml无菌水混合均匀，将混合溶液倒入水样中；3.发酵过程：将水样发酵瓶通过逆时针旋紧，摇晃均匀；4.测定结果：记录下发酵瓶开始发酵的时间，水样中的气体不断地逸出，瓶内逐渐产生负压下降，直到完全断氧的时间。
断氧时间愈短，水质愈差，水中微生物愈多，反之亦然。
实验要点1.无菌取样，避免二次污染，结果更加准确；2.取样量及试剂加入的量要准确，否则会影响实验结果；3.发酵瓶要紧闭，防止气体泄漏；4.营养元素中含有的碳源、氮源等应与微生物的生长有适当的关系。
通过测定水中细菌总数，可以更加准确地判断水的卫生状况。
通过本实验的学习和操作，可以更加深入地了解微生物结构、生长条件以及水质检测的方法，具有较高的理论和实际应用价值。
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。
这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。
2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。
通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。
3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。
这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。
4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。
这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。
5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。
这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。
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介绍几种新的水中细菌总数检测方法
介绍几种新的水中细菌总数检测方法近年来，随着水污染问题的加剧，水资源的保护和管理变得越来越重要，其中水中细菌总数检测是水质监测的重要指标之一。
本文将介绍几种新的水中细菌总数检测方法，以期为水质监测提供更加可靠和高效的手段。
1.高通量细菌量检测技术高通量细菌量检测技术可以同时检测多种细菌，检测速度快，可靠性高、检测方法简便。
它基于基因分析技术，将PCR技术与微孔板自动化操作技术相结合，通过多重PCR检测技术，可以在很短的时间内迅速检测出水样中的多种细菌，可以检测多达100种以上的微生物群体；与传统的培养基技术比较，减少了很多操作时间，而且可以避免细菌在营养基中生长的误差，大大提高了检测的准确性和精度。
2.荧光定量PCR技术荧光定量PCR技术是一种基于PCR技术的定量检测方法，通过特异载体或FAM（荧光素丙酸酯）依赖基因和所需定量基因并列进行扩增，可以快速、准确地测定样品中细菌的数量。
它将实时检测平台与计量分析相结合，具有检测速度快、精确、灵敏度高、标准化程度高等优点，被广泛应用于水质监测领域，是一种更为先进的具有优势的技术手段。
3.自动化细胞计数法自动化细胞计数法是一种新型的自动计数方法，基于图像处理技术和机器学习算法，同时识别并统计生长在液体中的微生物的数量和大小，具有操作简便、检测速度快、精度高、可靠性好等优点。
此方法不受培养基、肌红蛋白等耗时耗费的因素的影响，而且能够快速而准确地检测出微生物数量，对于微生物的定量和质量检测具有很高的应用价值和推广前景，已成为最具有前景的水中细菌检测技术之一。
虽然上述三种水中细菌总数检测方法在水质监测中得到了广泛应用，但仍存在一些局限性。
因此，在推广过程中需要结合实际情况，选择合适的检测方法，并根据需要进行优化，以实现更加科学、现代、高效、准确的水质监测。
实验10 水中细菌总数的测定
一、目的要求
❖ 学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的 方法；
❖ 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。
二、实验材料
❖ 水样 ❖ 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 ❖ 1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等
饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总 数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升 水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后 所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的 总菌数不得超过100个。
三、基本原理
❖ 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一 个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉眼可见的子 细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计 数方法。
❖ 将样品进行不同稀释，使微生物分散并以单细胞 存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养 后，每一个活细胞即能形成一个菌落。统计菌落 的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算 出样品中的含菌数。
❖ 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入 融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml， 置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而 又不使培养基荡出或溅到皿盖上。
❖ 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养 24h。
❖ 菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。
若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数。
(完整)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的测定一、目的要求l．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2．了解水源水的平板菌落计数的原则。
二、基本原理本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多,它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
三、器材l．培养基肉膏蛋白胨琼脂培养基，无菌水。
2.仪器或其他用具灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶,灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等.四、操作步骤l．水样的采取（1）自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5min后,以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
（2）池水、河水或湖水应取距水面l0～15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
2．细菌总数测定（1）自来水①用灭菌吸管吸取lml水样，注入灭菌培养皿中。
共做两个平皿.②分别倾注约15mL己溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL作空自对照。
④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。
⑤两个平板的平均菌落数即为lml水样的细菌总数.(2)池水、河水或湖水等①稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。
取lml水样注入第一管9ml 灭菌水内、摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管,稀释度分别为10-1、10—2与10-3。
稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30～300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。
水 中 细 菌 总 数 的 检 测
水中细菌总数的检测一、试验的目标请求1.进修并控制水的细菌学检测办法2.懂得水质状态与细菌数目在饮用水检测中的重要性.二.试验道理细菌总数是指1ml水样在养分琼脂造就基中,于37℃经24h造就后,所发展的细菌菌落的总数. 细菌总数是评价水质污染程度的重要卫生指标.我国现行的生涯饮用水尺度磨练办法GB5750—85划定水样中细菌总数测定是1ml水样在通俗养分琼脂造就基中37℃经24小时造就所发展的细菌菌落的总数.所测定的细菌总数增多解释水被生涯放弃物污染,但不克不及解释污染的起源.是以必须联合总大肠菌群数来断定水污染的起源和安然程度.本试验运用平板计数技巧测定水中细菌总数.因为水中细菌种类繁多,它们对养分和其他发展前提的请求不同很大,不成能找到一种造就基在一种前提下,使水中所有的细菌均能发展滋生,是以,以必定的造就基平板上发展出来的菌落,盘算出来的水中细菌总数仅是一种近似值.今朝一般是采取通俗牛肉膏蛋白胨琼脂造就基.平板菌落计数法的长处：能测出样品中的活菌数.此法经常运用于某些成品和生物成品检定以及食物.水源的污染程度的检定等.缺陷：手续较繁,并且测定值常受各类身分的影响.生涯饮用水细菌卫生尺度我国饮用水卫生尺度：≤ 3个大肠菌群/1L饮水 , ≤ 100个细菌总数/1ml饮水三.试验仪器和材料1.高压蒸汽灭菌锅.恒温箱.冰箱.无菌接种间.2.消毒酒精.消毒水.3.试管.三角瓶.平皿.刻度吸管.涂布器等（试验前包扎灭菌处理好备用）4.造就基蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~20g蒸馏水1000ml制备办法：按照现实的须要量,按上述配方称取各成分混杂后,加热消融,调剂pH为,,分装于玻璃容器中,用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min,倒制成平板后储存于冷处备用.5.水样：自来水.中水.四.试验内容：（一）.造就基的制备：试验前事先预备好造就基平板（办法见上）,每小组2-4个平板.（二）.取水样：1.自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭,再用酒精灯火焰灭菌,打开龙头放水1-2分钟,用无菌空三角瓶接取水样200毫升.2.纯清水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后,先放走部分水,再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.3.池水.河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛满后,将瓶塞盖好,再从水中掏出,最好立刻检讨,不然需放入冰箱中保管.（三）.接种造就：（请求无菌操纵）用无菌吸管汲取1毫升水样,参加平板中（每个水样平行做两个平板）,用无菌涂布器涂抹平均,在造就皿正面标注清晰后,置于37℃恒温箱内经24h-48小时造就后,统计细菌菌落的总数.（四）.菌落记数：菌落计数及陈述办法作平皿菌落计数时,可用眼睛直接不雅察,须要时用放大镜检讨以防漏掉.在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步盘算时运用.在求同稀释度的平均数时,若个中一个平皿有较大片状菌落产生时,则不宜采取,而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数.若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数散布又很平均,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数.然后再求该稀释度的平均菌落数.五.试验留意事项六.试验陈述内容;1.记载试验办法和步调.2.列表解释检测成果.（1）自来水（2）饮用水3.思虑题：（1）从自来水的细菌总数成果来看,是否合乎饮用水的尺度？（2）你所测的水样污秽程度。
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水中细菌总数的检测
一、实验的目的要求
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
二、实验原理
细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。
细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标。
我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。
所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染，但不能说明污染的来源。
因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源和安全程度。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
平板菌落计数法的优点：
能测出样品中的活菌数。
此法常用于某些成品和生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。
缺点：手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。
生活饮用水细菌卫生标准
我国饮用水卫生标准：
≤ 3个大肠菌群/1L饮水，≤ 100个细菌总数/1ml饮水
三、实验仪器和材料
1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。
2、消毒酒精、消毒水。
3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等（实验前包扎灭菌处理好备用）
4、培养基
蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 10~20g 蒸馏水 1000ml 制备方法：
按照实际的需要量，按上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH
为~，，分装于玻璃容器中，用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，倒制成
平板后储存于冷处备用。
5、水样：自来水、中水。
四、实验内容：
（一）、培养基的制备：
实验前事先准备好培养基平板（方法见上），每小组2-4个平板。
（二）、取水样：
1、自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，
打开龙头放水1-2分钟，用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
2、纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用
无菌空三角瓶接取水样200毫升。
3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃
塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱
中保存。
（三）、接种培养：（要求无菌操作）
用无菌吸管吸取1毫升水样，加入平板中（每个水样平行做两个平板），用无菌涂布器涂抹均匀，在培养皿侧面标注清楚后，置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后，统计细菌菌落的总数。
（四）、菌落记数：
菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查以防遗漏。
在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用。
在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落产生时，则不宜采用，而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。
然后再求该稀释度的平均菌落数。
五、实验注意事项
六、实验报告内容；
1、记录实验方法和步骤。
2、列表说明检测结果。
（1）自来水
（2）饮用水
3、思考题：
（1）从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准（2）你所测的水样污秽程度。