pth1-84氨基酸序列
抗体和用于产生对生物活性完整甲状旁腺激素(PTH)1-84具有选择性
专利名称：抗体和用于产生对生物活性完整甲状旁腺激素
（PTH）1－84具有选择性结合特异性的抗体的肽
抗原
专利类型：发明专利
发明人：理查德·J·扎赫拉德尼克,杰佛里·R·拉维涅
申请号：CN200580045294.9
申请日：20051129
公开号：CN101095053A
公开日：
20071226
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：对应于甲状旁腺激素(PTH)的氨基酸残基2－12、1－12、2－15和1－15的肽抗原，对该肽抗原具有亲和性的抗体及其制备方法。
将根据本发明这样的抗原、抗体及其制备方法可用于检测血清、血浆和/或细胞培养基中的生物活性完整PTH水平。
这样的抗体进一步具有高度的物种交叉反应性，但是基本上减轻的与非－完整PTH肽片段的交叉反应性以及几乎不能识别PTH的头一个氨基酸残基。
申请人：理查德·J·扎赫拉德尼克,杰佛里·R·拉维涅
地址：美国加利福尼亚
国籍：US
代理机构：中国国际贸易促进委员会专利商标事务所
代理人：李瑛
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融合蛋白定义
融合蛋白科技名词定义中文名称：融合蛋白英文名称：fusion protein定义1：融合基因的表达产物，或通过生物学和化学方法融合的两个或两个以上蛋白质。
所属学科：免疫学（一级学科）；应用免疫（二级学科）；免疫学检测和诊断（三级学科）定义2：通过基因工程方法将编码不同蛋白质的基因片段按照正确的读框进行重组，将其表达后获得的新蛋白质。
所属学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方法与技术（二级学科）定义3：由两段或多段基因序列串联形成的融合基因表达所产生的蛋白质。
所属学科：细胞生物学（一级学科）；细胞培养与细胞工程（二级学科）本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布目录融合蛋白 - 技术概况融合蛋白技术是为获得大量标准融合蛋白而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法。
利用融合蛋白技术，可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白。
技术特点融合蛋白融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌) 也可在真核细胞中进行表达。
原核表达系统的特点是时程短，费用低，是科研中的主要工具。
其缺点是真核蛋白表达没有得到确切修饰；大量蛋白常常沉淀成不溶性包涵体聚合物，需要复杂的变性和复性过程；大量蛋白的分泌较困难。
真核表达系统的特点是蛋白翻译后加工机会多，甚至可被改造成人源型；真核细胞易被转染，具有遗传稳定性和可重复性；产物可被分泌，提纯简单，成本低。
技术内容构建融合蛋白的基本原则是，将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，以实现两个基因的共同表达。
具体步骤有：1.进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。
2.在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重组质粒。
3.将重组表达载体转染宿主细胞并利用选择标志进行筛选及测序。
融合蛋白
（一）DNA疫苗
目前，疫苗已经经历了三代： 第一代疫苗是用减毒或杀死的病原体来激 活机体免疫系统； 第二代疫苗是用生物技术和重组DNA技术 研制的组分疫苗注射机体诱导免疫应答； 第三代疫苗是直接注射基因重组的抗原基 因来激活人体免疫系统，即DNA疫苗。
（一）DNA疫苗
• DNA疫苗与传统疫苗相比有着 明显的优势，如易于生产，稳 定性强，成本低廉等，并可同 时诱导体液与细胞免疫应答。
融合蛋白及其应用
07生物技术
主要内容
融合蛋白的概念
融合蛋白技术概况
融合蛋白技术的临床应用 常见的几种融合蛋白
一、融合蛋白的概念
在基因工程迅速发展的基础上， 有目的地把两段或多段编码功能蛋白 的基因连接在一起，进而表达所需蛋 白，这种通过在人工条件下将两个或 多个基因的编码区首尾连接，由同一 调控序列控制构成的基因表达后所得 的蛋白质产物称为融合蛋白(fusion protein，FP)。
真核或原核细胞中表达出的具有上 述两部分结构域的重组蛋白。据目 的蛋白与Ig不同片断相连，可将其 分为二大类 ：一类为Fab(Fv)融合 蛋白； 另一类为 Fc融合蛋白。
1、Fab (Fv) 融合蛋
Fab(Fv) 融合蛋白主要是将Fab(Fv) 段与其他生物活性蛋白结合，利用
抗体对抗原的特异识别功能将活性 蛋白导向特定部位。使活性蛋白在 特定部位发挥生物作用。常见的与 Fab融合的蛋白有毒素、细胞因子、 受体、酶等。
二、融合蛋白技术概况
融合蛋白技术是为获得大量 标准融合蛋白而进行的有目的 性的基因融合和蛋白表达方法。 利用融合蛋白技术，可构建和 表达具有多种功能的新型目的 蛋白。
（一）融合蛋白技术的特点
融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌)
高龄女性骨质疏松症患者对特立帕肽治疗的依从性及用药前后骨密度等指标的变化
高龄女性骨质疏松症患者对特立帕肽治疗的依从性及用药前后骨密度等指标的变化汪菲菲;边平达;王珏;寿张轩;陈锦平【摘要】目的了解高龄女性骨质疏松症(OP)患者对特立帕肽治疗的依从性及药物对患者骨密度、骨转换标志物(BTMs)和血液生化指标的影响.方法分析30例高龄女性OP患者接受特立帕肽治疗的依从性,并比较治疗6个月前后骨密度、BTMs 和血液生化指标的差异.结果患者接受特立帕肽治疗的持续时间为1～24个月,仅11例连续用药超过6个月,用药依从性较差.出院、转科、药物不良反应是患者停药的主要原因.与治疗前比较,11例患者治疗6个月后L1-4骨密度、Ⅰ型前胶原氨基端前肽、骨钙素、Ⅰ型胶原羧基末端肽交联、尿酸和血钙均明显升高,甲状旁腺素明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论高龄女性OP患者对特立帕肽治疗的依从性较差;特立帕肽能提高患者血清BTMs水平,增加L1-4骨密度,但可引起尿酸和血钙升高.【期刊名称】《浙江医学》【年(卷),期】2019(041)009【总页数】4页(P951-953,958)【关键词】骨质疏松症;特立帕肽;骨密度;骨转换标志物;血钙【作者】汪菲菲;边平达;王珏;寿张轩;陈锦平【作者单位】310024 杭州,浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)望江山院区康复医学科;310024 杭州,浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)望江山院区老年医学科;310024 杭州,浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)望江山院区老年医学科;310024 杭州,浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)望江山院区药学部;310024 杭州,浙江省人民医院(杭州医学院附属人民医院)望江山院区骨科【正文语种】中文特立帕肽是一种利用基因重组技术人工合成的34个氨基酸片段，是第一个被证明有成骨作用的抗骨质疏松症（OP）药物[1]。
每日小剂量（20μg）皮下注射特立帕肽，不仅能重建已丢失的松质骨，刺激皮质骨及骨小梁生长，使骨量明显增加，而且能促进骨膜形成及骨小梁的连续性，加快骨折愈合[2-3]。
注射用重组人甲状旁腺激素(1-34)使用说明书
赛迪松注射用重组人甲状旁腺激素(1-34)使用说明书【药品名称】通用名：注射用重组人甲状旁腺激素(1-34)商品名：赛迪松TM英文名：Recombinant Human Parathyroid Hormone（1-34） for Injection 汉语拼音：zhusheyong chongzu ren jiazhuangpangxian jisu (1-34) 【性状】本品为无菌白色冻干粉针剂。
【主要成分】基因重组人甲状旁腺激素(1-34)【药理毒理】1.药理本品含有重组人甲状旁腺激素（1-34），它与84个氨基酸的人甲状旁腺激素的N端氨基酸34个（生物活性区）序列完全相同，分子量为4117.8 道尔顿。
本品通过重组DNA技术改造的大肠杆菌生产，以无菌冻干粉针剂形式提供。
以1毫升无菌注射用水溶解后，每毫升注射液含有200国际单位重组人甲状旁腺激素（1-34）、20毫克甘露醇的pH7.0的磷酸缓冲液。
内源性的84个氨基酸的甲状旁腺激素（PTH）是肾脏和骨骼中钙、磷代谢的主要调节剂。
PTH的生理作用包括骨代谢的调控、肾小管对钙、磷的重吸收以及肠钙的吸收。
PTH和PTH（1-34）的生物活性通过与特异性高亲和力的细胞表面受体相结合来发挥作用。
PTH（1-34）和PTH与这些受体的结合有相同的亲和力，对骨骼和肾脏有相同的生理作用。
PTH（1-34）对骨骼的影响取决于全身的药物剂量。
每天一次给药PTH（1-34），由于对成骨细胞的刺激活性高于破骨细胞，可以刺激骨小梁和皮层骨表面新骨的形成。
对猴子的研究表明，通过刺激网状骨和皮层骨中新骨的形成，PTH（1-34）可以改善骨小梁的显微结构，提高骨量和骨强度。
在人体中，PTH（1-34）对合成代谢的影响表现为：增加骨量，增加骨形成和重吸收的标记物，增大骨强度。
2.毒理一般药理学研究表明：单次sc 对小鼠神经系统无明显影响；单次sc使大鼠收缩压、舒张压、平均动脉压降低，心率增加，且存在量效关系, 但2小时后上述指标基本恢复正常，对循环系统的其他指标和呼吸系统无明显影响。
甲状旁腺素
1010/2010/MODULAR ANALYTICS E170甲状旁腺素用途：用免疫学方法定量测定人血清或血浆的甲状旁腺素（PTH）的含量。
电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys1010、2010和E170免疫测定分析仪。
概述:甲状旁腺素（PTH）由甲状旁腺合成并分泌入血流中。
完整的PTH由一条肽链组成，含84个氨基酸，分子量为9.5KD。
具有生物活性的N端片段半衰期只有几分钟。
因此，有选择地检测完整的甲状旁腺素，可以直接了解甲状旁腺体的分泌活性。
PTH与维生素D和降钙素一起，动员骨骼系统的钙和磷酸，增加小肠对钙的吸收和肾脏对磷的排泄。
PTH和降钙素的相互作用维持血钙水平的稳定性。
血钙升高抑制PTH的分泌，血钙降低则促进PTH的分泌。
甲状旁腺体机能紊乱引起的PTH分泌改变，进而导致血钙水平的升高或降低（高钙血症或低钙血症）。
检查甲状旁腺机能低下症要求灵敏的试验，以便检测低于正常范围的PTH水平。
甲状旁腺机能功能亢进症导致PTH分泌上升，主要由甲状旁腺腺瘤引起。
继发性的甲状旁腺机能功能亢进症中，血钙低下，这是由于其它病理状态引起的。
目前，对甲状旁腺机能亢进的诊断中，PTH和血钙含量测定更加引起重视，在甲状旁腺腺瘤切除手术前后测定PTH能帮助外科医生了解手术效果，完全切除可使PTH快速下降。
PTH测定法采用双抗体夹心法原理，生物素化的单抗与N端结合（1-37），钌标记的单抗与C端结合（38-84）。
对应的抗原决定簇氨基酸序列在26-32和55-64区域。
原理：采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。
·第1步：50µl标本、生物素化的抗PTH 单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗PTH单抗混匀，形成夹心复合物。
·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
骨代谢标志物与骨质疏松症
骨代谢标志物与骨质疏松症彭道荣第四军医大学西京医院全军临床检验医学中心主要内容 骨标志物概述骨质疏松主要标志物及临床应用实验室检测及注意事项主要内容 骨标志物概述骨质疏松主要标志物及临床应用实验室检测及注意事项骨的组成骨组织的构成成分：无机物和有机物。
无机物：占骨重70%，有机物：占骨重30%，骨的转换【基本过程】去除旧骨(破骨)形成新骨(成骨)【细胞基础】成骨细胞破骨细胞【表现形式】骨的塑建骨的重塑定义在骨转换过程中产生的一些代谢物，叫骨代谢生化标志物或骨转换标志物。
骨标志物在正常人的不同年龄段骨生化标志物在血循环和尿液中的水平会发生不同程度的变化各种代谢性骨病会影响骨的新陈代谢并导致骨器官功能变化与异常骨转换标志物分类直接标志物形成标志物: 代表成骨细胞活动及骨形成时的代谢产物 吸收标志物: 代表破骨细胞活动及骨吸收时的代谢产物，特别是骨基质的降解产物。
间接标志物在骨重建过程中，许多激素和细胞或体液因子影响骨的重建过程，通过促进或抑制成骨细胞和破骨细胞的发育及提高或抑制其活性对骨转换起加速和抑制作用。
反映什么？反映:骨代谢变化速率破骨和成骨细胞功能骨转换的频率和速率应用：骨质疏松症面临人口老龄化的挑战全国总人口13.2亿，65岁以上老人约1亿与年龄相关的疾病骨质疏松发病率非常高，约8000万，市场巨大应用：其它疾病许多疾病影响骨代谢骨质疏松内分泌疾病：原发性甲旁亢、甲亢、甲减、糖尿病 肿瘤骨转移主要内容 骨标志物概述骨质疏松主要标志物及临床应用实验室检测及注意事项骨质疏松症骨质疏松症(osteoporosis)是一种系统性骨病，其特征是骨量下降和骨的微细结构破坏，表现为骨的脆性增加，因而骨折的危险性大为增加，即使是轻微的创伤或无外伤的情况下也容易发生骨折。
包括：有机物和无机物量的绝对减少对骨质疏松症的概念定义的理解和认识： 骨的脆性增高、骨力学强度下降、骨折危险性增加，对载荷承受力降低而易于发生微细骨折或完全骨折。
甲状旁腺激素PTH测定标准操作规程
甲状旁腺激素PTH测定标准操作规程1 检验目的规范本实验室的检验操作，确保甲状旁腺激素(PTH)检测结果及报告的准确性、可靠性和有效性。
2 标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1 常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符（条码）。
2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。
2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。
2.1.5.2 对于测定和吸样有干扰的标本：如近期使用鼠源性单克隆抗体诊断后采取。
2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。
2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。
2.2 标本保存2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清, 避免溶血。
离心必须达到4000rpm×15min，离心后的血清中不能含有颗粒物或微量纤维蛋白。
2.2.2 标本保存时间：室温（15～25℃）下可稳定8h，普通冰箱中（2～8℃）稳定48h。
需较长时间保存应将血清存放于-20℃。
冰冻标本仅可冻融一次。
2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置2～8℃冰箱内保存7d。
2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动。
2.3.2 采血后应使血液充分凝固，不建议使用抗凝的血液标本。
3 方法原理双位点酶免法(“夹心法”)测定。
将样本和单克隆抗PTH 碱性磷酸酶结合物、含蛋白的TRIS 缓冲盐水及包被着山羊抗多克隆PTH 抗体一起添加到反应管中。
在反应管内温育完成后，结合在固相上的物质将置于一个磁场内被吸住，而未结合的物质被冲洗除去。
然后，将化学发光底物 Lumi-Phos* 530 添加到反应管内，再由照度计对反应中所产生的光进行测量。
PTH的结构与功能
PTH的结构与功能关系关键词：PTH N端C端转角生物活性构象正文：PTH即parathyroid hormone，甲状旁腺激素。
是体内钙平衡的主要调节者，小剂量间歇性注射PTH可刺激成骨细胞及骨细胞的生长，PTH还可治疗骨质疏松症及原发性甲状旁腺机能亢进。
PTH是由甲状旁腺分泌的含84个氨基酸的单链多肽蛋白质，其分子量为9500，分子中不含半胱氨酸。
PTH的N端与C端在骨代谢中发挥作用不尽相同，N端主要与PTHⅠ型受体结合，影响成骨作用；而C端则通过与另一类受体结合，发挥其他生物学作用，甚至促进骨细胞凋亡。
PTH的N末端有3个稳定的螺旋组成，它们分别是SER3 到ASN10、SER17到LAS27和ASP30 到LEU37之间，而C末端最明显的结构特征是一条短的、不稳定的螺旋及一系列松散的转角，这一分子倾向于形成三级结构。
具有生物活性的PTH类似物的两个螺旋片段之间存在着柔性位点，因此，PTH类似物与PTHⅠ型受体作用时会折叠成有生物活性的构象。
进一步的RMS偏差分析显示，最终的精细结构被划分成了一个有限的稳定的构象系统，显示出PTH在溶液中本身的构象柔性重组甲状腺激素类似物的活性比甲状腺激素的活性要高，这主要是由于C末端区域的构象柔性。
MET8附近区域对PTH的生物活性起到重要作用，RHPTH（1~34）的第八位和的第十八位突变为MET或正亮氨酸时生物活性会明显降低。
另外PTH的衍生物RHPTH能够增加骨量及改善骨微结构，降低骨折风险。
其氨基酸序列如下：H-Ser-V AL-Ser-Glu-Ile-Gln--Leu-Met-His-Asn-Leu-Gly-Lys-His-L eu-Asn-Ser-Met-Glu-Arg-Val-Glu-Trp-Leu-Arg-Lys-Lys-Leu-Gln-Asp-V al-His-Asn-Phe-OH与天然PTH相比，它克服了C端对骨代谢的不利影响，这主要是由于C末端区域的构象柔性决定。
高中生物激素分类
例如生长素（GH）是一个蛋白质激素，人的生长素由191个氨基酸残基组成，它的一级结构已经研究清楚。两个末端氨基酸都是苯丙氨酸，含有两个分子内二硫键。生长素的主要作用是促进RNA的生物合成，从而直接影响蛋白质的合成和骨骼的生长。生长素也能促进糖和脂的代谢。人在幼年时期，如果生长素分泌不足，则生长发育迟缓，身材矮小，称为“侏儒症”。若在幼年时生长素分泌过多，身体各部分过度生长，称为“巨人症”。
GRH可以促进垂体生长素的释放，而GRIH则抑制生长素的释放。在正常情况下，主要是GRIH起调节作用。
（3）胰岛激素。胰岛是胰脏的内分泌组织。人的胰岛主要是由α、β和δ三种细胞组成。α-细胞分泌胰高血糖素、β-细胞分泌胰岛素。
①胰岛素：胰岛素是由胰腺中胰岛的β-细胞分泌的一种含有51个氨基酸残基的蛋白质激素。胰岛素由两条多肽链组成，它的一级结构如图3.13所示。
药用胰岛素通常由猪的胰腺中提取，现在已经可以应用基因工程方法生产胰岛素。
②胰高血糖素：胰高血糖素为胰岛的α-细胞分泌的多肽激素，由29个氨基酸组成，人和猪的胰岛血糖素的氨基酸序列完全一样。
Байду номын сангаас
胰高血糖素主要是促进肝糖原分解，使血糖升高，与肾上腺素作用相似。其作用原理是激活肝细胞中的腺苷酸环化酶，使cAMP浓度升高，从而提高肝细胞中磷酸化酶α活性，促进肝糖原分解。
②降钙素：降钙素（CT）是一个由32个氨基酸残基组成的多肽激素。不同种属动物中降钙素的氨基酸离列存在一定的差别。
降钙素的主要生理功能是降低血钙，在体内由降钙素和甲状旁腺素共同作用以维持血钙平衡。
（5）其它多肽及蛋白质激素。
①血管紧张肽：血管紧张肽是存在于血液中的一类多肽激素。血管紧张肽有两种存在形式，即血管紧张肽I和II。具有活性的是血管紧张肽II，是一个8肽化合物。
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pth1-84氨基酸序列
《pth1-84氨基酸序列》详解
一、概述
pth1-84是蛋白质合成过程中的重要序列，它由84个氨基酸组成。
在生物学中，蛋白质是生命的基础，而氨基酸则是构成蛋白质的基本单位。
因此，了解pth1-84氨基酸序列对于理解蛋白质的结构和功能具有重要意义。
二、序列特征
pth1-84氨基酸序列包含了许多重要的特征，包括其空间结构、疏水性、带电性质等。
该序列属于分泌信号肽，具有高度疏水性的起始部分和较易与蛋白质骨架结合的末尾部分。
此外，该序列还具有一定的规律性，有助于其在蛋白质合成过程中的识别和引导。
三、功能与应用
pth1-84氨基酸序列的功能主要体现在其与蛋白质骨架的结合以及引导新合成的蛋白质进入正确的分泌途径。
这一序列在许多生物体内都有发现，如哺乳动物、昆虫等。
在生物工程领域，pth1-84氨基酸序列的应用也日益广泛，如用于合成具有特定功能的蛋白质或多肽药物。
四、与其他序列的关系
pth1-84氨基酸序列与其他相关的分泌信号肽、跨膜蛋白等序列之间存在着复杂的相互作用和调控机制。
这些序列在蛋白质合成、转运、折叠等过程中相互作用，共同维持着生物体内蛋白质代谢的平衡。
总的来说，pth1-84氨基酸序列在蛋白质合成过程中扮演着重要的角色，对于理解蛋白质的结构和功能具有重要意义。
随着生物技术的不断发展，pth1-84氨基酸序列及其相关序列的应用前景将更加广阔。