15种中草药提取物抗氧化活性的研究
式中: A0— ——DPPH 甲醇溶液的吸光值; At— ——加 入 提 取 物 溶 液 后 的 DPPH 甲 醇溶液的最终吸光值。
用同样的方法测定质量浓度为 7.5 mg/mL 的 抗坏血 酸 水 溶 液 和 合 成 抗 氧 化 剂 BHT 甲 醇 溶 液 的 SR%。
1 000 SE=
IC50 式 中 : IC50— ——SR% 为 50% 时 的 提 取 物 溶 液 浓 度。
IC50 的获取: 同上法测定提取物在不同浓度下 的SR%, 以 提 取 物 的 不 同 浓 度 为 横 坐 标 , 以 SR% 为纵坐标作图, 在图中找出 SR%为 50%时的提取 物 溶 液 浓 度 IC50; 同 样 测 出 抗 坏 血 酸 水 溶 液 和 BHT 甲醇溶液的 IC50。 1.2.3.2 总抗氧化活性的评估 采用铁还原/抗氧 化 能 力 ( Ferric reducing/antioxidant power, FRAP) 分析法评估所选 15 种中草药提取物的总抗氧化 活性[6]。该分析方法的原理是抗氧化物质将 Fe3+还
关键词 中草药 抗氧化活性 DPPH 自由基 Fe3+还原/抗氧化能力( FRAP) 总酚含量 文章编号 1009- 7848( 2006) 01- 0284- 06
自 20 世纪 50 年代以来, 由于生活水平的提 高, 卫生条件和生存环境的改善, 老年人普遍长 寿, 但相应地伴随年龄而来的许多疾病, 如患心血 管疾病、帕金森症的几率也增大了。据目前研究所 知, 这些疾病主要是人体内各种外源性和内源性 自由基在一定外界环境下与生物内的许多物质如 脂肪酸、蛋白质等作用, 夺取它们的氢原子, 造成 相关细胞的结构与功能的破坏, 自由基过氧化物 的累积所致[1]。此外, 食用油脂和含脂食品的酸败 ( 脂质过氧化) 也是由自由基引发的。自由基不仅 使油脂本身受破坏而丧失营养, 而且其氧化产物 和 中 间 物 会 伤 害 生 物 膜 、酶 、维 生 素 、蛋 白 质 及 活 细胞功能, 这些产物中有些还是公认的致癌物。因 此寻找一些天然的、安全的抗氧化物添加于食品、 药品和化妆品中是非常必要的。
第6卷 第1期 2006 年 3 月
中国食品学报
Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology
Vol. 6 No. 1 Mar. 2 0 0 6
15 种中草药提取物抗氧化活性的研究
吴 青 黄 娟 罗兰欣 易路遥 龙树娣 ( 华南农业大学食品学院 广州 510642)
SR%值在 15%~75%范围内, 该值与提取物浓 度 有 很 好 的 线 性 关 系 , 但 当 SR%值 超 过 此 范 围 时, 即在高自由基清除率的情况下, SR%值不随提 取物浓度的增加而增加, 因此对 SR%值超过 50% 的提取物需进一步采用自由基清除效率( SE) 来评 估它们的抗氧化活性。
1.2.3.1 清除 DPPH 自由基活性的评估 为评估 所选 15 种中草药提取物对自由基的清除活性, 采 用提取物与稳定自由基 DPPH 反应的分析方法[5]。
稍作改动的方法: 在比色皿 中 加 入 1.95 mL 质量浓度为 24 mg/L 的 DPPH 甲醇溶液, 测定其在 515 nm 处的吸光值, 然后加入 50 μL 质量浓度均 为 7.5 mg/mL 的中草药提取物溶液( 石油醚、乙酸 乙酯和甲醇提取物用甲醇溶解, 水提取物用水溶 解) , 记录加入提取物溶液后第 2、3、4、5 分钟的吸 光值。5 min 后, 每 5 min 记录吸光值 1 次, 直到吸 光 值 的 改 变 在 每 分 钟 内 不 超 过 0.003 单 位 为 止 。 用稳定后的吸光值计算提取物对 DPPH 自由基的 清 除 能 力 ( The percentage of scavenging radical capacity) , SR%。
在脂质的氧化过程中, 抗氧化剂以多种方式 起作用, 如清除自由基、分解过氧化物或螯合金 属[3]。因此, 抗氧化活性必须针对不同的抗氧化机 理, 采用不同的分析方法来评估。本文采用 DPPH 和 FRAP 分析法评估提取物的抗氧化活性。
1 材料与方法
1.1 材料 大花紫薇叶( Lagerstroemia Speciosa) 、鸡蛋花
收稿日期: 2005- 08- 27 作者简介: 吴青, 女, 1964 年出生, 副教授
物质, 从而达到保护肌体的作用。因此, 从中草药 中筛选具有抗氧化和清除自由基活性的物质, 对 食品和医药工业均有重要意义。
由于不同植物中抗氧化活性成分不同, 极性 也有差异, 因而采用不同极性的溶剂提取抗氧化 成分的提取效果不同。对于极性大的抗氧化剂如 酚酸和许多黄酮类物质的糖苷类通常用水、醇或 水与醇的混合液来提取, 而对于极性小的抗氧化 剂如一些黄酮类物质的配糖基和大部分类胡萝卜 素则采用非极性溶剂来提取[3]。由于甲醇具有比乙 醇高的提取效率因而比乙醇更为常用[1], 为此, 试验 采用 4 种极性不同的溶剂( 石油醚、乙酸乙酯、甲醇 和水) 提取 15 种中草药中的抗氧化活性成分, 通过 总酚含量和抗氧化活性的分析筛选出不同植物抗 氧化物质的提取溶剂。
DPPH( 1, 1- 二苯- 2- 苦 肼 基 , C18H12N5O6, 相 对 分子质量 394.3, 纯度 90%) 、TPTZ ( 三吡啶三吖 嗪, C18H12N6, 相对分子质量 312.34, 纯 度 98%) 、 Folin - Ciocalteu 试 剂 和 没 食 子 酸 购 买 于 Sigma - Aldrich 公司; 其它试剂均为分析纯级别。 1.2 方法 1.2.1 提取物的制备 对所选定 的 15 种 中 草 药 采用 4 种溶剂( 石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水) 依次 提取, 具体方法是: 称取 30 g 的中草药粉末, 加入 150 mL 石油醚, 在 40 ℃下回流提取 6 h, 过滤, 滤 渣再加入 150 mL 乙酸乙酯于 40 ℃摇床上振荡提 取 6 h, 过滤, 滤渣再依次用甲醇和水同乙酸乙酯 的提取方法提取。将石油醚、乙酸乙酯和甲醇溶剂 的提取液用旋转蒸发仪( RE- 52A, 上 海 荣 华 生 化 仪器厂) 减压挥发去除溶剂, 将水提取物用冷冻干 燥机 ( Freezone Plus 12, 美国 Labconco 公司 ) 干 燥, 各提取物置于冰箱( - 75 ℃) 中保存。 1.2.2 提取物中总酚含量的测定 提取物中总酚 含量的测定采用 Folin- Ciocalteu 方法, 结果表示 为每克提取物中含有相当没食子酸的毫克数。
叶和枇杷叶于 2004 年 6~7 月采摘自华南农业大
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学 校 园 , 摘 后 置 于 55 ℃烘 箱 中 干 燥 , 粉 碎 , 过 60 目筛, 保存于密封容器中备用。荔枝皮于 2004 年 6 月取自新鲜荔枝( 品种为槐枝), 分别采用两种 方法处理: 第 1 种方法: 将新鲜荔枝皮直接置于 55 ℃烘箱中干燥; 第 2 种方法: 将新鲜荔枝皮经 100 ℃沸 水 热 烫 3 min 后 置 于 55 ℃烘 箱 中 干 燥 。 两种方法处理的荔枝皮干燥后粉碎, 过 60 目筛, 保 存于密封容器中备用。火炭母、阳春砂仁、鱼腥草、 淫羊霍、车前草、酸枣仁、益母草、刺五加、玉米须、 七叶一枝花和白茅根购于广东本草药业连锁有限 公司, 粉碎, 过 60 目筛, 保存于密封容器中备用。
醚、乙酸乙酯和甲醇提取物用甲醇溶解, 水提取物 用 水 溶 解 ) , 8 min 后 于 593 nm 处 读 取 吸 光 值 A 反应 后 。由 A - 反应 后 A 反 应前 的差 值 在 标 准 曲 线 上 获 得 中 草 药 提 取 物 相 应 的 FeSO4 的 浓 度 ( μmol/L) , 定义为 FRAP 值。FRAP 值越大, 表明由抗氧化物 质还原的 Fe2+越多, 即抗氧化物质的抗氧化活性 越强。采用同样的方法获得 0.75 mg/mL 抗坏血酸 和 BHT 的 FRAP 值, 所有试验重复 3 次。
对文献[ 4] 所报道的பைடு நூலகம்法稍作改动: 吸 取 0.2 mL 一定浓度( 使吸光值落在标准曲线上) 的提取 物溶液( 石油醚、乙酸乙酯和甲醇提取物用甲醇溶 解, 水提取物用水溶解) , 加入 1 mL 稀释的 Folin- Ciocalteu 试剂( 加入 10 的水稀释) , 再加入 0.8 mL 75.05 g/L 的碳酸钠溶液充分混合, 室温下放置 2 h, 然后在 750 nm 下测吸光值。用没食子酸溶液 ( 质量浓度范围为 10~80 μg/mL) 制作标准曲线, 所 有试验重复 3 次。 1.2.3 提取物抗氧化活性评估
摘要 用石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水对所选定的 15 种中草药进行浸泡提取, 采用 Folin- Ciocalteu 方法测定各 提取物中的总酚含量; 用 DPPH 和 FRAP 分析法评估了同溶剂提取物的抗氧化活性, 并与 2 种参照抗氧化剂( 抗 坏 血 酸 和 BHT) 进 行 比 较 。 结 果 表 明 : 不 同 中 草 药 显 示 出 不 同 的 抗 氧 化 活 性 , 在 15 种 中 草 药 中 以 大 花 紫 薇 叶 ( Lagerstroemia Speciosa) 的抗氧化活性最高, 其甲醇提取物中酚类物质的含量最高; 同一种中草药的不同溶剂提 取物显示出不同的抗氧化活性, 通常甲醇提取物比石油醚、乙酸乙酯和水提取物有更强的抗氧化活性和更 高 的 总酚含量。与参照抗氧化剂比较, 大花紫薇叶甲醇提取物对 DPPH 自由基的清除能力强于抗坏血酸。
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中国食品学报
2006 年第 1 期
原为 Fe2+, Fe2+与三吡啶三吖嗪( TPTZ) 结合生成蓝 色络合物, 在 593 nm 处有最大光吸收。吸光值越 大,表明抗氧化剂有越强的还原能力, 因而具有越 高的抗氧化活性。
甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究
甘草多糖的提取及其抗氧化活性研究作者:乌兰其其格宋学军段雪琴来源:《赤峰学院学报·自然科学版》2019年第06期摘要:本文利用水提醇沉法从甘草中提取甘草粗多糖,用沉淀法对提取的甘草粗多糖进行分离纯化后,得到三种多糖,即水提一级、二级、三级多糖,并对粗多糖和三种分级多糖进行了光谱性能分析.紫外光谱结果显示,四种多糖在260-280nm处均有吸收,表明含有蛋白质或核酸;红外光谱结果表明,四种多糖都具有多糖的特征吸收峰.另外,根据芬顿反的原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力,并研究了甘草多糖对酱油中羟基自由基清除能力的影响,结果表明,加入甘草多糖的酱油试样对羟基的清除能力有明显的增强.关键词:甘草多糖;提取;分级;抗氧化性中图分类号:S567.2;O657; 文献标识码:A; 文章编号:1673-260X(2019)06-0036-031 前言甘草别名还有乌拉尔甘草,国老,甜根,甜草,属豆科,是著名的传统药用植物[1],主要生长在内蒙古,新疆,宁夏等地.随着科学的发展,在1860-1869年学者们开始对甘草进行化学方面有关的研究[2],研究表明,甘草中含有许多药用成分.多糖是生物体的重要组成部分,可以从植物,微生物和动物等生物中提取.在体内,有许多重要的生物功能,如防御功能、结构支持和储能,同时,多糖在细胞和细胞之间,细胞与外界之间的能量和物质转化中起重要作用.作为甘草的重要活性成分之一,许多研究表明甘草多糖具有抗肿瘤,抗炎,抗病毒[3-5],免疫调节,抗氧化和抗菌等生理活性[6,7],常用的提取法主要有超声辅助提取法、溶剂浸提法等[8-12].本研究利用水提醇沉法从甘草中提取甘草粗多糖,进行分离纯化并对提取的粗多糖和三种分级多糖进行了光谱性能分析,根据芬顿反应原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力,并研究了加入甘草多糖对酱油试样的羟基的清除能力的影响.2 实验部分2.1 仪器和材料红外光谱仪(Nicilet iS5),紫外光谱仪(普析),SHD-(III)循环真空泵(河南予华),可见光度计(菁华科技);双氧水(30%,沈阳华东试剂),抗坏血酸(红岩试剂,硫酸亚铁铵(双船化学试剂),甲醇(国药),无水乙醇(国药),磷酸氢二钠(国药),二甲亚砜(沈阳华东试剂),正丁醇(恒兴化学试剂),三氯化铁(泉瑞试剂),其他试剂(KH2PO4,乙二胺四乙酸二钠,三氯甲烷,茚三酮等)均购于国药集团.2.2 试剂配制(1)0.2mol/L的PBS溶液(pH=7.4):准确称量35.8010gNa2HPO4·12H2O,溶于500ml蒸馏水中,标为液①;准确称量3.1120gKH2PO4·2H2O,溶于100ml蒸馏水,标记为液②;适量混合①号溶液和②号溶液配制所需缓冲溶液.(2)2.0mmol/L的EDTA-Fe(II)溶液:EDTANa2溶液(4.0mmol/L):EDTANa20.3721g溶于250ml超纯水,记为溶液①,精确称量硫酸亚铁铵0.3923g溶于250ml蒸馏水记为溶液②,将①、②两种溶液按1:1的体积比进行混合,得到2.0mmol/L的EDTANa2-Fe (II)溶液.(3)0.52mg/mL的番红花红T溶液、6%的H2O2溶液、0.2%的水合茚三酮溶液的配制准确称量藏红花红T0.0525g溶于超纯水中,转移至100ml容量瓶中,定容,备用.量取10ml30%的H2O2,并转移至50ml的容量瓶中后定容.在100ml容量瓶中准确称取0.2010g茚三酮,将其溶解在乙醇中,稀释至刻度并备用.(4)配制5%的FeCl3溶液:在10ml容量瓶中准确称取0.5000gFeCl3,将其溶解在超纯水中,并稀释至刻度.2.3 多糖的提取与分级用粉碎机将天然甘草破碎过,分别脱脂、脱色,按一定比例加入溶剂搅拌均匀,静置后置于80℃的水浴锅中恒温6h,冷却至室温后离心分离,然后将残余物保持在烧杯中,重复上述步骤三次.将滤出四次的滤液合并,置于烧杯中,在60℃的水浴中浓缩至没有水层后冷却至室温.按体一定体积比加入乙醇密封静置36小时后过滤.将沉淀物用少量甲醇洗涤三次,并将沉淀物置于干燥的容器中真空干燥后的产品即为甘草粗多糖.称取一定量的粗糖,加入蒸馏水,加热至60℃使多糖充分溶解后冷却至室温后过滤,然后加入无水乙醇,当醇的浓度达到20%时会产生大量的棕色沉淀,静置、抽滤,干燥后所得物质即为“水提1级多糖”.再将乙醇继续加入上述保留的滤液中,在溶液中得到浓度为40%的无水乙醇,得到沉淀物“水提2级多糖”,如上所述继续向母液中加入乙醇,使醇的浓度至60%,得到“水提3级多糖”,其他分级操作与1级糖的相同.2.4 甘草多糖清除各样品羟自由基分别在六个试管中,吸取三毫升上述配制的PBS缓冲液,再加1.5ml浓度为2.0mmol/L的EDTA二钠铁,0.45ml的浓度为0.51mg/mL的番红花红T溶液,然后加入2.0毫升不同浓度的多糖,加入0.9ml的6%H2O2溶液后稀释至10毫升.将混合溶液置于40℃的恒温水浴中半小时,在520nm的波长处测定样品吸光度.由测得的各空白和样品的吸光度值计算清除率E (%),计算公式如下:E(%)=(A樣品-A空白)/(A对照-A空白)*100%3 结果和讨论3.1 甘草多糖的显色特性本研究对提取的甘草多糖进行了三氯化铁和茚三酮实验,结果表明每种甘草多糖和三氯化铁(FeCl3)溶液样品反应溶液均变黄,表明不存在烯醇、酚羟基.在茚三酮显色实验中,发现部分多糖溶液变成紫色,表明含有氨,此结果与UV的结论一致.3.2 紫外光谱研究对所提取各多糖试样进行了紫外吸收测试,实验在200-900nm波长范围内进行.从紫外光谱测试结果可以看出,粗多糖,水提取物一级,二级和三级多糖均有吸收峰,表明粗多糖和每种分级的多糖含有蛋白质或核酸.3.3 红外光谱设定红外光谱仪的试验条件,用溴化钾压片法制备粗多糖和各分级水提多糖红外试样,在4000-600cm-1之间依次扫描压制样品,获得相应多糖样品的红外光谱,红外特征峰的数据示于表1.以图2粗多糖为例,从红外光谱可以看出,在3450.4cm-1處有一个强而宽的吸收峰.这是多糖中的O-H伸缩振动吸收峰;在1635.4cm-1处是C=O的伸缩振动吸收峰;1257.3cm-1处的吸收峰是由糖环中醚环C-O-C的C-O伸缩振动引起的吸收峰;在1089.5cm-1处的强吸收峰是由糖环C-O-H的C-O伸缩振动引起的吸收峰;915.3在cm-1处是β-糖苷键的特殊吸收峰;α-糖苷键在859.6cm-1处具有特定的吸收峰,表明在水提粗多糖中存在β-糖苷键和α-糖苷键.3.4 甘草多糖对羟自由基清除能力的活性研究我们探讨了甘草多糖对羟自由基的清除能力,原理为在Fe2+存在时,与H2O2可生成·OH的同时还生成Fe3+,反应方式如下:H2O2+Fe2+→·OH+OH-+Fe3+,而·OH又可使翻红花红T褪色,基于以上原理可通过分光光度计法来检测甘草多糖对羟自由基清除能力.本研究提取的四种甘草多糖各试样的清除羟自由基能力见表2,对应EC50值的大小见图3.由以上实验结果可知,EC50由小到大排列依次为1级多糖>粗多糖>2级多糖(EC50)>3级多糖(EC50)>抗坏血酸(EC50),由上述结果可知提取的多糖的羟自由基清除能力强于对照品(抗坏血酸).同时,也表明随着甘草水提分级的增加,羟自由基的清除能力降低.本研究也探讨了加入甘草多糖对酱油试样的羟基自由基清除能力的影响,结果表明,加入甘草多糖后酱油试样对羟基的清除能力明显的增强.4 结论本文是以甘草为原料,采用水提醇沉法提取了甘草多糖后对甘草多糖进行分级,分别得到水提一级、二级,三级糖.用紫外、红外等方法对提取的多糖进行了表征,根据芬顿反的原理研究了所制备的甘草多糖清除羟自由基的能力,并在酱油试样中添加提取的多糖后,研究了其羟基自由基清除能力,结果表明,加入甘草多糖的酱油试样对羟基的清除能力有明显的增强.参考文献:〔1〕陈橙,帕丽达.阿不力孜,米仁沙.亚库甫,胀果甘草酸性多糖的分离纯化、结构分析及免疫活性测定[J].2017,21(10):1110-1112.〔2〕贺敏,吕慧英,梁逸曾.甘草化学成分分析(英文)[J].湘潭化工学院化学工程与制药系,2014,27(4):290-295.〔3〕Ikegami N.Prophylactic effect of long-term oral administration of glycyrrhizin on AIDS development of a symptomatic patients.PO-825-0596 IX International Conference on AIDS,Berlin,1993.〔4〕Chen M,Christensen S.B,Theander T.G,Kharazami A.Antileishmanial Activity of Licochalcone A in mice infected with Leishmania major and in hamsters infected with Leishmania donovani. Antimicrobial Agents and Chemotheraphy,1994,38:1339-1344.〔5〕张泽生,史珅,杨超慧,等.甘草多糖免疫调节作用的研究[J],现代生物医学进展,2008,8(10):1855-1837.〔6〕王忱.甘草多糖抑瘤的体内实验及其分子机制的研究[D].天津医科大学,2002.1213-1215.〔7〕魏炜.甘草药用成分的萃取、分离、纯化方法研究[D].大连:大连理工大学,2005.〔8〕刘树兴,唐孟忠.“米邦塔”食用仙人掌多糖分级新方法的研究[J].食品工业科技,2006(4):108-109.〔9〕郭立山.郁金中水溶性多糖的梯度分离和含量测定[J].中医药学报,1996(4):48-49.〔10〕蔡亚平,韩学忠.五味子多糖分级注射剂的含量和性质测定研究[J].中草药,2010,32(7):228-230.〔11〕刘湘,汪秋安.天然产物化学[M].北京:化学工业出版社,2010.。
5种中药提取物清除自由基的体外抗氧化活性研究
084) 作者简介:郭新颖(1986-),女,工程师,主要从事理化检验工作。 通信作者:陆 娟。
单、试剂便宜,可为开拓现代食药用途、开发功能性 保健1.1 仪器与试剂
GUO Xin-ying,SHI Yu-kun,CHEN Feng,LU Juan (Nantong Center for Disease Control and Prevention, Nantong 226007, China) Abstract :Objective A new fluorescence detection method was established for the indirect determination of
抗氧化活性,其中以五倍子最佳。
关键词:羟自由基;荧光强度;抗氧化;中药
中图分类号:R284.1
文献标识码:A
Study on scavenging free radicals and antioxidant activity in vitro for 5 kinds of traditional Chinese medicine extracts*
F96 型荧光分光光度计 (上海棱光技术有限公 司);930 型荧光光度计 (上海第三分析仪器厂); FA2004 型电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)。
5.0×10-5mol·L-1 曙红 B 溶液(上海新中化学试 剂厂);5.0×10-4mo·l L-1 FeSO4 溶液(批号 20140630 国 药集团化学试剂有限公司);2.0×10-3mol·L-1 硫脲溶 液(批号 96-12-02 上海试剂一厂);2.0×10-3mol·L-1 抗坏血酸溶液 (批号 L-8754-50 Sigma 试剂公司); 0.002% H2O2 溶液 (批号 10011218 国药集团化学试 剂 有 限 公 司);1.0 ×10-4mol·L-1 H2SO4 溶 液 (批 号 20061204 上海试剂四厂昆山分厂)。
15种中草药抗烟草花叶病毒活性的研究
15种中草药抗烟草花叶病毒活性的研究作者:徐晓庆等来源:《安徽农业科学》2014年第06期摘要[目的]测定15种中草药提取物抗TMV的活性。
[方法]利用半叶枯斑法,初筛测定15种中草药对TMV钝化作用,复筛测定其对TMV初侵染和复制增殖作用。
[结果]商陆、大黄、板蓝根、金银花4种中草药表现出明显的TMV体外钝化作用,其钝化抑制率均在50%以上;复筛测定4种中草药抗TMV初侵染和复制增殖活性,大黄表现出较好的活性,且与其他3种中草药相比差异显著。
盆栽试验表明,植物提取液(大黄)在100倍液下,喷雾加灌根的施药方式对烟草病毒病的防效最好,达49.00%,优于对照药剂20%吗啉胍·乙铜可湿性粉剂。
[结论]15种中草药中大黄具有较优的抗TMV活性,值得进一步研究。
关键词中草药;烟草花叶病毒;心叶烟;曼陀罗中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611(2014)06-01691-03Abstract[Objective] The aim was to study the active determination of the extracts of 15 kinds of Chinese traditional medicine against TMV. [Method] Using half leaf blight spot method, 15 kinds of Chinese traditional medicine against TMV in vitro was determined in the experiment of initial screening, after screened again through the experiments of inhibiting TMV infection and inhibiting the multiplication of TMV. [Result] Four kinds of Chinese herbal medicine, Phytolacca acinosa Roxb., Rheum palmatum L., Isatis tinctoria, Lonicera japonica Thunb., had an obvious inactivation on TMV in vitro, and the inhibition rate was more than 50%. After screened again through the experiments of inhibiting TMV infection and inhibiting the multiplication of TMV,Rheum palmatum L. showed better activity. It had a significant difference compared with the other three kinds of Chinese traditional medicine. In the field plot trials, the extract of Rheum palmatum L.(100 times, spraying+pouring )was better than Moroxydine+Cupric acetate, W.P.(20%) and had the best inhibition rate(49.00%). [Conclusion] Rheum palmatum L. had the best activity against TMV, and was worth further studying.Key words Chinese traditional medicine; TMV; Nicotiana glutinosa L.; Datura stramonium L.植物病毒病的防治相对于病(真菌、细菌)、虫、草等的防治较为困难,全世界每年因其造成的经济损失高达数百亿元,然而成为商品的抗植物病毒剂较少[1-5]。
天麻提取物的抗氧化与抗炎研究
天麻提取物的抗氧化与抗炎研究天麻是一种传统的中药材,其根茎具有多种药理活性,被广泛用于中药的制剂中。
近年来,天麻提取物因其良好的抗氧化和抗炎作用,成为了新的研究热点。
抗氧化研究天麻提取物中含有大量的多酚类、生物碱类和黄酮类物质,这些化合物具有良好的抗氧化性质。
抗氧化是指能够减少或抵消人体内自由基的活性和对细胞的损伤的能力。
自由基是在人体代谢过程中产生的一种高度活性的分子,它们可引起细胞膜的氧化损伤、DNA断裂和细胞凋亡等现象。
而自由基的产生源于氧化还原反应中未被还原的过程性氧分子。
天麻所含的多酚类、生物碱类和黄酮类物质能够对抗自由基的氧化反应,从而减少对人体的损伤。
多项研究证明,天麻提取物对于心脑血管系统的保护作用具有明显的效果。
在中老年人群中常见的高血压、糖尿病等疾病都与氧化损伤有关,而天麻提取物的抗氧化特性可以减轻这些疾病对体内细胞的损伤。
此外,天麻提取物对神经系统的保护作用也备受关注。
神经元细胞一旦受损,会释放氧化物,导致自由基引起的氧化损伤加剧,形成恶性循环。
天麻提取物具有神经保护作用,可以抗氧化,减轻细胞氧化损伤,从而减缓神经系统的退化。
抗炎研究除了抗氧化作用,天麻提取物还有显著的抗炎作用。
炎症是一种对于容器壁或组织细胞等损害的进攻性反应。
炎症反应伴随有多种生物学样品的急性和慢性免疫反应的过程。
炎症反应产生的趋化因子是一类可以使白细胞向炎症部位聚集的蛋白质,引发细胞的免疫失调和炎症反应。
多项研究表明,天麻提取物对于炎症的控制具有显著的作用。
天麻提取物中的黄酮类物质能够抑制炎性因子的产生,从而减轻炎症反应的严重程度,同时也能够减轻组织细胞的氧化损伤。
另外,天麻提取物还具有镇痛、镇静、改善免疫功能等特性。
其中天麻生物碱可以减轻中枢神经系统的兴奋性,从而产生镇静、抗惊厥等效果。
总结在中医药中,天麻作为比较常见且重要的药材,一直有着较高的使用价值。
随着现代医学研究技术的发展,对于天麻的多种药理活性的研究也更加深入和系统。
金银花不同提取物抗氧化活性的研究
that 95 % ethanol extract had highest content of chlorogeinc acid,total flavonoids and total polyphenols,that was 123.99 mg/g,242.62 mg/g and 48.76 mg/g;95% ethanol ext ract had t he strongest·OH and DPPH·radical scavenging ability with scavenging ratio of 90.69% and 65.64 % .Thus."OH and DPPH ·scavenging capacity presented probably positive relatively with concentration of chlorogeinc acid, total flavonoids and tota l polyphenols.
Key words:the f lower buds ofLonicerajaponica;antioxidant bioactivity;chlorogenic acid;total f lavonoids; total polyphenols;hydroxyl radical(·OH);diphenyl picryl hydrazinyl radical (DPPH·)
ja ponica.T h e ultraviolet—visible spect rophotometry was applied to test the contents of chlorogeinc acid,total
白薇提取物的抗氧化和抑菌活性
白薇提取物的抗氧化和抑菌活性白薇(Cynanchumatratum )为萝摩科(Asclepiadacea )鹅绒藤属(Cy nan chum 植物直立白薇(Cy nan chumatratum Bunge)或蔓生白薇(Cynanchum versicolor Bunge )的干燥根及根茎,在全国大部分地区均有分布,主要生长于山地。
据《中药大辞典》记载,白薇根及根茎部分可供药用,有“清热散肿、利尿通淋、解毒疗疮”的功效。
目前,国内外对白薇的研究主要集中在化学成分的分离鉴定与药理作用。
化学成分研究表明,白薇主要含有C21笛体皂昔、白薇素、挥发油、强心昔,而且发现白薇皂昔具有抗菌消炎作用[1]。
柑橘是我国南方的主要水果品种之一,在采后贮藏过程中易受青绿霉菌侵染,导致果实腐烂,随后大量病果被到处丢弃,造成巨大的经济损失、环境污染。
另外,受空气中的氧和果实中酶的作用,果实油脂中的不饱和脂肪酸会氧化分解为醛、酮和低级脂肪酸,降低果实的品质[2]。
为了降低采后柑橘果实烂果率,目前生产上主要使用咪鲜胺、嗟菌灵等化学杀菌剂,而使用化学杀菌剂易造成果实药剂残留,危害人体健康。
面对这种情况,开发具有较强抗氧化性和能抑制柑橘等植物采后主要病害病原菌双重功能的保鲜剂是比较理想的办法。
笔者所在课题组前期筛选发现,白薇对柑橘青霉菌具有较强的抑制作用。
因此,本研究以石油醛、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙醇、水为提取溶剂,采用超声波辅助方法提取白薇,比较白薇不同溶剂提取物体外抗氧化性和对柑橘采后主要病原菌意大利青霉(Penicillium italicum )的抑菌活性;进一步研究白薇乙醇提取物对其他15种植物病原菌的抑菌活性,以期为植物源果蔬保鲜剂相关研究提供参考依据。
1材料与方法1. 1试验材料白薇,购自江西省樟树市华丰药业XX公司,粉碎,过40目筛,常温保存备用。
柑橘青霉病病菌:柑橘意大利青霉(P. italicum );枣褐斑病病菌:枣拟茎点霉菌(Phomopsis mauritiana );柑橘黑腐病病菌:柑橘链格抱菌(Alternaria citri );柑橘蒂腐病病菌:柑橘囊抱壳菌(Phytophthora capsici );萬苣菌核病病菌:萬苣菌核核盘菌(Sclerotinia sc 1 erot iorum );辣椒疫病病菌:辣椒疫霉(Phytophthora capsici );柑橘酸腐病病菌:柑橘白地霉(Geotrichum citri- aurantii );茄褐纹病病菌:茄褐纹拟茎点霉(Phomopsis vexans );柑橘灰霉病病菌:柑橘灰霉菌(Botrytis cinerea );芦笋茎枯病病菌:芦笋天门冬拟茎点霉(Phomopsis asparagi );西瓜枯萎病病菌:西瓜尖镰抱菌(Fusarium oxysporum f. sp. n iveum);柑橘绿霉病病菌:柑橘指状青霉( Pe nicillium digitatum );狒猴桃软腐病三大致病菌:葡萄座腔菌(Botryosphaeria parva )、彳弥猴桃拟盘多毛砲菌(Pestalotiopsis fici )、彳弥猴桃拟茎点霉(Phomopsis sp. ) o以上菌株均由江西农业大学农学院植物病理实验室提供;PDA培养基,笔者所在实验室自制。
设计性实验药学实验报告
实验题目:中药复方提取物的抗氧化活性研究一、实验目的1. 探究中药复方提取物的抗氧化活性。
2. 评估不同提取方法对中药复方提取物抗氧化活性的影响。
3. 为中药复方提取物的开发和应用提供实验依据。
二、实验原理本实验采用DPPH自由基清除法检测中药复方提取物的抗氧化活性。
DPPH自由基是一种稳定的自由基,具有较强的氧化性。
当抗氧化剂与DPPH自由基反应时,DPPH 自由基的吸收峰会减弱,其吸光度值降低。
通过测定吸光度值的变化,可以评估抗氧化剂的抗氧化活性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:- 中药复方:采用某中药复方药材,经粉碎、过筛后备用。
- 乙醇、甲醇、水等有机溶剂。
- DPPH自由基溶液。
- 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基。
2. 实验仪器:- 电子天平。
- 超声波提取仪。
- 分光光度计。
- 真空干燥箱。
四、实验方法1. 中药复方提取物的制备:- 采用超声波提取法、回流提取法和渗漉法分别制备中药复方提取物。
- 将药材与乙醇、甲醇、水等有机溶剂按一定比例混合,置于超声波提取仪中提取。
- 提取液经真空干燥箱干燥,得到中药复方提取物。
2. 抗氧化活性检测:- 配制不同浓度的中药复方提取物溶液。
- 取一定量的DPPH自由基溶液,加入中药复方提取物溶液,混合均匀。
- 在517nm波长下测定吸光度值。
- 以未加中药复方提取物的DPPH自由基溶液为空白对照。
3. 数据处理:- 计算抗氧化活性指数(IC50):以不同浓度的中药复方提取物溶液的吸光度值与空白对照组的吸光度值之比作为抗氧化活性指数。
- 比较不同提取方法制备的中药复方提取物的抗氧化活性。
五、实验结果与分析1. 不同提取方法对中药复方提取物抗氧化活性的影响:- 超声波提取法、回流提取法和渗漉法制备的中药复方提取物均具有一定的抗氧化活性。
- 超声波提取法所得中药复方提取物的抗氧化活性最高,回流提取法次之,渗漉法最低。
2. 中药复方提取物的抗氧化活性:- 随着中药复方提取物浓度的增加,其抗氧化活性也随之增强。
16种中草药提取物的抗氧化活性研究
16种中草药提取物的抗氧化活性研究王雪梅;吴汉平;汪晓敏;刘洋;王家恒【摘要】以无水乙醇、50%乙醇水溶液和水为提取剂,分别超声提取16种中草药,并运用3种抗氧化活性评价方法对各提取液的体外抗氧化能力进行了测定和评价。
结果表明:红景天、何首乌、肉苁蓉的乙醇提取液对DPPH・、・OH和・O2-自由基都具有较强的清除能力;石榴皮的无水乙醇、50%乙醇水溶液和水3种提取液对DPPH・和・O2-自由基具有较强的清除能力;陈皮、丹参的水提取液对DPPH・和・O2-自由基也具有较强的清除能力;所有中草药的水提取液对・OH自由基的抑制率均较低。
%Ultrasonic extraction was used to extract 16 kinds of Chinese herbs with ethanol , 50% ethanol solution and water as solvents .The antioxidant capacity of the extracts was measured and evaluated by three kinds of antioxidant activity evaluation methods in vitro . The results showed that the ethanol extracts of Rhodiola roseaL .,Polygonum multif lorum and Herba Cistanche had better scavenging effects to DPPH ・ ,・ OH and ・ O2 - free radicals ;three kinds of extracts of Punica granatum L .had strong scavenging activity to DPPH・and・O2 -free radicals ,the same as the water extracts of Citrus aurantium L .and Salvia miltiorrhiza Bge .;and the water extracts of all herbs exhibited lower scavenging effects to・OH free radicial .【期刊名称】《安徽大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】7页(P74-80)【关键词】中草药;自由基;抗氧化性;清除能力【作者】王雪梅;吴汉平;汪晓敏;刘洋;王家恒【作者单位】安徽大学化学化工学院,安徽合肥230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601【正文语种】中文【中图分类】Q503生物有机体在代谢过程中不断地产生自由基,根据氧化性质及程度的不同,自由基一般被分为氧自由基、脂类自由基和半醌类自由基,与生命现象关系最为密切的是活性氧自由基,包括超氧阴离子自由基(·O2-)、羟基自由基(·OH)、过氧化氢(H2O2)、单线态氧(1O2)、三线态氧(3O2)等.其中·O2-是生物体生成的第1个自由基,是所有自由基的前身,具有重要的生物功能,也与多种疾病有着密切关系;·OH是目前所知活性氧中对生物体毒性最强、危害最大的一种自由基[1].当生物有机体产生的自由基超出机体防护系统所具有的清除能力时,就会直接或间接地引起蛋白质变性、酶失活、DNA链断裂、细胞解体乃至机体病变或死亡[2-4].自由基及其诱导的氧化作用被认为是导致生物衰老和某些疾病如癌症、糖尿病、心血管疾病等的重要因素[5-6].抗氧化剂能有效清除自由基,延缓人体衰老和预防疾病.天然抗氧化剂因其具有无毒副作用、无污染、无残留、安全等优点日益受到人们的关注.我国的中草药资源十分丰富,中草药中多含有黄酮、多酚、鞣质、皂苷及生物碱等活性成分,是很有潜力的天然抗氧化剂资源[7-9].从中草药中筛选出具有抗氧化活性、清除自由基的物质是目前抗氧化研究领域较为重要的工作.由于中草药中往往含有多种抗氧化活性成分,而不同的萃取溶剂、方法和条件会导致评价效果的差异.因此,采用单一的抗氧化活性评价方法进行筛选不能全面反映中草药的抗氧化活性[10].作者选择以无水乙醇、50%乙醇水溶液和水作为提取溶剂,分别超声提取16种中草药,采用分光光度法测定提取物对DPPH·、·O2-、·OH 3种自由基的清除能力,以期较为全面地评价各中草药的抗氧化性.1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·)、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、邻苯三酚、水杨酸、硫酸亚铁、30%双氧水、抗坏血酸(VC)、无水乙醇,均为分析纯.红景天(Rhodiola rosea L.)、红花(Carthamus tinctorius L.)、何首乌(Polygonum multiflorum)、陈皮(Citrus aurantium L.)、丹参(Salvia miltiorrhiza Bge. )、当归(Angelica sinensis)、黄精(Polygonatum sibiricun Red.)、灵芝(Ganoderma lucidum )、山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)、石榴皮(Punica granatum L.)、绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)、银耳(Tremella fuciformis)、黄芪(Astragalus membranaceus)、肉苁蓉(Herba Cistanches)、淮山药(Dioscorea opposita Thunb.)、玉竹(Polygonatum odoratum),均购自合肥百姓缘大药房.蒸馏水,实验室自制.TU-1901型紫外-可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司;数显恒温水浴锅,江苏金坛市金城国盛实验仪器厂;超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;电子天平,奥豪斯仪器上海有限公司;电热恒温干燥器,上海精密科学仪器有限公司;中药粉碎机,上海淀久中药机械有限公司.准确称取经干燥、粉粹后的各类中草药1.0 g,采用无水乙醇、50%乙醇水溶液和水作为提取剂进行提取.分别加入40 mL提取剂,超声30 min后过滤;向滤渣中再加入40 mL该提取剂,继续超声30 min过滤,合并两次滤液,将滤液定容至100 mL后,按1∶10稀释得各中草药待测液,待测液中药液浓度为1 mg·mL-1.(1) 对DPPH·自由基的抑制率[11]分别取中草药待测液和浓度为2.00×10-4 mol·L-1的DPPH·乙醇溶液各3 mL加入同一具塞试管中,摇匀,在室温暗处放置30 min后,以蒸馏水为参比,用紫外-可见分光光度计测定混合溶液在517 nm处的吸光度(Ai1),同法测定3 mL的各提取剂与3 mL DPPH·溶液混合后的吸光度(A01)和3 mL样品溶液与3 mL无水乙醇混合后的吸光度(Aj1),根据下列公式计算抑制率(S1)(2) 对·OH自由基的抑制率[12]分别取浓度为1.00×10-2 mol·L-1的水杨酸-乙醇溶液、浓度为1.00×10-2 mol·L-1的FeSO4溶液和中草药待测液各2 mL加入同一具塞试管中,然后加入2 m L 8.8×10-2 mol·L-1的H2O2溶液,摇匀,于37 ℃水浴中反应30 min后,以蒸馏水为参比,在510 nm处测定吸光度(Ai2);以2 mL去离子水代替水杨酸溶液测定吸光度(Aj2);用2 mL提取剂代替上述待测液来测定吸光度(A02).根据下列公式计算抑制率(S2)(3) 对·O2-自由基的抑制率[13]取pH为8.2的Tris-HCl缓冲溶液5 mL于具塞试管中,在25 ℃水浴中预热20 min后,依次加入待测液2 mL和0.5 mL浓度为5.00×10-3 mol·L-1邻苯三酚溶液(用1.0×10-2 mol·L-1的HCl溶液配制),摇匀,于25 ℃水浴中反应4 min,以1.0×10-2 mol·L-1的HCl溶液作参比,在320 nm处测定其吸光度(Ai3);以该浓度的HCl溶液0.5 mL代替邻苯三酚溶液,测定吸光度(Aj3);用各提取剂2 mL代替上述不同待测液,测定吸光度(A03).根据公式计算抑制率(S3)用同样方法测定质量浓度为1 mg·mL-1的VC水溶液对DPPH·、·OH、·O2- 3种自由基的抑制率.(4) IC50的测定用上述同样方法测定提取物、VC在不同浓度下的抑制率,以提取物的浓度为横坐标,以抑制率为纵坐标作图,在图中找出抑制率为50%时的提取物溶液浓度IC50.DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基,具有单一电子,能够接受一个电子或氢离子,在波长517 nm处具有最大吸收,其醇溶液呈深紫色.当有抗氧化剂存在时,DPPH·的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度值会下降,且下降程度呈线性关系,可用于评价实验样品的抗氧化能力.此抗氧化能力用抑制率来表示,抑制率越大,其抗氧化性越强[14].16种中草药提取液对DPPH·的抑制率测定结果见表1.由表1可以看出,16种中草药提取液对DPPH·自由基都具有一定的清除能力.其中红景天、何首乌、石榴皮、肉苁蓉、山楂的无水乙醇提取液对DPPH·自由基的抑制率均在88%以上;红景天、何首乌、石榴皮、肉苁蓉、山楂、丹参、陈皮的50%乙醇提取液对DPPH·自由基的抑制率超过了75%;陈皮、丹参、石榴皮、红景天的水提取液对DPPH·自由基的抑制率也均达到了70%.VC对DPPH·自由基的抑制率为81.7%.从表1中可以看出:多数中草药的无水乙醇提取液对DPPH·自由基的抑制率高于其水提取液,而陈皮、丹参的水提取液对DPPH·自由基的抑制率却远高于其醇提取液.对表1中前8种中草药的提取液及VC进行浓度梯度稀释,分别测定其对DPPH·的抑制率,并计算IC50,其值见表2.IC50是指对自由基的抑制率为50%时的提取物溶液浓度,IC50越小,抗氧化能力越强.由表2可见,VC的IC50(0.046 mg·mL-1)最小;中草药中IC50较小的依次为红景天的无水乙醇提取液(0.065 mg·mL-1)和50%乙醇提取液(0.072 mg·mL-1)、石榴皮的无水乙醇提取液(0.092 mg·mL-1)和50%乙醇提取液(0.101 mg·mL-1)、陈皮水提取液(0.113 mg·mL-1)、丹参水提取液(0.132 mg·mL-1)等,说明其对DPPH·自由基的清除作用均较强.·OH是生物体内最活泼的活性氧,也是已知的对生物分子破坏能力最强的自由基之一.通过利用Fenton反应,Fe2+与H2O2反应产生·OH自由基,然后加入水杨酸捕捉并产生有色物质,该有色物质在510 nm处有最大吸收.当有抗氧化剂存在时,·OH自由基的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度会下降,且下降程度呈线性关系,由此可推知体系中·OH自由基量的变化,用于评价实验样品的抗氧化能力[15].16种中草药提取液对·OH自由基的抑制率测定结果见表3.续表3由表3可以看出,16种中草药的提取液对·OH自由基也都具有一定的清除能力.其中,红景天、黄精、何首乌、肉苁蓉的无水乙醇提取液对·OH自由基的抑制率均在80%以上;50%乙醇提取液中仅有红景天对·OH自由基的抑制率超过70%;而水提取液对·OH自由基的抑制率均没有达到70%.VC对·OH自由基的抑制率为82.7%.对表3中前7种中草药的提取液进行浓度梯度稀释,分别测定其对·OH自由基的抑制率,并计算IC50,其值列于表4.由表4可见,VC的IC50最小,为0.049 mg·mL-1,对·OH自由基的清除作用最强;中草药提取液中IC50最小的为红景天的无水乙醇提取液(0.193 mg·mL-1),对·OH自由基的清除作用也较强.利用邻苯三酚自氧化法测定抗氧化剂对·O2-自由基的抑制率.邻苯三酚在pH<9.0的条件下发生自氧化反应,产生稳定浓度的·O2-与中间物,中间物又与·O2-反应,生成一种有颜色的中间产物,此物质在紫外波长320 nm处有最大吸收,故可通过紫外-可见光分光光度计来定量测定抗氧化剂在此体系中对·O2-的清除作用,间接评价抗氧化剂的抗氧化能力[16-17].16种中草药提取液对·O2-自由基的抑制率测定结果见表5.由表5可以看出,16种中草药的提取液对·O2-自由基同样都具有一定的清除能力.其中,肉苁蓉、石榴皮、红景天、何首乌的无水乙醇提取液对·O2-自由基的抑制率均超过70%;肉苁蓉、石榴皮、红景天的50%乙醇提取液对·O2-自由基的抑制率也超过70%;石榴皮、陈皮、丹参的水提取液对·O2-自由基的抑制率也都在70%以上.VC对·O2-自由基的抑制率为97.6%.对表5中前6种中草药的提取液进行浓度梯度稀释,分别测定其对·O2-自由基的抑制率,并计算IC50,其值见表6.由表6可见,石榴皮(0.213 mg·mL-1)和肉苁蓉(0.253 mg·mL-1)的无水乙醇提取液的IC50较小,对·O2-自由基的清除作用强于VC(0.457 mg·mL-1).测定的16种中草药中,多数中草药的无水乙醇提取液对3种自由基的抑制率高于其水提取液,但陈皮、丹参等的水提取液对3种自由基的抑制率却高于其无水乙醇提取液;16种中草药的水提取液对·OH自由基的抑制率均较低.这是因为不同中草药中所含有的抗氧化活性成分的种类和含量不同,同一种中草药采用不同极性的溶剂提取出的抗氧化活性成分不同,同种抗氧化活性物质对不同自由基的清除效果也不尽相同.由于16种中草药的50%乙醇提取液对3种自由基的抑制率均介于其醇提液和水提液之间,因此,只要选择无水乙醇和水作提取剂即可对中草药的抗氧化活性作出综合评价.作者采用分光光度法测定了16种中草药的不同溶剂提取液对DPPH·、·OH 和·O2-自由基的抑制率,方法简便.实验结果表明:16种中草药的不同溶剂提取液对3种自由基都有一定的清除作用.其中红景天、何首乌、肉苁蓉的无水乙醇提取液对3种自由基具有较强的清除能力;石榴皮的3种提取液、陈皮和丹参的水提取液对DPPH·和·O2-自由基具有较强的清除能力;所有中草药的水提取液对·OH自由基的抑制率均较低.对于不同种类的中草药,使用同一种提取溶剂、同一种抗氧化活性评价方法所测得的抗氧化能力各不相同;对于同一种中草药,使用不同的提取溶剂、用同一种抗氧化活性评价方法所测得的抗氧化能力不同;对于同一种中草药,使用相同的提取溶剂、用不同的抗氧化活性评价方法所测得的抗氧化能力也不同.因此,在筛选具有高效抗氧化活性中草药的过程中,应该选择不同的提取剂,使用多种抗氧化测试方法进行综合评价,以便全面客观准确地评价抗氧化效果,从而筛选出活性高、特异性强的天然抗氧化剂.【相关文献】[1] 李勇,孔令青,高洪,等.自由基与疾病研究进展[J].动物医学进展,2008,29(4):85-88.[2] 马小媛,钱卫平.抗氧化能力评价方法[J].化学进展,2011,23(8):1737-1746.[3] Stadtman E R, Levine R L.Free radical-mediated oxidation of free amino acids and amino acid residues in proteins[J]. 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19种中草药美白及抗氧化活性的比较
19种中草药美白及抗氧化活性的比较王雪梅;沈雪梅;吴文琴;张娜;王荣庆【摘要】以无水乙醇和水作为萃取剂超声提取19种中草药,采用紫外-可见分光光度法测试各中草药提取液对酪氨酸酶和DPPH·、·OH、·O-23种自由基的抑制率及半数抑制浓度IC50.结果表明,茯苓、黄芩、红景天、赤芍、人参、白蔹均表现出较强的酪氨酸酶抑制活性,其中茯苓对酪氨酸酶的抑制能力最强.红景天、黄芩、白芍、赤芍的综合抗氧化活性强于其他中草药.%Absolute ethyl alcohol and water were used to extract 19 kinds of Chinese herbal medicine with ultrasonic extraction,the inhibition ratio and the half inhibition concentration on tyrosinase and three kinds of radical of DPPH·,·OH and ·O-2 were determined by UV-visible spectrophotometry.The results showed that extracts of poria cocos,scutellaria baicalensis,rhodiola rosea,radix paeoniae rubra,ginseng and ampelopsis japonica showed a strong inhibitory effecton the tyrosinase,in which poria cocos was the strongest,while the extracts of rhodiola rosea,scutellaria baicalensis,radix paeoniae alba and radix paeoniae rubra had stronger comprehensive antioxidant activity than the other herbs.【期刊名称】《安徽大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2017(041)001【总页数】9页(P86-94)【关键词】中草药;酪氨酸酶;自由基;抗氧化活性;抑制率【作者】王雪梅;沈雪梅;吴文琴;张娜;王荣庆【作者单位】安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601;安徽大学化学化工学院,安徽合肥 230601【正文语种】中文【中图分类】TQ658;R285皮肤中黑色素的数目、大小、类型及分布影响着人体皮肤颜色.黑色素是由黑素细胞内的酪氨酸在酪氨酸酶、多巴色素互变酶,5,6-二羟吲哚-2-羧酸氧化酶(TRP-1)的综合作用下形成的[1].由黑色素的合成途径可知,酪氨酸酶在黑色素产生过程中起着至关重要的作用[2],其活性过高或异常表达会引起黑色素生成过多,并引发皮肤色素性疾病[3-4];此外,机体在代谢过程中产生的具有高活性的自由基对黑色素的合成也有着重要的影响[5].体内的氧自由基产生过量不但会促进酪氨酸酶催化氧化,生成脂褐素,在细胞内大量堆积,形成皮肤斑点,同时也会使皮肤血管老化,营养成分不能及时输送到肌肤[6-7].所以,通过抑制酪氨酸酶和清除过量的自由基不但能有效阻止黑色素产生、抑制黑色素沉着,同时还能增强皮肤对自由基的防御能力,从而达到美白防衰的效果[8].笔者对19种中草药进行超声提取.以无水乙醇和水作为提取剂,通过比较各提取液对酪氨酸酶和 3种自由基的抑制率,筛选出具有较强的酪氨酸酶抑制作用和较好抗氧化能力的中草药.1.1 试剂与仪器L-酪氨酸、酪氨酸酶(25 kU),上海生工生物工程股份有限公司;1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH·),上海梯希爱化成工业发展有限公司;三羟甲基氨基甲烷(Tris),Sigma-Aldrich公司;邻苯三酚、盐酸、水杨酸、硫酸亚铁、30%过氧化氢、无水乙醇、氢氧化钠、磷酸二氢钾、维生素C(Vc),均为分析纯;当归、红景天、赤芍、白蔹、人参、黄芩、桑葚、苦参、玉竹、葛根、六月雪、茯苓、川芎、白芨、苦丁茶、金银花、白芍、苍术,均购于百姓缘大药房;黄蜀葵花,购于阜阳;蒸馏水,实验室自制.UV-1750紫外-可见分光光度计,日本岛津;JK3200B超声波清洗器,合肥金尼克机械制造有限公司;AB104-N分析天平,精度0.000 1 g,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司;DZF-6020型真空干燥箱,上海一恒科技有限公司.1.2 实验操作1.2.1 制备中草药提取液称取19种干燥、粉碎后的中草药各1.0 g,选择无水乙醇和水分别为提取剂超声提取.先分别加入提取剂40 mL,超声30 min后过滤;再向滤渣中加入40 mL该提取剂,继续超声30 min,合并两次滤液,并将其定容到100 mL,制得各中草药提取液原液.原液浓度为10 mg·mL-1,作为抑制酪氨酸酶测试液;原液稀释为1 mg·mL-1作为清除自由基测试液;均以Vc做阳性对照.1.2.2 酪氨酸酶抑制率的测定分别配置pH=6.8的磷酸盐缓冲液(PBS),1 mg·mL-1的L-酪氨酸溶液,0.07 mg·mL-1的酪氨酸酶溶液.按以下设置组加样,1测试样:2.0 mL PBS+0.5 mL酪氨酸酶溶液+0.5 mL L-酪氨酸溶液;2测试样:2.5 mL PBS+0.5 mL酪氨酸酶溶液;3测试样:0.5 mL样品溶液+1.5 mL PBS+0.5 mL酪氨酸酶溶液+0.5 mLL-酪氨酸溶液;4测试样:0.5 mL样品溶液+2.0 mL PBS+0.5 mL酪氨酸酶溶液.将各测试样混匀,置37 ℃水浴中保温30 min后立即于475 nm处测吸光度(A)[9].按公式(1)计算酪氨酸酶抑制率(I)其中:A1~A4为测试样1~4在475 nm处的A值.1.2.3 抗氧化能力的测定1.2.3.1 DPPH·抑制率测定将3 mL中草药待测液和3 mL浓度为0.200 mmol·L-1的DPPH·乙醇溶液加入同一具塞试管中,摇匀,室温下置于暗处30 min,测定其在波长517 nm处的吸光度Ai1,同法测定提取剂与DPPH·溶液各3 mL混合后的吸光度A01以及该样品溶液与无水乙醇各3 mL混合后的吸光度Aj1,依据公式(2)计算中草药对DPPH·的抑制率(S1)[10-11]1.2.3.2 ·OH抑制率测定在同一具塞试管中分别加入浓度为9.0 mmol·L-1的水杨酸-乙醇溶液和9.0 mmol·L-1的FeSO4溶液,以及中草药待测液各2 mL,然后加入8.8 mmol·L-1 H2O2溶液2 mL,摇匀,置于37 ℃水浴中反应30 min,以蒸馏水为参比,在波长510 nm处测定吸光度Ai2;以蒸馏水2 mL替代水杨酸-乙醇溶液测定吸光度Aj2;用提取剂2 mL替代中草药待测液并测定吸光度A02.依据公式(3)计算中草药对·OH的抑制率(S2)[12]抑制率测定将5 mL pH为8.2的Tris-HCl缓冲溶液加入具塞试管中,先置于25 ℃水浴中预热20 min,然后加入2 mL待测液和0.5 mL浓度为5.00 mmol·L-1的邻苯三酚溶液(用10 mmol·L-1的HCl溶液配制),摇匀后放入25 ℃的水浴中反应4 min,以10 mmol·L-1的HCl溶液作参比,选择波长320 nm测定吸光度Ai3;以0.5 mL的HCl溶液替代邻苯三酚溶液,测定吸光度Aj3;用2 mL提取剂替代中草药待测液并测定吸光度A03.依据公式(4)计算中草药对·O2-的抑制率(S3)[13]1.2.4 IC50测定用上述同样方法测定提取物和Vc在不同浓度下对酪氨酸酶的抑制率及其抗氧化能力,并依据浓度-抑制率曲线估算出半数抑制浓度(IC50).以Vc作为酪氨酸酶抑制率测试和抗氧化能力测试的阳性对照组.1.2.5 数据处理每组实验重复3次,数据采用Excel统计,以x±s表示.2.1 19种中草药的选择依据我国的中医药美容有着两千多年的历史,具有美容功效的药物已达160余种.笔者从中医药美容古方中选取祛斑、增白皮肤使用频率较高[14],或文献报道[15-16]具有较好抑制酪氨酸酶活性的19种中草药作为研究对象.依据中医药美容祛斑原理,红景天、人参补气养血,当归、川芎、赤芍、白芍、白芨活血化瘀,茯苓、苍术、六月雪健脾利湿,白蔹、葛根、黄芩、黄蜀葵花、苦丁茶、苦参、金银花清热、解毒、散结、凉血、化瘀,玉竹养阴生津,桑葚补肝益肾,所选的19种中草药虽以不同机制作用于人体,都具有一定的靓白皮肤的功效.2.2 19种中草药对酪氨酸酶的抑制作用酪氨酸酶是一种多酚氧化酶,在黑色素形成过程中分别参与催化一元酚羟基化生成邻二羟基化合物和氧化邻苯二酚生成邻苯二醌这两类不同的反应,是黑色素生成的关键酶,其活性强弱决定了黑色素数量的多少[2].目前市场上销售的许多美白、祛斑产品都是以抑制酪氨酸酶达到美白作用[17].因此,对酪氨酸酶抑制作用的强弱是评价增白效果的主要指标.在黑色素的生成过程中,在酪氨酸酶的催化作用下,首先由酪氨酸转化为多巴,多巴再转化为多巴醌.多巴醌是一种在波长475 nm处有特征吸收的有色物质.当加入对酪氨酸酶有抑制作用的样液时,多巴醌的合成量下降,下降的程度与样液的浓度呈一定的量效关系,因此依据475 nm的吸光度变化比较样液对酪氨酸酶的抑制作用的强弱[18-19].19种中草药提取液对酪氨酸酶的抑制率测定结果见表1.由表1可知:19种中草药的无水乙醇提取液和水提取液对酪氨酸酶都有一定的抑制作用.其中茯苓、赤芍、红景天、白蔹、黄芩、人参、葛根的无水乙醇提取液对酪氨酸酶的抑制率都在80%以上;赤芍、红景天、人参、白蔹、黄芩、茯苓、桑葚的水提取液对酪氨酸酶的抑制率也在80%以上.对前6种中草药进行梯度稀释,分别测定其对酪氨酸酶抑制作用,并计算IC50.IC50 为抑制率达到50%时的样品浓度,IC50 的值越小,对酪氨酸酶抑制活性越高.对前6种中草药酪氨酸酶抑制强弱复筛的测定结果见表2.由表2可知:6种中草药无水乙醇提取液中只有茯苓无水乙醇提取液的IC50(0.101 mg·mL-1)小于Vc(0.314 mg·mL-1),说明茯苓醇提液比Vc具有更好的酪氨酸酶抑制作用.6种中草药水提取液的IC50都比Vc的大,说明该6种中草药水提取液的酪氨酸酶抑制作用均弱于Vc.2.3 19种中草药提取液对DPPH·的抑制作用DPPH·在有机溶剂中是一种稳定的自由基,其乙醇溶液呈紫色,在波长517 nm处具有最大吸收.当有抗氧化剂存在时,DPPH·的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度值会下降[20],根据吸光度与浓度呈一定的量效关系,可推知体系中的DPPH·含量变化,用于评价样液的抗氧化能力.19种中草药提取液对DPPH·的抑制率测定结果见表3.由表3可知,19种中草药的无水乙醇提取液和水提取液对DPPH·都有一定的清除能力.其中红景天、黄芩、白芍、赤芍、苦丁茶、黄蜀葵花的无水乙醇提取液对DPPH·的抑制率都在90%以上;这6种中草药的水提取液对DPPH·的抑制率也均在70%以上.对前6种中草药提取液进行浓度梯度稀释,分别测定它们在不同浓度下对DPPH·自由基的抑制率,并计算IC50,测定结果列于表4.由表4可知,6种中草药中仅黄芩(0.043 mg·mL-1)的无水乙醇提取液的IC50小于Vc(0.046 mg·mL-1),说明黄芩醇提物比Vc具有更好的清除DPPH·的能力.2.4 19种中草药提取液对·OH的抑制作用利用Fenton反应,H2O2和Fe2+混合产生·OH,在反应体系中加入水杨酸可以有效捕捉·OH并生成有色物质,在510 nm处有强吸收.当有抗氧化剂存在时,·OH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度值会下降,根据吸光度与浓度呈一定的量效关系,可推知体系中·OH含量的变化,用于评价实验样品的抗氧化能力[21-22].19种中草药提取液对·OH的抑制率测定结果见表5.由表5可知,19种中草药提取液对·OH自由基的清除能力相对较弱,抑制率超过50%的仅有红景天、黄芩、茯苓的无水乙醇提取液和黄芩、红景天、白芍、赤芍、六月雪的水提取液.对红景天、黄芩、白芍、赤芍、六月雪、茯苓这6种中草药提取液进行浓度梯度稀释,测定各稀释液对·OH自由基的抑制率,计算IC50并将结果列于表6.由表6可知,无水乙醇提取液中仅红景天、黄芩、茯苓可测出IC50;除茯苓外,其余5种中草药的水提取液均可测出IC50;红景天无水乙醇提取液的IC50最小(0.193 mg·mL-1),但仍大于Vc的IC50 (0.049 mg·mL-1).2.5 19种中草药提取液对的抑制作用邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化,生成与半醌自由基,又加速半醌自由基氧化成有色的醌类物质,该物质在紫外波长320 nm处有灵敏吸收.由于醌类物质的积累依赖于的浓度,所以加入抗氧化物质后,被捕捉,导致320 nm处的最大吸光度降低.根据吸光度与浓度呈一定的量效关系,可推知体系中含量的变化,因而推算样液对的清除能力[23-24].醌类物质的积累在1 ~ 4 min内与时间呈良好的线性关系,之后减慢,所以选定反应时间4 min[25].表7列出了19种中草药提取液对自由基的抑制率.由表7可见,19 种中草药提取液对自由基的抑制率达到了80%以上的有黄芩、黄蜀葵花、白芍、红景天、苦丁茶、赤芍的无水乙醇提取液,以及赤芍、白芍、黄蜀葵花的水提取液.对前6种中草药进行浓度梯度稀释,根据测定各稀释液对自由基的抑制率,计算IC50并将结果列于表8.由表8可知,黄芩(0.091 mg·mL-1)、苦丁茶(0.258 mg·mL-1) 、红景天(0.432 mg·mL-1)的无水乙醇提取液,黄芩水提取液(0.278 mg·mL-1)的IC50,均小于Vc(0.457 mg·mL-1).说明黄芩提取液、苦丁茶和红景天的无水乙醇提取液比Vc具有更好的清除能力.笔者测定了19种中草药的无水乙醇和水提取液对酪氨酸酶和3种自由基的抑制率,通过初筛和复筛分析比较得出以下结论:19种中草药的无水乙醇提取液和水提取液对酪氨酸酶都具有一定的抑制作用.茯苓、黄芩、红景天、赤芍、人参、白蔹均表现出较强的酪氨酸酶抑制活性,其中茯苓对酪氨酸酶的抑制能力最强.19种中草药的无水乙醇提取液和水提取液对3种自由基的清除作用有较大差异.红景天、黄芩、白芍、赤芍的综合抗氧化活性强于其他中草药.在筛选的19种中草药中,红景天、黄芩、赤芍兼具较好的酪氨酸酶抑制作用和抗氧化活性.对酪氨酸酶抑制率的测试是评价美白功效的常用方法,对自由基抑制率的测试则是评价抗氧化功效的常用方法.笔者综合分析评价了19种中草药提取液的酪氨酸酶抑制作用及抗氧化性能,研究结果可为化妆品、保健品中添加中草药美白抗氧化活性成分提供一定的参考.必须指出,仅通过对酪氨酸酶活性的抑制程度来筛选中草药美白活性成分,不可避免带有一定的片面性和盲目性.但相对于人体实验测试周期较长或缺乏人体测试仪器的情况,该法也不失为一种快速筛选和评价美白活性成分的方法.后续实验中将增加对黑色素生成过程中同时发挥作用的多巴色素互变酶和DHICA氧化酶的抑制作用及美白活性成分的皮肤渗透性能的测试,以完善体外筛选方法,快速评价美白活性成分的功效.【相关文献】[1] 吴娅楠,黄曾辉,徐立. 桑树美白活性的研究进展[J]. 蚕学通讯, 2013, 33 (2): 7-13.[2] 王玉林,何锦风,王维民,等. 皮肤黑色素的产生及美白浅析[J]. 日用化学品科学, 2013,36 (2): 33-35.[3] PARK H Y, KOSMADAKI M, YAAR M, et al. 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吴茱萸中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究
吴茱萸中总黄酮的提取及其抗氧化活性研究吴茱萸(学名:Euscaphis konishii Hayata)是一种寒带落叶乔木植物,其果实含有丰富的总黄酮化合物,具有很高的抗氧化活性。
本文将针对吴茱萸中总黄酮的提取方法及其抗氧化活性进行研究,以期为开发吴茱萸的药用价值和抗氧化产品提供科学依据。
一、吴茱萸中总黄酮的提取方法(一)常温下乙醇提取法1. 取新鲜吴茱萸果实,去除杂质并晾干。
2. 粉碎晾干的果实,取适量经过筛网过滤,获得粗粉末。
3. 将粗粉末加入适量的70%乙醇中,常温浸泡24小时。
4. 使用滤纸滤去沉淀物,收集滤液。
5. 通过浓缩和蒸发乙醇,得到总黄酮提取物。
(二)微波辅助提取法1. 取适量新鲜吴茱萸果实,去除杂质并切碎。
2. 加入适量乙醇,并在微波炉中进行微波辅助提取。
3. 调节微波功率和时间,使总黄酮充分提取。
4. 通过真空浓缩乙醇,获得总黄酮提取物。
以上两种提取方法各有优缺点,常温下乙醇提取法提取时间较长,但操作简单;微波辅助提取法提取速度快,但需要专门设备。
在实际操作中,可以根据实验需求进行选择和组合。
二、吴茱萸中总黄酮的抗氧化活性研究(一)总黄酮的结构与抗氧化活性总黄酮是一类天然的多酚化合物,具有强抗氧化活性。
其分子结构中含有多个酚羟基,能够有效清除自由基,对细胞损伤具有保护作用。
(二)吴茱萸中总黄酮的抗氧化活性评价1. 高效液相色谱(HPLC)法测定总黄酮含量采用适量吴茱萸总黄酮提取物,经过适当处理后进行HPLC分析,确定总黄酮的含量。
2. DPPH自由基清除实验将不同浓度的吴茱萸总黄酮提取物与DPPH自由基反应,通过测定溶液的吸光度变化,计算总黄酮的清除率,评估其抗氧化活性。
实验结果表明,吴茱萸中总黄酮具有很高的抗氧化活性,能够有效清除自由基,并对氧化损伤具有一定的保护作用。
三、吴茱萸中总黄酮的应用前景吴茱萸中总黄酮具有很高的药用和抗氧化价值,可以广泛应用于食品、保健品和药品等领域。
