人教版高中生物选修1-2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》精品课件
思考讨论
2、统计的菌落数往往比活菌的实际数目高还是 低，为什么？ 低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上 观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用 菌落数而不是活菌数来表示。
二、实验设计
（一）土壤取样
从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好 的信封中。
缺点：
1mm
不能区分死菌与活菌
（二）统计菌落数目 2、统计菌落数目——稀释涂布平板法
平板菌落数统计注意事项 1、几个菌落粘连一起，只要肉眼能区分，就算几个； 2、不管菌落大小，只要肉眼看得见，就应该计数；
思考讨论
1、为什么测平板上的菌落数可以推测样品中的活 菌的数目？ 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一 个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过 统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约有 多少活菌。为了保证结果准确，一般选用菌落数 在30~300的平板进行计数。
三、操作提示
（一）无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前 都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好 的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。
3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁操作。 （二）做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。 （三）规划时间
取平均值233
3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，
在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统
计结果，正确的是( D )
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230
B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取
平均值238
C．涂布了三个平板，统计菌落数是21、212和256，
取平均值163
D．涂布了三个平板，统计菌落数是210、240和250，
2．通过进行土壤中分解尿素的细菌的分离与 计数过程，能够列举其中涉及的相关技术并会 用这些技术解决生产生活中的相关问题。
3．通过实际实验操作，能够运用无菌技术完 成微生物的分离、培养和技术各个环节。
新知探究
一、研究思路
（一）筛选菌株 1、实验室微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、 温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
（）
A.2.34×108
B.2.34×109
C.234
D.23.4
解析：稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落 数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就 为234/0.1×106=2.34×109。
每mL样品中的菌株数=（C÷V）×M C：某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V：涂布平板时所用的稀释液的体积 M：稀释倍数
碳源是葡萄糖和尿素，氮源是尿素 2.分析该配方的培养基对微生物是否具有选择作用？ 如果有，又是如何进行选择的？
有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源，因此， 原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。
（二）统计菌落数目 1、显微镜直接计数法
1mm
下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计 算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B， 那么，一个大方格中的总菌数是多少? 5A 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3） 5AB×104
2、选择培养基 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生
长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养 基，称做选择培养基。
• 加入青霉素的培养基 ——细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长
• 不加含碳有机物的无碳培养基 ——分离自养型微生物
思考讨论
1.在培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和 氮源的分别是是什么物质？
课题2 土壤中分解尿素 的细菌的分离与计数
新一种重要的农业氮 肥，但是尿素并不能直接被农 作物吸收。只有当土壤中的细 菌将尿素分解后，才能被植物 利用。土壤中的细菌之所以能 分解尿素，是因为它们能合成 脲酶。
学习目标
1．通过学习选择培养基的应用原理，能够根 据各种微生物的代谢特征，配制选择培养基；
土壤中分解 尿素的分离 与计数
课堂小结
研究思路
菌种筛选 统计菌落菌数目 设置对照
实验设计
土壤取样 样品稀释 涂布平板 培养观察
操作提示
结果分析与评价
随堂测试
1.某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上
的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落
数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）
答案：B
2.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应，用3种细 菌在事先准备好的琼脂块平板上画3条等长的平行线 (3条线均与下图中的链霉素带接触)，将平板置于 37℃条件下恒温培养3天，结果如图所示。从实验结
果分析以下叙述，不正确的是( D )
A．链霉素能阻止结核菌的生长 B．链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效 C．链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D．链霉素可以用于治疗伤寒病人
（三）取样涂布
实验时要对培养皿作 好标记。注明培养基 类型、培养时间、稀 释度、培养物等。
◆如果得到了2个或2个以上菌落数目 在30——300的平板，则说明稀释操作 比较成功，并能够进行菌落的计数， 如果同一稀释倍数的三个重复的菌落 数相差较大，表明试验不精确，需要 重新实验。
（四）微生物的培养与观察 不同类型的微生物形成的菌落往往有差别---微生物分类依据
四、结果分析与评价
1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌 落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落 形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿 素的微生物。
2.提示：选择每个平板上长有30—300个菌落 的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀 释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如 相差较大，表示实验不精确。
（二）样品的稀释
测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105 和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的 数量，一般选用103、104和105倍稀释液；测定真 菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释液。
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封 在使用前都要灭菌。 ◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都 要在火焰旁进行 ◆分离不同的微生物采用不同的稀释度
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高中生物专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件新人教版选修12
ⅰ原理：人为提供有利于_目_的__菌__株__生长的条件(包括营养、温 度、pH等)，同时_抑__制_或__阻__止__其他微生物的生长。
ⅱ方法：利用选择培养基分离。
a．选择培养基：允许_特__定__种_类__的微生物生长，同时 _阻_止__或__抑__制__其他种类微生物生长的培养基。
b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以_尿__素_作为唯一氮 源，只有能合成_脲__酶_的微生物才能分解尿素。
项目 原理
25
直接计数法
间接计数法
利用特定细菌计数 板或血细胞计数 板，在显微镜下计 算一定容积的样品 中微生物的数量
当样品的稀释度足够高时，培 养基表面生长的一个菌落，来 源于样品稀释液中的一个活 菌。通过统计平板上的菌落 数，就能推测出样品中大约含 有多少活菌
26
显微镜、细菌计数
主要用具
培养基
22
[归纳总结] 1．选择培养基的选择作用 (1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理
因素的抗性不同而制备培养基。 (2)方法： ①在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离
出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。
23
②改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮 微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生 物；用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。
(2)①培养基被污染，一些菌落是由杂菌繁殖而成的；②接种过 程中由于操作不当感染了杂菌；③取菌液时没有摇晃，所取菌液中 细菌个体浓度偏大等。
36
1．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( ) ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ C [要分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中尿素应是唯一的 氮源，不能加硝酸盐；在固体培养基上形成菌落，要加琼脂作凝固 剂；分解尿素的细菌是异养生物，要加有机碳源(如葡萄糖)。]
ⅱ方法：利用选择培养基分离。
a．选择培养基：允许_特__定__种_类__的微生物生长，同时 _阻_止__或__抑__制__其他种类微生物生长的培养基。
b．实例：选择分解尿素的细菌的培养基，以_尿__素_作为唯一氮 源，只有能合成_脲__酶_的微生物才能分解尿素。
项目 原理
25
直接计数法
间接计数法
利用特定细菌计数 板或血细胞计数 板，在显微镜下计 算一定容积的样品 中微生物的数量
当样品的稀释度足够高时，培 养基表面生长的一个菌落，来 源于样品稀释液中的一个活 菌。通过统计平板上的菌落 数，就能推测出样品中大约含 有多少活菌
26
显微镜、细菌计数
主要用具
培养基
22
[归纳总结] 1．选择培养基的选择作用 (1)原理：根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理
因素的抗性不同而制备培养基。 (2)方法： ①在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离
出酵母菌和霉菌；加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌。
23
②改变培养基中的营养成分。例如，缺乏氮源时可以分离固氮 微生物；石油作为唯一碳源时，可以分离出能消除石油污染的微生 物；用含无机碳源的培养基分离自养型微生物。
(2)①培养基被污染，一些菌落是由杂菌繁殖而成的；②接种过 程中由于操作不当感染了杂菌；③取菌液时没有摇晃，所取菌液中 细菌个体浓度偏大等。
36
1．分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是( ) ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不加硝酸盐 A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦ C [要分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中尿素应是唯一的 氮源，不能加硝酸盐；在固体培养基上形成菌落，要加琼脂作凝固 剂；分解尿素的细菌是异养生物，要加有机碳源(如葡萄糖)。]
人教版高中生物选修一2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt配套课件
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培养观察(将培养基平板倒置于 30~37 ℃温室中培养 1~2 天,每隔 24 小时统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,算出 同一稀释度的三个平板上的菌落平均数)
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2.结果分析与评价 (1)在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的脲酶将尿素分解成 了氨。氨会使培养基的碱性增强,pH 升高。因此,我们可以通过检测培 养基 pH 的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细 菌后,如果该细菌能够分解尿素,则 pH 升高,指示剂将变红。
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4.微生物的培养 不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。 细菌一般在 30~37 ℃的温度下培养 1~2 d,放线菌一般在 25~28 ℃ 的温度下培养 5~7 d,霉菌一般在 25~28 ℃的温度下培养 3~4 d。在菌落 计数时,每隔 24 h 统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为 结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 5.菌落的特征 菌落的特征包括菌落的形状、大小、隆起程度、颜色等方面。
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迁移与应用 2 下列关于微生物分离和培养的有关叙述,错误的是( )。 A.微生物培养前,需对培养基进行消毒 B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法 C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度 D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源 解析:微生物培养前,需对培养基进行灭菌处理,要将所有的微生物 杀死;当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样 品稀释液中的一个活菌;土壤中各类微生物的数量是不同的,为获得不 同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对 性地提供选择培养的条件。 答案:A
培养观察(将培养基平板倒置于 30~37 ℃温室中培养 1~2 天,每隔 24 小时统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,算出 同一稀释度的三个平板上的菌落平均数)
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2.结果分析与评价 (1)在细菌分解尿素的化学反应中,细菌合成的脲酶将尿素分解成 了氨。氨会使培养基的碱性增强,pH 升高。因此,我们可以通过检测培 养基 pH 的变化来判断该化学反应是否发生。 (2)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养某种细 菌后,如果该细菌能够分解尿素,则 pH 升高,指示剂将变红。
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4.微生物的培养 不同种类的微生物,往往需要不同的培养温度和培养时间。 细菌一般在 30~37 ℃的温度下培养 1~2 d,放线菌一般在 25~28 ℃ 的温度下培养 5~7 d,霉菌一般在 25~28 ℃的温度下培养 3~4 d。在菌落 计数时,每隔 24 h 统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为 结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 5.菌落的特征 菌落的特征包括菌落的形状、大小、隆起程度、颜色等方面。
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迁移与应用 2 下列关于微生物分离和培养的有关叙述,错误的是( )。 A.微生物培养前,需对培养基进行消毒 B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法 C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度 D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一的氮源 解析:微生物培养前,需对培养基进行灭菌处理,要将所有的微生物 杀死;当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样 品稀释液中的一个活菌;土壤中各类微生物的数量是不同的,为获得不 同类型的微生物,就需要按不同的稀释度进行分离,同时还应当有针对 性地提供选择培养的条件。 答案:A
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数一、预习与质疑（课前完成）（一）预习内容课本P21-26（二）预习目标1．阐述选择培养基的应用原理；能根据各种微生物的代谢特征，配制选择培养基；2．阐述土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程，列举其中涉及的相关技术并会用这些技术解决生产生活中的相关问题。
3．学会运用无菌技术完成微生物的分离、培养和技术各个环节。
（三）预习检测一、理论基础1．筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。
(2)选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
（3）配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如，培养基中不加入有机物可以选择培养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养微生物.加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
2．统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
3．设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
二、实验设计（结合课题1学过的知识）关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm左右，再取样。
2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3．微生物的与观察将10g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的无菌水大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。
2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
是
分离 只生长 尿素 尿素细
养基
细菌 菌
对照组
牛肉膏蛋 白胨培养
基
判断该培 生长多
是
养基有无 种微生 选择性 物
㈡.统计菌落数目：
1、显微镜直接计数：
利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定 容积里样品中微生物的数量。
优点： 设备简单、能观察微生物的形态特征
缺点： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；
DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制 的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（93℃）的DNA聚合酶。
or ?
水生栖热菌Taq
Taq酶
因为热泉温度为70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有
Taq细菌被筛选出来。
1.启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境要求，到相应的 环境中去寻找。
每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培 养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
菌落的特征：形状、大小、隆起程度和颜色等。
三、操作提示
[一]无菌操作 1、取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。 [二]做好标记 注明培养基种类、培养日期、平板培养样品 的稀释度等。 [三]规划时间
石油分解菌
纤维素分解菌 尿素分解菌
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，
同时抑制或阻止其他微生物生长。
3.选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微 生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培 养基。
人教版高中生物选修一专题二课题2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》 课件(共19张PPT)
47. 不是境况造就人，而是人造就境况。48. 你想成为幸福的人吗?但愿你首先学会吃得起苦。——屠格涅夫49. 成功的时候，都说是朋友。但只有母亲——她是失败时的伴侣。——郑振峄 50.在我们的一生中，没有人会为你等待，没有机遇会 为你停留，成功也需要速度 51.不论做什么事，都要相信你自己，别让别人的一句话将你击倒。人生没有对错，只有选择后的坚持，不后悔，走下去，走着走着，花就开了。52.吃别人吃不了的苦，忍别人受不了的气，付出比别人更 多的，才会享受的比别人更多。53.我们每个人的人生之舟都需要自己掌舵，自己掌控。懂得，是跌倒了依然会选择站起，失败了依然会选择重来，受伤了依然会选择坚强;懂得，是在黑暗中依然不迷失方向，在生死关头依然不乱了 方寸，在灾难包围中依然会微笑前行。54.思路清晰远比卖力苦干重要，心态正确远比现实表现重要，选对方向远比努力做事重要，做对的事情远比把事情做对重要。成长的痛苦远比后悔的痛苦好，胜利的喜悦远比失败的安慰好。 55.再大的事，到了明天就是小事，再深的痛，过去了就把它忘记，就算全世界都抛弃了你，——你依然也要坚定前行，因为，你就是自己最大的底气。56.人生路上常有风雨，需要一个好的心态。再难的路，只要不放弃，一直走下 去，总会走到终点;再重的担子，笑着是挑，哭着也是挑，又何必让自己难堪;再不顺的生活，撑一撑，也就过去了，笑容，最终会出现在脸上。57.最精美的宝石，受匠人琢磨的时间最长。最贵重的雕刻，受凿的打击最多。58.只有 对过去既往不咎，才能甩掉沉重的包袱；只有能够看轻自己，才能做到轻装上阵。只要不放弃，就没有什么能让自己退缩；只要够坚强，就没有什么能把自己打垮。59.学会驾驭自己的生活，即使困难重重，也要满怀信心的向前。 不自怜不自卑不哀怨，一日一日过，一步一步走，那份柳暗花明的喜乐和必然的抵达，在于我们自己的修持。真正想做成一件事，不取决于你有多少热情，而是看你能多久坚持。60.永远不要沉溺在安逸里得过且过，能给你遮风挡 雨的，同样能让你不见天日。只有让自己更加强大，才能真正的撑起一片天。61.人生中谁都有梦想，但要立足现实，在拼搏中靠近，在忍耐中坚持，别把它挂在嘴边，常立志者无志。62.人这一辈子，其实做不了几件事，所以想做
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
5.测定细胞总氮量或总碳量
7
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
8
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
1.想一想，如何从平板上的菌落数推测出每克样品中 的菌落数？
答：统计某一稀释度下平板上的菌落数，最好能统计 3个平板，计算出平板菌落数的平均值，然后按课本旁 栏的公式进行计算。
9
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
富集一些。
检测：酚酞的灵敏度不
如酚红，因此建
议最好使用酚红，
否则效果不明显。
31
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
培养基 类型
日期 第一天 第二天
平板细菌数（土壤稀释度）
选择性培养基
（涂布接种）
（未涂布接种）
牛肉膏蛋白胨 培养基
32
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数优秀课件
本课题知识小结:
33
12
两稀释度 菌数之比
1.6 2.2
-
菌落总数 个/g或个/ml
16400 38000 27100 513000
270 30500
报告方式 个/g或个/ml 16000或1.6×104 38000或3.3×104 27000或2.7×104 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104
102
103
104
105
106
107
101
10g土壤
9ml
无菌水
9ml 无菌水
104
105
106
107
104
105
106
107
104
105
106
107
生物选修Ⅰ人教新课标2-2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件(16张)
但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同，但是A同学没有设计 对照，拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照，帮助A同学排除上 述两个可能影响因素吗？
方案1：其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学 一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培 养基的配制有问题。
㈢设置对照
1.目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
2.实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学 从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在 同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学认为A同学结果有问 题，可能是A同学培养基被杂菌污染，或者培养基混入其他含氮物质， 导致其他杂菌生长。
3.选择培养基
本课题使用的培养基
KH2PO4
1.4g
NaHPO4
2.1g
问题1：该培养基的配方中，为微生物的生 长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
MgSO4 .7H2O 0.2g
葡萄糖
10.0g
尿素
1.0g
问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？ 为什么？
能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作 为氮源而生存。
计算公式： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所 用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。
【例2】：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细 菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落 数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值 163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题， 错在哪？
方案1：其他同学用与A同学一样的土样进行实验。如果结果与A同学 一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培 养基的配制有问题。
㈢设置对照
1.目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果 的可信度。
2.实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学 从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在 同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学认为A同学结果有问 题，可能是A同学培养基被杂菌污染，或者培养基混入其他含氮物质， 导致其他杂菌生长。
3.选择培养基
本课题使用的培养基
KH2PO4
1.4g
NaHPO4
2.1g
问题1：该培养基的配方中，为微生物的生 长提供碳源和氮源的分别是什么物质？
碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素
MgSO4 .7H2O 0.2g
葡萄糖
10.0g
尿素
1.0g
问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？ 为什么？
能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作 为氮源而生存。
计算公式： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所 用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。
【例2】：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细 菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。
1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落 数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值 163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题， 错在哪？
专题04 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数-2020-2021学年高二生物课件(人教版选修1)
➢统计菌落
显微镜直接计数法
这种方法是利用特定细菌计数板或血细胞计数板， 在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量
每毫升原液所含细菌数 ＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数
缺点：不能区分死菌与活菌 不适于对运动细菌的计数
间接计数法（活菌计数法）
原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所 形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的， 即一个菌落代表原先的一个单细胞
1966年美国微生物学家鲁克在黄石国家公园的热泉 中发现一种耐热细菌Taq；并从该细菌体内分离出了耐 高泉中温的DNA聚合酶
对微生物的筛选有何启示？ 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境 的要求，到相应的环境中去寻找。
为什么Taq细菌能从热泉中被筛选出来？ 原因：热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数 微生物只有Taq细菌被筛选出来
小结：通过这个事例可以看出，实验结果要 有说服力，对照的设置是必不可少的
知识点3．实验操作
➢土壤取样
“微生物的天然培养基” 大约70%—90%是细菌
数量最大、种类最多
从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样 先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先 准备好的信封中。
注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌
A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
说明设置重复组的重要性：在设计实验时，一定
要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服 力与准确性。
计数原则：一般选择菌落数在30—300的平板上进行
计数（50个左右为最佳）
统计的菌落往往比活菌的实际数目低
➢设置对照
实验室中微生物的筛选原理
人教版高中生物选修一2-2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt同步课件
验操作与评价
1．实验设计 (1)土壤取样 ①土壤微生物大约70%～90%是 细菌 。
②细菌适宜在酸碱度接近中性 的 潮湿 土壤中生长，绝大多
数分布在距地表 3～8 cm 的土壤层。
(2)样品处理
样品的 稀释程度 直接影响平板上生长的 菌落数目，选用一定稀释 范围的样品液进行培养，保证菌落数在30～300 之间，便于计数。 (3)微生物的培养与观察 将培养基平板放置于 30～37 ℃ 温室中培养1～2d，每隔 24h 统计
(5) 在进行分离分解尿素的细菌的实验时， A同学从培养基上筛选
出大约150个菌落，而其他同学只筛选出大约50个菌落。A同学的
实验结果产生的原因可能有______。(填序号) ①由于土样不同 ③由于操作失误 思维导图： ②由于培养基污染 ④没有设置对照
深度剖析
(1)培养基中加入尿素的目的是筛选尿素细菌。
( ①加尿素 糖 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 )。 ⑤加葡萄
⑥不加葡萄糖
⑦加硝酸盐
⑧不加硝酸盐
A．①③⑤⑦ B．②④⑥⑧ C．①③⑤⑧ D．①④⑥⑦
解析
土壤中分解尿素的细菌能够合成脲酶，将尿素分解生
成氨，利用尿素中的氮合成自身有机物。培养基中只加尿素， 分解尿素的细菌能生长，其他微生物不能生长；分离微生物 要用固体培养基；土壤中分解尿素的细菌属于异养微生物， 需要加葡萄糖作为碳源。
实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌
操作。 答案 (1)苯酚 A 稀释涂布平板 (2)④的培养基没有加入苯酚 稀释涂布平板法或平
作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源 板划线
以防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作
人教版高中生物选修一2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt课件
操作提示
• 无菌操作
1. 取土样的小铁铲和盛土样的信封在使用前 都需要灭菌。 2. 应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称 好的土样倒入烧瓶中，塞好棉塞。 3. 在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要 在火焰旁操作。
做好标记
• 本实验使用的平板和试管比较多。为 避免混淆，最好在使用前就做好标记。
例如：
在标记培养皿时，应注明培养基种类、 培养日期以及平板上培养样品的稀释 度。
实验室微生物的筛选原理
应用筛选 Taq 细菌的原理，人为提 供有利于目的菌株生长的条件（包 括营养、温度、pH等），同时抑制 或阻止其他微生物生长。
统计菌落数目
常用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数 目。样品的稀释度足够高时，培养基表面 生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的 一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就 能推测出样品中大约含有多少活菌。为保 证结果准确，一般选择菌落数30—300的
■高中生物课件（人教课标版）
专题2 微生物的培养与应用
课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
课题背景
尿素是一种重要的农业氮肥。但是尿素并 不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的 细菌将尿素分解成氮之后，才能被植物利 用。土壤中的细菌之所以能分解尿素，是 因为它们能合成脲酶。
尿素最初是从人的尿液中ຫໍສະໝຸດ 现的。• 指示剂也可以帮助我们准确地鉴定该 种细菌能否分解尿素。
相关链接
• 活菌计数技术广泛应用于土壤含菌亮的测 定、食品卫生和水源污染度的检验等方面。 如果你赶兴趣，可以从下列项目中选做一 个。 空气中微生物总数的检测 水中细菌总数的检测 牛奶中细菌的分离与计数 土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数
规划时间
• 对于耗时较长的生物实验，我们需要 实现规划时间，以便提高工作效率， 在操作时更加有条不紊。