赖氨肌醇维B_12_口服溶液中赖氨酸与维生素B_12_含量测定

·药物研究·
2011年6月第1卷第11期
赖氨肌醇维B12口服溶液中赖氨酸与维生素B12含量测定
谢清春 吕竹芬 （广东药学院药物研究所，广东广州 510006）
[ 摘要 ] 目的 建立赖氨肌醇维 B12 口服溶液中赖氨酸与维生素 B12 含量测定方法。方法 采用电位滴定法测口服液中盐酸 赖氨酸含量；高效液相色谱法测定维生素 B12 的含量，色谱条件为 C18 柱，以乙腈 -0.05mol/L 磷酸二氢钠（16 ︰ 84）用 磷酸调节 pH=3.3 为流动相，流速 1mL/min，检测波长 210nm。结果 电位滴定法测定口服液中盐酸赖氨酸的回归方程为 V=0.1055G-0.3425，r=0.9996。精密度试验的 RSD% 为 0.44%，溶液稳定性试验的 RSD% 为 0.59%，低中高三个浓度的 平均回收率分别为 99.54%、100.08%、99.71%，3 批样品含量测定分别为 100.72%、99.45% 和 99.76%；测定维生素 B12 的 回归方程为 A=0.8407C-0.0425,r=0.9998，精密度试验 RSD 为 0.99%，溶液稳定性试验 RSD 为 1.08%，最低检出限与定量 限分别是 0.12µg/mL 和 0.40µg/mL，低中高三个浓度平均回收率分别是 98.20%、99.00% 和 99.07%，对 3 批样品的检测 结果分别是 100.81%、99.43%、98.25%。结论 本研究测定盐酸赖氨酸和维生素 B12 的方法均准确可行，可用于本口服液 的质量控制。 [ 关键词 ] 赖氨肌醇维 B12 口服溶液；电位滴定；高效液相 [ 中图分类号 ] R917 [ 文献标识码 ] B [ 文章编号 ] 2095-0616（2011）11-34-02
2.2 维生素B12的含量测定方法 2.2.1 对照液和供试液的配制 对照品溶液：精密称取维生 素 B12 对照品 10mg，置 50mL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻 度，摇匀得到浓度为 200µg/mL 标准储备液，精密量取此溶液 3mL 至 200mL 容量瓶中，加水稀释至刻度即得浓度为 3µg/mL 对照液。供试品溶液：取本口服液用 0.45µm 滤过，即得。 2.2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为十八烷基硅烷 键 合 硅 胶 柱，以 乙 腈 -0.05mol/L 磷 酸 二 氢 钠（16 ︰ 84）用 磷
表1 盐酸赖氨酸含量测定的回收率试验
编号
加入量 （g）
测得量 （g）
回收率 （%）
平均回收率 RSD （%） （ 2 0.1443
0.1445
99.62
99.54
0.59
3 0.1443
0.1429
99.11
4 0.1801
0.1794
99.42
中 5 0.1801
0.1801
99.82
100.08
0.39
6 0.1801
0.1808
99.98
7 0.2165
0.2172
99.93
高 8 0.2165
0.2160
99.80
99.71
0.37
9 0.2165
0.2157
99.68
2.1.6 样品含量测定 精密量取本品 15mL，置于 100mL 量 瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取 20mL，照 1.1 项测定 三批自制样品，结果表明自制三批样品（20050608、20050608、 20050610）中 盐 酸 赖 氨 酸 含 量 分 别 为 100.72%、99.45% 和 99.76%，均符合规定。
2 方法与结果
2.1 盐酸赖氨酸含量测定 2.1.1 测定方法 按照赖氨肌醇维B12口服溶液标准[WS10001-（HD-0482）-2002]中含量测定方法测定[4]。方法为： 精密量取本品15mL，置于100mL量瓶中，用水稀释至刻度，
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酸调节 pH=3.3 为流动相，流速 1mL/min，检测波长 210nm。取 维生素 B12 对照品溶液过 0.45um 滤膜滤后，精密量取续滤液 20uL 注入液相色谱议，记录色谱图。维生素 B12 的理论塔板 数应大于 800，不含维生素的 B12 的阴性对照对测定没有干扰。 见图 1、2、3。
盐 酸 赖 氨 酸 对 照 品（色 谱 纯，上 海 康 达 氨 基 酸 厂，批 号： 20020311），维生素 B12 对照品（中国药品生物制品检定所，批 号：100248-200201），自 制 赖 氨 肌 醇 维 B12 口 服 溶 液（批 号： 20050608、20050610、20050612）。
氨基酸是人体生命活动过程中不可缺少的一种物质，赖氨 酸又是人体不能自身合成而又为机体所必须的 8 种氨基酸中 最为重要的一种。赖氨酸可加快神经细胞代谢过程，提高脑组 织的生理功能，增强记忆力[1]。维生素 B12 是人体内非常重要的 水溶性维生素之一[2]，维生素 B12 缺乏时，从甲基四氢叶酸上转 移甲基基团的活动减少，使叶酸变成不能利用的形式，导致儿 童发育和神经功能受损等。营养性贫血目前仍为我国儿童时 期的多发病，其发病率占儿科门诊的 40% 左右。补充赖氨酸 维生素 B12 口服溶液可增进小儿食欲[3]，补充机体必需营养，改 善小儿免疫功能。因此对赖氨肌醇维 B12 口服溶液进行质量标 准研究对控制赖氨肌醇维 B12 口服溶的质量有着重要的意义。
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摇匀，精密量取20mL，用NaOH滴定液（0.1mol/L）调节pH至 7.0，然后加预先校正至pH=9.0的甲醛溶液14mL，再以NaOH滴 定液滴定至pH为9.0，自加入甲醛溶液以后所消耗的NaOH滴定 液（0.1mol/L）的每1毫升数即为赖氨酸所消耗的毫升数。每1毫 升的NaOH滴定液相当于9.132mg的C6H14N2O2·HCl。 2.1.2 工作曲线的制定 精密称取盐酸赖氨酸对照品 1.8g，置 于 200mL 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取 16、18、20、 22、24mL，照 1.1 项下的“用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）调节 pH 至 7.0”开始操作测定，计算 V（滴定液消耗量 /mL）对 G（盐酸 赖氨酸的量 /mg）的回归方程为 V=0.1055G-0.3425，r=0.9996。 2.1.3 精密度实验 取批号为 20050608 的样品，精密量取 6 份，分别按 1.1 项下的方法测定其含量，测定结果为 100.44%、 101.15%、101.71%、101.31%、100.88%、100.76%，RSD% 为 0.44%（n=6），精密度试验良好。 2.1.4 溶液稳定性试验 取批号为 20050608 的样品，于 0、 2、8、24、48、120h 分别按 1.1 项下的方法测定其含量，结果分别 为 101.12%、100.53%、102.15%、100.79%、101.55%、101.65%， RSD% 为 0.59%（n=6），溶液稳定性好。 2.1.5 回收率试验 按处方比例配制不含盐酸赖氨酸的阴性 溶液，精密称取盐酸赖氨酸对照品 0.72g、0.9g 和 1.08g（相当于 含量的 80%、100% 和 120%）置 100mL 量瓶中，加入阴性溶液 到刻度，摇匀，照 1.1 项下方法测定。结果见表 1，平均回收率 为 99.81%，RSD=0.46%，符合含量测定要求。
Determination of Lysine and Vitamin B12 in Lysine Inosite and Vitamin B12 Oral Solution
XIE Qingchun LV Zhufen Institute of Pharmaceutical Research of Guangdong Pharmacy College,Guangzhou 510006,China [Abstract] Objective To determine Lysine and Vitamin B12 in Lysine,Inosite and Vitamin B12 Oral Solution.Methods Potentiometric titration was used to determine Lysine and HPLC was used to determine vitamin B12. The HPLC condition:C18 was used,acetone0.05mol/L Sodium Dihydrogen Phosphate（16︰84,pH was adjusted to 3.3 by Phosphoric acid）,mobile rate 1mL/min,detection wavelength at 210nm.Results Potentiometric titration to determine lysine Regression equation was V=0.1055G-0.3425，r=0.9996. The Precision test RSD was 0.44% and solution stability RSD was 0.59%.The recovery rates of three different concentrations（low concentration, middle concentration and high concentration）were 99.54%、100.08%、99.71% respectively. The HPLC method to determine vitamin B12 Regression equation is A=0.8407C-0.0425,r=0.9998.The Precision test RSD was 0.99% and solution stability RSD was 1.08%.The recovery rates of three different concentrations（low concentration, middle concentration and high concentration） were 98.20%、99.00%、99.07% respectively.The LOD and LTD is 0.12µg/mL and 0.40µg/mL.Conclusion The assay method can be used to determine lysine and vitamin B12 and can be used to control the oral solution quality. [Key words] Lysine Inosite and Vitamin B12 oral solution；Potentiometric titration；HPLC