谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸
文章编号:1674-9146(2016)03-0108-03赖氨酸,化学结构式为H 2NCH 2CH 2CH 2CH 2CH(NH 2)COOH ,是构成蛋白质的基本单位,是组成人体蛋白质的21种氨基酸之一。
赖氨酸是白色或近白色自由流动的结晶性粉末,几乎无臭,263~264℃熔化并分解。
赖氨酸的作用包括建立肌肉组织,从创伤或受伤恢复,并帮助更有效吸收钙。
它还有助于身体产生抗体,酶和激素。
赖氨酸补充剂也用于治疗疱疹病毒爆发。
谷物及饲料通常用赖氨酸含量的高低作为食物蛋白生理价值的一个指标[1-2]。
目前检测赖氨酸含量的方法主要有染料结合法、毛细管电泳法、气质联用法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[3-5]。
染料结合法灵敏度较高,可检测到微量蛋白,操作简便、快迅,试剂配制简单,重复性好,但干扰因素多,误差大,颜色会转移。
紫外分光光度法灵敏、快速、不消耗样品,但是核酸类物质有影响。
高效液相色谱法稳定、准确、良好,但耗费时间长。
已有文献介绍用胶束增敏法检测元素,因此,笔者用赖氨酸和甲酚红的络合物在溴化十六烷基三甲基胺(CTMAB )胶束介质中的吸收光谱检测谷物中赖氨酸的含量,以期为赖氨酸提供简便的检测方法。
1实验部分1.1实验试剂及仪器实验所使用的试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。
所用仪器包括UV-2800荧光光谱仪,HH-S 型恒温水浴锅和Water Proof pH 计。
1.2实验方法1.2.1工作曲线绘制及回收率和精密度测试准确配制浓度为10μg/mL 赖氨酸溶液,物质的量浓度为1.0×10-4mol/L 的甲酚红溶液和物质的量浓度为0.1mol/L 的CTMAB 溶液待用。
然后用移液管分别移取不同体积(0.2mL ,0.4mL ,0.6mL ,0.8mL ,1.0mL ,1.2mL ,1.4mL )的待用赖氨酸溶液于10mL 的比色管中,并依次编号;在各比色管中依次加入1mL 的甲酚红溶液和1mL 的CTMAB溶液,用二次蒸馏水稀释至刻度;在75℃恒温水浴中保温10min ,流水冷却至室温;以相应的空白试剂为参比,用紫外可见分光光度计分别测定各溶液在583nm 处的吸光度。
食物中氨基酸的测定方法
食物中氨基酸的测定方法（1）一、氨基酸自动分析仪法1. 原理食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。
一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。
2. 适用范围GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。
本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。
其最低检出限为10pmol。
本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定3. 仪器和设备3.1 真空泵3.2 恒温干燥箱3.3 水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。
用去离子水冲洗干净并烘干。
3.4 真空干燥器（温度可调节）3.5 氨基酸自动分析仪。
4. 试剂全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。
4.1 浓盐酸：优级纯4.2 6mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。
4.3 苯酚：需重蒸馏。
4.4 混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L4.5 缓冲液：4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1 000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.24.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。
4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。
4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。
4.6 茚三酮溶液4.6.1 pH5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。
谷物赖氨酸测定技术的研究
谷物赖氨酸测定技术的研究
苗桂珍
【期刊名称】《辽宁农业科学》
【年(卷),期】2000(000)006
【摘要】在谷类作物育种中,提高赖氨酸含量已作为新品种选育的重要指标之一.因此,需要研究出快速、简便、有效的赖氨酸测定技术,以便对亲代、子代的大量样品进行筛选以及对高赖氨酸材料的有效选择.重点研究叙述了染料结合法(DBL法)和仪器分析法的基本原理、测定程序和重要的技术环节,以便提高分析结果的精确度.并比较了DBL法和仪器分析法赖氨酸测定的结果,10种谷物两种方法所测结果的相关系数均达到了显著或极显著差异平准,表明任一方法所得结果均是准确的.【总页数】5页(P12-16)
【作者】苗桂珍
【作者单位】辽宁省农业科学院测试分析中心,辽宁沈阳 110161
【正文语种】中文
【中图分类】S510.1
【相关文献】
1.谷物赖氨酸测定方法的评价 [J], 路苹;于同泉;王淑英;王建立;杨柳
2.应用定量滤纸对DBL法测定谷物赖氨酸效果的试验研究 [J], 周肃纯
3.谷物中赖氨酸含量测定方法的探析 [J], 李桂玲;李欢庆;刘从彬
4.胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸 [J], 张宝红;胡国胜
5.胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸 [J], 张宝红;胡国胜;
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玉米种子中赖氨酸含量测定实验报告
玉米种子中赖氨酸含量测定实验报告玉米是世界上最重要的粮食作物之一，被广泛种植和消费。
赖氨酸是一种重要的氨基酸，对于人体和动物的生长发育至关重要。
因此，测定玉米种子中赖氨酸的含量具有重要的意义。
为了测定玉米种子中赖氨酸的含量，我们采用了高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）进行分析。
首先，我们将玉米种子样品进行研磨，得到粉末状样品。
然后，将粉末样品与适量的溶剂进行混合，使得样品中的赖氨酸溶解。
接下来，我们使用HPLC-MS仪器对样品进行分析。
在HPLC-MS分析中，我们采用了C18色谱柱，以乙腈和水为流动相，在梯度洗脱条件下进行分离。
赖氨酸在HPLC柱上具有特定的保留时间和特征峰形，通过质谱仪器可以准确地识别和定量赖氨酸的含量。
经过测定和计算，我们得到了玉米种子中赖氨酸的含量为XX mg/g。
这个结果表明，玉米种子中富含赖氨酸，具有很高的营养价值。
赖氨酸是人体和动物体内合成蛋白质的重要组成部分，对于维持正常的生理功能和生长发育至关重要。
赖氨酸在人体内具有多种功能。
首先，赖氨酸参与合成肌肉组织和骨骼，对于增强肌肉力量和骨骼健康具有重要作用。
其次，赖氨酸对于神经系统的正常运作至关重要，可以提高记忆力和学习能力。
此外，赖氨酸还可以增强免疫力，减少感染和疾病的风险。
玉米作为一种常见的粮食作物，其种子中富含赖氨酸，对于人体和动物的健康具有积极的影响。
因此，适当增加玉米的摄入量可以提供足够的赖氨酸，有助于维持人体的正常生理功能和健康发育。
除了玉米种子，赖氨酸还存在于其他食物中，如肉类、鱼类、奶制品和大豆制品等。
然而，对于某些人群来说，如素食者或特殊疾病患者，很难通过日常饮食获得足够的赖氨酸。
因此，可以考虑通过食物补充或膳食补充剂来增加赖氨酸的摄入量。
本实验通过HPLC-MS技术成功测定了玉米种子中赖氨酸的含量。
玉米种子富含赖氨酸，具有重要的营养价值和健康益处。
通过适当增加玉米的摄入量，可以提供足够的赖氨酸，有助于维持人体的正常生理功能和健康发育。
云南农业大学生物化学实验讲解(新)
生物化学实验实验基本原理1 有效数字计算（结合电子天平的应用等）加减法：进行数字加减时，最后结果所保留的小数点后的位数应与参与运算的各数中小数点后位数最少者相同，其尾数“四舍五入”。
如：0.124+1.2345+12.34=13.6979，应取13.70。
乘除法：进行数字乘除时，最后结果的有效数字应与参与运算的各数中有效数字位数最少者为准，而与小数点的位数无关，其尾数“四舍五入”。
如：1.23×0.12=0.1476,应取0.15。
2 误差分析误差为实验分析的测定值与真实值之间的差值。
误差越小，测定值越准确，即准确度越高。
误差可用绝对误差和相对误差表示。
绝对误差= 测定值- 真实值相对误差= 绝对误差÷真实值×100%一般用相对误差表示结果的准确度，但因真实值是并不知道的，因此实际工作中无法求出分析的准确度，只得用精确度来评价分析的结果。
3 偏差分析（结合“可溶性蛋白或赖氨酸实验”要求掌握）精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。
一般用偏差来衡量分析结果的精确度。
偏差也有绝对偏差和相对偏差两种表示方法。
绝对偏差= 单次测定值- 算术平均值（不计正负号）相对偏差= 绝对偏差÷算术平均值×100%例如：分析某一材料糖含量，共重复测定5次，其结果分别为：16.1%，15.8%，16.3%，16.2%，15.6%，用来表示精确度的偏差可计算如下：分析结果算术平均值个别测定的绝对偏差（不计正负）16.1% 0.1%15.8% 0.2%16.3% 16.0% 0.3%16.2% 0.2%15.6% 0.4%平均绝对偏差=（0.1%+0.2%+0.3%+0.2%+0.4%）÷5 = 0.2%平均相对偏差= 0.2÷16.0×100% = 1.25%在实验中，有时只做两次平行测定，这时就应用下式表达结果的精确度：两次分析结果的差值÷平均值×100%4 实验结果的表述：实验结果可用列表法（“影响酶作用的因素”常用）和作图法（综合实验用）表示。
用分光光度计测定玉米中总赖氨酸的简便方法
用分光光度计测定玉米中总赖氨酸的简便方法王玺;张崇玉【摘要】为探索测定玉米中总赖氨酸含量的简便方法,对玉米中总赖氨酸含量的测定条件进行了比较研究,结果表明,样品在150℃下用6 mol/L盐酸水解4 h,利用赖氨酸与茚三酮显色的原理进行分光光度计比色测定,回收率达103%,结果精确稳定,方法简便,适合大批量样品分析.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2010(038)008【总页数】3页(P78-80)【关键词】赖氨酸;玉米;分光光度计【作者】王玺;张崇玉【作者单位】贵州大学,农学院,贵州,贵阳550025;贵州大学,农学院,贵州,贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】S513赖氨酸是人和动物的必需氨基酸，也是评价玉米品质的一项重要指标。
测定赖氨酸的国标方法是采用氨基酸自动分析仪，但其价格昂贵，一般单位无力购买。
常规的赖氨酸测定方法有：1) 样品经纸层析、薄层层析或电泳分离后，加茚三酮显色定量；2) 样品经赖氨酸脱羟酶作用后，测定其产生CO2而定量；3) 微生物法[1]；4)分光光度计法。
这些方法操作过程都过于繁琐、复杂，不易掌握且误差较大。
分光光度法是利用茚三酮与赖氨酸在一定酸度条件下可形成有色配合物，并在565 nm 处有最大吸收峰[3]的特性测定样品中的赖氨酸。
而传统的赖氨酸测定方法需要110℃水解2 h，耗时较长，给大批量样品测定带来不便。
因此，寻求一种快速简单的测定玉米中的赖氨酸方法显得尤为重要。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 仪器、器具及装置分光光度计(581,721或751型)，分析天平(精确到0.0001g)，金属块消煮炉(要求温度保持在150～160℃)，回流水解装置(150mL或500mL短颈烧瓶，以玻璃磨口接头与回流冷凝器(长35～40cm)连接。
1.1.2 试剂 6mol/L盐酸，0.15mol/L氯化铜溶液，磷酸盐缓冲液pH为7±0.1(磷酸二氢钾0.68g，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液29.1mL，用水稀释至100mL)，L-赖氨酸(色谱纯)，茚三酮分析纯。
玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的测定
玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的测定玉米籽粒蛋白质是一种重要的植物蛋白质来源，对人体健康具有重要意义。
其中的赖氨酸是一种必需氨基酸，对人体的生长发育和免疫功能起着重要的作用。
因此，准确测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸的含量对于评估其营养价值和应用价值具有重要意义。
测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸含量的方法有多种，其中比较常用的是高效液相色谱法（HPLC）。
该方法利用色谱柱对样品进行分离，再通过紫外光检测器测定赖氨酸的峰面积，最终计算出样品中赖氨酸的含量。
在进行测定之前，需要对玉米籽粒进行样品制备。
首先，将玉米籽粒磨碎成粉末状，然后利用溶剂提取蛋白质。
提取过程中需要注意选择合适的溶剂，以确保蛋白质的完整性和提取率。
提取得到的蛋白质溶液经过过滤等处理后即可进行后续的色谱分析。
在色谱分析过程中，首先需要准备好色谱柱，并根据实验要求选择合适的色谱柱。
常用的色谱柱有反相色谱柱和离子交换色谱柱。
在进行色谱柱选择时，需要考虑样品的特性和分离要求。
接下来，将提取得到的玉米籽粒蛋白质溶液注入色谱柱，通过流动相的洗脱，使样品中的赖氨酸与色谱柱发生相互作用，从而实现赖氨酸的分离。
在进行色谱分析的过程中，需要注意流动相的选择和梯度条件的设定。
流动相的选择应根据赖氨酸的特性和色谱柱的要求，常用的流动相有甲醇、乙腈和磷酸盐缓冲液等。
梯度条件的设定则可以通过改变流动相的组成及流速来实现。
在测定赖氨酸含量时，需要根据标准曲线进行定量。
标准曲线的制备是通过测定一系列已知浓度的赖氨酸溶液，并绘制出浓度与峰面积之间的关系曲线。
通过测定待测样品的峰面积，并根据标准曲线进行计算，即可得到赖氨酸的含量。
除了HPLC法，还有其他方法可以测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸的含量，如氨基酸分析仪和酶法等。
每种方法都有其优点和局限性，需要根据实际需求选择合适的方法进行测定。
准确测定玉米籽粒蛋白质中赖氨酸的含量对于评估其营养价值和应用价值具有重要意义。
通过选择合适的样品制备方法和测定方法，可以获得可靠的测定结果，为玉米籽粒蛋白质的研究和应用提供科学依据。
谷物籽粒蛋白质含量的快速测定
Infratec 1241 谷物分析仪 样品传动单元
光程 6mm 18mm 29mm
对于某些特殊用户，样品量极少，可以在样 品槽中加入插件，占据部分空间，进一步减 少所需样品数量。对于育种研究，可以测定 单株单穗的籽粒。
不使用插件
满槽样品量 30％样品量
26ml
7.8ml
79ml
24ml
125ml
70.8 68.4 70.6 69.4 70.7 69.4 68.6 68.7 68.2 67.6 68.7 68.8 69.8 69.6 69.1
r = 0.9679**
粗蛋白(干基%)
近红外分析
10.4 10.7 10.8 10.9 11.2 11.4 11.8 11.8 12.2 12.3 12.2 12.7 13.3 13.6 14.2
光谱学原理
近红外检测技术分类：
NIR = 近红外漫反射技术 Near Infrared Reflectance
NIT = 近红外透射技术 Near Infrared Transmittance
光谱学原理
Foss Tecator Infratec 近红外透射技术 适用固体/液体分析 主要应用领域：整粒谷物，固体粉末，液体分析
• ANN定标意味着近红外定标即装即用
Infratec 1241 所 测试的谷物及测试项目
谷物 小麦 玉米 精米 大麦芽 大豆
测 试项目 水份、粗蛋白、总淀粉、湿面筋、沉降值、硬度等 水份、粗蛋白、总淀粉、油份 水份、粗蛋白、直链淀粉 水份、粗蛋白、可溶性蛋白、浸出率 水份、粗蛋白、油份
Dedicated Analytical Solutions
实验 谷物籽粒蛋白质含量的快速测定
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ﻩ
谷物种子蛋白质中赖氨酸含量的测定
一、实验目的
掌握茚三酮比色法测定氨基酸含量的原理和方法,测定谷物种子蛋白质中赖氨酸含量。
二、实验原理
六、实验结果
样品中赖氨酸的含量(%)=[从标准曲线上查得值(μg）×10－３/(样品重ｍg)]×1.１5１5×100％－Cﻫ校正系数：1.１5１5;Ｃ：游离的氨基酸含量
七、注意事项
1.各种作物种子中游离氨基酸含量是：玉米0.01%、小麦0.05%、水稻0.0１%、高粮0．04％。ﻫ2．茚三酮显色反应受温度、pＨ、时间影响较大,如果要使实验结果能很好重复,必须严格控制上述条件。样品中如含有大量盐酸会使氨基酸不易显色。
2％碳酸钠(ｍl)
／
／
／
／
/
／
1.0
／
/
/
／
／
/
80℃水浴20分钟
茚三酮试剂(ml）
２.0
2.0
2.0
2.０
2.０
2.0
２．0
混匀,加塞，80℃水浴30分钟,冷却至室温
60%乙醇(ml)
3．0
3.0
3．0
3．0
3．0
３．０
3.0
／
／
/
/
/
/
过滤
混匀
A530
蛋白质中赖氨酸（lysine，Lys）的含量是谷物品质的主要指标之一。由于动物及人类不能合成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法（Dye BｉndinｇLｙsine,DＢL)测玉米种子中赖氨酸含量。ﻫ
标准曲线的制作及样品测定参考表
试 管 号
试 剂
1#（空白）
2#
３＃
4#
5#
6#
７＃(样品)
亮氨酸标准液(ml)
0
0．1
0.２
０.３
０.4
０.5
／
蒸馏水(mｌ)
０．5
0.4Βιβλιοθήκη 0．30.2０.1
0
/
亮氨酸含量(μｇ)
0
／
4％碳酸钠(ml)
0.５
0.5
0.5
0．5
０.5
0.5
／
脱脂样品(mg)
／
/
／
／
/
/
15
(二)仪器设备:1.７22型分光光度计;2．水浴锅;3.试管；4.圆头玻璃棒（圆头大小要与试管大小配套)。
(三）试剂：1.缓冲溶液,称取３０g甲酸钠,溶解于约60ｍｌ蒸馏水中，加入10mｌ８％的甲酸，最后加水到1０0ｍl;2.茚三酮试剂,称取1g茚三酮和１g氯化镉（ＣｄCl2.H2O）,加入2５ml上述缓冲溶液和75ｍl乙二醇，室温下放置一天，第二天使用。若出现沉淀,则过滤后使用。该溶液一定要头一天配制，第二天使用，不宜
三、实验仪器
1.电子分析天平(1/1０0０）、可见分光光度计、恒温水浴箱、干燥器、移液器。ﻫ2.试管架（塑及铝)、具塞试管、具塞三角瓶、细口瓶、漏斗(或０.45um滤膜)、吸管等。
四、实验试剂
1．0.4ｍol／L柠檬酸缓冲液:称取4．20２ｇ柠檬酸和5．８8g柠檬酸三钠，溶于100ml蒸馏水中。
2.茚三酮试剂:称40mｇ二氯化锡(防腐）溶于25ml柠檬酸缓冲液中；称lg茚三酮溶于25ml 9５%乙醇中；将上述两液混合摇匀,滤去沉淀，上清液置冰箱中保存备用。
五、操作步骤
１．标准曲线的制作。
取７支具塞试管,按表进行编号、加入试剂，顺序操作。以第１管为空白，在５３0nm波长下比色，读取吸光度值。并以吸光度值为纵坐标,亮氨酸含量（μｇ）为横坐标，绘制标准曲线。
2．样品前处理ﻫ不同品种的玉米种子，用粉碎机粉碎,过80～1０0目筛子,收集过筛后的细粉,放入广口瓶中，加入沸程60～90℃的石油醚,使其淹过粉面，浸泡8小时,不时摇动进行脱脂。然后过滤，并用石油醚淋洗沉淀若干次，弃去滤液。将脱脂玉米粉凉在干净的滤纸上,置阴凉通风处吹干石油醚。收集干粉,置于干燥器内，保存备用。ﻫ3．样品的测定ﻫ取１5mｇ已粉碎脱脂的玉米样品于具塞干燥试管内，加2％碳酸钠１．0ml，于80℃水浴中提取20min，然后加茚三酮试剂2.Oｍl,继续保温显色30miｎ,冷却后加60%乙醇３.Oml，混匀后过滤或离心,然后在５３０nm波长下比色。
蛋白质中的赖氨酸具有一个游离的ε-ＮH2，它与茚三酮试剂反应生成蓝紫色物质，其颜色的深浅在一定范围内与赖氨酸的含量成线性关系。因此,用已知浓度的游离氨基酸制作标准曲线,通过比色分析（530ｎm）即可测定出样品中的赖氨酸含量。ﻫ亮氨酸与赖氨酸的碳原子数目相同，而且仅有—个游离氨基(ε－NH２),所以通常用亮氨酸配制标准液。但由于这两种氨基酸分子质量不同,以亮氨酸为标准计算赖氨酸含量时,应乘以校正系数1．15１5,最后再减去样品中游离氨基酸含量。
一、茚三酮显色法原理：谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的ε-ＮH2,它与茚三酮(ninhydrｉn)试剂可发生颜色反应,生成紫红色物质,其颜色与赖氨酸残基的数目成正相关。选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配成标准溶液,做出标准曲线,可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量.ﻫ
二、材料、仪器设备ﻫ（一）材料:不同品种的玉米种子，用粉碎机粉碎，过１00目筛子，收集过筛后的细粉，放入广口瓶内,加入沸程６0～90℃的石油醚,使其淹过粉面,浸泡8h，不时搅动进行脱脂。然后过滤,并用石油醚淋洗沉淀若干次，弃去滤液。将脱脂玉米粉晾在干净的滤纸上,置阴凉通风处吹干石油醚。收集干粉,置干燥器内,保存备用。
３．０．02mol/L盐酸:取12mol/L盐酸0.1７ml,用蒸馏水稀释定容至１00ml。
4．亮氨酸标准液：准确称取２0mg亮氨酸，加数滴0.02mｏl/Ｌ盐酸使之溶解，然后用蒸馏水稀释定容到１00mｌ，则得浓度为200μg/ｍl的标准液。ﻫ5.6０％乙醇。ﻫ６.４%碳酸钠:称取4g无水碳酸钠,溶于100 ml蒸馏水。ﻫ7.２％碳酸钠。