乳与乳制品病原微生物检验方法志贺氏菌的检验
乳与乳制品检验方法汇编
乳与乳制品检验方法汇编（第三版）汇编：蒋懿超前言本汇编内的原奶及奶粉掺假检验方法等同采用伊利集团内部检验方法，理化检验方法等效采用IDF相关标准、GB/T5413-1997，GB/T5009-2003，个别地方根据实验具体情况做了适当修改；微生物检验方法等同采用GB/T4789-2003，部分检验项目等效采用IDF标准。
目录前言——————————————————————————————---1目录——————————————————————————————---2第一部分原料奶新鲜度和掺杂异物的检验方法YLNB 1.1 酒精实验——————————————————————--5 YLNB 1.2 美兰实验——————————————————————--6 YLNB 1.3 碱性物质的检出———————————————————--8 YLNB 1.4 食盐的检出—————————————————————--10 YLNB 1.5 硝酸盐，亚硝酸盐的检出———————————————--12 YLNB1.6 糊精的检出—————————————————————--14 YLNB 1.7 淀粉的检出————————————————————----15 YLNB 1.8 硫酸盐的检出————————————————————--16 YLNB 1.9 蔗糖的检出—————————————————————--17 YLNB 1.10 尿素的检出—————————————————————--18 YLNB 1.11 饴糖（糖稀）及葡萄糖的检出—————————————--19 YLNB 1.12 甲醛的检出—————————————————————--20 YLNB1.13 硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠的检出————————————--21 YLNB1.14 过氧化氢的检出——————————————————---23 YLNB1.15 乳中掺入水解蛋白的检测出———————————————25 YLNB 1.16 乳中不溶性物质的检出—————————————————27 第二部分乳与乳制品常规理化指标检验方法YLNB 2.１滴定酸度的检测————————————————————28 YLNB 2.2 灰分的检测—————————————————————--34 YLNB 2.3 全脂乳固体的检测——————————————————--36 YLNB 2.4 总固形物的检测———————————————————--38 YLNB 2.5 水分的检测—————————————————————--42YLNB 2.6 脂肪的检测—————————————————————--44 YLNB 2.7 乳糖和蔗糖的检测——————————————————--53 YLNB 2.8 蛋白质的检测—————————————————————62 YLNB 2.9 不溶度指数的检测——————————————————--68 YLNB 2.10 乳与乳粉中杂质度的检测————————————————73 YLNB 2.11 硝酸盐，亚硝酸盐的检测————————————————74 YLNB 2.12 乳铁蛋白饱和度的检测—————————————————82 第三部分乳与乳制品微生物检验方法YLNB 3.1 菌落总数检测————————————————————--84 YLNB 3.2 大肠菌群检测————————————————————--90 YLNB 3.3 嗜冷菌检测—————————————————————--96 YLNB 3.4 霉菌和酵母菌的计数—————————————————-- 100 YLNB 3.5 鲜乳中抗生素残留检测—————————————————103 YLNB 3.6 芽孢和耐热芽孢检测—————————————————--106 YLNB 3.7 双歧杆菌检测—————————————————————109 YLNB 3.8 染色技术——————————————————————--112 YLNB 3.9 显微技术———————————————————————116 第四部分乳与乳制品病原微生物检验方法YLNB4.1 金黄色葡萄球菌的检测——————————————————119 YLNB4.2 金黄色葡萄球菌肠毒素的检测——————————————--123 YLNB4.3 沙门氏菌的检测—————————————————————126 YLNB4.4 志贺氏菌的检测—————————————————————132 YLNB4.5 溶血性链球菌的检测————――—————————————136 YLNB4.6 单增李斯特菌的检测—————————————————----139 YLNB4.7 阪崎肠杆菌的检测———————————————————--146 YLNB4.8 粪链球菌群的检测———————————————————--152 附图1 金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片附图2 金黄色葡萄球菌的平板菌落照片附图3 金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态附图4 志贺氏菌落在SS平板上的照片附图5 大肠杆菌革兰氏染色照片第五部分乳与乳制品非常规指标分析方法YLNB 5.1 乳与乳制品中黄曲霉毒素M1的检测———————————163 YLNB 5.2 食品及饲料中黄曲霉毒素B1的检测————————————165 YLNB 5.3 预混料中维生素C的含量的检测（常规法）——————————167 YLNB 5.4 维生素C的检测————————————------------------169 YLNB 5.5 奶酪中脂肪含量以及食盐含量的检测————————————172 YLNB 5.6 磷的检测————————————----------------------177YLNB 5.7 DHA、AA的检测————————————-------------------180的检测———————————--------------------184 YLNB 5.8 维生素B1YLNB 5.9 碘的检测------------------------------------------------187 YLNB 5.10 维生素A、E的检测——————————--------------------191 YLNB 5.11 山梨酸、苯甲酸、糖精钠的检测————————————----195的检测———————————--------------------198 YLNB 5.12 维生素B6YLNB 5.13 烟酸和烟酸铵的检测--------------------------------------201 YLNB 5.14 乳制品中钾、钠、钙、镁、铁、锌、铜和锰的检测--------------204 YLNB 5.15 乳制品中铅的检测----------------------------------------209 YLNB 5.16 乳制品中总砷的检测--------------------------------------212 YLNB 5.17 乳制品中硒的检测----------------------------------------215原料奶新鲜度和掺杂异物检验方法酒精实验 YLNB 1.11. 原理生鲜牛乳在酸度升高后，与等体积中性酒精混合后会出现絮片, 通过絮片的产生情况判定是否可通过该浓度的酒精。
志贺氏菌检测
C群：也称鲍氏菌群，有15个血清型，分解甘 露醇，无鸟氨酸脱羧酶。各型内无交叉凝集。 D群：也称宋内氏菌群，仅有一个血清型。分 解甘露醇，有鸟氨酸脱羧酶，迟缓发酵乳糖。 有Ⅰ(S相光滑菌落)、Ⅱ相(R粗糙菌落)之分。
福氏志贺菌在HE琼脂平板上的菌落 特征蓝绿色大肠埃希菌红色较大
二、志贺氏菌的生物学特性
菌落形态学
关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、 质地等等，都是区分细菌的重要手段。
福 氏 志 贺 氏 菌 的 菌 落 特 征
宋内志贺菌乳糖迟发酵菌株 在麦康凯平板上的菌落特征
细菌在肉汤培养基中的生长
均匀浑浊生长是什么意思？
二、志贺氏菌的生物学特性
3、志贺氏菌的生化特性： 本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。大 多不发酵乳糖，仅宋内氏菌迟缓发酵乳糖。 靛基质产生不定，甲基红阳性，VP试验阴 性，不分解尿素，不产生H2S。与肠杆菌科 各属细菌相比较，志贺氏菌的主要鉴别特 征为不运动，对各种糖的利用能力较差， 并且在含糖的培养基内一般不形成可见气 体。根据生化反应可进行初步分类。
志贺氏菌属的四个群
根据抗原构造的不同，按最新国际分类法，将本 属细菌分为四个群、39个血清型（包括亚型） A群：也称志贺氏菌群，有10个血清型。不发酵甘露 醇，无鸟氨酸脱羧酶，与其他各群细菌无血清学 联系。 B群：也称福氏菌群，已有13个血清型（包括亚型和 变种）。最近又发现3个亚型（1c、4c、5b）。发 酵甘露醇，无鸟氨酸脱羧酶。抗原结构较复杂， 各型间有交叉凝集。每一福氏菌型具有二种抗原， 即型特异性抗原和群抗原，前者只存在于同型菌 株中，后者有许多种，存在于福氏各菌型中。例 如福氏1b型除含有1型特异性抗原外，尚含有4、6 群抗原。
二、志贺氏菌的生物学特性
乳品微生物指标及检验标准介绍
微生物指标监管政策的完善
制定更严格的乳品安全标准
01
针对乳品中的微生物指标，制定更为严格和具体的标准，确保
乳品安全。
加强监管力度
02
加大对乳品生产、加工、销售等环节的监管力度，确保微生物
指标符合标准。
建立追溯体系
03
建立乳品生产全过程的追溯体系，对不合格产品进行追溯和处
理，保障消费者权益。
提高消费者对乳品安全的认知
普及乳品安全知识
通过各种渠道向消费者普及乳品安全知识，提高消费 者的安全意识。
倡导健康消费观念
引导消费者选择安全、优质的乳制品，倡导健康消费 观念。
加强与消费者的沟通
建立与消费者的沟通机制，及时回应消费者关切，提 升消费者对乳品安全的信任度。
THANK YOU
VS
详细描述
李斯特菌在乳品中主要来自加工设备和环 境，也可通过包装材料污染产品。感染李 斯特菌的病例通常在摄入后1-4周内出现 症状，包括头痛、发热、肌肉疼痛等。
志贺氏菌
总结词
志贺氏菌是一种可导致细菌性痢疾的病原菌 ，具有较强的传染性。
详细描述
志贺氏菌在乳品中主要通过感染病牛传播， 也可通过加工设备和环境污染产品。感染志 贺氏菌的病例通常在摄入后1-2周内出现症 状，包括腹泻、腹痛、发热等。
微生物指标的检测结果可以为乳品的生产、加工、储存和运输等环节提供改进和优化的依据，提高乳 品的质量和安全性。
02
乳品中常见的微生物 指标
大肠菌群
总结词
大肠菌群是肠道细菌的一种，通常作为食品污染的指示菌，表示食品是否受到粪便污染。
详细描述
大肠菌群包括大肠杆菌、肠球菌等，主要来源于动物肠道。在乳品中，大肠菌群的存在通常与奶牛的健康状况和 生产过程中的卫生条件有关。
S4501乳及乳制品中志贺氏菌的检验-培训PPT.
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（四）血清学鉴定
• 特异性诊断血清鉴定
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（五）进一步生化鉴定 • 用初步生化实验中已培养的营养琼脂斜面上生长的 菌苔，进行生化试验，即 β-半乳糖苷酶、尿素、赖 氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶以及水杨苷和七叶苷的 分解试验。 • 由于福氏志贺氏菌 6型的生化特性和痢疾志贺氏菌或 鲍氏志贺氏菌相似，必要时还需加做靛基质、甘露 醇、棉子糖、甘油试验，也可做革兰氏染色检查和 氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。
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（四）抗原结构 抗原 菌体抗原 （O抗原） 群特异性抗原 表面抗原 （K抗原）
型特异性抗原
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（四）抗原结构
• 志贺氏菌分为四群：
– A群（痢疾志贺氏菌）：1~10型 – B群（福氏志贺氏菌）：1~6型+X、Y两个变种， – C群（鲍氏志贺氏菌 ）：1~15型 – D群（宋内氏志贺氏菌） ：1个型
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（五）抵抗力
• 宋内氏最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。 • 一般在潮湿土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在冰块 中可存活96天，在粪便内（室温）存活11天。 • 日光直接照射30min，56~60℃ 10 min即被杀死。 • 对高温和化学消毒剂很敏感，1%石炭酸中15~30 min即被杀 死，对氯霉素、磺胺类、链霉素敏感，但易产生耐药性。
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葡萄糖+ 甘露醇－ 靛基质－ 乳糖－ 甘露醇+ 乳糖+
靛基质+
靛基质－
靛基质+
靛基质－
痢疾志贺 氏菌1、3、 4 、5 、6 、 9、10型
痢疾志贺 福氏6型，鲍 氏菌2、7、 氏1、2、3、 8型 4、6、8、10、 12、14型
志贺氏菌的检验
免疫性：病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不稳定。
四、志贺氏菌的检验
1、增菌 称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL 广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎 1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻 璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。 培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混 浊时即应中止培养。 2、分离和初步生化试验 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平 板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和伊红美蓝 琼脂平板各1个，于36℃培养18～24h。 志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖 的菌落。
麦康凯琼脂平板
EMB平板照片及原理
挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多 挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。
动力试验
三糖铁（TSI）琼脂试 验的原理
1. Pseudomonas aeruginosa：Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtilis：Motile
3、血清学分型
挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的 存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查； 如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分 别试验。 如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检 查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先 用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果， 依次选用型因子血清检查。 4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价 1、2、3分别检查，并进一步用1～18各型因子血清检查。 如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多 价血清及各型因子血清检查。
乳与乳制品微生物检验方法
乳与乳制品微生物检验方法菌落总数的测定1、术语菌落是指在因体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计的相同的细茵集合而成。
茵落总数是指食品检样经处理后，在一定条件下培养后（如营养成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1ml（g）检样中所生长的细菌菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
所以厌氧或微需氧茵、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有的生长条件不能满足其生理要求，故难以生长。
因此菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
2、设备和材料2.1培养箱：36±1℃2.2冰箱：0～4℃2.3恒温水浴：46±1℃2.4天平2.5电炉2.6吸管2.7广口瓶或三角瓶：容量为500ml2.8玻璃珠：直径50mm2.9平皿：直径约90 mm2.10试管2.11放大镜2.12菌落计数器2.13酒精灯2.14均质器或乳钵2.15试管架2.16灭菌刀或剪子2.17灭菌镊子3 培养基和试剂3.1营养琼脂培养基：按GB4789.28中4.7规定或按购买的商用培养基配方配制。
3.2生理盐水3.3 75%乙酵溶液4 检验程序菌落总数的检验程序如下：5 操作步骤5.1检样稀释及培养5.1.1以无菌操作将检样25g（或ml）剪碎放于装有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭玻璃瓶内，（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置均质器中以8000～10000r/min 的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。
5.1.2用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液）振摇试管，混合均匀，做成1：100的稀释液。
乳与乳制品微生物检验方法
乳与乳制品微生物检验方法1.菌群总数测定方法：菌群总数测定方法是衡量乳制品中微生物质量的基础方法之一、目前常用的菌群总数测定方法有总计数平板法、液体培养法和荧光素酶法。
总计数平板法是将样品分别接种在琼脂平板上，通过平板上菌落的形成来计数。
液体培养法是将样品接种在适当的培养基中，通过测量培养液的浑浊度或菌液悬浮液中的细菌数量来计数。
荧光素酶法是通过加入荧光素酶底物，菌落会释放出荧光，通过测量荧光强度来计数。
这些方法可以快速、准确地测定样品中菌落总数，从而确定乳制品的微生物质量。
2.根据德国奶酪乳制品行业协会VDF指南的要求，共有500多种病原菌可以检测，包括沙门氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及其他致病菌。
这些方法多是PCR技术、荧光定量PCR技术等。
以沙门氏菌检测为例，主要有传统培养法、分子生物学培养法、酶免的葡萄糖酸盐液体培养基、黄金标准法等多种方法。
其中，PCR技术可以通过扩增沙门氏菌的DNA序列，快速、准确地检测样品中的沙门氏菌。
3.酸奶产品中乳酸菌数量的测定：乳酸菌是酸奶中的一类重要菌群，其数量多少直接影响酸奶的质量。
常用的测定乳酸菌数量的方法有直接显微法、涂布法、测定菌落数量法等。
直接显微法是将样品显微镜下直接观察和计数乳酸菌的数量。
涂布法是将样品涂于适当的培养基上，通过菌落的形成来计数。
菌落数量法是将样品稀释后均匀涂布在琼脂平板上，通过菌落的形成来计数。
这些方法可以可靠地测定乳酸菌的数量，从而评估酸奶的质量。
4.冷藏和储存条件检验方法：乳制品的储存条件对其微生物质量有着至关重要的影响。
常用的储存条件检验方法包括温度检测、湿度检测、pH值检测等。
温度检测可以通过温度计或温度记录器来测量乳制品的储存温度，确保其符合相关标准。
湿度、pH值等的检测可以通过仪器设备进行测量和监控。
这些方法能够及时发现和纠正乳制品储存条件的问题，保证乳制品的微生物质量稳定。
总结起来，乳与乳制品微生物检验方法包括菌群总数测定方法、病原菌检测方法、乳酸菌数量测定方法和储存条件检验方法等。
志贺氏菌的检验讲解39页文档
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
60、人民的幸福是至高无个的法。— —西塞 罗
1、最灵繁的人也看不见自己的背脊。——非洲 2、最困难的事情就是认识自己。——希腊 3、有勇气承担命运这才是英雄好汉。——黑塞 4、与肝胆人共事，无字句处读书。——周恩来 5、阅读使人充实，会谈使人敏捷，写作使人精确。——培根
GB志贺氏菌检验
• XLD琼脂：粉红色至无色，半透明、光滑、湿润、圆形、边 缘整齐或不齐
6
GB 志贺氏菌检验
志贺氏菌（Shigella）检验
• 志贺氏菌属（Shigella） 的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病 原菌。 • 直杆菌，形态似其他肠杆菌科的种。革兰氏阴性。不运动。兼性厌氧， 具有呼吸和发酵两种类型的代谢。
2
《GB 4789.5—2012食品微生物学检验 志贺氏菌检 验》
XLD培养基
CM0469B CM0115B CM0115T 无
MacConkey Agar No.3 3号麦康凯琼脂
Triple sugar Iraon Agar 三糖铁琼脂
CM0277B CM0003B
初步生化实验
营养琼脂斜面
Nutrient Agar
营养琼脂
BO0196M BO0196T BO0196V
赖氨酸脱羧酶肉汤 片剂(Taylor 改良配 CM0308S 方) 胰蛋白胨水 蛋白胨水 BactiDrop™ Kovacs吲哚 CM0087B CM0009B R21522
RapID™ ONE 肠杆 R8311006 菌鉴定系统
5
结果观察
• 麦康凯琼脂：无色至浅粉红色，半透明、光滑、湿润、圆形 、边缘整齐或不齐
半固体琼脂斜面
4
GB 4789.5—2012食品微生物学检验 志贺氏菌检验 解决方案-D的中文名称 OXOID货号 Simmons柠檬酸琼 CM0155B 脂 尿素琼脂基础 CM0053B
西蒙氏柠檬酸盐琼 Simmons Citrate Agar 脂 尿素琼脂 Urea Agar
40%尿素溶液
SR0020K
生化鉴定
Lysine Decarboxylase 氨基酸脱羧酶试验 Broth Tablets 培养基 （Taylor modification） 蛋白胨水 靛基质试剂 生化鉴定试剂盒 Tryptone Water Peptone water BactiDrop™ Kovacs Indol RapID™ ONE system
志贺氏菌检验
志贺氏菌检验志贺氏菌属于肠杆菌科，是一种革兰氏阴性菌，会引起肠道感染，引发肠炎，当人出现连续性腹泻、腹痛等症状的时候，就需要考虑是否感染志贺氏菌。
志贺氏菌的传播途径主要是食物和水，比如沙拉、土豆、金枪鱼、虾、奶制品等，在密闭以及不卫生的条件下志贺氏菌会迅速传播，而且经常出现在人员比较密集的地方，比如餐厅、食堂等地。
食源性志贺氏菌的传播主要是因为从事食品工作的人员感染了志贺氏菌，并且将其传播到食物上所引起的，另外，保存食物的温度不当，也可能引起志贺氏菌。
志贺氏菌检验是临床上检验肠道感染疾病的一个重要途径，在检测过程中常用的方法有以下几种。
一、生化鉴定法常规的生化鉴定方法是志贺氏菌检验过程中的常用方法，需要对细菌进行增殖培养、分离、生化试验、血清学检验等步骤来完成，步骤比较繁琐，而且耗时较长，每一次一般只能检验一个样品，但是检测的结果比较准确，检测稳定性较高，假阳性率低。
二、免疫学检验方法免疫学是检验志贺氏菌最快速、准确的方法，特异性较强，而且灵敏度很高，主要的免疫学检验方法有以下几种：第一，酶联免疫法。
这种方法的灵敏度很高，而且简单快速，检测过程比较稳定，可以进行自动化操作，是志贺氏菌检测过程中最快速的一种方法。
但是，使用酶联免疫法进行检验的时候，影响检测结果的因素较多，而且假阳性率高，所以还需要采用其他的方法进行配合检验。
第二，SPA协同凝集法。
这种方法是使用已知标准血清吸附到含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌表面之后，让金黄色葡萄球菌成为吸附抗体的载体，再根据吸附的结果来诊断是否感染志贺氏菌的一种方法。
三、分子生物学方法分子生物学是建立在很多其他的检测技术基础上的，敏感度高、检测快速，而且特意性高，是生物技术革命的一个重要产物，目前在志贺氏菌的检测过程中十分常见。
志贺氏菌的分子生物学检测方法有以下几种：第一，聚合酶链式反应法，比如常规PCR、多重PCR法、实时荧光PCR法和恒温荧光PCR法等。
以恒温实时荧光PCR法为例，这种方法的原理是利用环介导等温扩增反应为原理进行测量的方法，灵敏度很高，与传统的荧光测量方法相比，灵敏度高出2～5个数量级，而且测量十分迅速，荧光反应的时间较短，一般30-60分钟就可以完成荧光反应。
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乳与乳制品病原微生物检验方法志贺氏菌的检验 YLNB 4.4 1.仪器及器材
1.1 架盘药物天平:0——500g,精确至0.5g
1.2 均质器或灭菌乳钵。
1.3 恒温培养箱：36±1℃，42℃
1.4 冰箱
1.5 灭菌广口瓶:500mL。
1.6 灭菌锥形瓶:500mL,250mL。
1.7 灭菌平皿:直径90mm
1.8 显微镜：10×——100×。
1.9 硝酸纤维素滤膜:150mm×50mm, 0.45μm。
临用时切成两张,每张70mm×50mm,
用铅笔划格,每格6mm×6mm。
每行10格,分6行。
灭菌备用。
2. 培养基和试剂
2.1 CN增菌液:按GB 4789.28中4.17规定。
2.2 HE琼脂:按GB 4789.28中4.21规定。
2.3 SS琼脂:按GB 4789.28中4.22规定。
2.4 麦康凯琼脂:按GB 4789.28中4.24规定。
2.5 伊红美蓝琼脂(EMB):按GB 4789.28中4.25规定。
2.6 三糖铁琼脂(TSI):按GB 4789.28中4.26、4.27规定。
2.7 葡萄糖半固体管:按GB 4789.28中4.31规定。
2.8 半固体管:按GB 4789.28中4.30规定。
2.9 葡萄糖铵琼脂:按GB 4789.28中
3.8规定。
2.10 尿素琼脂(pH7.2):按GB 4789.28中
3.15规定。
2.11 西蒙氏柠檬酸盐琼脂:按GB 4789.28中
3.5规定。
2.12 氰化钾(KCN)培养基:按GB 4789.28中
3.16规定。
2.13 氨基酸脱羧酶试验培养基:赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基,按GB 4789.28中
3.12规定。
2.14 糖发酵管:棉子糖、甘露醇、甘油、七叶苷及水杨苷,按GB 4789.28中
3.2规定。
2.15 5%乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.32规定。
2.16 蛋白胨水、靛基质试剂:按GB 4789.28中
3.13规定。
2.17 志贺氏菌属诊断血清。
3． 检验程序
志贺氏菌检验程序如下:
36℃±１℃,6－8h
36℃±１℃,18－24h 检 样
25g+GN225ml HE 琼脂或SS 麦康凯或EME
挑取可疑菌落
TSI ，葡萄糖半固体 TSI 底层产酸，斜面产碱,H 2S －
不产气，无动力 如左述的各种发应结果 血清学分析 生化分群试验 志贺氏菌 分群及分型结果 进一步的生化试验
葡萄糖铵试验、西蒙氏柠檬盐 赖氨酸,尿素,KCN 水扬苷和七叶苷 葡萄糖铵＋或任何其他阳性结果 非志贺氏菌 非志贺氏菌 报 告
4．方法
4．1 增菌
称取检样25g,加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内,固体食品用均质器以8 000～10 000r/min打碎1min,或用乳钵加灭菌砂磨碎,粉状食品用金属匙或玻璃棒
研磨使其乳化,于36℃培养6～8h。
培养时间视细菌生长情况而定,当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。
4．2 分离和初步生化试验
4．2.1 取增菌液1环,划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个;另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板1个,于36℃培养18～24h,志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
4．2.2 挑取平板上的可疑菌落,接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。
一般应多挑
几个菌落,以防遗漏,经36℃培养18～24h,分别观察结果。
4．2.3 下述培养物可以弃去:
a. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物;
b. 在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物;
c. 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物;
d. 产气的培养物;
e. 有动力的培养物;
F. 产生硫化氢的培养物.
4．2.4 凡是乳糖、蔗糖不发酵,葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体),
无动力的菌株,可做血清学分型和进一步的生化试验。
4．2.5 生化试验和血清学试验按照GB/T4789.5-2003进行。
5．结果报告
如果在培养基上无菌落生长，则报告“阴性”或“未检出”；如果有可疑菌落出现，可报告“有可疑菌落”或进一步做生化试验及血清学试验鉴定后报告“阴性”或“阳性”。