PICKERING 柱后衍生系统操作手册
Agilent1260液相色谱仪联用柱后衍生标准操作规程
Agilent 1260液相色谱仪+Vector柱后衍生仪标准操作规程一、Agilent 1260液相色谱仪1 操作程序1.1 操作前准备1.1.1 样品过滤1.1.1.1 用流动相或比流动相弱的溶剂溶解。
1.1.1.2 过滤样品确保样品中不含固体颗粒。
1.1.1.3 进样量尽量小。
1.1.2 流动相过滤不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器，降低泵的性能。
遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器的寿命。
1.1.2.1 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。
1.1.2.2 流动相使用HPLC级。
1.1.2.3 用滤膜过滤溶剂去除微生物（滤膜最大0.45μm，最好0.22μm）。
1.1.2.4 每二天更换或过滤。
1.1.2.5 避免溶剂瓶直接日照。
1.2 仪器组成1.2.1 Agilent 1260高效液相色谱系统主要由工作站、在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱和检测器等部件组成。
1.2.2 各部分的操作及数据处理均由工作站计算机控制完成，其操作系统为Windows 7，工作站软件名称为Control Panel。
1.3 开机操作1.3.1 接通电源，打开计算机及工作站其他各部件开关，约30s后，各部件预热完毕，进入待机状态，指示灯为黄色。
1.3.2 打开Agilent ChemStations，进入仪器1联机状态，约30s后，计算机进入工作站的操作页面。
该页面主要由以下几部分组成：1.3.2.1 最上方为命令栏，依次为文件，运行控制，仪器等；命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件、保存文件……等；1.3.2.2 左边为样品信息栏；1.3.2.3 中部为工作站各部件的工作流程示意图，依次为进样器——输液泵——柱温箱——检测器——数据处理——报告；1.3.2.4 中下部为动态监测信号；1.3.2.5 右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
美国Pickering柱后衍生仪-酒糟中霉菌毒素
Multi-Residue Mycotoxin Analysisof Dry Distillers Grains 干酒糟的多种残留霉菌毒素分析酒糟(Distillers grains, DG)是抽取乙醇后剩下的谷物残渣。
大约90%的酒糟用作动物饲料。
存在于新鲜谷物中的霉菌毒素可通过三个方面浓缩。
在储存过程中也容易发生污染。
由于使用霉菌毒素污染的酒糟而危害动物和人类健康的问题，正越来越引起人们的重视。
我们应该遵守FDA所指定的操作规程，常规检测用于乙醇加工生产的谷物以及酒糟的霉菌毒素污染。
我们提出了一种同时检测干酒糟中四种霉菌毒素的实验方法。
样品萃取和提纯25g研磨成粉末的样品采用150mL水/甲醇溶液(30/70)提取。
提取液过滤后，取20 mL滤液用70mL磷酸盐缓冲液(PBS)稀释。
采用AOZ免疫亲和柱(Vicam,USA)分离黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赭曲霉素A。
霉菌毒素通过2×2mL甲醇洗脱下来。
采用FumoniTest免疫亲和柱(Vicam,USA)分离伏马菌素。
霉菌毒素通过2×1.5 mL甲醇洗脱下来。
合并两次洗脱液。
洗脱液旋蒸至0.5mL，采用甲醇定容至终体积1 mL。
分析条件色谱柱: MYCOTOX™反相柱C18,4.6x250 mm 货号1612124温度: 40°C流速: 1 mL/min流动相: 磷酸钠缓冲液, pH3.3货号1700-1108/甲醇/乙腈柱后衍生条件柱后衍生系统: Pinnacle PCX反应体积: 1.4 mL温度: 60°C试剂: OPA, Thiofluor, Brij 35® in GA104光化学反应器: UVE™检测器: 荧光检测器黄曲霉毒素Aflatoxins (光化学衍生)λex = 365 nm; λem = 455 nm伏马菌素Fumonisins (柱后衍生OPA法)λex = 330 nm; λem = 465 nm赭曲霉素A Ochratoxin Aλex = 335 nm; λem = 455 nm玉米赤霉烯酮Zearalenoneλex = 275 nm; λem = 455 nm采用HPLC和柱后衍生法一次测定黄曲霉毒素(Aflatoxins)、赭曲霉素A(Ochratoxin A)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone)和伏马菌素(Fumonisins)霉菌毒素标准品加标霉菌毒素的DDG样品5点式标准曲线色谱柱和试剂黄曲霉毒素B1 0.23–113.1 ppb 0.99926 黄曲霉毒素B2 0.2–39.7 ppb 0.99966 黄曲霉毒素G1 0.5–58.2 ppb 0.99933 黄曲霉毒素G2 0.2–24.7 ppb 0.99941 赭曲霉素A 9.2–1155 ppb 0.99926 玉米赤霉烯酮 0.024–12.01 ppm 0.99908 伏马菌素B1 0.024–11.84 ppm 0.99987 伏马菌素B2 0.031–7.84 ppm0.999931612124 MYCOTOX™反相柱, C 18, 4.6×250 mm 1700-1108 磷酸钠洗脱液 pH 3.30, 4x950 mL/瓶 O120 o-PHTHALALDEHYDE (OPA), 1x5 g/瓶 3700-2000 THIOFLUOR™, 1x10 g/瓶 GA104OPA 稀释剂, 4x950 mL/瓶霉菌毒素货号描述货号浓度范围相关性黄曲霉毒素B1 10.0 65 7.6 黄曲霉毒素B2 3.4 79 6.3 黄曲霉毒素G1 10.2 75 9.4 黄曲霉毒素G2 4.4 82 9.1 赭曲霉素A 203 89 7.1 玉米赤霉烯酮 1057 231 75 8.8 伏马菌素B1 1042 801 109 5.8 伏马菌素B2 1379 223 104 6.8霉菌毒素加标样浓度，ppb 天然污染水平，ppb 回收率，%RSD N=4，%。
HPLC柱前衍生和柱后衍生
HPLC柱前衍生和柱后衍生1、为什么要衍生？衍生化最为主要的目的就是提高目的物的可检测性。
对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性；对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的相应。
2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。
柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物；柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。
3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素（聚醚类抗生素多见）和氨基酸类。
4、衍生化要求？1）衍生剂必须过量且稳定；不过量反应不完全，检测不充分。
不稳定，重现性差。
2）衍生物、衍生产物和衍生副产物至少是好分离的。
当然如果只能检测到衍生产物最好。
3）衍生反快速完全。
反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。
因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。
柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。
5、两种衍生比较柱前衍生优点是，对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。
缺点是，引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物（当然这个是检测需要的）和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。
柱后衍生优点是，重现性好，认为因素少，引入物质比较少。
缺点是，可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢（必然流速低）、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。
仪器管路的清洗Agilent的液相，反相柱，想用异丙醇清洗下系统.用纯异丙醇,流速一般在0.2~0.4ml/min先用甲醇-水，甲醇洗，再用异丙醇洗，流速低一点，根据你的压力决定，不要超过平时使用压力就可以了,洗完了，再用甲醇洗把流通池拿掉，看基线，基本可以确定，问题在哪个方向，如果基线稳定，那就是流通池或者流动相或者泵什么的问题了.再有，检测器光路透镜老化什么的也会有这个情况，光电倍增管是否老化等基线走不平一般是1.流动相脏，2.灯能量不够（流通池），3.系统有气泡，4.泵压力不稳。
柱后衍生系统操作注意事项
柱后衍生系统操作注意事项柱后衍生系统是用于色谱分离后进行检测和分析的一种操作工具，它可以在分析结果基础上对分离样品进行深入分析，为研究提供更加全面和详细的数据。
在柱后衍生系统的操作中，需要注意以下事项：1. 仪器的准备工作：在开始操作柱后衍生系统之前，需要对仪器进行准备工作，包括装载试剂、填充试剂耗材、设置检测参数等。
确保仪器处于正常状态，各项参数设置正确。
2. 样品的处理：为保证柱后衍生系统的准确性和可靠性，样品处理尤为重要。
需要对样品进行前处理，去除杂质、沉淀和胶体等杂质，以提高柱后衍生的检测精度和准确性。
3. 试剂的选择和添加：柱后衍生系统中所用的试剂涉及到分析结果的准确度和灵敏度。
选择试剂一定要根据具体需要来设置，对于不同的分析对象选择不同的试剂有助于提高检测结果的可靠性。
4. 柱后衍生系统的操作规范：柱后衍生系统操作一定要按照规范来进行，操作步骤、试剂添加顺序、检测参数等必须依据仪器手册来执行。
任何不符合规范的操作可能会导致检测结果失准，严重影响后续分析。
5. 仪器的维护和保养：定期进行仪器的维护和保养是延长柱后衍生系统寿命的关键。
当仪器使用过程中出现故障或报警提示，必须要及时检查和修复，以免出现更加严重的问题。
6. 操作人员的安全：柱后衍生系统在操作过程中可能会产生有害气体或化学物质，需要注意操作安全。
在操作前必须仔细阅读操作手册和安全手册，按照具体的操作程序来执行，避免对人员和环境的影响。
7. 数据的处理和分析：柱后衍生系统操作完成后，需要对数据进行处理和分析，得出具有意义的结论。
数据的处理和分析过程需要认真细致，不能草率处理，得出不准确的结论。
只有真正的分析得出了正确的结论才是有意义的。
在柱后衍生系统的操作中，这些注意事项是不被忽略的，必须全都遵循。
这样，才能够保证柱后衍生系统的实验精度和可靠性。
高效液相色谱_柱后衍生法检测水中呋喃丹残留量的方法研究_施俭
引起对地下水的污染， 为此美国对呋喃丹使用作了 一些地区性限制,我国在 2007 年 7 月 1 日正式实施 的新版 《生活饮用水卫生标准 》(GB 5749—2006)中 也列入呋喃丹作为检测指标。
图 1 呋喃丹结构式 Fig.1 The structural formula of carbofuran
Polyether Antibiotics聚醚类抗生素
Minutes101552025M o n e n s i n BM o n e n s i n AS a l i n o m y c i nN a r a s i nPolyether Antibiotics聚醚类抗生素Monensin, Narasin, and Salinomycin聚醚类抗生素，例如莫能菌素(Monensin)、Narasin 和盐霉素(Salinomycin)，存在于原料、预混合料、液体补充剂和饲料产品中，采用高效液相色谱和柱后衍生仪能够对其进行定量分析。
聚醚类抗生素在硫酸存在的条件下与香草醛(Vanillin)反应，其衍生产物能够在520 nm 处被检测。
但是，这种腐蚀性的试剂会严重地损坏大部分仪器。
然而，Pickering 公司的PCX5200柱后衍生设备，主要由非金属零件和清洗泵头组成，能够耐受硫酸的腐蚀性，同时提供特殊的操作说明。
需要获得PCX5200柱后衍生设备用于聚醚类抗生素分析的更多资料，可联系Pickering Laboratories 。
方法分析条件色谱柱: 聚醚类反相柱, C18, 4.6 x 250 mm, 货号2381750温度: 40 °C流速: 0.7 mL/min流动相: 甲醇/5%醋酸水溶液(90/10), 等度洗脱柱后衍生条件柱后衍生系统: Pinnacle PCX (要求非金属柱后衍生系统)试剂1: 浓硫酸/甲醇(4:96 v/v)反应器1: 室温, 0.1 mL试剂2: 60 g 香草醛(或者p-dimethylaminoben-zaldehyde, DMAB) 溶于950 mL 甲醇反应器2: 90 °C, 1.4 mL 流速: 0.3 mL/min检测器: 紫外可见分光光度计:香草醛λ=520 nm, DMAB λ=450 nm货号 描述2381750 聚醚类反相柱, C 18, 4.6×250 mm 18ECG001 保护柱卡套, 带3个保护柱芯 3700-2200 香草醛, 1x30 g/瓶3700-0400p-Dimethylaminobenzaldehyde (DMAB), 1x5 g/瓶色谱柱和试剂。
黄曲霉毒素净化柱使用手册最新
黄曲霉毒素B/G免疫亲和净化柱使用手册目录1、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书2、样品处理方法3、柱后衍生技术4、实验操作注意事项5、主要技术指标和参数6、黄曲霉毒素分析实验室配置7、参考文献8、欧盟相关规定中黄曲霉毒素的限量表9、附件AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱说明书LCTech 公司的AflaCLEAN TM免疫亲和净化柱采用单克隆抗体技术，预先在净化柱壁涂布了黄曲霉毒素B和G的抗体，当提取样品液过净化柱时，黄曲霉毒素就会被吸附保留在柱子上，而其他杂质则被排除，然后再用甲醇将黄曲霉毒素从净化柱上洗脱下来进行黄曲霉毒素检测分析的前处理，适用于食品，饲料以及相关原料中黄曲霉毒素检测时，样品的净化处理，特点是适用范围广，平行性好，回收率高，重新性好，操作简单，性价比高。
一、AflaCLEAN TM黄曲霉毒素免疫亲和柱产品组成1、AflaCLEAN TM净化柱25支/盒2、批次证书和使用说明书二、实验准备1、样品处理方法：详见：“样品处理方法”2、试剂配制（1）样品提取溶剂：甲醇/水（4/1，v/v）（2）5mmol磷酸盐缓冲溶液（PBS）（pH7.2）母液配制：1）称取50.14gNa2HPO4.12H2O溶解于700ml水中。
2）称取9.66gNaH2PO4.1H2O溶解于350ml水中。
3）将上述两种溶液进行混合并加入42.5gNaCl，配制成pH7.2 5mmol 磷酸盐缓冲溶液（3）1mmol磷酸盐缓冲溶液(PBS)（pH7.2）工作液配制：取200ml 的5mmol磷酸盐缓冲溶液（pH7.2）稀释于800ml水中。
（4）磷酸盐缓冲溶液（PBS）/吐温(Tween)配制：取8ml吐温-20稀释于92mlpH7.2磷酸盐缓冲溶液中（5）HPLC 流动相配制：水/甲醇/乙腈（60/30/15,v/v）三、实验步骤1、净化柱平衡：将净化柱于室温中放置15min以上，平衡至室温。
柱后衍生化-HPLC法检测硫酸新霉素的有关物质
柱后衍生化-HPLC法检测硫酸新霉素的有关物质张杨慧;蒋孟虹;赵敬丹;秦峰;刘浩【摘要】目的建立硫酸新霉素有关物质检查的柱后衍生化-HPLC-荧光检测法,并与新建的HPLC-电化学检测法进行比较.方法色谱柱为COSMOSIL 5C18-PAQ(4.6mm×250mm,3.5μm);以pH3.4缓冲液[取庚烷磺酸钠一水合物4.35g和无水硫酸钠169,加水溶解并稀释至1000mL,用冰醋酸调节pH值至(3.4±0.1)]-乙腈(95∶5)为流动相A,pH3.4缓冲液-乙腈(60∶40)为流动相B;梯度洗脱;柱温为30℃;流速为1.0mL/min.柱后衍生化试液为邻苯二甲醛溶液[pH值为(10.4±0.1)];流速为0.3mL/min.电化学检测法采用脉冲安培检测器,金电极为工作电极,四电位波形工作模式.结果柱后衍生化法与电化学检测法均检出24个杂质.柱后衍生化法的检测限和定量限分别为1.1和3.5ng.结论柱后衍生化-HPLC法操作简便,灵敏度高,重复性好,可作为硫酸新霉素有关物质检查的常规方法.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2019(044)005【总页数】6页(P568-573)【关键词】新霉素;有关物质;高效液相色谱;柱后衍生化;脉冲安培检测【作者】张杨慧;蒋孟虹;赵敬丹;秦峰;刘浩【作者单位】中国医药工业研究总院,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;上海市食品药品检验所,上海201203;复旦大学化学系,上海200433;上海市食品药品检验所,上海201203【正文语种】中文【中图分类】R917新霉素(neomycin)是首个被发现的2-脱氧链霉胺双取代氨基糖苷类抗生素[1]。
由于硫酸新霉素的有关物质较多[2](图1)，杂质(如新霉胺)一般活性较低且具有一定的毒性，会影响临床疗效，导致不良反应，因此对新霉素进行有关物质的检测是产品质量控制十分重要的环节。
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1. 四元梯度泵，最好配备柱塞清洗组件； 2. 进样器要使用Tefzel或者PEEK材料的转子，否则不能承受再生试
剂高达12+的pH； 3. 不要使用不锈钢溶剂过滤头，洗脱试剂中的锂盐或者钠盐在暴露
于空气中的情况下会轻度腐蚀不锈钢；
4. 彻底冲洗LC管路，该衍生反应对于污染物非常灵敏； 5. 连接离子交换柱之前，LC到柱后衍生系统所有管路中的有机溶剂
检测：
茚三酮法-紫外检测器：λ 1 570nm，λ 2 440nm （λ ref 700nm） OPA法-荧光检测器：λ ex 330nm, λ em 465nm 离子交换柱：钠盐1193250,3.0x250mm或锂盐0353150, 3.0x150mm
四. 硬件原理与安装:
硬件原理:
柱后反应装置的最低要求是含有一个无脉冲的试剂泵，一个用于混合反 应试剂和流动相的混合器以及一个反应器。要完成氨基甲酸酯分析需要 两个柱后反应系统串联。如下图所示：在Pickering的设计中，压力表和 其后的阻尼用于减少压力脉冲。为保证反应快速还需要对水解过程进行 控温，高温又需要一个背压调节器以避免流动相在加热的反应器中沸 腾，Pickering 的设计还含有一个压力表来监测第一个混合器的压力。 加压的试剂瓶可以保证泵在较低的流速下更加精确，同时提供一个惰性 气氛以阻止试剂氧化。安全系统也整合到系统中从而避免两个柱后反应 系 统 的 隐 患 ： 1- 过 压 导 致 柱 后 反 应 器 爆 裂 ， 2- 强 碱 试 剂 返 流 损 坏 色 谱 柱，第一个隐患是通过一个525psi的卸压阀来完成，第二个隐患是在系 统中增加了一个500psi的安全开关，只有在分析柱上游达到500psi的压 力下才允许柱后反应系统操作。单向阀在泵关闭状态时防止试剂虹吸。
位置
类型
内径(英寸) 外径(英寸)
接头
泵到PCX “From Pump” PCX “To Injector”到
PEEK或不 锈钢
PEEK或不 锈钢
0.25 0.25
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Upchurch Upchurch
自动进样器 自动进样器到 PCX “From Injector” 预柱过滤器 到保护柱 PCX To Detector 检测器出口到 100Psi背压调 节器 100Psi背压调 节器到废液 超压阀出口 （允许滴到台 面，有液体意 味有故障） 气体连接
事项。
二. 仪器配置:
在线脱气机(推荐使用) 二元泵或四元泵 自动进样器或手动进样器 柱温箱(可选) 荧光检测器 紫外检测器 化学工作站 Pickering 柱后反应仪 Pickering 氨基甲酸酯分析套包或氨基酸分析套包
三. 典型应用的分析方法
氨基甲酸酯分析
硬件连接 PCX5200:
请按照下图所示连接仪器管线(管线材料及接头要求参见本段末附表): 1. 从泵出口连接1/16不锈钢或PEEK管线到PCX 5200的“From Pump”
处。
2. 从PCX 5200的“To Injector”处连接1/16不锈钢或PEEK管线到 1100自动进样器进样阀入口。
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ห้องสมุดไป่ตู้
“From Injector” 处必须PEEK PEEK Upchurch Upchurch
带1/4-28螺母 的反向压环
带1/4-28螺母 的反向压环 带1/4-28螺母 的反向压环
带1/4-28螺母 的反向压环用 于气体控制模 块，铜螺母用 于钢瓶 带1/4-28螺母 的反向压环
PEEK
PEEK PEEK或不 锈钢 Teflon或 PEEK Teflon或 PEEK Teflon
SARAN
0.01
0.007 0.01 0.25
0.25
试剂管线（从 SARAN管用于
反应试剂瓶到 OPA，Teflon
PCX泵）
用于其它
1/ 16 1/ 16 1/ 16 1/ 16 1/ 16 1/ 16
3. 从1100自动进样器进样阀出口连接0.01英寸内径左右的PEEK管线 到PCX 5200的“From Injector”处(注意在PCX 5200仪器上此接 头含有一个可更换的0.5u过滤器，因此此处接头必须使用PEEK接 头)。
4. 从PCX 5200的“To Detector”处连接0.01英寸内径左右的不锈钢 或PEEK管线到1100荧光检测器流通池入口。
可以看出氨基酸分析只需要配置单泵衍生系统，如使用双泵衍生系 统，可以关闭第二个试剂泵，加热反应器出口管线可以绕过第二个混 合器和常温反应器，直接连接检测器。 氨基酸分析可以使用Pickering分析套包中的离子交换柱分离，流动 相体系和再生试剂均包含在分析套包内，是一种低速高分辨率的方 法，可以分离生物体液或组织提取物等复杂混合物中的46种氨基酸。
第二种是邻苯二甲醛（OPA）衍生化，可以用于一级氨基酸的高灵敏 度检测。 一级氨基酸与邻苯二甲醛和N,N-二甲基-2-巯基乙胺在弱碱 性条件下反应生成一种有荧光响应的异吲哚衍生物。二级氨基酸不能 发生此反应，必须通过先氧化经两步反应检测二级氨基酸，这是该法 的缺点。这个反应需要150ul反应器和45℃反应温度。
b. 用1/4-28螺母和反向压环连接PCX 5200仪器后侧的SARAN管线 到OPA加压试剂瓶Shut-off阀的下面接口。同样连接仪器后侧 的白色PTFE管线到水解试剂加压瓶的Shut- off阀的下面。见 下图：
c. 打 开 钢 瓶 减 压 表 ， 调 节 出 口 压 力 为 3-5Bar ， 打 开 Gas Manifold的ON/OFF开关和加压试剂瓶的Vent阀，用惰性气体 Purge气体管线和试剂瓶。
此外，Vector PCX的气路控制组件已经整合到后面板内，气体开关则 处于前面板方便操作，气路控制组件的入口和出口的连接则与前述 PCX 5200相同。
Vector PCX与PCX 5200的另一个主要差别还在于，Vector型号的试剂 泵流速和压力，反应器温度等都为电子显示，并且可通过功能键连续 可调，不过Vector比5200少一个柱后压力显示。（注：PCX 5200如需 改变试剂泵流速，必须手动调节泵体背后的螺杆并自行测量流速，其 默认流速为0.3mL/min。）
检测：
荧光检测器：λ ex 330nm , λ em 465nm 氨基甲酸酯分离柱0846250（4.6×250mm）, C18, 5um
氨基酸分析 氨基酸的衍生化有两种方法。第一种是茚三酮（Ninhydrin）衍生
化，茚三酮与一级氨基酸反应产生深蓝色或紫色，称为罗曼紫，吸收 波长570nm；茚三酮与二级氨基酸反应产生一种黄色物质，吸收波长 440nm。这个反应需要130℃高温和500ul反应器。
右图即为前述柱前过滤芯， 并且具有单向阀功能，也可 以为色谱柱提供保护，避免 衍生试剂反灌入色谱柱。 玲 另外，Pinnacle与前面两种 型号最大的差别在于：前面 两种型号的试剂泵是活塞往 复式，而Pinnacle的试剂泵 是注射泵，并且泵配有多位 选择阀，以实现抽液，冲 洗，推液，排空等动作的自 动切换。仪器上方设有溶剂柜，除了可以放置两个试剂瓶以外，还可 以放洗液瓶和废液瓶。如下图所示，阀的1号位连接泵出口，2号位连 接混合器，6号位连接废液瓶，4号位连接泵入口，3号位连接衍生试 剂瓶，5号位连接洗液瓶，阀的切换由操作软件控制。
必须用水彻底冲干净，否则会造成柱床溶胀； 6. LC泵的阻尼器和PCX-5200的压力传感器一端必须堵死以最小化延
迟体积（详情请见下页图），保证梯度的准确性，因为流动相pH 值的微小变化对于分离效果的影响非常显著。
氨基酸分析的柱后条件：
PCX5200订货号1152-1221或1152-1222（茚三酮衍生化分析包） 衍生化试剂: 茚三酮(订货号T100或T200) 衍生试剂流速: 0.30mL/min 反应器: 500μ L，130℃ PCX5200订货号01152-1111或1152-1112（邻苯二甲醛衍生化分析包） 衍生化试剂: OPA(订货号O120)，Thiofluor™(订货号3700-2000)，pH 10.4 硼酸缓冲液(订货号OD104)+30mL Brij35® 衍生试剂流速: 0.30mL/min 反应器: 150μ L，45℃
Pinnacle PCX:
Pinnacle PCX是目前最新的型号，本身带柱温箱，与Vector PCX一 样，试剂泵流速以及柱温和反应器温度均可以数字显示，但是没有功 能键，只能由软件控制。由于该软件可以读取安捷伦工作站中泵压以 及运行状态等信息，因此省略了PCX 5200和Vector PCX两者均具备的 Pressure Switch。只有当安捷伦工作站已经启动泵并且柱压超过 500psi，Pinnacle工作软件才会激活启动试剂泵的菜单，从而避免衍 生试剂反灌导致损坏色谱柱。另外这一变化也让LC与Pinnacle之间的 流路连接更加简洁。
5. 从1100荧光检测器流通池出口连接0.02英寸内径的PTFE管线到 100Psi背压调节器入口（注意100psi背压调节器的目的是防止温 度较高的流动相在流通池内爆沸或产生气泡，但也要注意FLD流通 池的最高奈压只有20Bar）。
6. 用随机的0.02英寸内径的PTFE管线连接100Psi背压调节器出口到 废液瓶。
分离后的氨基甲酸酯农药首先在100℃下在NaOH作用下水解释放出
醇，碳酸盐和甲胺。在第二个柱后反应中甲胺与邻苯二甲醛（OPA和 2-巯基乙醇反应生成有强荧光吸收的1-甲基-2-蚓哚类化合物，被荧 光检测器检测且具有很低的检测限，满足EPA方法的要求。
氨基甲酸酯分析的柱后条件：
衍生试剂1：水解衍生试剂CB 130 衍生试剂2：100mg OPA, 2g Thiofluor溶解于950mL CB 910 反应器1：100℃，0.5mL 反应器2：环境温度 衍生试剂流速：0.3mL/min