人白细胞介素27 (IL-27)说明书
IL-27、KL-6在诊断CTD-ILD中的价值
㊃论 著㊃I L -27㊁K L -6在诊断C T D -I L D 中的价值杨红娇 董昭兴 王颖 李建波 刘瑶瑶昆明医科大学第二附属医院呼吸与危重症医学科650101通信作者:王颖,E m a i l W Y 925@163 c o mʌ摘要ɔ 目的 通过分析血清白细胞介素27(I L -27)㊁涎液化糖链抗原(K L -6)在结缔组织病相关性间质性肺疾病(C T D -I L D )患者中的表达水平,探索它们在诊断C T D -I L D 中的价值㊂方法 本试验为前瞻性研究,收集了昆明医科大学第二附属医院26例C T D -I L D 患者㊁33例结缔组织病(C T D )患者及16名同期昆明医科大学第二附属医院体检中心健康成人无吸烟史㊁无间质性肺疾病㊁C T D 病史及家族史者(正常对照组)的临床资料,对入组对象的血清I L -27㊁K L -6水平进行检测并分析㊂结果 C T D -I L D 组患者的血清I L -27㊁K L -6水平均显著高于C T D 组及正常对照组(P 值均<0 05),C T D 组的血清K L -6水平明显高于正常对照组(P <0 05),而2组间的血清I L -27水平差异无统计学意义㊂I L -27㊁K L -6诊断C T D -I L D 的受试者工作特征曲线中,二者的曲线下面积分别为0 659㊁0 664,诊断临界值分别为50 86n g /L ㊁4 26μg /L ,此时I L -27诊断C T D -I L D 的敏感度为53 85%,特异度为69 70%,阳性预测值为58 33%,阴性预测值为65 71%;K L -6诊断C T D -I L D 的敏感度为61 54%,特异度为69 70%,阳性预测值为61 54%,阴性预测值为69 70%,二者联合时虽然敏感度降低(34 62%),但特异度明显升高(90 91%)㊂结论 血清I L -27㊁K L -6单独诊断C T D -I L D 准确性较低,二者联合检测在诊断C T D -I L D 上可能有一定价值㊂ʌ关键词ɔ 结缔组织病相关性间质性肺疾病;涎液化糖链抗原;白细胞介素27基金项目:国家自然科学基金(81560015);昆明医科大学硕士研究生创新基金项目(2018S 144)D O I 10 3760 c m a jc n 131368-20190613-00869V a l u e o f i n t e r l e u k i n -27a n dK r e b s v o nde n l u n g e n -6i nd i a g n o s i s of c o n n e c t i v e t i s s u e d i s e a s e -a s s o c i a t e d i n t e r s t i t i a l l u ng di s e a s e Y a n g H o n g j i a o D o n g Z h a o x i n g W a n g Y i n g L i J i a n b o L i uY a o ya o D e p a r t m e n to f R e s p i r a t o r y a n d C r i t i c a l C a r e M e d i c i n e t h e S e c o n d A f f i l i a t e d H o s p i t a lo f K u n m i n g M e d i c a lU n i v e r s i t y K u n m i n g 650101 C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h o r W a n g Y i n gE m a i l W Y 925@163 c o m ʌA b s t r a c t ɔ O b je c t i v e T oe x p l o r e dt h ev a l u eof i n t e r l e u k i n -27 I L -27 a n d K r e b sv o nd e n l u ng e n -6 K L -6 i nth edi a g n o s i so fc o n n e c t i v et i s s u ed i s e a s e -a s s o c i a t e di n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e C T D -I L D b y a n a l y z i n g t h ee x p r e s s i o n so fs e r u m I L -27a n d K L -6i n p a t i e n t s w i t h C T D -I L D M e t h o d s T h es u b je c t si n c l u d e d26p a t i e n t s w i t h C T D -I L D 33p a t i e n t s w i t hc o n n e c t i v et i s s u e d i s e a s e C T D 16h e a l t h y a d u l t sw i t h o u t s m o k i n g h i s t o r y h i s t o r y of i n t e r s t i t i a l l u ng d i s e a s ea n d C T D f a m i l yhi s t o r y w h ow e r e e x a m i n e d i n t h e p h y s i c a l e x a m i n a t i o n c e n t e r o f t h e S e c o n dA f f i l i a t e d H o s p i t a l o fK u n m i n g M e d i c a lU n i v e r s i t y d u r i n g th es a m e p e r i o d T h ec l i n i c a l d a t ao f t h ee n r o l l e d s u b j e c t sw e r e p r o s p e c t i v e l y co l l e c t e da n d t h e i r s e r u mI L -27a n dK L -6l e v e l sw e r e t e s t e d R e s u l t s T h e s e r u ml e v e l s o f I L -27a n dK L -6i n t h eC T D -I L D g r o u p w e r e s i g n i f i c a n t l y h i gh e r t h a n t h o s e i n t h eC T D g r o u p a n d t h e n o r m a l g r o u p a l l P <0 05 T h e s e r u m K L -6l e v e l i n t h eC T D g r o u p w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e rt h a nt h a ti nt h en o r m a l g r o u p P <0 05 b u tt h e r e w a sn os i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n s e r u mI L -27l e v e l b e t w e e n t h e t w o g r o u p s I n t h e r e c e i v e r o p e r a t i n g ch a r a c t e r i s t i c c u r v e o f I L -27a n d K L -6f o rd i a gn o s i so fC T D -I L D t h ea r e a su n d e rc u r v e w e r e0 659a n d0 664 t h e c u t -o f f v a l u ew e r e 50 86n g La n d4 26m g L r e s p e c t i v e l y A t t h i s c r i t i c a l v a l u e t h e s e n s i t i v i t y of ㊃119㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第12期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .12Copyright ©博看网. All Rights Reserved.I L-27t od i a g n o s eC T D-I L D w a s5385% t h e s p e c i f i c i t y w a s6970% t h e p o s i t i v e p r e d i c t i v ev a l u e w a s5833% a n dt h en e g a t i v e p r e d i c t i v ev a l u ew a s6571% T h es e n s i t i v i t y o fK L-6t od i a g n o s e C T D-I L D w a s6154% t h e s p e c i f i c i t y w a s6970% t h e p o s i t i v e p r e d i c t i v ev a l u ew a s6154% a n d t h e n e g a t i v e p r e d i c t i v e v a l u e w a s6970% A l t h o u g h t h e s e n s i t i v i t y o f t h e t w o i n d i c a t o r s c o m b i n a t i o n w a s r e d u c e d3462%t h e s p e c i f i c i t y w a s s i g n i f i c a n t l y i n c r e a s e d9091% C o n c l u s i o n s T h e d i a g n o s t i c a c c u r a c y o f s e r u mI L-27a n dK L-6f o rC T D-I L Da l o n e i s l o w b u t t h e c o m b i n e dd e t e c t i o no f t h e t w o i n d i c a t o r sm a y h a v e c e r t a i nv a l u e i n t h e d i a g n o s i s o fC T D-I L DʌK e y w o r d sɔ C o n n e c t i v et i s s u ed i s e a s e-a s s o c i a t e di n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e K r e b sv o nd e n l u n g e n-6I n t e r l e u k i n-27F u n d p r o g r a m N a t i o n a lN a t u r a lS c i e n c eF o u n d a t i o no fC h i n a81560015K u n m i n g M e d i c a l U n i v e r s i t y M a s t e r S t u d e n t I n n o v a t i o nF u n dP r o j e c t2018S144D O I103760c m a j c n131368-20190613-00869结缔组织病(c o n n e c t i v e t i s s u e d i s e a s e, C T D)是一种主要侵犯全身结缔组织和血管的自身免疫性疾病,常累及全身多个脏器系统,肺是最易受累的器官之一㊂间质性肺疾病(i n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e,I L D)是C T D最常见的肺脏受累表现[1]㊂约20%~45%的类风湿性关节炎[2-3]㊁156%的原发性干燥综合征[4]和20%~75%的多发性肌炎/皮肌炎[5-7]患者可发生I L D㊂虽然与特发性间质性肺炎相比,C T D-I L D的预后相对较好,免疫抑制剂对部分患者有一定效果[2],但I L D仍是C T D患者死亡的主要原因[8],因此早期诊断及有效治疗C T D-I L D是目前呼吸科及风湿免疫科医师亟需解决的难题㊂目前临床上I L D的诊断主要依靠临床症状㊁肺部听诊及高分辨率C T㊁肺功能㊁支气管肺泡灌洗㊁肺活检等检查手段,但上述检查手段由于费用较高㊁重复性差或有创等缺点,无法广泛应用于临床工作㊂血清生物标志物是近年来研究的热点㊂I L-27是I L-6/I L-12细胞因子家族中的一种新型白细胞介素㊂有研究[9]证实全反式维甲酸通过调节T h17与调节性T细胞分化降低I L-17A的表达,从而减轻肺纤维化㊂而I L-27在T h17分化调节的过程中发挥着非常广泛的免疫调节功能,由此猜想I L-27可能通过I L-17介导I L D的发生㊁发展,其在C T D-I L D患者中的表达水平可能不同于正常人㊂涎液化糖链抗原(K r e b s v o nd e n l u n g e n-6,K L-6)最早由日本人在肺腺癌研究中发现,其本质是一种大相对分子质量糖蛋白㊂K L-6是目前可用于I L D 管理的最佳和最可靠的生物标志物之一[10]㊂但国内相关研究较少,其临床价值尚无定论㊂故本研究通过比较血清I L-27㊁K L-6在C T D-I L D及C T D患者中表达水平的差异,初步探讨二者在诊断C T D-I L D上的价值,为I L D的诊疗提供新方法和思路㊂1对象与方法11研究对象选择2018年4月1日至2018年12月31日于昆明医科大学第二附属医院呼吸科和风湿免疫科收治的C T D-I L D和C T D患者纳入本研究,其中C T D-I L D患者26例,C T D患者33例,同时选择同期体检中心健康成人无I L D㊁C T D 病史及家族史,且均为非吸烟者16名为正常对照组㊂目前国内外对C T D-I L D尚无统一诊断标准,本研究纳入标准为同时满足以下条件:(1)符合I L D诊断[11];(2)符合C T D诊断[12-16]㊂排除标准:(1)合并急性感染㊁结核㊁支气管哮喘㊁C O P D㊁恶性肿瘤;(2)合并严重心㊁肝㊁肾功能不全;(3)尘肺㊁吸入有机物及其他原因引起的I L D;(4)妊娠及哺乳期妇女;(5)资料不完整及不愿意配合者㊂本研究符合‘赫尔辛基宣言“的原则㊂12血清I L-27㊁K L-6检测方法嘱入院患者夜间空腹12h,于次日清晨采集上肢静脉全血4m l,室温下放置2h,以3000r/m i n离心10m i n,取上层血清保存于-80ħ冰箱备用㊂标本收齐后解冻,然后严格按照华美生物工程有限公司生产的人I L-27㊁K L-6试剂盒说明书操作步骤,利用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法测得I L-27㊁K L-6水平㊂13统计学分析应用S P S S220统计软件㊂计量资料正态性检验运用K-S检验,计量资料符合正态分布的采用x-ʃs表示,多组间比较采用单因素方差分析,多组样本的两两比较采用L S D-t检验;计数资料以例数或构成比表示,样本构成比用P e a r s o nχ2检验;绘制受试者工作特征(r e c e i v e r o p e r a t o rc h a r a c t e r i s t i c,R O C)曲线计算I L-27㊁K L-6诊断C T D-I L D的曲线下面积,通过标准公式计算敏感度㊁特异度㊁阳性预测值㊁阴性预测值㊂P<005为差异有统计学意义㊂㊃219㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第12期I n t JR e s p i r,J u n e2020,V o l.40,N o.12Copyright©博看网. All Rights Reserved.2 结果2 1 纳入对象的临床特征 C T D -I L D 组和C T D 组患者的平均年龄间比较差异无统计学意义,但C T D -I L D 组和C T D 组患者的平均年龄均高于正常对照组(P 值均<0 05)㊂3组间性别差异构成比㊁有/无吸烟史差异均有统计学意义(F 值分别为6 587㊁12 500,P 值均<0 05)㊂见表1㊂表1 3组间一般资料的比较组别例数年龄(岁,x -ʃs )性别(例)男女吸烟史(例)有无C T D -I L D 组2660 7ʃ13 6a16101313C T D 组3354 9ʃ13 2a12211221正常对照组1646 3ʃ12 610616F 值5 7986 58712 500P 值0 0050 0370 002 注:C T D -I L D 为结缔组织病相关性间质性肺疾病;C T D 为结缔组织病;与正常对照组比较,aP <0052 2 血清I L -27和K L -6的表达差异 结果显示,3组研究对象的血清I L -27浓度差异有统计学意义(F =4 672,P <0 05),进一步的组间比较显示C T D -I L D 组的血清I L -27浓度较C T D 组㊁正常对照组明显升高(P 值均<0 05),而C T D 组㊁正常对照组间血清I L -27浓度差异无统计学意义㊂3组研究对象的血清K L -6浓度差异有统计学意义(F =10 301,P <0 05),进一步的组间比较显示C T D -I L D 组㊁C T D 组的血清K L -6浓度较正常对照组明显升高(P 值均<0 05),且C T D -I L D 组的血清K L -6浓度较C T D 组明显升高(P <0 05)㊂见表2㊂表2 3组间血清I L -27和K L -6的比较(x -ʃs )组别例数I L -27(n g /L )K L -6(μg /L )C T D -I L D 组2655 34ʃ20 754 30ʃ1 23bC TD 组3343 68ʃ18 14a3 58ʃ1 27a b 正常对照组1638 79ʃ15 68a 2 43ʃ1 45F 值4 67210 301P 值0 0120 000注:C T D -I L D 为结缔组织病相关性间质性肺疾病;C T D 为结缔组织病;K L -6为涎液化糖链抗原;与C T D -I L D 组比较,a P <0 05;与正常对照组比较,bP <0052 3 I L -27㊁K L -6诊断C T D -I L D 的R O C 曲线 本研究中I L -27㊁K L -6诊断C T D -I L D 的最佳临界值为分别为50 86n g /L ㊁4 26μg/L ,曲线下面积分别为0 659(95%C I :0 517~0 800)㊁0 664(95%C I :0 525~0 803)㊂见图1㊁2㊂2 4 I L -27㊁K L -6及二者联合诊断C T D -I L D 的价值分析 本研究中C T D -I L D 组和C T D 组患者I L -27㊁K L -6分别以50 86n g /L ㊁4 26μg/L 为界,二者单独及联合诊断C T D -I L D 的敏感度㊁特异度㊁阳性预测值㊁阴性预测值见表3㊁4㊂注:C T D -I L D 为结缔组织病相关性间质性肺疾病图1 I L -27诊断C T D -I L D的受试者工作特征曲线注:C T D -I L D 为结缔组织病相关性间质性肺疾病;K L -6为涎液化糖链抗原图2 K L -6诊断C T D -I L D 的受试者工作特征曲线㊃319㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第12期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .12Copyright ©博看网. All Rights Reserved.表3 I L -27㊁K L -6及二者联合时C T D -I L D 和C T D 分布情况(例)组别例数I L -27ȡ50 86n gL I L -27<50 86n gL K L -6ȡ4 26μgL K L -6<4 26μgL I L -27ȡ50 86n g L 且K L -6ȡ4 26μg L I L -27<50 86n gL 或K L -6<4 26μgL C T D -I L D 组2614121610917C T D 组3310231023330注:K L -6为涎液化糖链抗原;C T D -I L D 为结缔组织病相关性间质性肺疾病;C T D 为结缔组织病表4 I L -27㊁K L -6及二者联合诊断C T D -I L D 的预测价值(%)项目敏感度特异度阳性预测值阴性预测值I L -27ȡ50 86n gL 53 8569 7058 3365 71K L -6ȡ4 26μgL 61 5469 7061 5469 70I L -27ȡ50 86n g L 且K L -6ȡ4 26μg L 34 6290 9175 0063 83注:K L -6为涎液化糖链抗原;C T D -I L D 为结缔组织病相关性间质性肺疾病3 讨论I L D 是C T D 患者死亡的主要原因[8]㊂因此,提高对C T D -I L D 的认识水平,将对制定C T D -I L D患者的治疗方案及评估C T D -I L D 患者的预后有重要意义㊂但目前临床上尚缺乏方便易行㊁重复性高㊁有效的生物标志物对C T D -I L D 的诊治进行指导,很多患者未能得到及时有效的干预,预后极差㊂因此,对相关生物标志物的探索成为广大研究者关注的热点㊂3 1 I L -27和C T D -I L D I L -27是2002年P f l a n z等[17]发现的一种新型I L ,是由2条多肽链E B I 3和p28通过二硫键组成的异二聚体㊂I L -27主要由活化的单核细胞㊁单核细胞来源的树突状细胞㊁淋巴细胞等产生,在机体内发挥着促进和抑制炎症的双重作用㊂国内有动物实验证实I L -27在博来霉素诱导肺纤维化形成中起保护作用㊂董昭兴等[18]研究发现,在博来霉素诱导的肺纤维化小鼠肺组织中I L -27㊁I L -27R 的m R N A 表达量均较正常组升高,然后给予外源性的I L -27和I L -27R 进行干预,分别于造模后第7㊁28天处死小鼠,肺组织病理学检查结果显示给予了外源性I L -27小鼠的肺纤维化程度最轻,其次是没有给予任何干预的肺纤维化小鼠,程度最重的是给予了I L -27R 的小鼠,从而证实I L -27对肺纤维化的形成可能有抑制作用,而且在注射I L -27R 后发现小鼠的死亡率明显增加,进一步证实I L -27在博来霉素诱导肺纤维化形成中起保护作用㊂另外有相关临床研究证实C T D -I L D 患者的血清I L -27水平呈一个高表达状态㊂Y o s h i z a k i 等[19]通过检测系统性硬化症患者血清I L -27水平及分离单核细胞产生I L -27的情况,实时定量P C R 检测皮肤成纤维细胞㊁B 细胞和T 细胞中I L -27受体的表达,并分析了I L -27对B 细胞产生I gG ㊁C D 4T 细胞产生I L -17㊁成纤维细胞增殖及胶原合成的影响,发现系统性硬化症患者血清I L -27水平较健康对照组升高,并与皮肤和肺纤维化程度及免疫异常程度呈正相关㊂S h e n 等[20]研究发现皮肌炎/肌炎患者的I L -27水平明显高于正常对照组,且高肌酸激酶和合并间质性肺疾病患者的I L -27水平升高程度更明显㊂本研究中C T D -I L D 组的血清I L -27水平较C T D 组及正常对照组升高,与上述研究结果一致;但C T D 组的I L -27水平并没有明显高于对照正常组,这可能与样本量较少有关,需要扩大样本量进一步研究证实㊂本研究将C T D -I L D 组和C T D 组患者的I L -27行R O C 曲线分析,结果显示其曲线下面积为0 659(95%C I :0 517~0 800),说明通过检测血清I L -27来诊断C T D -I L D 准确度较低㊂3 2 K L -6和C T D -I L D K L -6是日本学者K o h n o 等1985年研究肺腺癌时发现并命名的一种大相对分子质量糖蛋白抗原物质,类属于黏液素MU C 1家族,其相对分子质量接近200000[21,10]㊂K L -6主要由Ⅱ型肺泡上皮细胞㊁呼吸性支气管上皮细胞㊁支气管腺浆液细胞分泌,而在Ⅰ型肺泡上皮细胞㊁杯状细胞㊁支气管腺体细胞中无表达[10],故又叫肺泡Ⅱ型细胞表面抗原㊂当肺泡上皮受损时,Ⅱ型肺泡上皮细胞增生,分泌大量的K L -6,并通过损伤的肺间质基底膜渗漏入血,导致血中K L -6浓度升高,故增高的血清K L -6水平可作为肺损伤的敏感性指标[22]㊂有研究[23]指出,K L -6是一种肺成纤维细胞潜在的促增殖和抗凋亡物质,影响作用类似于转化生长因子β㊁成纤维细胞生长因子及血小板源性生长因子,可能是纤维化增殖的启动因子㊂朱晨等[24]的研究显示特发性肺纤维化组血清K L -6高于结节病Ⅰ期组和过敏性肺泡炎组,但与C T D -I L D 组无明显差别㊂另外不少研究[25-26]已表明㊃419㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第12期 I n t JR e s pi r ,J u n e 2020,V o l .40,N o .12Copyright ©博看网. All Rights Reserved.K L-6可作为评估类风湿性关节炎㊁干燥综合征㊁系统性硬化病㊁多发性肌炎/皮肌炎等多种结缔组织病肺部受累严重程度的指标,且其水平与系统性硬化病患者弥散功能㊁用力呼气容积呈负相关㊂本研究发现C T D-I L D组的血清K L-6水平明显高于C T D组及正常对照组,与刘玉梦等[27]㊁冯聪行和许爱国[28]的研究结果一致㊂将C T D-I L D组和C T D组患者的K L-6行R O C曲线分析,结果显示其曲线下面积为0664(95%C I:0525~ 0803),说明通过检测血清K L-6来诊断C T D-I L D 准确度较低㊂二者联合时虽然敏感度降低(3462%),但特异度明显升高(9091%)㊂C T D隶属于风湿性疾病,是一组疾病的总称,这些疾病包括类风湿性关节炎㊁干燥综合征㊁系统性硬化病㊁皮肌炎㊁血管炎等,上述疾病好发于30~60岁人群[29]㊂此次入选的C T D-I L D组㊁C T D组患者多为中老年人,但于昆明医科大学第二附属医院体检中心体检的多为青中年人群,故本研究中C T D-I L D组㊁C T D组患者的平均年龄较正常对照组大㊂本次研究纳入的病例数较少,未能保证组间的性别构成及有吸烟史患者比例无差异,且因经费限制,未能实时检测血清I L-27㊁K L-6水平,可能影响试验结果㊂故本试验结果需要进一步验证㊂C T D是否继发I L D,影像学和临床特征是最直观的,也是 金标准 ,但很多C T D-I L D患者合并呼吸衰竭,无法很好配合甚至不能完成C T 检查,而临床特征又受临床医师主观因素影响,但I L-27㊁K L-6等血清生物标志物标本易获取㊁可多次重复检验,当然它们可能受到其他疾病或因素干扰,临床应用中还需结合患者情况㊂综上所述,本研究发现I L-27㊁K L-6在C T D-I L D患者血清中的表达水平显著高于C T D患者及正常人,两者联合检测在诊断C T D-I L D上可能有一定价值㊂利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突参考文献1 W o o d h e a d F W e l l s A U D e s a i S R e t a l P u l m o n a r yc o m p l i c a t i o no fc o n n e c t i v et i s s u ed i se a s e J C l i n i c s C h e s tM e d2008291149-164D O I101016j c c m 2007110092 V i j R S t r e kM E D i a g n o s i s a n d t r e a t m e n t o f c o n n e c t i v e t i s s u ed i se a s e-a s s o c i a t e di n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e J C h e s t20131433814-824D O I101378c h e s t12-07413 B o n g a r t zT N a n n i n i C M e d i n a-V e l a s q u e zY F e t a l I n c i d e n c ea n d m o r t a l i t y o f i n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e i n r h e u m a t o i da r t h r i t i s a p o p u l a t i o n-b a s e d s t u d y J A r t h r i t i s R h e u m20106261583-1591D O I101002a r t274054张静梁宗安杨阳等结缔组织病相关性间质性肺病90例临床分析J西部医学2016287947-952D O I103969j i s s n1672-3511201607014Z h a n g J L i a n g Z A Y a n g Y e ta l C l i n i c a l c h a r a c t e r i s t i c so fc o n n e c t i v e t i s s u ed i se a s e-a s s o c i a t e di n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e90c a s e s a n a l y s i s J X iB u Y iX u e2016287947-952D O I103969j i s s n1672-35112016070145 H a l l o w e l lRW D a n o f f S K I n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s ea s s o c i a t e dw i t h t h e i d i o p a t h i c i n f l a mm a t o r y m y o p a t h i e s a n d t h ea n t i s y n t h e t a s es y n d r o m e r e c e n t a d v a n c e s J C u r r O p i nR h e u m a t o l2014266684-689D O I101097B O R 00000000000001046 C h u a F H i g t o n AM C o l e b a t c h A N e t a l I d i o p a t h i ci n f l a mm a t o r y m y o s i t i s-a s s o c i a t e d i n t e r s t i t i a ll u n g d i s e a s ee t h n i c i t y d if f e r e n c e sa n dl u ng f u n c t i o nt r e n d si n a B r i t i s hc o h o r t J R h e u m a t o l o g y O x f o r d201251101870-1876D O I101093r h e u m a t o l o g y k e s1677陈小波罗群李时悦以急性间质性肺炎为主要症状的多发性肌炎皮肌炎八例并文献复习J中国呼吸与危重监护杂志2016156589-592D O I1075071671-62052016134C h e nX B L u oQ L i S Y P o l y m y o s i t i sD e r m a t o m y o s i t i sw i t ha c u t e i n t e r s t i t i a l p n e u m o n i aa st h e p r e s e n t i n g s y m p t o m s ac l i n i c a la n a l y s i s o fe i g h tc a s e s a n dl i t e r a t u r er e v i e w JZ h o n g g u oH uX i Y uW e i Z h o n g J i a nH uZ a Z h i2016156589-592D O I1075071671-620520161348陈志磊张奉春结缔组织病相关间质性肺疾病必须重视的疾病J协和医学杂志201893193-196D O I103969j i s s n1674-9081201803001C h e n Z L Z h a n g F C C o n n e c t i v e t i s s u e d i s e a s e-a s s o c i a t e di n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e ad i s e a s e w o r t h y o f g r e a ta t t e n t i o nJ X i e H e Y iX u eZ aZ h i201893193-196D O I103969j i s s n1674-90812018030019 D o n g Z T a iW Y a n g Y e ta l T h er o l eo fa l l-t r a n sr e t i n o i ca c i d i nb l e o m yc i n-i nd u ce d p u l m o n a r yf i b r o s i s i nm i c e J E x pL u n g R e s201238282-89D O I10310901902148201164605210I s h i k a w aN H a t t o r iN Y o k o y a m aA e t a l U t i l i t y o fK L-6 MU C1i n t h e c l i n i c a lm a n a g e m e n t o f i n t e r s t i t i a l l u n g d i s e a s e sJ R e s p i rI n v e s t 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r o m e ad a t a-d r i v e n e x p e r tc o n s e n s u sa p p r o a c hi nt h e㊃519㊃国际呼吸杂志2020年6月第40卷第12期I n t JR e s p i r,J u n e2020,V o l.40,N o.12Copyright©博看网. All Rights Reserved.S jög r e n'si n t e r n a t i o n a lc o l l a b o r a t i v ec l i n i c a la l l i a n c ec o h o r tJ A r t h r i t i sC a r er e s H o b o k e n2012644475-487D O I101002a c r2159113 A l e t a h a D N e o g i T S i l m a n A J e t a l2010r h e u m a t o i da r t h r i t i s c l a s s i f i c a t i o n c r i t e r i a a n A m e r i c a n c o l l e g e o fR h e u m a t o l o g y E u r o p e a n l e a g u e a g a i n s t r h e u m a t i s mc o l l a b o r a t i v ei n i t i a t i v e J A r t h r i t i s R h e u m 20106292569-2581D O I101002a r t2758414J e n n e t t e J C F a l k R J B a c o n P A e t a l2012R e v i s e di n t e r n a t i o n a l c h a p e l h i l l c o n s e n s u s c o n f e r e n c e n o m e n c l a t u r e o fv a s c u l i t i d e s J A r t h r i t i sR h e u m 20136511-11D O I101002a r t3771515 M o s c aM T a n i C B o m b a r d i e r i S U n d i f f e r e n t i a t e dc o n n e c t i v et i s s u e d i s e a s e s U C T D a n e w f r o n t i e r f o r r h e u m a t o l o g y JB e s tP r a c t R e sC l i n R h e u m a t o l20072161011-1023D O I101016j b e r h20070900416v a n d e n H o o g e n F K h a n n a D F r a n s e n J e t a l2013c l a s s i f i c a t i o n c r i t e r i a f o r s y s t e m i c s c l e r o s i s a n A m e r i c a nc o l l e g e o f R h e u m a t o l o g y E u r o p e a n l e a g u e a g a i n s tr h e u m a t i s m c o l l a b o r a t i v ei n i t i a t i v e J A n n R h e u m D i s201372111747-1755D O I101136a n n r h e u m d i s-2013-20442417 P f l a n zS T i m a n sJ C C h e u n g J e ta l I L-27a h e t e r o d i m e r i cc y t o k i n e c o m p o s ed o f E B13a n d p28p r o te i n i n d u c e sp r o l i f e r a t i o no fn a i v eC D4+Tc e l l s J I mm u n i t y2002166779-790D O I101016s1074-76130200324-218董昭兴雷雯李昌波等I L-27在博来霉素诱导肺纤维化模型中的保护作用J昆明医科大学学报201536121-4D O I103969j i s s n1003-4706201512001D o n g Z X L e i W L iC B e t a l T h er o l e o fI L-27i nt h eb l e o m yc i n-i nd u ce d p u l m o 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n ga d e n o c a r c i n o m a J J p nJC l i nO n c o l1988183203-216 22S a t o H C a l l i s t e r M E M u mb y S e t a l K L-6l e v e l s a r ee l e v a t e di n p l a s m af r o m p a t i e n t s w i t h a c u t e r e s p i r a t o r yd i s t re s s s y n d r o m e J E u rR e s p i rJ2004231142-145D O I10118309031936030007030323朱晨赵亚滨孔灵菲等涎液化糖链蛋白6在特发性肺纤维化患者支气管肺泡灌洗液和血清中的表达及临床意义J中国呼吸与危重监护杂志2015143225-228D O I1075071671-62052015058Z h uC Z h a oY B K o n g L F e t a l E x p r e s s i o na n ds i g n i f i c a n c e o f K L-6i n B A L F a n d s e r u m o f p a t i e n t s w i t hi d i o p a t h i c p u l m o n a r y f i b r o s i s J Z h o n g g u o H uX iY u W e iZ h o n g J i a nH uZ aZ h i2015143225-228D O I1075071671-6205201505824朱晨赵亚滨孔灵菲等涎液化糖链抗原-6在不同类型的弥漫性间质性肺疾病患者血清和支气管肺泡灌洗液中的表达及临床意义J中华结核和呼吸杂志201639293-97D O I103760c m a j i s s n1001-0939201602004Z h uC Z h a oY B K o n g L F e t a l T h ee x p r e s s i o na n dc l i n i c a l r o l e o fK L-6i ns e r u m a n dB A L Fo f p a t i e 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白介素-27作用于树突状细胞CD
白介素-27作用于树突状细胞CD
白介素-27（IL-27）是一种介于细胞因子和细胞表面受体之间
的蛋白质。
它由IL-27A和IL-27B两种亚单位组成，主要由树突状
细胞、巨噬细胞和B细胞产生。
IL-27对树突状细胞有多种作用。
首先，IL-27能够促进树突状
细胞的成熟和功能的升级，增强其对外周T细胞的活化作用。
这是
因为IL-27能够增加树突状细胞表面的共刺激分子CD80、CD86和CD40的表达，同时也能够提高其分泌的醛固酮类似物，从而增强了树突状细胞的活化作用。
其次，IL-27还能够促进树突状细胞所促进的TH1型细胞反应，从而增强细胞介导免疫反应。
这是因为IL-27能够抑制TH2型细胞
的发展和TH17型细胞因子的产生，从而有利于TH1型细胞反应的
升级和维持。
此外，IL-27对CD8+T细胞也有促进作用。
研究表明，IL-27
能够促进CD8+T细胞在体外增殖和活化，增强其抗病毒反应。
这一作用可能与IL-27增强树突状细胞的功能有关。
总之，IL-27对于树突状细胞的活化和功能的提升具有重要作用，这有助于增强细胞介导免疫反应和抗病毒反应。
IL-27及其在类风湿关节炎中的研究进展
IL-27及其在类风湿关节炎中的研究进展史慧1刘秀梅2▲薛西鹏3【摘要】[摘要]类风湿关节炎（RA）是一种以滑膜过度增生、血管翳形成，最终导致软骨、骨及关节结构破坏为主要表现的系统性自身免疫病。
各种细胞因子、免疫细胞及成纤维样滑膜细胞（FLS）在其炎性发展及关节破坏过程中起着重要角色。
研究表明白细胞介素-27（IL-27）可以调节上述免疫细胞的增殖、分化，提示它可能通过不同的作用机制参与类风湿关节炎的发生、发展及转归。
本文就IL-27及其在类风湿关节炎中的研究进展作一综述。
【期刊名称】中国医药科学【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4【关键词】[关键词]白介素27；类风湿关节炎；细胞因子；免疫细胞类风湿关节炎是一种系统性自身免疫病，以对称性多关节的慢性侵蚀性滑膜炎、软骨及骨破坏为主要表现[1]。
研究发现除免疫因素外，细胞因子过度表达在其发病过程中也起着非常重要的作用，它可以加重RA患者的关节炎症，进而造成骨、软骨的破坏。
IL-27是一种新发现的抗/亲炎因子，对各种免疫反应均具有重要的调节作用，可诱导Th1分化以及调节性T细胞活性，同时抑制Th17、Th2的分化，在保持机体免疫稳态及免疫病的发病中发挥着重要作用。
各种T 细胞、巨噬细胞及滑膜细胞在RA的炎性骨破坏过程中至关重要，而IL-27可以通过相关信号转导途径调节上诉细胞的分化、增殖、活化[2]，提示它可能通过不同的作用机制参与类风湿关节炎的发生、发展及转归。
1 IL-27及受体（IL-27R）1.1 IL-27IL-27 是Pflanz发现的隶属IL-12家族[3]，由p28和EBI3（EB病毒诱导基因3）两个亚基组成的异源二聚体。
IL-27与IL-12家族的其他成员具有相似的结构组成[4]。
EBI3是在EB 病毒转染的B淋巴细胞中首次被发现，其与IL-12p40具有结构同源性，是一种可溶性细胞因子受体。
p28与IL-12p35及IL-6同源性较高，因其基因产物电泳结果显示分子量为28000，故名为p28[3]。
28个免疫细胞基因集
28个免疫细胞基因集免疫细胞是人体内重要的防御机制之一，其功能主要通过一系列特定的基因来实现。
本文将介绍28个与免疫细胞功能密切相关的基因集。
1. CD4基因：CD4基因编码CD4蛋白，是T细胞表面上的一种受体。
CD4蛋白能够与MHC-II分子结合，从而调节T细胞的活化和免疫应答。
2. CD8基因：CD8基因编码CD8蛋白，也是T细胞表面的一种受体。
CD8蛋白能够与MHC-I分子结合，参与调节细胞免疫应答。
3. CD28基因：CD28基因编码CD28蛋白，是T细胞活化所必需的共刺激分子。
CD28与抗原递呈细胞表面的B7分子结合，促进T 细胞的活化和增殖。
4. CTLA4基因：CTLA4基因编码CTLA4蛋白，是CD28的负调节分子。
CTLA4与B7分子结合后抑制T细胞的活化，起到调节免疫应答的作用。
5. IL2基因：IL2基因编码白细胞介素2（IL-2），是T细胞活化和增殖所必需的细胞因子。
IL-2能够促进T细胞的增殖和分化，增强免疫应答。
6. IFNG基因：IFNG基因编码干扰素γ（IFN-γ），是一种重要的细胞因子。
IFN-γ能够激活巨噬细胞和NK细胞，增强细胞免疫应答。
7. IL4基因：IL4基因编码白细胞介素4（IL-4），是一种重要的细胞因子。
IL-4能够促进B细胞的增殖和分化，参与体液免疫应答。
8. IL6基因：IL6基因编码白细胞介素6（IL-6），是一种重要的细胞因子。
IL-6能够促进B细胞的增殖和分化，参与体液免疫应答。
9. IL10基因：IL10基因编码白细胞介素10（IL-10），是一种重要的免疫调节细胞因子。
IL-10能够抑制炎症反应，调节免疫应答。
10. TNF基因：TNF基因编码肿瘤坏死因子（TNF），是一种重要的炎症介质。
TNF能够激活巨噬细胞和其他炎症细胞，参与免疫炎症反应。
11. IL12基因：IL12基因编码白细胞介素12（IL-12），是一种重要的细胞因子。
白细胞介素27的研究现状与进展
３ Ｉ ２ Ｌ炎 症 和拮抗 炎 症 的双 重性 质 。
Ｉ ２ Ｌ一 ７可通过多 种机 制启 动早 期 Ｔ ｌ 应 ， 导 Ｔ ｌ ｈ反 诱 ｈ 的分化 ， 同时抑制 其它类 型 Ｔ ｈ细胞 （ ｈ Ｔ ２和 Ｔ １ ） ｈ７ 的 分化和诱导型调 节性 Ｔ细胞 （ ｒ 的发育 ， Ｔ Ｔ） 在 ｈ细胞 分化 中起重要作用 。虽 然 Ｉ ２ Ｌ一 ７能 诱导 Ｔ ｌ ｈ 细胞 分
４ Ｉ ２ Ｌ一 ７与 疾病 的关 系
４１ Ｉ ２ ． Ｌ～ ７与感染性疾病
Ｉ ２ Ｌ一 ７在细胞 内病原 体
感染 （ 寄 生 虫 ， 菌 感 染 ） 期 能 有 效 诱 导 初 始 如 细 初 Ｃ ４ Ｔｌ Ｄ ｈ 细胞增殖 ， 使活化 的 Ｃ ４ Ｔ ｌ Ｄ ｈ 细胞 产生高水
１Ｔ Ｃ （Ｔ细胞细 胞因子受体 ） ｇｌ０组成 ， 于 Ｉ ／Ｃ Ｒ 和 ｐ３ 属 型细胞 因子 受体 家族 成员 ， ６ ６个 氨 基酸 组成 ， 由 ３ 主 要分 布于 Ｔ细胞和 自然杀伤 （ Ｋ） Ｎ 细胞表 面 ， 此外 ， 还 表达 于单核细胞 、 肥大细胞 、 突状细胞 、 树 内皮细胞 及 朗格汉斯细胞等细胞 表面 ¨ 故 Ｉ ２ 。 ， Ｌ一 ７分 子可调 控 天然免疫和获得性 免疫 的效应 细胞 。ＷＳ Ｘ一１Ｔ Ｃ ／Ｃ Ｒ 分布较广泛 ， 主要分布在外周淋 巴细胞 、 胸腺 、 和淋 脾
因此有学者在主要由thl7介导的疾病模型自身免疫性葡萄膜视网膜炎引变应性脑脊髓膜炎1等中应用il一27能明显减轻实验小鼠的临床症状因此他们认为il一27是强有力的抑制自身免疫反应的细胞因子il一27分子有可能成为治疗aid如类风湿关节炎系统性红斑狼疮胰岛素依赖型糖尿病自身免疫性葡萄膜视网膜炎自身免疫性甲状腺炎等疾病的新43il一27与肿瘤早期动物实验如神经母细胞瘤结肠癌颅内神经胶质瘤小鼠模型研究显示il一27能通过活化cd8t细胞而发挥抗肿瘤和抑制肿瘤转移的作用
IL-27在肺纤维化进程中的作用及机制研究
［
２
］
ＩＬ－２７与成纤维细胞分化的关系 肺纤维化是弥漫性肺问质疾病的共同结局，成纤维细
［
３
胞分化成为胞质含大量平滑肌肌动蛋白的ＭＦＢ，是肺纤维 化的病理特征。ＴＧＦ—Ｂ是迄今为止发现的最强的细胞外基 质沉淀促进剂，参与调控细胞的增殖与分化、细胞外基质的 分泌，是公认的对纤维化有重要促进作用的纤维化因子，在 ＭＦＢ的分化过程中起促进作用。１“。高浓度的ＴＧＦ—Ｂ在创 伤的皮肤中可以促进愈合及纤维化的形成。１…。姚鲁肃 等…１的研究发现，ＩＬ一１０在体外抑制ＴＧＦ—Ｂ诱导肺成纤维细 胞向ＭＦＢ转化，降低细胞增殖水平及胶原产生量，从而抑制 肺纤维化的形成。研究证实，ＩＬ—ｌｏ在体内也能抑制ＴＧＦ—Ｂ 诱导肺成纤维细胞向ＭＦＢ转化，减轻肺纤维化。１…。刘金苹 等¨２。阐明ＩＬ一２７可以促进Ｔｈｌ细胞分泌ＩＬ—ｌｏ。故可以推 测，ＩＬ－２７通过分泌ＩＬ—１０抑制ＴＧＦ—Ｂ对成纤维细胞向ＭＦＢ 分化的作用，从而抑制肺纤维的形成。但是也有研究表明， 重组人结缔组织生长因子可通过ＪＡＫ／ＳＴＡＴ信号通路诱导 人胚肺成纤维细胞转化为ＭＦＢ”…。ＩＬ一２７也可以激活ＪＡＫ／ ＳＴＡＴ信号产生生物学效应。目前，ＩＬ－２７对成纤维细胞的分 化的影响及机制不是很明确。
Ａｂｓｔｒａｃｔ：‘ｆｈｅ ｐｕｌｍｏｎａＤ－ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｉｓ
ｃａｎ
ｔｉｍｅ ａｎｄ
ａｎｄ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏＵ ｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｂｙ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ ｃｅｌｌ．ＩＬ一２７ ｈａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉ—ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ， ｎｅｏｐｌａｓｍ ａｎｄ ａｕｔｏｉｎｌｎｌｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｖｅｄ ｂｙ ｒｅｌｅｖａｎｔ ａｒｔｉｃｌｅｓ．‘Ｆｈｅｒｅ ｉｓ ｌｉｔｔｌｅ ｒｅｐｏｒｔ ａｂｏｕｔ ｔｈｅ ｒｕｎｅ—
骨肉瘤患者血清中IL_27_IL_10的表达及意义_卢贤哲
骨肉瘤患者血清中IL-27、IL-10的表达及意义基金项目：国家自然科学基金资助项目（81260315）；广西自然科学基金项目（2012GXNSFAA053169）；2016年百色市科技攻关项目（百科计20160610）作者简介：卢贤哲，男，硕士研究生，研究方向：脊柱与骨关节疾病。
E-mail 卢贤哲，廖品琥，谢克恭，陆敏安，陆潞，黄可，王俊利，韦叶生，唐毓金▲（右江民族医学院附属医院，百色533000）【摘要】目的探讨骨肉瘤患者血清中白细胞介素27（IL-27）、白细胞介素10（IL-10）的表达意义。
方法选取2005 2013年间收治的160例肢体骨肉瘤患者作为骨肉瘤组，健康体检人群250人作为健康对照组。
采集两组研究对象的外周血，用酶联免疫吸附试验法（ELISA ）检测血清中IL-27、IL-10的表达水平，分析其与骨肉瘤发病及进展关系。
结果骨肉瘤组的IL-27、IL-10水平均低于健康对照组，差异有统计学意义（P ＜0．01）。
在骨肉瘤患者中，IL-27与肿瘤的临床分期和是否有转移明显相关，处于肿瘤发病Ⅲ Ⅳ期的患者其血清IL-27水平低于Ⅰ Ⅱ期患者（P ＜0.01），合并远处转移的患者血清IL-27水平低于无远处转移的患者（P ＜0．01）。
但IL-10与骨肉瘤的相关临床特征均无相关性，且血清IL-27水平与IL-10水平也无明显线性相关（r =0．076，P =0．594）。
结论IL-27、IL-10参与了骨肉瘤的免疫调节，IL-27的低表达可能与骨肉瘤的进展相关。
【关键词】骨肉瘤；IL-27；IL-10中图分类号：Ｒ738．1文献标识码：ADOI ：10．3969/j．issn．1003-1383．2016．03．002Expressive significance of IL-27and IL-10in serum of patients with osteosarcomaLU Xianzhe ，LIAO Pinhu ，XIE Kegong ，LU Min ’an ，LU Lu ，HUANG Ke ，WANG Junli ，WEI Yesheng ，TANG Yujin ▲（Affiliated Hospital of Youjiang Medical University for Nationalities ，Baise 533000，China ）【Abstract 】Objective To investigate the significance of expression of IL-27and IL-10in serum of patients with osteosar-coma．Methods160cases of patients with osteosarcoma admitted to hospital from 2005to 2013were selected as osteosarco-ma group ，and 250healthy people who received physical examination as control group．Peripheral blood was collected from the 2groups ，and expression levels of IL-10and IL-27in serum were tested by ELISA and then its relationship with the morbidity and development situation of osteosarcoma was analyzed．ＲesultsThe levels of serum IL-10and IL-27in the case group werelower on average than those of the control group ，so difference was statistically significant （P ＜0．01）．The level of IL-27in os-teosarcoma patients was significantly correlated with tumor stages and metastasis．IL-27level in serum of patients in tumor sta-ges Ⅲ Ⅳwere lower than those in stages Ⅰ Ⅱ（P ＜0．01）．The similar results were also found in patients with metastasis ，patients with merger of distant metastasis had lower IL-27levels than those without distant metastasis （P ＜0．01）．But there was no correlation between IL-10and the clinical features of osteosarcoma ，and no significant linear correlation were found be-tween IL-27and IL-10levels （r =0．076，P =0．594）．ConclusionIL-27and IL-10involve in the immune regulation of osteo-sarcoma．The low expression of IL-27may be related to the progression of osteosarcoma．【Key words 】osteosarcoma ；IL-27；IL-10骨肉瘤（osteosarcoma ）是青壮年原发性骨肿瘤中发病率最高的一类恶性肿瘤，多发于股骨、胫骨和肱骨等四肢骨［1，2］。
白细胞介素27与多种疾病关系的研究进展
３．１．３ Ｂ
ＩＬ－２７与病毒感染
乙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓ
［６】
Ｓａｂｏｋ＇ｂａｒ Ａ。Ｋｕｄｏ Ｏ，ＡｔｈＩｊＪｌｓｓｏｕ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｔｈｅｔｉｃ
ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅ，，《ｓｉｏｎ ｏｆ Ｈｓｐ９０ ｉｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔ．１ｉｋｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ【Ｊ１．Ｂｏｎｅ，２００６，３９（４）：７３９．７５３．
ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ ｉｎ ｐｅｆｉｐｎⅪ－
［１５］
２０：７９５－８２３． Ｒｏｍａｎｅｌｌｏ Ｍ，Ｂｉｖｉ Ｎ．Ｐｉｎｅｓ Ａ．以ａ／．Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ
ｃｌｅｏｔｉｄｅ
ｎｕ．
ｍｅｒｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．Ｊ
ｏｆ ｏｓｔｅｏｅｌａｓｔ
Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００ｌ，８３（１）：７０．８３．
ＮＡ．ｅｔ
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［５］
Ｚｏｕ
Ｗ，ＨａｋｉｍＩ．‰ｈｏｅｐ Ｋ．ｅｔ ａ／．Ｔｕｍｏｔ
ｌｉｇａｎｄ
ｌｏｓｓ．ａｎｄ
ｍａｍｍａｌｉａｎ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ Ｊ．Ａｎｎ
ｌｍｍｕｎｏｌ，２００２．
ａｃｔｉｖａｔｅ
ｄｉａｔｅｓ ＲＡＮＫ ａｕｔｏｃｒｉｎｅ
ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ
Ｃｅｌｌ
ｏｆ
ｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ．ａｌｐｈａｌＩｌｅ－ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔ ｄｉｆｉｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｙ ａｎ ａ１．Ｔｗｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ
基金项目：福建Ｊ．ｒｌ市科技局资助项目［２００８】４１号
ＩＬ－２７的生物学性质
ＩＬ－２７能作用于固有免疫系统和适应性免疫系 统的各种细胞而发挥广泛的免疫调节，尤其在调节
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人白细胞介素27 (IL-27)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆，组织及相关液体样本中白细胞介素27 (IL-27)的含量。
实验原理：本试剂盒应用夹心法测定标本中白细胞介素27 (IL-27)水平。
用纯化的人白细胞介素27 (IL-27)抗体包被微孔板，往微孔中依次加入白细胞介素27 (IL-27)，再与HRP标记的白细胞介素27 (IL-27)抗体结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素27 (IL-27)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中白细胞介素27 (IL-27)浓度。
试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
用液氮迅速冷冻保存备用。
标本融化后仍然保持2-8℃的温度。
加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为60ng/L，40ng/L ，20ng/L，10ng/L，5ng/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：Array以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：1.6ng/L -75ng/L保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月FOR RESEARCH USE ONLYDrug NamesGeneric Name：Human Interleukin 27 (IL-27) ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of IL-27concentrations in Human serum, blood plasma, Tissue and other biological fluids.Principle of the assayT he kit assay Human IL-27 level in the sample，use Purified Human IL-27 antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add IL-27 to wells, Combined IL-27antibody which With HRP labeled，become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of IL-27 in the samples is then determined by comparing the O.D. of the samplesto the standard curve.Materials provided with the kitSpecimen requirements1.serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2.plasma-use suited EDT A or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3.Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4.cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.5.Tissue samples- After cutting samples, check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）, Rapidlyfrozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m.remove supernatant.6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevantliterature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles.7.Can’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure1.Dilute and add sample to Standard: set 10 Standard wells on the ELISA plates coated, add Standard 100μl to the first and the second well, then add Standard dilution50μl to the first and the second well, mix; take out 100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately. then add Standard dilution 50μl to the third and the forth well ,mix ; then take out 50μl from the third and the forth well discard, add 50μl to the fifth and the sixth well ,then add Standard dilution 50μl to the fifth and the sixth well, mix ; take out 50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well, then add Standard dilution 50μl to the seventh and the eighth well ,mix ; take out 50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well, add Standard dilution 50μl to the ninth and the tenth well, mix , take out 50μl fro m the ninth and the tenth well discard(add Sample 50μl to each well after Diluting ,(density: 60ng/L, 40ng/L , 20ng/L,10ng/L, 5ng/L)2.add sample：Set blank wells separately (blank co mparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent, other each step operation is same). testing sample well. add Sample dilution 50μl to testing sample well, then add testing sample 10μl (sample final dilution is 5-fold), add sample to wells , don’t touch the well wall as far as possible, and Gently mix.3.Incubate: After closing plate with Closure plate membrane ,incubate for 30 min at 37℃.4.Configurate liquid: 30-fold (or 20-fold)wash solution diluted 30-fold (or 20-fold) with distilled water and reserve.5.washing：Uncover Closure plate membrane, discard Liquid, dry by swing, add washing buffer to every well, still for 30s then drain, repeat 5 times, dry by pat.6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent 50μl to each well, except blank well.7.incubate：Operation with 3.8.washing：Operation with 5.9.color：Add Chromogen Solution A 50ul and Chromogen Solution B to each well, evade the light preservation for 15 min at 37℃10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well, Stop the reaction(the blue color change to yellow color).11.assay：take blank well as zero , Read absorbance at 450nm after Adding Stop Solution and within 15min.Important notes1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced 15-30 minutes inthe room temperature, ELISA plates coated if has not use up after opened, the plate should be stored in Sealed bag.2.washing buffer will Crystallization separation, it can be heated the water helps dissolvewhen dilute . Washing does not affect the result.3.add Sample with sampler Each step, And proofread its accuracy frequently, avoids theexperimental error. add sample within 5 mins, if the number of sample is much , recommend to use Volley .4.if the testing material content is excessively higher (The sample OD is bigger than the firststandard well ),please dilute Sample (n-fold), Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.5.Closure plate membrane only limits the disposable use, to avoid cross-contamination.6.The substrate evade the light preservation.7.Please according to use instruction strictly, The test result determination must take themicrotiter plate reader as a standard.8.All samples, washing buffer and each kind of reject should according to infective materialprocess.9.Do not mix reagents with those from other lots.CalculateAssay range1.6ng/L -75ng/LStorage and validity1．Storage ： 2-8℃. 2．validity ： six months.T ake the standard density as the horizontal, the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper, Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve, multiplied by the dilution multiple, or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation, calculate the sample density, multiplied by the dilution factor, the result is the sample actual density.This chartis for reference only。