(整理)苄嘧磺隆对野慈姑的生测检验
DB21T 1544-2007 土壤中苄嘧磺隆残留量的测定(高效液相色谱法).pdf
3 原理
试样经二氯甲烷和丙酮混合溶剂提取后，经液－液萃取、C18固相萃取柱净化，用高效液相色谱反 相分离，紫外检测器检测，外标法定量。
4 试剂和材料
所有的试剂如未注明规格，均为分析纯；实验用水，如未注明，均应符合GB/T 6682 中一级用水 的要求。 4.1 正己烷。 4.2 乙腈。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 乙酸。 4.5 二氯甲烷＋丙酮混合溶剂（v+v,7＋3）。 4.6 氨水溶液：0.15mol/L。 4.7 苄嘧磺隆标准物质：纯度≥99％。 4.8 标准溶液 4.8.1 苄嘧磺隆标准贮备液，浓度为 100μg/mL。准确称取苄嘧磺隆 0.0100g，置于 100.0mL 容量瓶 中，加乙腈（4.3）溶解并定容至刻度。贮存于 0～5℃的冰箱中。 4.8.2 苄嘧磺隆标准中间溶液：浓度为 10μg/mL。准确移取 1.0mL 苄嘧磺隆标准贮备溶液（4.8.1） 于 10.0mL 容量瓶中，用乙腈（4.3）定容。贮存于 0～5℃的冰箱中。 4.8.3 苄嘧磺隆标准曲线工作液：分别准确移取 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL 苄嘧磺隆标准中间溶液 （4.8.2）于 5 个 10.0mL 容量瓶中，用乙腈（4.3）定容，混和均匀。临用前配制。此标准系列的苄嘧 磺隆浓度分别为 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0μg/mL。 4.9 C18 固相萃取柱(MT 型，250MG)：使用前依次用 25mL 乙腈（4.2），25mL 氨水（4.6）淋洗，备用。 4.10 滤膜：0.45μm。
色谱柱：C18,5μm,3.9×150mm或相当者。 流动相：乙腈+0.5％的醋酸水溶液（v+v,50＋50）。 流速：0.9mL/min。 柱温：30℃。 检测波长：234nm。 进样量：10μL。 6.2.5 液相色谱测定 取苄嘧磺隆标准工作溶液系列（4.8.3）及样品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行分析，用 外标法定量。
野慈姑对吡嘧磺隆抗性的分子机理
野慈姑对吡嘧磺隆抗性的分子机理作者：刘延 刘华招 高增贵来源：《杂草科学》2015年第03期摘要：野慈姑是我国稻田危害最严重的杂草之一。
以黑龙江稻田采集的野慈姑（Sagittaria trifolia Linn.）为研究对象，通过室内生物测定和分子克隆技术，对野慈姑的吡嘧磺隆抗性水平进行检测，并从靶标位点突变的角度解释抗性产生原因。
结果表明，采自哈尔滨稻田的2个野慈姑种群N03及N06均为高抗种群，抗性达到4倍剂量以上。
经比对2个抗性种群的靶标酶ALS基因发现，Pro197的脯氨酸分别被亮氨酸、丝氨酸取代，该位点的突变可能是野慈姑种群对磺酰脲类除草剂产生抗药性的主要原因。
关键词：野慈姑；除草剂抗性；ALS基因；吡嘧磺隆中图分类号：S451.21文献标志码：A文章编号：1003-935X（2015）03-0020-04水稻是黑龙江省的主要粮食作物。
2014年黑龙江省水稻种植面积突破340万hm2，除北部高寒地区外，全省80个市（县）中72个市（县）种植水稻[1]。
杂草是影响水稻产量的主要因素之一[2]，随着除草剂的大量使用，稻田杂草的种群变化和群落演替加速，原来处于次要防治地位的莎草科及泽泻科杂草成为主要杂草。
野慈姑（Sagittaria trifolia L.）别称狭叶慈姑、长瓣慈姑，俗称驴耳菜，为泽泻科多年沼生草本植物。
野慈姑喜温暖湿润环境，生长适宜温度为20～25 ℃，既能种子繁殖也可宿生根繁殖[3-4]。
通过田间调查和与农民交流获知，野慈姑近年来发生日益严重，己成为黑龙江省寒地稻区主要恶性杂草。
磺酰脲类除草剂苄嘧磺隆和吡嘧磺隆，自20世纪80年代末在我国登记以来，由于其具有活性高、用量低、杀草谱广、对作物安全及毒性低等特点，一直是水田防除阔叶杂草的主推品种[5]。
我国东北地区水稻田使用磺酰脲类除草剂已有20多年历史[6]。
长期单一品种的除草剂施用极易诱导杂草产生抗药性，造成野慈姑对磺酰脲类除草剂敏感性降低。
苄嘧磺隆对稻田土壤微生物及酶活性的影响
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井 冈山大学 学报 （ 自然 科 学版 ）
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69%苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂防除水稻抛秧田杂草药效试验
６９％苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂防除水稻抛秧田杂草药效试验摘要69%苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂防除水稻抛秧田杂草药效试验结果表明,用69%苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂600 g/hm2防除水稻抛秧田杂草效果好,在稻田杂草种类较多,特别是稗草密度较大的情况下,用600g/hm2就能达到理想的防除效果,可在水稻抛秧田上应用。
关键词69%苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂;水稻抛秧田杂草;防效2008年4~7月,益阳市会龙山农技站进行了吉林省瑞野农药有限公司生产的69%苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂防除水稻抛秧田杂草田间药效试验。
现将试验结果报告如下。
1材料与方法1.1试验材料供试水稻品种为湘早籼45号。
供试药剂为69%苯噻酰草胺·苄嘧磺隆水分散粒剂(吉林省瑞野农药有限公司生产);50%苯噻酰草胺可湿性粉剂(无锡瑞泽农药有限公司生产);30%苄嘧磺隆可湿性粉剂(江苏金凤凰农化有限公司生产);60%苯噻·苄可湿性粉剂(浙江乐清市农药厂生产)。
1.2 试验对象稗草(Echinochloa crusgalli(i.)Beauv);鸭舌草(Monochoria vag-inalis Presl);矮慈菇(Sagittaria difformis L.);节节菜(Rotala idica(Willd.)Koehne);丁香蓼(Ludwigia prostrate Roxb.);陌上菜(Lind-ernia procubens(Korck)Philcox);异型莎草(Cyperus difformis L.);牛毛草(Eleocharis yokoscensis(Franch.et Sav.)Tang et Wang)。
1.3栽培地条件试验地设在赫山区会龙山,面积1 280m2,稻田土质良好,为红黄泥轻黏壤。
耕作层土壤有机质含量为1.74%,pH值6.9。
苄嘧磺隆药效试验小结
苄嘧磺隆药效试验小结陈惠祥;沈俊明;黄敏;陈爱东【期刊名称】《杂草科学》【年(卷),期】1990(000)004【摘要】10％苄嘧磺隆是由江苏省如东农药厂近期开发的超高效水田除草剂。
为了解其对水田杂草的防除效果,江苏沿江地区农科所同如东农药厂合作,于1990年在南通市粮棉原种场进行了田间药效式验。
现将结果总结如下: 一、材料与方法(一)供试药剂 1.10％苄嘧磺隆可湿粉(如东农药厂产); 2.10％农得时可湿粉(美国杜邦公司产)。
(二)试验设计试验设10％苄嘧磺隆可湿粉6.7、13.3、20.0克/亩;10％农得时可湿粉13.3克/亩;不喷药(对照)共5个处理。
小区面积20米~2,随机区组排列,重复3次。
水稻移栽后的第【总页数】2页(P48-49)【作者】陈惠祥;沈俊明;黄敏;陈爱东【作者单位】江苏沿江地区农科所;江苏沿江地区农科所;如东农药厂【正文语种】中文【中图分类】S451【相关文献】1.6%苄嘧磺隆·丙草胺·噁草酮颗粒剂防除水稻机插秧田杂草药效试验 [J], 夏仁来;张跃;李兵2.10%苄嘧磺隆可湿性粉剂防治小麦田阔叶杂草药效试验 [J], 刘宗江;辛洪宇;吴怀刚3.30%苄嘧磺隆·丙草胺可湿性粉剂防除水稻直播田杂草药效试验 [J], 余建邦;李平;肖建桥;肖玉英4.40%苄嘧磺隆·丙草胺WP防除水直播稻田杂草田间药效试验 [J], 季文祥;戴琴;余为国5.苄嘧磺隆·炔草酸65％可湿性粉剂小麦田间药效试验 [J], 贾增坡;谢丁梅;闫兴亚;李玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
简析：苄嘧磺隆
苄嘧磺隆的化学名称是 N-(4 , 6-二甲氧基嘧啶-2-基)邻甲酸甲酯苄基磺酰脲，又叫农得时、稻无草、威农等，属于磺酰脲类广谱，高效，低毒的稻田除草剂。
是我国磺酰脲类除草剂使用量最大的品种。
1984年由美国杜邦公司开发成功，1986年在中国临时登记，产品为农得时10%可湿性粉剂，1991年在获得正式登记。
国产苄嘧磺隆登记在1990年首次登记。
苄嘧磺隆具有超高效活性, 在初登记时每666.7m2 用药量 1.3 ～ 2.5g 即可防除稻田中各种 1 年生和多年生阔叶杂草和莎草, 对稗草等亦有抑制作用。
01化学性质纯品为白色无臭固体，m.p.185～188℃，蒸气压1.733×10-3Pa (20℃)。
溶解度为：二氯甲烷11720mg/L，乙腈5380mg/L，二甲苯280mg/L，乙酸乙酯1660mg/L，丙酮1380mg/L,甲醇990mg/L, 己烷3.1mg/L，水1200mg/L。
分配系数为4.1。
在微碱性（pH=8）水溶液中稳定，在酸性溶液中缓慢分解。
pH值5时半衰期11d，pH值7时为143d。
原药略带浅黄色。
02毒性大鼠急性经口LD50为5000mg/kg，小鼠急性经口LD50>10985mg/kg。
家兔急性经皮LD50>2000mg/kg。
对眼无刺激。
大鼠慢性经口无作用剂量为750mg/kg。
动物试验未见致畸、致癌、致突变作用。
鲤鱼LC50>1000mg/L (48h)，野鸭急性经口LD50>2150mg/kg。
03作用机理苄嘧磺隆是选择性内吸传导型除草剂。
有效成分可在水中迅速扩散，被杂草根部和叶片吸收转移到杂草各部，阻碍氨基酸、赖氨酸、异亮氨酸的生物合成，阻止细胞的分裂和生长。
敏感杂草生长机能受阻，幼嫩组织过早发黄抑制叶部生长，阻碍根部生长而坏死。
有效成分进人水稻体内迅速代谢为无害的惰性化学物，对水稻安全。
使用方法灵活，可用毒土、毒沙、喷雾、泼浇等方法。
30%丙草胺·苄嘧磺隆WP防除直播水稻田杂草试验简报
为探 明 湖 南 天 人 农 药 有 限 公 司 生 产 的 ３ ％丙草 胺 ・ 嘧 ０ 苄 磺 隆 可湿 性 粉 剂对 直播 水 稻 田禾 本 科 杂 草 的 防 除 效果 、 效 持 期 、 宜 剂 量 及 安 全性 等 ， 该 药 剂 的 农 药 登 记 和 推 广 应 用 适 为
药 后 ｌｄ， ０ ３ ％丙 草 胺 ・ 嘧 磺 隆 ＷＰ每 ６ ７ 用 ６ ｇ、 ０ ５ 苄 ６ ｍ！ ０ ８ｇ、 ｌ０ ０ ｇ、１０ ６ｇ的 田间 杂 草 已基 本 死 亡 ，株 防 效分 别 为 ９ ．％、 ６３ ９ ．％、９ ．％、１０ｏ ８４ ９４ ０ ％，对 照 药 剂 ３％ 扫 弗特 Ｅ ０ Ｃ和 １％ 苄 ０
提供科学 依据 ， 特进行本试 验。
１ 材料 与方 法
嘧磺隆 ｗＰ的株防效分 别为 ９ ．％和 ５ ．％。药后 ４ ｄ， ０８ ３６ ５ 处
理 （ ） （ ） 株 防 效 分 别 为 ９ ．％、 ８ ５ ｌ０ ｌ０ １～ ４ 的 ６ １ ９ ．％、 ｏ％、 ０％，
１ １ 供试 药剂 试验药剂为 ３ ％丙草 胺 ・ ． ０ 苄嘧磺 隆 ｗＰ（ 湖
为 ９ ％， ４ 降水量 ３ ２ ｍ。药后 １ｄ ．ｒ ａ ０ 平均 温度为 ２ ． ℃， ２ ８ 平均 最高温度为２ ． ℃， 均最低 温度 为２ ． ℃， ５９ 平 ３ ０ 平均相对 湿度
为 ８ ．％，施 药 后 １ｄ降 雨 量 为 １ ６ ６ ｍ 。 ９０ ０ ６ ．ｒ ａ １ ５ 调 查 方 法 每 小 区定 ５ ，每 点 ０ １ｍ！ ． 点 ． ｌ ，药 后 ｌｄ、 ５
南天人农 药有 限公司 ） 对 照药剂为 ３ ％扫弗特 Ｅ 先正达 ， ０ Ｃ（
（ 州） 物保护 有限公司 ） ０ 苄嘧磺隆 ＷＰ（ 苏瑞禾化 苏 作 、１％ 江 学 有 限公 司 ） 。 １２ 试 验 处 理 ． 试 验 共 设 ７ 处 理 （ ６ ７ 用 量 ） 分 别 个 每 ６ ｍ ，
苄嘧磺隆标准
苄嘧磺隆是一种常见的除草剂，在农业生产中得到了广泛的应用。
为了确保其质量和安全性，制定标准的苄嘧磺隆标准是十分必要的。
首先，标准中应该明确规定苄嘧磺隆的化学成分和含量。
这是确保产品质量的基础，也是评价其除草效果和安全性能的重要指标。
具体的含量范围应根据大量的实验数据和实际应用效果来确定，以保证产品的稳定性和可靠性。
其次，标准中应该对苄嘧磺隆的剂型和制剂进行规定。
不同剂型的苄嘧磺隆具有不同的使用方法和效果，因此需要对其剂型和制剂进行明确的规定。
同时，为了确保产品的安全性和稳定性，应对其制剂中的其他成分进行限量或禁止，避免对环境和人体造成危害。
此外，标准中还应规定苄嘧磺隆的除草效果和残留量。
这是评价其性能和安全性能的重要指标。
在制定除草效果标准时，应考虑不同作物、不同使用方法下的除草效果，并采用科学的实验方法和数据分析来确定其效果。
对于残留量标准，应根据农作物的特点和使用方式，制定合理的残留限量，以保证食品的安全性。
最后，为了确保苄嘧磺隆标准的有效实施，应加强标准的宣传和培训工作。
这可以提高农民和企业的安全意识和质量意识，促进标准的推广和应用。
同时，应加强标准的监督和检查工作，对于不符合标准的产品和企业进行严肃处理，以维护市场的公平竞争和消费者的合法权益。
总之，制定标准的苄嘧磺隆标准是十分必要的，这可以确保产品的质量和安全性，提高农业生产效益和食品安全水平。
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苄嘧磺隆对野慈姑的生测检验一综述;1 野慈姑１．１形态特征野慈姑又叫驴耳菜，属泽泻科，为多年生杂草。
它主茎直立，株高４０～７０ｃｍ，根生叶，簇生，幼苗鞘叶条形弯曲，１～６叶呈条状，７～８叶呈舌状（披针叶），第９叶以上为狭窄剑型叶，两侧叶耳长，叶尖和耳部均为尖长，叶柄粗长有棱，茎部膨大成鞘状，第６片剑型叶茎部中间抽花茎，圆锥花序，花轮生，每轮３朵，白色，单性，雄花在上部，雌花在下部，地下有须根和球茎，球茎呈卵圆形，有鳞片，野慈姑一般产生２～３个花茎分枝，个别多的能达到４个花茎分枝，可结５～８轮花朵，其中３轮花朵（９朵）均已成熟野慈姑由球茎和种子越冬，翌年繁殖。
球茎一般在４月下旬至５月上旬发青5月中旬开始生根、出苗，6月中下旬开始开花，７月上旬为盛花期，8-9月成熟。
种子一般在５月底至６月上旬出苗日种子开始发叶，，一直延迟到６月底。
有少量种子可延迟到７月中旬出苗日仍有慈姑种子出苗）。
凡是７月５日出苗的野慈姑到９月２日都能长出舌状叶，并且都能在新根尖端处生长球茎，野慈姑结球期一般在８月中旬至９月上旬，野慈姑种子生长在舌状叶片以上的植株，均能结球，一般结球数量１～３个，多则５个以上，种子苗结球小、数量少，球茎生长的野慈姑结球大、数量多分布危害黑龙江水田大部分都有野慈姑分布。
调查野慈姑植株，茎部第１轮３朵花，每朵花产生的种子量５１０～６９６粒，花朵小种子量就少，花朵大种子量就多。
每轮３朵花可产生种子１５３０～２０８８粒，球茎野慈姑成株共轮生，７～８节位花朵，按有效产生３轮花节位９朵花，１株野慈姑产种子量大约在５０００～６０００粒，每个球茎野慈姑植株可分２株花茎，共计１８朵有效花，共产生种子量在１００００～１２５００粒。
水田野慈姑球茎分布大致如下：轻田块球茎分布每平方米５个以内，较重田块球茎分布１０个左右，严重田块球茎分布２０～６０个。
野慈姑生长迅速，枝叶繁茂，强烈抑制了水稻的生长，一般公顷减产７５０～１５００ｋｇ稻谷，严重减产可达５０％。
２．２杂草防效调调查杂草防效，对稗草、野慈姑防效达９０％以上的有处４、１０、１１、１２、１３，其中处理２、１０防效最高，均为９５．７％。
第２次杂草防效在7月５日调查，对稗草、野慈姑、雨久花防效达９５％以上的有处理２、３、１０、１１、１２、１３、１４，与杂草鲜重防效都达９９％以上处理基本一致。
２．３水稻产量分析处理１～１４的水稻产量分别为９５２９．５、９９７９．５、９８５５．０、９６７９．５、９４２９．０、７８３７．５、９３７９．５、８７７９．５、９２２９．５、９６５５．５、９７０５．０、９７０５．０、８９０４．０、８１０４．５ｋｇ，表明所有药剂处理产量均明显高于空白对照，其中处理２产量最高，其次为处理３，再次为处理１１、１２，处理２、３、１１、１２分别比常规药剂处理增产４．７％、３.４％ ,１．８％、１．８％。
二苄嘧磺隆 ( bensulfuron- methyl ) , 又称苄磺隆商品名为；农得时 ( Londax) ,化学名称: 中文为2- { [ ( 4,6 - 二甲氧基嘧啶- 2- 基)氨基羰基氨基 ] 磺酰基甲基 } 苯甲酸甲酯;分子式:。
分子量: 410.40 。
化学结构式:苄嘧磺隆是20 世纪80 年代中期美国杜邦公司（) 开发的一种新型磺酰脲类除草剂, 具有高效、广谱、低毒及低用量等优点, 是目前广泛用于稻田杂草防治的主要除草剂之一。
苄嘧磺隆在使用的同时, 其降解物是否对环境有不良影响已成为科学工作者日益关注的问题。
本文仅就当前国内外对苄嘧磺隆降解研究的现状和研究动向进行分析。
2.1 苄嘧磺隆的理化性质及其应用苄嘧磺隆原药有效成分含量大于96% ,为白色略带浅黄色无臭固体, 熔点185～188℃, 蒸气压为 1.7 ×10-3Pa(20℃) 。
20℃时在各种溶剂中的溶解度: 二氯甲烷11720 mg/L ,乙腈5 380mg/L ,乙酸乙酯1660mg/L,丙酮1380mg/L,甲醇990 mg/L。
2 5℃时在磷酸盐缓冲液中的溶解度随pH变化而不同: pH5时为 2 . 9mg/L,pH6时为12mg/L , pH7时为120 mg/L , pH8时为1200 mg /L 。
在微碱性溶液中稳定,酸性水溶液中缓慢降解,在醋酸乙酯二氯甲烷乙腈和丙酮中稳定,在甲醇中可能分解。
苄嘧磺隆属低毒除草剂,原药大鼠急性经口 LD50> 5 000 mg/ k g,兔急性经皮 LD50> 2 000 mg / kg , 大鼠急性吸入 LC 50> 7 .5 mg/L 。
鲤鱼(48h) LC 50> 1000 mg /k g , 水蚤(48 h) LC 50> 100mg/kg 。
苄嘧磺隆适用于水稻插秧田和直播田防除阔叶杂草。
如鸭舌草、眼子草、节节菜、陌上菜、矮慈姑等及莎草科杂草如牛毛草、异型莎草、水莎草、碎米莎草、萤蔺等。
对禾本科杂草防效差, 高剂量下对稗草有一定的抑制作用。
苄嘧磺隆使用方法灵活, 可用药肥、药土、药砂、喷雾、浇灌等方法, 用量 20～ 30g/hm2,可与丁草胺、杀草丹、优克稗、禾大壮、甲磺隆、乙草胺等剂混用, 是我国水稻田中使用面广、时间长、量大的一种除草剂。
三抗苄嘧磺隆慈姑ALS基因突变位点东北地区属于施用稻田化学除草比较早的地区之一,使用磺酰脲类除草剂已有20余年。
研究结果证实,延边地区稻田发生抗苄嘧磺隆的雨久花、慈姑、扁秆藨草,过去对SU除草剂极为敏感的慈姑、雨久花大发生,其靶标酶)))新型乙酰乳酸合成酶(ALS)对苄嘧磺隆、吡嘧磺隆的抗性系数增到几十倍。
本试验通过测定感、抗性生态型慈姑ALS基因部分片段的碱基序列,了解抗性ALS基因突变位点。
3.1 供试植物抗药性慈姑(Sagittaria sagittrifoliaL. var.longilobaT. ) 材料采自多年连续使用苄嘧磺隆、吡嘧磺隆的延边地区稻田,敏感性材料采自野池塘3.2 慈姑ALS基因特异兼并引物设计与合成通过美国生物技术信息中心(NCBI)登录的x51514(拟南芥)等10种植物的ALS氨基酸序列信息分析,利用Primerprimier5. 0程序设计了1对特异简并引物,其上游引物Ap1:TC(A/C)ATGGA(G/A)AT(C/T)CA(C/T)CA(C/G)GC;下游引物Ap2:CC(C/A/G/T)GT(C/G/A)AC(A/T/G)CG(A/G)TC(A/G)TC(A/G)AA。
1. 3 慈姑总RNA提取、RT-PCR扩增、ALS基因片段克隆及测序利用Trizol一步法制备总RNA。
参照TaKaRa反转录试剂盒说明书,以Oligo dT为引物,以提取的总RNA为模板,经反转录合成cDNA。
利用特异简并引物Ap1、Ap2,以反转录cDNA为模板进行PCR扩增。
反应体系由10@ExTaqbuffer(210Ll)、cDNA(110Ll)、Ap1(10 pmol/L, 110Ll)、Ap2(10pmol/L, 110Ll)、dNTPMixture(215 mmol/L, 210Ll)、ExTaq(015Ll)、ddH2O(1215Ll)构成,反应程序为94e30 S, 55e30 S, 72e1 min,循环30次。
回收、纯化PCR扩增的目的DNA片段,利用pMD-18T载体将目的DNA片断转化至JM109感受态细胞中。
经白斑筛选将其接种于含氨苄青霉素的LB培养液中并震荡培养,按煮沸法提取质粒。
将重组质粒DNA经酶切鉴定为阳性的DNA克隆委托上海博亚生物公司测序。
2 结果目的片段RT-PCR产物与质粒重组鉴定利用特异简并引物Ap1、Ap2进行RT-PCR扩增,扩增产物经电泳获得了800 bp左右的DNA片段(图1)。
这与引物设计扩增目标779 bp基本相符合,说明扩增产物是感、抗性慈姑ALS基因编码区的DNA片段。
克隆重组质粒DNA目的片段经酶切、鉴定,同样获得800bp左右的DNA片段图2),与RT-PCR扩增产物相似,证明重组质粒DNA中含有目的DNA片段3.2.2 目的基因片段测序分析对测序结果采用DNASIS软件进行排序分析,结果表明,本试验碱基测序区域为363位点到1142位点(以拟南芥ALS基因编码为标准)。
其中,抗性慈姑ALS基因编码区第972位的碱基发生转换突变(腺嘌呤A972y鸟嘌呤G972),导致了ALS第324位点氨基酸替代突变(苏氨酸Thr324y丙氨酸Ala324),其他碱基位点突变其他碱基位点突变均属于兼并碱基的无效突变(表1)3.2.3 慈姑与植物类ALS氨基酸同源性分析采用DNASISDemo软件分析和比较感抗.性慈姑目的片段ALS氨基酸序列和其它5种植物的同源性,结果显示,慈姑与低等类绿藻的同源性为70%,与其他高等植物的同源性为80%以上,与日本自生慈姑(Sagittaria trifoliaL. ) (登录号:BAF57909)的同源性为100%。
说明慈姑变种之间ALS基因非常稳定。
3 讨论国内外研究结果表明,杂草ALS基因抗性突变,常发生在一定的部位和一定的位点[4-6]。
从多种抗药性杂草ALS基因图谱不难看出,目前常发生抗性突变的5个位点(第122位Ala, 197位Pro, 205位Ala, 574位Trp和653位Ser)均是其保守区域。
某种杂草的抗药性突变强度、交叉抗药性范围等化性状与突变部位、突变点数量、被取代的氨基酸种类也有相关性[6-7]。
本试验结果表明,抗性慈姑ALS第122位Ala197位Pro、205位Ala均没发生突变(第574位Trp和653位Ser 在本试验测序域之外),而发生突变的位点是第324位。
虽然此位点的突变目前还是首例,但这个区域同样是一个较长的保守区域(320~336位点),具备了发生抗性突变的共同特征。
通过多种植物的比较发现,植物ALS一级结构较大范围的保守区约有10处。
我们认为,在保守区内氨基酸不可能发生随意性突变,如果突变/过度0,会丧失其固有功能。
不同种类的ALS抑制剂各自具有与ALS结合位点,如果此结合位点的氨基酸残基发生异性氨基酸替代而不能与除草剂结合成ALS-除草剂复合物,就会出现ALS同功异构的抗药性现象。
慈姑目的片段ALS氨基酸序列和其它植物的同源性约80%,而与日本自生的慈姑ALS同源性达到100%,说明慈姑变种之间ALS基因非常稳定。
同样,同属植物之间的ALS氨基酸一级结构保持很高的同源性和具有稳定的保守区。
这为未知植物类特异引物设计提供了便利条件。
由于本试验慈姑ALS碱基测序区域仅限于第363位点到1142位点,至于非测序区域ALS是否发生抗药性变异等问题,需通过ALS因全码解密来揭示。