图像分析基本原理及分析过程

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遥感图像分析的基本原理与方法

遥感图像分析的基本原理与方法

遥感图像分析的基本原理与方法遥感图像分析是一种通过获取和解释地球表面的图像数据来研究地理现象和环境变化的方法。

它利用遥感技术获取的图像数据进行数据处理和分析,以揭示地球的表面特征、变化和趋势。

本文将介绍遥感图像分析的基本原理和方法,并探讨其在地质、环境和农业等领域的应用。

一、遥感图像分析的基本原理遥感图像分析依赖于传感器获取的电磁辐射数据。

电磁辐射是能量在电磁波形式下传播的过程,其波长范围从长波到短波,包括可见光、红外线和微波等。

传感器可以通过不同波段的响应来获取不同的辐射数据,从而得到不同频谱范围内的图像数据。

在遥感图像中,每个像素代表一块地表区域的平均辐射量。

图像数据可以由数字矩阵表示,其中每个像素的灰度值或颜色值表示该区域的辐射强度或反射率。

通过对这些数据进行处理和分析,可以获得地表特征的信息。

二、遥感图像分析的方法1. 预处理遥感图像预处理是为了去除图像中的噪声、增强特征和调整图像的对比度等。

常见的预处理步骤包括去噪、辐射校正、大气校正和几何校正等。

这些步骤可以提高图像质量并准确反映地表特征。

2. 特征提取特征提取是指从遥感图像中提取有用的地物信息。

可以根据图像的灰度、色彩、纹理和形状等特征来区分不同的地物类型。

常用的特征提取方法包括直方图均衡化、主成分分析、变化检测和物体识别等。

3. 分类与识别遥感图像分类是将图像中的像素按照其地物类型划分为不同的类别。

分类可以基于监督或无监督方法进行。

其中,监督分类依赖于训练样本和分类器,而无监督分类则是通过数据的统计分布和聚类分析进行分类。

4. 变化检测变化检测是利用多期遥感图像比较分析同一地区在不同时间的变化情况。

通过对像素之间的差异进行检测和分析,可以揭示地表的变化趋势和时空模式。

变化检测在环境监测、城市规划和资源管理等领域具有重要应用价值。

三、遥感图像分析的应用1. 地质勘探遥感图像分析可以帮助地质学家在不同尺度上研究地球表面的地质结构和岩矿成分。

遥感图像分析

遥感图像分析

遥感图像分析遥感图像分析是利用遥感技术对获取的遥感图像进行解译和处理,以获取地表信息和探索地理现象的一种方法。

本文将介绍遥感图像分析的基本原理、常用的分析方法以及其在各个领域的应用。

一、遥感图像分析的基本原理遥感图像是通过遥感卫星或飞机等平台获取地球表面信息的图像,利用其进行分析可以揭示出地表的空间分布、变化规律及与地理现象的联系。

遥感图像主要包括光学遥感图像和微波遥感图像两种类型,其中光学遥感图像主要利用反射特性获取地表信息,而微波遥感图像则是通过电磁波的散射和回波等特性获取地表信息。

二、遥感图像分析的常用方法1. 图像预处理:遥感图像预处理是为了提取有效的地表信息,常用的预处理方法包括辐射定标、大气校正、几何校正等。

通过这些预处理方法,可以降低图像中的噪声,使图像更加清晰,有利于后续的分析工作。

2. 特征提取:特征提取是遥感图像分析的核心步骤,它是将图像转化为可供分析和解释的信息的过程。

常用的特征提取方法包括光谱特征提取、纹理特征提取、形状特征提取等。

通过提取图像的各种特征,可以获得地表的物理和几何信息。

3. 分类分类是遥感图像分析的重要任务,它是将图像中的像素划分为不同的类别。

常见的分类方法包括有监督分类、无监督分类和半监督分类等。

分类结果可以用来监测地表的变化,研究地表的演化过程以及评估地表的植被覆盖程度等。

4. 变化检测:变化检测是遥感图像分析的一项重要任务,它通过对多期遥感图像进行比较,来识别出地表变化的位置和程度。

常见的变化检测方法包括基于像元的变化检测和基于物体的变化检测等。

变化检测可以应用于城市规划、农田利用变化分析等领域。

三、遥感图像分析的应用1. 农业:遥感图像可以提供农作物的生长状态、土壤湿度、植被覆盖度等信息,帮助农民合理安排农作物的种植和施肥。

2. 环境监测:通过遥感图像分析,可以监测海洋和河流水质、大气污染、森林覆盖变化等环境问题,为环境保护和资源管理提供数据支持。

计算机视觉基础实现像与视频的分析与识别

计算机视觉基础实现像与视频的分析与识别

计算机视觉基础实现像与视频的分析与识别计算机视觉基础实现图像与视频的分析与识别计算机视觉是计算机科学与人工智能领域中的一个重要分支,它致力于使计算机具备感知视觉信息的能力,实现对图像和视频的自动分析与识别。

计算机视觉的研究目标是模拟人类视觉系统,将视觉信息转化为计算机可理解的形式,并进行各种分析与识别任务。

本文将介绍计算机视觉的基础原理和实现方法,以及在图像和视频分析与识别中的应用。

一、图像分析与识别图像分析与识别是计算机视觉领域的重要应用之一,它涉及到对图像中的对象、场景、特征等进行自动分析与理解。

图像分析与识别的主要步骤包括图像预处理、特征提取、特征匹配和分类识别。

下面将依次介绍这些步骤的基本原理和实现方法。

1. 图像预处理图像预处理是指对原始输入图像进行一系列预处理操作,以消除噪声、增强图像的质量和准确度。

常见的图像预处理操作包括图像去噪、图像增强、图像平滑和图像阈值化等。

图像去噪可以采用滤波器进行噪声滤除,图像增强可以通过调整图像的对比度、亮度和色彩饱和度等来提升图像的质量。

图像平滑可以通过卷积操作平滑图像的边缘和纹理,图像阈值化可以将图像的灰度值二值化,以便进行后续的特征提取和分类识别。

2. 特征提取特征提取是指从图像中提取出具有代表性、能够描述对象或场景特征的信息。

常用的特征包括颜色、纹理、形状和边缘等。

颜色特征可以通过直方图、颜色矩等统计方法来表示和描述。

纹理特征可以通过灰度共生矩阵、小波变换等来提取和描述。

形状特征可以通过轮廓分析、边缘提取等方法来获取和表示。

边缘特征可以通过Canny算法、Sobel算子等来检测和描述。

在实际应用中,可以根据具体任务的需求选择合适的特征进行提取和描述。

3. 特征匹配特征匹配是指将特征描述子进行匹配和对齐,以便识别出图像中的目标对象。

特征匹配的基本原理是计算特征之间的相似度或距离,并采用最优匹配规则进行特征匹配。

常用的特征匹配算法包括欧氏距离、汉明距离、相似性度量等。

医学图像处理技术的使用教程及应用

医学图像处理技术的使用教程及应用

医学图像处理技术的使用教程及应用医学图像处理技术是现代医学领域的一个重要分支,它利用计算机技术和图像处理算法对医学图像进行分析、重建和增强,从而为医生提供更多的诊断和治疗支持。

本文将介绍医学图像处理技术的基本原理、常用方法及其在医学领域中的应用。

一、医学图像处理技术的基本原理医学图像是通过各种医学影像设备获取的,包括X射线摄影、核磁共振成像、超声成像等。

这些图像数据包含了丰富的信息,可以用于疾病的早期诊断、手术规划和治疗效果评估等。

医学图像处理技术的基本原理是将医学图像数字化,并采用一系列的算法对图像进行处理。

数字化的过程包括采样、量化和编码。

采样将连续的图像转化为离散的样本,量化则确定了每个样本的灰度级别,编码则将量化后的样本编码为数字。

二、医学图像处理技术的常用方法1. 图像增强:医学图像常常受到噪声、低对比度等影响,图像增强技术可以改善图像的质量,使医生更容易进行观察和诊断。

常用的增强方法包括直方图均衡化、滤波和局部对比度增强等。

2. 图像分割:图像分割是将图像分成若干个意义明确的区域,常用于肿瘤分割、组织边界提取等任务。

分割方法有阈值分割、边缘检测和区域生长等。

这些方法可以帮助医生快速准确地对病变区域进行定位和分析。

3. 特征提取:医学图像特征提取是从图像中提取有意义的信息,通常用于疾病的诊断和分型。

特征可以来自图像的形态、纹理、灰度等方面。

常用的特征提取方法有形态学操作、纹理分析和主成分分析等。

4. 三维重建:三维图像重建是将多个二维图像合成一个三维模型,常用于手术导航、病灶定位和治疗计划等任务。

三维重建方法有体素插值、表面重建和体绘制等。

三、医学图像处理技术在医学领域的应用1. 病变检测与诊断:医学图像处理技术可以帮助医生发现病理性病变,并进行相关的诊断。

例如,在肺部CT图像中,医学图像处理技术可以帮助医生检测肺结节,并判断其恶性程度。

2. 手术规划与导航:医学图像处理技术可以根据患者的图像数据生成三维模型,为手术规划提供参考。

临床分析医学像的定量分析

临床分析医学像的定量分析

临床分析医学像的定量分析医学像的定量分析方法是临床分析中常用的一种方法,通过测量病人在特定条件下的生理指标值,结合相应的参考范围和统计学方法,对病人的病情进行客观量化评估。

本文将从医学像的定量分析方法的基本原理、应用示例以及存在的局限性等方面展开论述。

一、医学像的定量分析方法的基本原理医学像的定量分析方法基于现代医学成像技术,如CT、MRI等。

这些成像技术通过获取人体内部器官的影像图像,从而能够观察到病人的内部病变情况。

定量分析方法则是在这些像素级别的图像上进行数学计算,以获得更具体的信息。

其基本原理包括以下几个方面:1. 图像预处理:对原始图像进行预处理,如去噪、增强对比度等操作,以提高后续分析的准确性和可靠性。

2. 特征提取:根据医学专家对疾病的认识和经验,选择合适的特征来描述病变区域的形态、纹理、密度等特征。

3. 特征量化:通过统计学方法对提取到的特征进行量化,将其转化为具体的数值,以便进行后续的数据分析和比较。

4. 建立模型:根据已有的病人样本数据,建立定量分析模型,可以使用机器学习等方法,以实现对未知样本的预测和识别。

二、医学像的定量分析方法的应用示例医学像的定量分析方法在临床实践中有着广泛的应用,下面将以几个常见的应用示例来说明。

1. 肿瘤诊断:医学像的定量分析方法可以通过测量肿瘤的形态、大小、密度等特征,对肿瘤进行准确诊断和分期。

2. 脑卒中评估:通过对患者头部CT或MRI图像进行定量分析,可以评估脑卒中的面积、灶点数目等指标,从而判断患者的脑卒中程度和预后情况。

3. 心脏病评估:使用心电图进行心脏病评估时,可以结合相应的图像分析方法,对心脏的结构、功能等进行定量化评估,提供更全面的医学信息。

4. 器官移植:对于器官移植患者,医学像的定量分析方法可以通过对移植器官的形态学和功能学特征进行分析,来判断器官的状态和可能存在的并发症。

三、医学像的定量分析方法存在的局限性尽管医学像的定量分析方法在临床应用中有着广泛的应用前景,但也存在一些局限性,需要予以关注:1. 数据质量:医学图像的成像质量直接影响定量分析方法的准确性和可靠性。

计算机图像处理的基本原理和方法

计算机图像处理的基本原理和方法

计算机图像处理的基本原理和方法计算机图像处理是通过数字图像处理技术对图像进行获取、处理、分析和干预的过程。

它是计算机视觉领域中的重要研究方向之一。

本文将详细介绍计算机图像处理的基本原理和方法。

一、图像获取图像获取是指使用数字相机、扫描仪等设备将现实中的图像转化为数字形式。

常见的图像获取方式包括光学传感器原理、电子转换和光电转换。

具体的步骤包括:1. 设置相机或扫描仪的参数,如曝光时间、ISO感光度等。

2. 对被摄物体进行定位和对焦。

3. 采集图像数据,并将其存储在计算机内存中。

二、图像预处理图像预处理是为了增强图像的质量和消除噪声,以便更好地进行后续处理和分析。

常见的图像预处理方法包括:1. 灰度化:将图像从彩色转变为灰度图像,简化计算过程。

2. 平滑滤波:通过消除图像中的高频噪声,使图像更加清晰。

3. 锐化增强:通过增强图像的边缘和细节,提高图像的观感。

三、图像增强图像增强是改善图像的视觉效果和提取图像信息的过程。

常见的图像增强方法包括:1. 空域增强:对图像的每个像素进行操作,如直方图均衡化、灰度拉伸等。

2. 频域增强:利用频域滤波器对图像进行增强,如傅里叶变换、小波变换等。

3. 借助机器学习技术进行图像增强,如深度学习和卷积神经网络等。

四、图像分割图像分割是将图像分成若干个互不重叠的区域的过程。

图像分割可以提取出感兴趣的目标,为后续处理和分析提供基础。

常见的图像分割方法包括:1. 基于阈值的分割:通过设定阈值来将图像分成不同的区域。

2. 区域生长法:从种子点开始,根据像素邻域的相似性递归合并区域。

3. 基于边缘的分割:提取图像的边缘信息,将边缘作为分割的依据。

五、目标识别与分类目标识别与分类是将图像中的目标对象识别和分类的过程。

常见的目标识别与分类方法包括:1. 特征提取:通过提取目标对象的特征信息,如形状、纹理、颜色等,作为分类的依据。

2. 机器学习算法:使用分类算法,如支持向量机、决策树和随机森林等,对目标对象进行分类。

医学图像处理技术的基本原理与应用

医学图像处理技术的基本原理与应用

医学图像处理技术的基本原理与应用随着科技的不断进步,医学图像处理技术在医疗领域的应用越来越广泛。

这项技术通过对医学图像的处理和分析,可以帮助医生更准确地诊断和治疗疾病。

本文将介绍医学图像处理技术的基本原理和一些常见的应用。

首先,让我们了解一下医学图像处理技术的基本原理。

医学图像处理技术主要包括图像获取、预处理、特征提取和图像分析等步骤。

图像获取是指通过医学设备如X射线、CT扫描、MRI等获取患者的医学图像。

预处理是对原始图像进行去噪、增强、几何校正等处理,以提高图像的质量和准确性。

特征提取是指从预处理后的图像中提取出有用的特征,如病变区域的形状、纹理、颜色等信息。

图像分析是对提取的特征进行分析和解释,以帮助医生做出准确的诊断和治疗决策。

医学图像处理技术的应用非常广泛。

其中,最常见的应用之一是肿瘤检测和诊断。

通过对肿瘤图像的处理和分析,医生可以确定肿瘤的位置、大小和类型,从而制定出最合适的治疗方案。

此外,医学图像处理技术还可以用于心脏病的诊断和治疗。

通过对心脏图像的处理和分析,医生可以评估心脏的功能和结构,检测心脏病变,并制定出相应的治疗方案。

除了肿瘤和心脏病的诊断,医学图像处理技术还可以在其他疾病的诊断和治疗中发挥重要作用。

例如,在神经科学领域,医学图像处理技术可以用于脑部图像的分析,帮助医生确定脑部病变的位置和程度,并指导手术治疗。

在骨科领域,医学图像处理技术可以用于骨折的诊断和治疗,通过对骨骼图像的处理和分析,医生可以确定骨折的类型和位置,制定出最佳的治疗方案。

此外,医学图像处理技术还可以应用于医学研究和教育。

在医学研究中,医学图像处理技术可以帮助研究人员分析大量的医学图像数据,发现疾病的新特征和治疗方法。

在医学教育中,医学图像处理技术可以用于教学演示和培训,帮助学生更好地理解和掌握医学知识。

尽管医学图像处理技术在医疗领域的应用已取得了显著的进展,但仍然存在一些挑战和问题。

首先,医学图像处理技术需要大量的计算资源和专业知识,这对医疗机构和医生的要求较高。

图像识别技术实现原理与应用场景分析

图像识别技术实现原理与应用场景分析

图像识别技术实现原理与应用场景分析随着科技的不断发展,图像识别技术也越来越受到关注。

图像识别技术是指计算机通过对图像的分析、处理,从中自动识别出各种信息的技术。

其核心是通过将数学模型应用到图像上,从而实现图像识别。

本文将从技术原理和应用场景两个方面进行分析。

一、技术原理图像识别技术的实现,离不开图像处理和机器学习两个方面的支持。

1. 图像处理图像处理是指将数字图像经过一系列的计算机算法处理之后,得到一些本身不具有的信息。

这是图像识别技术实现的重要基础。

具体来说,图像处理的过程可以分为以下几个步骤:(1)采集图像这是图像处理的第一步,将图像以数字的形式存储在计算机中。

(2)预处理图像在采集的图像中可能会存在噪点和其他不必要的信息,预处理旨在去除这些干扰因素,使图像更清晰。

(3)特征提取通过对图像进行分析,提取出其中的特征信息。

如对于人脸识别技术,可以提取出眼睛、鼻子、嘴巴等特征。

(4)分类识别通过机器学习模型,对提取出的特征进行分类,从而实现对不同图像的自动识别。

2. 机器学习机器学习是指通过让计算机自我学习,从而对一定领域内的规律进行归纳和总结的过程。

其过程包括:收集数据、训练模型、评估模型和应用模型。

机器学习在图像识别技术中的应用,主要体现在:(1)建立模型根据数据的不同特点,建立不同的模型。

如对于人脸识别技术,可以建立卷积神经网络模型。

(2)训练模型将已有的数据输入到模型中,通过不断迭代,使模型得到更高的识别准确度。

(3)评估模型对训练好的模型进行验证,评估其识别准确度,从而获取更好的模型。

二、应用场景图像识别技术的应用场景非常广泛,以下列举其中几种:1. 人脸识别人脸识别是图像识别技术中应用最广泛的一种,其应用领域包括门禁系统、支付验证、考勤管理等等。

2. 文字识别文字识别也是图像识别技术中的重要应用之一。

如通过对车牌、身份证等信息的自动识别,能够提高识别效率,减少人工错误。

3. 环境监测图像识别技术通过对采集到的照片进行分析,可以实现对自然灾害、交通堵塞等情况的自动监测。

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图像分析基本原理及分析过程概述在生物及医学研究中,对图像的判读与分析特别是对显微镜下微观图像的观察研究从来都是重要的研究手段。

随着技术的进步,分析图像的方法也从眼观尺量进入到了使用计算机软件进行定量分析的阶段。

计算机软件的发展速度呈加速前进,采集图像的设备也不断更新,这使得我们能有更多的手段来分析测量复杂的生物图像。

现在我们可以使用CCD数码相机来采集图像。

使用功能比较强大的图像分析软件来进行图像分析测量。

相比之下,在不太久远的十来年前使用的图像分析仪及单色的图像采集摄像机已经过时了。

而图像分析的手段也比以前丰富。

简单地引用以前的分析方法未必就是最佳的方法,在许多情况下,需要我们依据软件及相机的情况设计与研究目标相适应的分析方法。

分析测量图像绝不仅仅是一个软件使用的问题,而是从实验设计开始,就要综合考虑研究目标、样品制作方法、拍摄方式、选择视野等各方面因素,最后才是通过软件实现最有效的图像分析测量。

一个完整的图像分析过程应该包括:1.明确需要测量分析的对象。

2.使用适当的方法拍摄下这个对象,包括进行适当的染色及取样,采集到突出显示的测量对象的照片。

3.分析照片上的图像元素,确定能反映测量对象的图像图形4.测量照片上的图形的测量参数,进而得到测量对象的测量数据5.对测量对象进行统计分析。

图像分析的最佳效果,是利用图像分析软件可以自动地判断测量目标,准确分析测量出目标对象的数值。

由于生物图像的复杂性,软件往往作不到这一点。

此时只能退而求其次,采取抽样统计,手工选择等方法进行近似的测量。

测量方法本身有时候也能成为一个研究课题。

一、把研究目标转换到图像分析问题上。

在丁香园混了好几年了,虽然很喜欢与大家讨论图像分析的问题,但是却经常对一些求助视而不见,例如:请问用IPP怎么分析双染的结果?谢谢!最近正要测肾小球面积以及球内PAS染色阳性面积(粉紫色),不会操作,希望各位老师及同仁多多指教,非常感谢!传张片子上来,请指导一下哦!免疫荧光定量分析选什么软件好?是IPP吗?这个软件可以做杂交结果的分析吗?具体如下:杂交后获得阳性结果和阴性对照的结果,如何分析结果呢?下面是阳性和阴性的图。

谢谢您的解答。

我做的是脐静脉内皮细胞管道形成实验,需要计算整张图片上内皮细胞管道的数目以及管道的总长度,这个怎么用IPP计算啊?希望能够提供详细步骤(附有图片)。

谢谢!!!我们在对免疫组化照片的阳性区域,进行最后的的统计学分析时,用的应该是哪个参数呢?-------------------------------------------上面这些提问我是没法回答的,除非是正好作过相关的研究,知道其来龙去脉。

否则即使有图片提交,也看不出哪里是肾小球内PAS,哪里是管道。

不知道需要分析的对象在哪里,当然也就不会作了。

所以一个完整的图像分析过程应当是前面所述的五条,其中最重要的却不在图像分析上,而在于确定所要分析的目标以及如何把这个研究目的转换成图像分析的问题。

这是图像分析的关键之处。

当然,如果是常用的分析测量,是已经有比较成熟的方法的,以免疫组化样品为例:免疫组化的分析对象(分析测量的目标)是组织切片上特定蛋白的表达量。

为了达到这个测量目标,先用特定抗体与切片反应,使之与切片上的特定蛋白结合,然后用DAB对结合了蛋白的抗体进行染色。

这样,DAB的染色深浅及范围就能反应切片上相应蛋白的表达量了。

所以免疫组化技术就是把切片上“蛋白表达量”这个研究目标转换成了切片上“黄色染色物的分布”这个图像分析问题。

荧光标记的免疫组化图片与此类似。

另一个例子:利用凝胶电泳方法来测量RT-PCR产物的分子量及质量(重量),研究目标是样品中各种DNA 片段的分子量与质量。

通过电泳把加样孔中的样品分布到泳道之中后,不同分子量的产物成份会分布到泳道的不同位置,形成条带。

用EB染色后,在紫外灯照射下各条带发出荧光,就能显示出条带的位置与强度信息。

这样就把研究目标(产物的各组分分子量与该组分的量重)转换成了凝胶图像上的条带的位置与光密度这个图像分析问题。

具体到前面提到的那些没法回答的问题,实际上就是提问的信息不够,没法确定如何把研究目标转换为图像分析问题。

当然,这类分析方法往往是从文献上查找到的,是已经有的分析方法,这时候就要仔细学习参考文献上相关的叙述,弄明白文献上的方法是把分析目标转换成什么样的图像分析目标。

明确了这一点后,才能考虑如何通过图像分析软件实现正确的测量。

甚至进一步改进测量方法。

二、正确地处理样品并进行拍摄。

处理样品主要是指对切片作正确的染色。

虽然染色的方法基本上有一个规范的程序,但进行图像分析的时候,根据分析目标对染色方法作适当的优化能让分析测量更加方便准确。

在免疫组化切片染色时,由于要分析比较染色深浅,所以在制片时就要强调以同样条件制作所有的组织切片。

曾经遇到一位,在染色时,遇到阴性样品就有意延长一下显色时间,让片子黄一点,结果是阴性结果的光密度测量数值与阳性样品一样大。

如果要分析细胞核,就得特别注意苏木青蓝染的深浅要适当,一般情况下,浅浅的蓝色只能标记出细胞核的位置,明显的蓝色才适合于进行细胞核尺寸的测量或对细胞进行计数。

而在进行细胞核上蛋白的免疫组化分析时,过浅的蓝染会导致细胞核选择困难,过深的蓝染则会掩盖免疫组化产物的颜色。

关于荧光免疫组化的染色就更复杂了,单染色的样品要注意样品荧光与背景荧光的对比度要足够高。

双染色的样品还要注意两种染料的荧光强度应当适配,不要一种颜色的荧光特别强,另一种特别弱。

最常见的是红色荧光特别亮,而FITC的绿色却很弱。

结果是在拍摄时绿色的荧光实际上是红色荧光图像的绿色分量。

拍摄样品时影响的因素更多,更容易出错。

在拍摄大体物品时要特别注意背景与物体之间的对比。

在拍摄离体组织器官时,把组织块放在干净的白纸或黑纸上以保证组织图像与背景之间有清晰的分界线,在两侧各用灯光照明以避免留下影子。

在缺乏照明条件的时候,也可以选择在室外背光处拍摄,既有足够的照明也能避免明显的阴影。

一般的组织切片只要正确选择视野并拍摄清楚就行了。

而免疫组化的样品却额外要注意拍摄时的曝光:以同样的曝光条件拍摄样品。

特别是荧光,一个对照组的弱荧光样品,就应该拍摄得光强较弱,阴性的甚至拍摄出一张黑照片。

如果有意延长弱样品的曝光,照片虽然漂亮,但其表现的光密度就与阳性样的强荧光差不多了。

所以在我介绍免疫组化样品的分析方法之前,都是先强调如何拍摄样品。

在使用倒置显微镜拍摄活细胞的时候,很多人并未注意到在显微镜上方的灯光筒下边有一个长方形可推移的板,上面有三四个大小不一的园孔,这几个孔的位置是与物镜的选择有关的。

高倍镜要使用小孔,低倍镜用大点的孔。

选择不对的时候,观察图像的反差不好。

拍摄彩色照片的时候,相机色彩也是常被忽视的。

最常见的是拍摄的照片色彩偏蓝。

这对分析免疫组化图片的影响非常大。

偏蓝的照片不仅降低了黄色深色的深浅程度,而且会使较浅的黄色变成了白色甚至浅蓝色。

三、确定图片上的测量目标在分析图片时,虽然我们嘴上说的是测量细胞、细胞核或胞浆。

但是心里应该有一个概念,就是实际上我们测量的是图片上的一片黄色,一个蓝色的园斑,或者一些边界线围成的区域,或者是某种色彩组成的区域。

有了这个概念,才能真正地把研究目标转换到图像分析的目标。

进而进行正确的测量。

生物图像几乎没有直线、正方或圆形这样规则的图形。

因此,要测量对象的长度,面积,直径这些指标时,是需要考虑该如何进行近似测量或等效测量的。

软件可以准确测量不规则曲线的长度与不规则区域的面积。

其他的指标往往就需要作等效计算或近似计算。

例如:测量细胞的半径。

可以先测量细胞的面积,然后利用area=pi *r^2公式计算其等效半径。

也可以通过细胞中心画一组放射线,测量细胞在这些放射线方向上的直径,然后取平均值作为它的近似测量值。

这种测量等效值或近似值的方法在几何测量中经常用。

我个人认为测量等效值更准确一些。

选择测量目标的另一个原则是要保证测量的可重复性。

即使是手工测量,也应当保证两次独立的重复测量数值不会有太大的差异。

四、使用软件测量说到这里,才算是提到了图像分析软件了。

实际上Image-pro plus不过是许多种图像分析软件中的一种。

它是一种通用的图像分析软件,不仅是用在生物图像分析上,在其他场合用得更多。

其优势当然是功能强大,操作也顺手。

缺点只有一个,就是贵。

请大家不要在此场合讨论非正版软件的问题,这不符合丁香园网站的规定。

通用的软件适合于多种场合下的应用,专用的软件则有特定的应用场合,比如凝胶电泳分析软件,它的功能范围远比不上通用的图像分析软件,但是在分析凝胶电泳图片时,它却非常方便。

这次既然提到了关于RT-PCR凝胶图片的分析及Western blot膜的分析,就得提到Image-pro plus 的姊妹软件:gel-pro。

如果使用IPP来分析电泳图片,恐怕会相当麻烦而且结果会比较粗糙。

用gel-pro来分析就轻松得多了。

Image J也是图像分析软件。

与IPP的功能类似,操作当然有不同。

优点是能自己编制处理功能,但要作到这一点却是有难度的。

专门分析凝胶图片的软件是很多的。

常用的除了gel-pro之外,还有bandscan,quantity one, visionworks等,它们大多是与凝胶拍摄系统一起购买使用的。

分析原理都一样,操作上略有不同,功能基本上都差不多,用哪个都行的。

用惯了IPP,再用gel-pro会熟悉一些。

使用凝胶电泳分析软件可以分析DNA凝胶图片,RNA凝胶图片,蛋白质的凝胶电泳图片,Western blot膜的照片,化学发光作的Western blot胶片等。

具体的软件操作步骤不是本讲座的重点。

在另外文章里,有关于Image pro plus以及gel-pro 软件的详细具体的操作方法。

五.测量数据的统计分析。

实际上统计分析测量数据依然是把研究目的转换成图像分析的问题的一部分。

虽然是最后进行的工作,但在一开始就需要考虑对测量数据该如何处理。

在最理想的情况下,使用软件能准确地识别图像上的测量对象,识别准确了,测量也就准确了。

生物图像本身是相当复杂的。

软件不能识别测量对象的情况非常普遍。

往往只能手工选择测量对象,这当然会有误差。

在更多的情况下,测量对象有许多,手工无法全部选择上,这时候还得更退一步,选择部分对象进行抽样测量,这就必须要统计分析。

实际上,在分析组织切片的时候,拍摄照片本身就是一种抽样。

你不可能把切片全部拍摄下来,而是选择几个视野拍摄下照片。

在哪里拍摄就有讲究了。

再深一步探究,就连在组织块的哪个部位作切片也是一种抽样。

这是图像分析软件所无能为力的。

所以从根本上来说,如何进行测量数据的统计分析并不是图像分析的问题,而是实验设计的问题。

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