细胞培养失败常见原因及对策

表：细胞培养失败常见原因及对策

出现问题可能原因解决办法

培养基中pH 错误的CO2浓度调节C02浓度

快速改变[NaHC02]2-3.7g/L,[C02]5-10%

培养瓶盖子过紧稍放松盖子

缓冲液量不足加HEPES至最终浓度为10-20mM

细菌、酵母和丢弃培养物、避免污染

真菌污染

细胞不贴壁过量的胰酶消化减少胰酶浓度或消化时间

培养基中无粘附因子加大血清浓度或增加粘附因子

细菌、霉菌、支原体污染检查并去除污染或丢弃

物理、化学污染去除相关污染

细胞生长速度降低改变培养基或血清比较培养基中成分,新旧血清比较

缺乏促进生长成分传代培养,加新鲜培养基和

如谷氨酰胺或生长因子生长促进成分

培养基储存不当保存在2-8℃，

血清培养基应尽量避光

初次细胞接种量少增加细胞接种数量

细胞衰老取得新细胞株

低度细菌和真菌污染无抗生素的培养基,如被污染，

则丢弃

支原体污染隔离培养,如污染,丢弃

细胞死亡无C02 检测C02

温度波动检验温度

抗生素浓度超量有毒性少量使用抗生素

细胞复苏受损重新复苏

渗透压错误检测培养基渗透压

产生毒性代谢物去除并更换培养基

细胞成团悬浮Ca，Mg离子存在用无Ca2+，Mg2离子的平衡

盐溶液清洗细胞

支原体污染隔离培养,检验支原体污

染,

如已经污染,则丢弃

胰酶过量,细胞DNA释放用DNase处理细胞

细胞形态、生长

状况改变细胞间污染更换细胞