Rh血型鉴定操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
试管法RH血型鉴定
试管法RH血型鉴定1．目的规范RhD血型鉴定实验，确保RhD血型鉴定结果的准确。
2．职责此规程用于试管法RhD血型鉴定试验，血库工作人员应严格按照本操作规程进行检测。
3．适用范围本规程适用于本院紧急输血患者的红细胞RhD血型鉴定检测操作。
4．操作规程4.1器材和试剂4.1.1器材：离心机、试管、滴管、生理盐水、记号笔，显微镜（OLYMPUS）,载玻片,移液器，一次性吸头。
4.1.2试剂：RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体），生理盐水；4.1.3原理：利用红细胞凝集实验可鉴定是否存在相应的抗原。
Rh血型系统常见的临床意义较大的C,c，E,e，D五种抗原中D抗原的临床意义最大，抗原性最强且出现频率高，故一般只进行RhD抗原的鉴定。
D抗原阳性者被称为Rh阳性，反之为Rh阴性。
4.2标本采集4.2.1标本要求：抽取EDTA抗凝血2ml，3400转/分离心5分钟分离血浆，抗凝标本应无溶血，标签齐全。
4.2.2标本运输：室温运输。
4.2.3标本拒收标准：细菌污染，溶血标本，标签不齐全不能作测定。
4.3操作步骤4.3.1实验前准备：压积红细胞制备：供血者及受血者血标本离心后，取洁净试管加500ul生理盐水，加入25ul压积红细胞，混匀约为5％的红细胞悬液。
1）取洁净试管1支，标明RhD,用加样器加入50ul（或用试剂瓶吸管各加入1滴）RhD（IgM）分型试剂；2）加入50ul（或用一次性吸管加入1滴）5％被检者红细胞悬液；3）轻轻混匀，500g，离心1min（或1000g，离心15sec）；4）观察上清液是否存在溶血现象。
5）轻轻摇动试管，将试管底部的红细胞扣重新悬浮于上清液中。
6）以肉眼观察、分析并记录结果。
应观察是否有凝集或溶血现象；如有凝集，应描述凝集强度；如无凝集，应在低倍显微镜下观察；7）实验结果无凝集或弱凝集。
（应根据实验室现有试剂条件加做抗人球蛋白实验以确认是否为弱D表型，或外送检测确认）5.注意事项5.1常见导致假阳性的原因1）受检细胞被免疫球蛋白致敏2）高蛋白介质可能导致的缗钱状形成3）标本抗凝不当，纤维蛋白凝块的干扰4）存在意外抗体5）红细胞多凝集现象6）实验器材不洁净5. 2常见导致假阴性的原因1）红细胞与抗血清比例失调2）漏加或错加试剂血清3）试剂效价降低4）离心后摇动试管时用力过度。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。
如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。
(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。
ABO、RH血型检测(试管法)标准操作规程
ABO、RH血型检测（试管法）标准操作规程【操作人员】经批准人授权的同志【部门主管】【质量控制员】【目的】保证测试结果的准确性。
【适用仪器范围】双目显微镜、普通离心机。
【该SOP变动程序】该标准操作程序的更改，可由任一使用本程序的操作人员提出并报请专业主管及科主任签字后生效。
【应用范围】ABO、RH血型检测的手工操作。
【标本采集和处理】由临床科室采用真空负压EDTA K2抗凝管采集3ml-5ml，作好标记，立即送检。
检验人员认真核对患者姓名、性别、床号、检验目的以及标本是否与申请单一致。
确认无误后用专用记号笔在试管与申请单上编写对应数字序号，并按日期索引进行登记。
将标本置于台式离心机内，放置保证平衡，以1500转/min离心10分钟。
保证血浆于血球有效分离。
溶血标本应重采取、乳糜血及标本量不足应加以登记，溶血性疾病应注明。
【检查项目】一、ABO血型（一）原理根据红细胞上有或无A抗原或（和）B抗原，将血型分为A型、B型、AB型和O 型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
所谓正定型，是用已知抗-A和抗-B 分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或（和）B 抗原；所谓反定型，是用已知A红细胞B 红细胞来测定血清中有无相应的抗-A 或（和）抗-B。
（二）试剂和材料1．抗-A（B 型血）、抗-B（A 型血）。
2．5％A 、B 试剂红细胞盐水悬液。
3．受检者血浆。
4．受检者5％红细胞悬液。
试剂可在室温2～8℃下避光保存至有效期。
（三）操作步骤1．试管法(1)正向定型a．取试管2支，分别标上A、B字样。
b．向A管滴加抗A分型试剂1滴，向B管滴加抗B分型试剂1滴。
c．向A、B管各滴加5％的待检红细胞悬液各1滴。
d．混匀（天冷时试管架置370C水浴箱15分钟）后配平衡，在离心机内1000转/min离心1分钟。
将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以低倍镜检查。
02 Rh血型鉴定试管法操作规程---作业指导书
操作人员
3.1.1负责对检测标本进行Rh(D)血型鉴定的具体操作和编写实验报告单
仪器管理人员
3.2.1负责相关仪器的日常保养
3.2.2负责相关仪器的维护
质量监督员
负责操作过程监督，仪器室内质量控制。
科室主任或授权者负责检测报告审核
实验原理
在临床输血中，Rh血型一般只做D抗原的鉴定，凡被检红细胞和抗D血清凝集者为
阳性，不凝集者为Rh(D)阴性。
Du(弱D)型红细胞与各批或几批抗D血清在盐水介质及酶实验中不发生凝集，但在间接抗人球蛋白实验中均发生凝集。
因此，当用盐水介质实验发现与抗D不凝集时，不应轻率地定为Rh阴性，需进一步排除Du型的可能。
6.2.3轻摇玻片，观察凝集结果，判读结果应在2分钟内进行，否则会因为样本干固而引起假阳性。
试管法
6.3.1用等渗盐水配制3%-5%待检红细胞悬液。
6.3.2取小试管1支，加1滴抗D试剂，再加1滴红细胞悬液。
6.3.3 1000g离心15秒。
6.3.4轻轻振荡，悬浮沉积细胞，观察凝集结果。
6.4 Rh阴性确认实验
如果使用血清单克隆抗-D经20℃孵育后，反应仍为阴性，那么就需要检测弱D抗原或不完全D抗原的存在。
6.4.1同时使用抗-D（IgM）和抗-D（IgG）两种试剂分别用盐水法和聚凝胺法进行检测，观察凝集结果。
该实验应同时做阳性及阴性对照实验。
Rh血型鉴定
Rh血型鉴定1.原理根据与Rh血型系统中的D抗原发生的凝集反应，通过直接凝集法对Rh血型系统中的D抗原进行体外检测和鉴定。
2.试剂组成分泌抗DIgM 人/小鼠杂交瘤细胞培养上清液、EDTA、叠氮钠。
3.试剂保存和稳定性存放2℃—8℃，有效期内使用。
4.标本收集和制备无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2℃—8℃。
5.检验方法1.玻片法：干净玻片上加1滴抗D试剂，再加入1滴30%-45%的被检红细胞生理盐水悬液，缓慢摇动玻片；2-5分钟左右肉眼观察结果，可借助弥漫光源观察；如结果呈阴性，需用试管法重复做一次试验。
2.试管法：向试管中加1滴抗D试剂，再加入2%-3%的被检红细胞生理盐水悬液，混匀；3400rpm离心10秒；轻轻摇动试管以悬浮底部细胞，肉眼观察可见的凝集；如结果是阴性，需在37℃孵育15-30分钟，然后再离心观察结果，结果仍呈阴性请按有关规定做进一步的确认试验。
6.结果判断凝集=阳性检测结果无凝集=阴性检测结果7.质量控制与附注1.抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
2.由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
3.Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
4.对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
5.其它附注参见ABO血型鉴定。
8. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编. 全国临床检验操作规程（第三版）.Rh血型鉴定[原理]红细胞与抗D抗体发生凝集反应表明该细胞有D抗原，反之，无凝集现象表明试验的红细胞缺少正常强度的D抗原。
[试剂组成] 抗D试剂广谱抗人球蛋白[试剂保存和稳定性]存放2—8℃，有效期内使用。
[标本收集和制备]无菌操作收集血液标本,收集后尽可能立即进行实验。
如果不能立即实验,应将样品贮存于2-8C。
Rh血型定型操作规程
Rh血型定型操作规程1.原理1.1单克隆混合试剂测定法：根据凝集反应原理，当被检测行红细胞上有D抗原存在时，可与抗D混合型血型定型试剂产生特异性的抗原反应，出现红细胞凝集现象。
1.2酶介质测定法：当IgG类小分子特异性血型抗体与具有相应抗原的红细胞相遇时，虽能与红细胞上的特异性抗原结合，却因IgG分子间两个抗原决定簇的跨度小于红细胞间斥力而产生的距离（250nm），不能将相邻的红细胞彼此连接起来。
酶介质可破坏红细胞表面的唾液酸，降低红细胞表面负电荷，减少细胞间斥力，使红细胞间的距离缩小，有利于IgG类抗体在两个抗原位点间的连接，使抗原抗体间的反应成为肉眼可见的凝集。
2.操作步骤2.1玻片法（IgM+IgG型）2.1.1在玻片方格中加1滴抗D（IgM+IgG）混合试剂。
2.1.2再加2滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于抗D混合试剂中。
2.1.3用干净的玻棒完全搅拌上述红细胞与抗D混合液。
2.1.4前后左右倾斜玻片且同时观察凝集现象。
2.1.5如出现凝集，则判断为Rh（D）阳性，反之为Rh（D）阴性。
2.2试管法（IgM+IgG型）2.2.1在试管中加1滴抗D混合试剂。
2.2.2再加1滴2%~5%红细胞生理盐水悬液于上述试管中，混匀。
2.2.3以3200~3400r/min离心15~30秒。
2.2.4轻轻振摇试管使红细胞重悬，肉眼或显微镜观察有无凝集现象。
2.2.5记录结果，凝集者为阳性反应，反之为阴性反应。
2.3微柱凝胶法：按ABO血型鉴定中微柱凝胶法进行检测，结果判断见ABO血型鉴定操作规程图3-1。
3.注意事项3.1 Rh血型系统的抗体多由免疫产生，血清中有很多天然抗体存在，故不需作反定型试验。
3.2阳性对照，取3人O型红细胞混合配血。
阴性对照不易得到，一般配置方法为正常人AB型血清1滴，5%RhD阳性红细胞悬液1滴和菠萝蛋白酶试剂1滴混匀，与受检管一同置于37℃水浴1小时。
3.3 Rh血型鉴定要严格控制温度与时间。
rh血型操作规程
rh血型操作规程RH血型操作规程一、背景介绍RH血型是血型系统中的一个重要组成部分，它是由D抗原的有无决定的。
人们通常将有D抗原的血型称为RH阳性血型，没有D抗原的血型称为RH阴性血型。
RH血型在输血和妊娠管理中起到了重要的作用，因此，在临床操作过程中必须严格遵守RH血型操作规程，确保安全和准确性。
二、操作规程1. 输血操作（1）献血者的血液抗凝后，经离心制备成全血和血小板浓缩物。
对于血小板输注，应选择和受血者血型相同的RH血型，以防止发生不良输血反应。
（2）在输血前，护士必须仔细核对受血者的血型信息，包括ABO血型和RH血型，确保与输血样本中的信息一致。
（3）如果受血者是RH阴性血型，应尽量选择RH阴性血型的供血者进行输血。
如果没有RH阴性血型的供血者，必须进行特殊处理，避免RH阴性受血者产生抗RH抗体。
（4）在输血过程中，护士应仔细观察受血者的反应，如出现发热、寒战、皮肤瘙痒等不适症状，应立即停止输血并报告给医生。
2. 妊娠管理操作（1）在孕妇第一次产前检查中，必须进行血型鉴定，包括ABO血型和RH血型。
如果孕妇是RH阴性血型，需要进一步检测是否有产生RH抗体。
（2）如果孕妇是RH阴性血型且未产生抗体，需要在孕妇20周左右注射RH免疫球蛋白。
该注射可以避免孕妇在分娩时产生抗RH抗体，保护胎儿的健康。
（3）对于孕妇已经产生抗RH抗体的情况，需要进行更加细致的监测和干预。
医生会根据不同的情况制定个体化的治疗方案，以保护胎儿的健康。
3. 实验室操作（1）实验室人员在操作前需要进行严格的消毒和无菌操作，以确保实验结果的准确性。
（2）实验室人员在进行血型鉴定时，必须使用高敏感性的试剂，以确保准确测定受血者的RH血型。
（3）实验室人员必须遵守操作规程，准确记录实验结果，并及时报告异常情况。
（4）实验室人员应定期进行技术培训和继续教育，提高操作的准确性和可靠性。
三、安全措施1. 输血过程中，护士应随时观察受血者的反应，如有不适症状，应立即停止输血并报告医生。
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抗D血型鉴定操作规程
1.目的：
定性鉴定患者Rh（D）血型
2.适用范围：
适用于献血员筛查、临床检测和血液制品检测。
3.方法及原理;
该系统主要有五种抗血清，即抗D、抗C、抗c、抗E、抗e。
.用五种抗Rh标准血清来检查红细胞抗原，有18种表现型。
在临床输血中，一般只做D抗原的鉴定，凡被鉴红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。
其它Rh抗原鉴定和D抗原一样只是加相应的抗血清既可。
其鉴定方法，由抗血清的性质而定。
如盐水抗体用盐水法，lgG抗体用聚凝胺，抗人球蛋白等方法。
4.试剂及设备:
4.1 RhD血型定型试剂、0.9%氯化钠
4.2 离心机、显微镜、恒温水浴箱
5.样本的采集与处理:
5.1标本种类：新抽取的EDTA-K2抗凝血2ml。
5.2标本储存：
2℃-8℃保存。
5.3标本运输：
室温运输
5.4.标本拒收标准：
细菌污染、溶血标本不能作测定。
6.操作步骤：
6.1试管法
6.1.1取1支标记的干净试管，加入2滴抗D定型试剂。
6.1.2再加1滴3-5%的被检红细胞悬液于试管中，摇匀。
6.1.3离心，3000-3400r/min15秒。
6.1.4检查是否有溶血（溶血可能是阳性结果，也可能是细菌污染），然后轻轻摇晃使细胞再悬浮起来。
6.1.5观察凝集状况，并立即记录，必要时可借助显微镜。
6.1.6若是阴性结果，需37℃孵育15分钟，然后再离心观察结果，结果若呈阴性需进一步确认是否为弱D。
6.2玻片法
6.2.1取一标记的干净玻片，在其表面滴加1滴抗D血型定型试剂，在滴加1滴35-50%的待测红细胞悬液。
6.2.2持续地、轻柔地上下倾斜载玻片，使待测红细胞悬液与该试剂在约2cm直径范围内充分混匀2分钟。
6.2.3肉眼观察载玻片上是否出现红细胞凝集。
6.2.4记录结果
6.2.5若是阴性结果，需用室温盐水试管法复核。
8.干扰因素:
8.1假阳性因素
8.1.1试剂中存在具有其他特异性抗体（指不完全D抗体），因此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。
因为使用两份特异性相同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员意识到有进一步试验的必要。
8.1.2多凝集红细胞与任何人血清都会发生凝集。
8.1.3当用未经洗涤的红细胞做试验时，标本中的自由凝集素和异常蛋白质可能引起假阳性结果。
8.1.4试剂瓶可能被细菌、外来物质或其他抗血清所污染. 8.2假阴性因素
8.2.1看错抗血清，每次试验时应细心核对抗血清瓶上的标签。
8.2.2试管中漏加抗血清，在加入红细胞悬液之前，必须检查试管中有无抗血清。
8.2.3某种特定的抗血清不能和与其相对应抗原的变异型起反应。
8.2.4如某种抗血清含有主要对抗Rh复合抗原的抗体则可能与独立的基因产物的个别抗原不发生反应。
8.2.5未遵照抗血清使用说明书进行操作，如抗血清和红细胞悬液间比例以及反应温度和时间不准确。
8.2.6抗血清保存不妥，试剂中的免疫球蛋白变质。
9.质量控制;
9.1抗D诊断试剂开封后，及时贴上开封时间标签，在效期内使用。
9.2由于人红细胞的D抗原往往表现较弱，故必要时进行显微镜镜检，以免错判结果，特别是阴性结果时。
9.3Rh血型鉴定应严格控制温度与时间，因Rh抗原、抗体集反应凝块比较脆弱，观察反应结果时，应轻轻侧动试管，不可用力振摇。
9.4对于结果可疑的，必须洗涤红细胞后重新检验。
9.5.3~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红细胞悬液的配制。
9.6应该使用新鲜的、非溶血的血标本，可以是未加抗凝剂的血标本，或是加入抗凝剂EDTA的血标本。
必要时应使用经过加入等渗盐水离心（1000g，2分钟）洗涤后的标本所制备的红细胞悬液。
推荐在制备红细胞悬液前，洗涤红细胞两遍，或洗涤上清至清澈。
高脂肪性、黄疸性或微生物污染的标本可能会导致检测结果错误，因此应尽量避免使用。
9.7判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
10.医学解释:
10.1RHD抗原检测原则:对受血者一般只测RHD抗原,而对献血者不仅要检查RHD抗原,并在其为阴性的前提下,必须进一步确定是否为RH弱D型。
10.2RHD抗原阴性患者的输血原则:正常情况下除了供、受
双方ABO血型相同外,还要求RHD抗原阴性相同。
10.3RH新生儿溶血病（HDN）患儿输血或换血的原则：ABO血型同患儿血型相同，RH血型同母亲血型相同。
10.5RH弱D型妇女与RH阳性丈夫生育的婴儿可能产生新生儿溶血病。
10.6RHD抗原阴性患者血小板输注原则:尽管血小板表面无RH抗原但制品中含有一定量的红细胞,可使患者致敏,故RHD 抗原阴性生育期的女患者(包括女童)应输RHD阴性血小板。
11.最常见的误差来源:
11.1标本采集错误
11.2标本信息登记错误
11.3红细胞和血清比例不当
11.4离心过度或不足
11.5阳性反应产生溶血现象或弱凝集未能识别
11.6漏加试剂
11.7结果记录或者判断错误
11.8其他原因导致的血型鉴定困难。