疟原虫检验技术
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜厚血膜：用推片的一角，取血一小滴（约4微升），置于平置的载玻片上，由里向外一个方向旋转约4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜。
厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
薄血膜：以推片一端的中部取血一小滴（约1微升），使血滴与载玻片接触，血液沿推片边缘向两侧展开，将推片与载玻片保持25-30度，均匀而迅速适当地用力向前推成舌形薄血膜。
薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
三、染色〈一〉吉氏染染色法（一）所需器材1、吉氏染液（原液）2、器具染色用的盘子、染色缸、烧杯、吸管若干。
染色及冲洗用水蒸馏水、冷开水、自来水、pH7.2缓冲液。
疟原虫镜检技术操作规范
疟原虫镜检技术操作规范疟原虫镜检是诊断疟疾、确定虫种及发现传染源的重要手段和方法，具有严格的操作程序和技术要求，为了统一方法、规范程序、提高血检质量，特制定本操作规范。
一、血片制作（一）所需器材载玻片玻片3张（1张作载玻片，1张作推片，1张作采血后滴于玻片备血用）采血针采用一次性采血针。
玻片盒存放50或100片玻片的木质或塑料盒。
皮肤消毒液、棉签或酒精棉球75%的酒精、安尔碘、碘伏等皮肤表面消毒剂。
记号笔用于玻片上书写血检病人基本信息。
（二）操作步骤1、载玻片基本信息登记取1张载玻片，首先用目测法将载玻片从右（磨砂处为右）到左等分成6格，接着用记号笔在第1、2格即（磨砂处）写下血检病人基本信息：编号、姓名、制片日期结果（镜检结束后补写）。
载玻片上信息应与血检登记表中的项目对应。
如图12、采血采血部位为手指末端或耳垂，婴儿可从拇趾或足跟取血。
用消毒剂消毒取血部位皮肤后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1～2mm 深，约挤出1-2滴血，滴于玻片上（以备涂制厚薄血膜用）。
3、涂制血膜用推片的左下角刮取玻片上的血液4～5μl，涂于载玻片的第三格（靠近磨砂侧），由里向外一个方向旋转2～4圈，涂成直径为0.8～1.2cm的圆形厚血膜；再用该角沾取血液1～1.5μl血置于载玻片的中心点即（第四格前缘中点）；接着用干棉球或卫生纸擦净推片角上的血渍；最后用推片的下缘置载玻片的中心点（1～1.5μl血液处），当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两玻片保持25°～35°角，从右向左迅速推成舌状薄血膜，即（薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部）。
如（图1）、（图2）疟原虫镜检涂制血膜方法示意图2薄血膜厚度应以红细胞之间互相接触而不相互重叠为佳，（直观透过玻片能清晰看到报纸上的字）；厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5～10个白细胞为宜。
二、固定（一）所需器材1、甲醇2、器具玻璃棒、吸管（二）操作步骤薄血膜固定薄血膜晾干后，用玻璃棒沾取或用吸管吸取少量甲醇平铺于薄血膜上，起固定薄血膜作用，（注意不能固定厚血膜）。
疟原虫检验技术
加强技术研究和应用
加强疟原虫检验技术的研究和应用，提高诊断和治疗水平。
推广普及适宜技术
推广普及适宜技术，降低技术应用成本，提高基层医疗机构的疟疾防治水平。
加强国际合作
加强与国际组织和相关国家的合作，共同推进疟疾防治工作，提高全球范围内疟疾控制的效果。
01
02
03
THANK YOU.
谢谢您的观看
从最初的化学预防到现在的综合防控，防控策略不断发展和完善。
02
疟原虫检验技术分类
血片染色镜检
通过在显微镜下观察染色血片，检测疟原虫ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ种类和数量。
活体染色镜检
利用活体染色剂对患者的血细胞进行染色，然后在显微镜下观察疟原虫的活动情况。
显微镜检查
免疫荧光抗体技术
通过将荧光素标记的抗体与患者血清中的疟原虫抗原结合，然后在荧光显微镜下观察并计数。
优点
直接观察疟原虫形态，定位准确；可同时观察几种不同种类的疟原虫；样品容易获取，操作相对简单；费用较低。
缺点
需要有经验的检验员才能准确识别疟原虫；无法区分死菌和活菌；无法鉴定疟原虫的种类；需要时间较长，无法快速检测。
显微镜检查的优缺点
优点
可以检测出感染疟疾后机体产生的特异性抗体，用于诊断和流行病学调查；可以判断出感染疟疾的时间；样品容易获取，操作相对简单。
缺点
抗体检测存在假阳性或假阴性；无法准确判断抗体的种类和来源；无法判断感染疟疾的种类；血清学检测需要时间较长。
血清学检查的优缺点
可以检测出疟原虫的核酸，具有更高的特异性和灵敏度；可以准确鉴定疟原虫的种类；可以判断出疟原虫的基因型；样品容易获取，操作相对简单。
优点
无法区分死菌和活菌；分子生物学检测需要较高的技术和设备支持；检测费用相对较高；对于样品的质量和保存条件要求较高。
疟原虫检验技术
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断和流行病学调查。
优点
恶性疟原虫免疫荧光染色法
优点
具有较高的灵敏性和特异性，可用于早期诊断、药物治疗监测和流行病学调查等。
原理
以疟原虫特异性DNA片段作为引物，通过聚合酶链反应扩增特异性DNA片段，然后将扩增产物进行电泳分析，以检测疟原虫的存在。
局限性
不同种疟原虫的DNA序列存在差异，因此需要针对不同种疟原虫设计不同的引物。
聚合酶链反应（PCR）
对疟原虫的基因序列进行分析，可了解疟原虫的种群结构、遗传变异和抗药性。
核酸序列分析
分子生物学检验
体外培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊细胞或其它传代细胞系中，进行体外培养，用于分离和鉴定疟原虫。
体内培养法
将患者血液中的疟原虫接种到按蚊体内，进行体内培养，用于分离和鉴定疟原虫。
流行病学调查
通过对疟疾疫源地进行分析，找出传染源和传播途径，有助于制定针对性的防控措施，控制疫情扩散。
疫源地分析
流行病学调查与疫源地分析
结论与展望
06
疟原虫检验技术的重要性和意义
疟原虫检验技术是疟疾诊断、治疗和防控的关键手段，对于减少疟疾传播、保护人民健康具有重要意义。
疟原虫检验技术的发展和应用，有助于提高疟疾防治效果，降低疟疾发病率和死亡率，为国家和人民节省了大量医疗资源和社会成本。
xx年xx月xx日
疟原虫检验技术
目录
contents
疟原虫检验概述疟原虫检验技术分类各种疟原虫检验技术介绍疟原虫检验技术的应用范围与局限性疟原虫检验的实际应用案例结论与展望
疟原虫检验概述
01
疟原虫检验是指通过实验室手段对患者的血液、组织、排泄物等进行检查，以确诊疟疾感染和评估病情严重程度。
疟原虫的镜检技术-制片染色
利用特异性抗体对疟原虫进行染色， 提高疟原虫的染色效果和特异性。
人工智能在疟原虫镜检中的应用
图像识别与分类
利用人工智能技术对显微镜下的疟原虫图像进行自动识别、分类和计数，提高镜 检的准确性和效率。
数据挖掘与分析
通过人工智能技术对疟原虫镜检数据进行分析和挖掘，发现数据间的关联和规律 ，为疟疾防控提供科学依据。
固定涂片时要选用适当的 固定剂，避免涂片脱落。
染色时要选用适当的染色 剂，按照染色剂的要求进 行操作，确保染色效果良 好。
镜检时要仔细观察疟原虫 的结构特征，避免误诊和 漏诊。
冲洗时要彻底去除多余的 染料和杂质，避免干扰观 察。
03
疟原虫镜检制片染色技 术
疟原虫镜检制片染色技术的原理
原理概述
疟原虫镜检制片染色技术是一种 用于检测疟原虫的病理学方法。 通过制备血液涂片，并对其进行 染色，可以观察到疟原虫的存在
疟原虫镜检技术的应用场景
在疟疾流行地区，疟原虫镜检技 术常用于对疑似疟疾患者进行快
速诊断，以指导治疗和防控。
在实验室研究中，疟原虫镜检技 术可用于研究疟原虫的生物学特 性、药物敏感性以及疫苗开发等
方面。
在公共卫生领域，该技术也可用 于监测和评估疟疾的流行趋势和
传播风险。
02
制片染色技术
制片染色技术的原理
疟原虫的镜检技术-制 片染色
目 录
• 疟原虫镜检技术简介 • 制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术 • 疟原虫镜检制片染色技术的发展趋势
01
疟原虫镜检技术简介
疟原虫镜检技术的定义
01
疟原虫镜检技术是指通过显微镜 观察疟原虫在人体内的形态、结 构和生长过程，从而对疟疾进行 诊断和研究的实验技术。
疟原虫镜检技术
•
甘油
3ml
•
纯甲醇
97 ml
• 将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油
充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒 入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中 的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。 充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤
应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。
• 急用时，放置24小时后过滤也可使用。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
（2）缓冲液的配制
PH M/15 Na2HPO4 M/15 KH2PO4
(ml)
( ml)
DW (ml)
6.8
49
51
900
7.0
63
37
900
7.1
68
32
900
7.2
73
27
900
7.4
81
19
900
• 加缓冲液的PH可用试纸或0.02%酚红液测定。
• 亦可用PH7.0中性蒸馏水稀释染剂
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。
• （1）两种贮备液的配制：
• 贮备液I • •
1/15M磷酸氢二钠（Na2HPO4）溶液
Na2HPO4 9.5 g 蒸馏水 1000 ml
• 贮备液Ⅱ 1/15M磷酸二氢钾 （KH2PO4 ）溶液
•
KH2PO4 9.07 g
•
蒸馏水 1000 ml
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、显微镜镜检用于疟疾诊断
• 显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断
技术(金标准）
• 主要优点
- 特异高 - 能区分虫种 - 能分期 - 能计数 - 1小时内能完成诊断程序
疟原虫检验技术概要
-血片制作、染色及疟原虫形态鉴别
黔东南州疾控中心检验vivax，P.v] 恶性疟原虫 [P．Falciparum,P.f] 三日疟原虫[P．Malariae,P.m] 卵形疟原虫[P．Ovale,P.o] 我国主要是间日疟原虫和恶性疟原虫；另 二种少见，近年偶见国外输入病例。 其它疟原虫 诺氏疟原虫(Plasmodium nowlesi)
时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。
疟原虫镜检
● 疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点 ● 疟原虫密度计数方法 ● 人体四种疟原虫的形态特征
原虫镜检---金标准
●当前分子生物学、血清学技术快速发展, 但是厚薄血片的检查仍被认为是不可替 代的确诊疟疾的 “金标准”
●显微镜检查是唯一可查到原虫实体并鉴 别4种人体疟原虫
直至甘油加完，将研磨的染液倒入棕色瓶中，在 研钵中加 入少许甲醇清洗研钵，然后倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗 ，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，将染液充分摇匀， 置于室内，每天晃动数分钟，存放一周后经过滤即可使用。 保存时间越长染色效果越好。
●整个染色液配制时间不能少于5个小时
血片的染色
染色用水和冲洗用水配制
疟原虫密度计算
计算疟原虫密度的三种方法： ● 白细胞原虫密度计数法 (厚血膜 WHO) 优点：可作为定性和定量分析 ● 半定量计数法 (厚血膜) 优点：方法简便 缺点：只能定性，不宜作为定量分析 ● 红细胞感染密度计算法 (薄血膜)
采血部位：耳垂或无名指， 取血方法：通常在耳垂取血， 先用75%酒精棉球消毒取血部位 ，待酒精干后，用左手拇指和 食指紧捏耳垂上方或无名指指 尖，右手持消毒针迅速刺入皮 肤，不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。厚血 膜血量约一粒米大小,薄血膜血 量为厚血膜的一半或1/3。
疟原虫检验技术(1)知识讲解
白细胞计数(国际标准) 。
白细胞原虫密度计数法
操作2 (慢染) 量筒 内量2ml缓冲液或净水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀 ，滴入待染标本上，染色 30min。清水缓缓冲洗，晾 干镜检。
成批血片染色
将已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入3%吉氏染 液（3毫升吉氏染色液加缓冲液或净水97毫升，混匀） 浸没血片，染色30分钟。 （如染液稀释液不合标准时，得酌情增减染色时间 和浓度），然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将染 色片插于晾干板上晾干，包装，待镜检。
● 半定量计数法 (厚血膜) 优点：方法简便 缺点：只能定性，不宜作为定量分析
● 红细胞感染密度计算法 (薄血膜)
白细胞原虫密度计数法
➢ 镜检厚血膜，按视野顺序，记录200个白细胞中的 疟原虫数，如果原虫密度较低（200个白细胞中小 于100个疟原虫），可增加白细胞，计数500个。
➢ 密度单位:原虫数/μl ➢ 计算公式：疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者
吉氏染液(原液)的配置
吉氏染粉 (Azure B type) 甘油 (纯) 甲醇 (纯)
5g 250ml 250ml
●吉氏粉放入研钵中，加少量甘油充分研磨, 然后边加边磨， 直至甘油加完，将研磨的染液倒入棕色瓶中，在 研钵中加 入少许甲醇清洗研钵，然后倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗 ，反复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，将染液充分摇匀， 置于室内，每天晃动数分钟，存放一周后经过滤即可使用。 保存时间越长染色效果越好。
原虫镜检---金标准
●当前分子生物学、血清学技术快速发展, 但是厚薄血片的检查仍被认为是不可替 代的确诊疟疾的 “金标准”
疟原虫显微镜镜检技术(共74张PPT)
正确的推片姿势
取血量及涂片法（涂片操作）
厚血膜 用推 片的一角， 从取血部位刮取约4微升 血量（相当于火柴头 小），使血滴与平置的 载玻片接触，再由里向 外一个方向旋转，转 2~4圈，涂成直径 0.8~1厘米大小圆形厚 血膜，血膜厚薄均匀， 过厚易于脱落，过薄达 不到检出率的要求。
涂制厚、薄血膜的位置
定的实验室检查方法（WS259-2006）。
镜检目的与意义
疟疾诊断标准中把疟疾病例分为疑似病例、 临床病例、确诊病例和带虫者，前两者依 据流行病学史和临床表现即可做出诊断， 而后两者需通过发现病原体方能做出诊断。
通过对发热病人血检达到确诊疟疾病例。 及时发现传染源和明确感染的疟原虫种类， 以能针对虫种选择正确的治疗方案。
（吉氏染色） 散在呈金黄色，集成团块呈黑褐色
在薄血膜上加瑞氏染液5～8滴，染色1～2分钟。 单张血片染色：薄血膜经固定干燥后，用2%吉氏染液稀释液1~2毫升，滴入血片标本上染色30分钟左右； 虫体占红细胞体积的2/3至3/4 虫体较小，圆形，占满胀大的红细胞 涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。 厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在第4格前缘至第6格中部。 在普查时均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。 将瑞氏染剂粉1g置于研钵内，加入15ml甘油充分研磨后，倒入有塞玻璃瓶中，再用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，倒入瓶中，摇匀后， 置室温下，每天摇动5分钟，3天后即可使用。
血片的染色
一、吉氏染液母液配制
取吉氏粉克置于研钵中，加少量甘油充分研磨，边加 边磨，至25毫升加完为止，倒入60或100毫升带有玻
塞的有色玻瓶中。在研钵中加少量无水甲醇，洗去甘油浓
疟原虫检验技术
疟原虫检验技术一、疟原虫的生物学特征疟原虫是一类单细胞真核生物，寄生在人类和其他脊椎动物的红细胞内。
常见的疟原虫种类包括恶性疟原虫、间日疟原虫、三日疟原虫和卵形疟原虫等。
疟原虫的生活史包括在人体内的无性生殖和在蚊体内的有性生殖两个阶段。
在人体内，疟原虫经历了肝细胞内的红外期和红细胞内的红内期发育过程。
了解疟原虫的生物学特征对于选择合适的检验方法具有重要意义。
二、疟原虫检验技术的分类1、显微镜检查法这是疟原虫检验的经典方法，包括薄血膜涂片和厚血膜涂片检查。
薄血膜涂片用于疟原虫形态学观察，可鉴定疟原虫的种类；厚血膜涂片则提高了疟原虫的检出率。
在显微镜下，观察疟原虫的形态、大小、细胞核和细胞质的特点，以及疟色素的分布等，从而确定是否感染疟原虫以及感染的种类。
2、免疫学检测法（1）抗原检测利用免疫层析技术检测患者血液中的疟原虫抗原。
这种方法操作简便、快速，适用于现场检测和大规模筛查。
（2）抗体检测检测患者血清中的特异性抗体。
但由于抗体在感染后一段时间才会产生，且抗体检测不能区分现症感染和既往感染，因此在疟疾诊断中的应用相对有限。
3、分子生物学检测法（1）PCR 技术通过扩增疟原虫特定的基因片段来检测疟原虫。
具有高度的敏感性和特异性，能够检测到极低浓度的疟原虫核酸。
（2）核酸杂交技术利用标记的核酸探针与疟原虫核酸进行杂交，从而检测疟原虫。
4、其他检测方法（1）血常规检查疟疾患者可能会出现贫血、白细胞减少等血常规异常。
（2）血生化检查部分疟疾患者可能会有肝肾功能损害，通过血生化检查可以了解相关情况。
三、显微镜检查法的操作步骤1、采血通常采集患者的末梢血或静脉血。
2、制作血涂片薄血膜涂片：将一滴血液滴在载玻片的一端，用推片以 30°－45°角均匀地推成薄而均匀的血膜。
厚血膜涂片：取较多的血液滴在载玻片上，用推片制成较厚的血膜。
3、固定和染色薄血膜涂片自然干燥后，用甲醇固定，然后用吉姆萨染液或瑞氏染液染色。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
如何确定疟原虫血片为阴性
●
检查全部厚血膜视野未查见疟原虫
●
最少检查100个厚血膜视野未查见 疟原虫（临床病人）
疟原虫镜检
人体四种疟原虫的分布
感染人的疟原虫有四种:
恶性疟原虫
间日疟原虫 三日疟原虫
P. falciparum
P. vivax P. malariae
卵形疟原虫
P. ovale
四种疟原虫形态特征
恶性疟（P.falciparum）
1. 2.
鉴定 要点
红细胞不涨大 环状体纤细, 常有多 重感染，环状体内 可有2个核 环状体可贴在红细 胞边缘 血片中只有环状体 和配子体期原虫 配子体呈新月形或 腊肠形 成熟裂殖体约含1632个裂殖子 可出现茂氏点
3.
4.
5.
6. 7.
间日疟（P. vivax ）
red cell
A typical Plasmodium malariae presentation
Female patient, arrived from Brazil two weeks previously. Flu like symptoms since arrival.
Broad
A typical Plasmodium ovale presentation
Recent travel in Africa. Pyrexia of unknown origin.
Developing
form of plasmodium
Comet-like"
red cells
Enlarged
2. 3.
4.
5.
卵形疟（P. ovale）
鉴定要点
1.
2. 3. 4. 5.
红细胞正常或 略涨大
常见慧星状 ( 也称齿轮状) 环粗大 薛氏点明显 成熟滋养体类 似三日疟原虫 但更粗大 成熟裂殖体约 含6-12个裂殖 子
6.
类型
周 围 血 中 发 育 阶段
红细胞形态 大小 点彩
疟原虫形态 胞浆 疟色素 裂殖子数
始，记录200个白细胞中的疟原虫数（可分有性体和 无性体），如果原虫密度较低，可增加白细胞计数 500~ 1 000 个。
● 白细胞疟原虫计算公式：
疟原虫数 ÷ 计数的白细胞数 × 患者每微升血白细 胞数 = 疟原虫数/μl血。
● 如果不知患者的白细胞数，则每微升血以8 000个白
细胞计数(国际标准) 。
恶性疟原 虫
环状体 配子体
正常大小
茂 氏 点
小滋养体纤细， 粗黑 ，配 子 体中明显 常见２个核， 一个红细胞内 常有2个以上的 原虫 阿米巴样滋养 体，浅蓝色， 活泼 金棕色 不明显
16-32 12-24
间日疟原 虫
各 期 滋 养体 裂殖体 配子体
涨大,可 达正常的 1.5-2 倍
薛 氏 点
卵形疟原 虫
●Numerous fine ring forms ●Double chromatin dots ●Marginal forms ●Red cells are not enlarged
A typical Plasmodium vivax presentation
A thin film from a 22 year old male holidaying in Lombok (Indonesia) one month previously. Intermittent fevers since returning. ●Salient features are: ●Developing and thick (signet) ring forms ●Enlarged red cells
薄血膜
厚血膜
制片过程图示
标签
标准的疟疾厚薄血膜片
●厚血膜血量不宜过多或过少 ●薄血膜平整,无皱折和空泡.显微镜下红细胞单层排列
标签
各种不同的血片涂制法： 标准疟疾血片
门诊发热病人血片
居民疟疾普查血片
血片染色
两种染色方法:
●吉氏染色法
1. 染色原液配制 2. 门诊快染、慢染 3. 成批染色和溶血染色
白细胞疟原虫计数法举例
●假设计数200 WBC中有35个疟原虫，在不知患
者白细胞数的情况下，以每微升血8 000个白细 胞计数, 由此计算出每微升血液疟原虫密度为： 35（计数的疟原虫数）÷200（计数的白细胞）x 8000（每微升血白细胞数） =1400 / μl 答：该患者的疟原虫密度为1400 / μl。
提高镜检质量
疟原虫镜检
● 疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点 ● 疟原虫密度计数方法 ● 人体四种疟原虫的形态特征
原虫镜检---金标准
●分子生物学、血清学技术发展迅猛,但是 厚薄血涂片的显微镜检查仍被认为是不可 替代的确诊疟疾的 “金标准”
●显微镜检查是唯一可鉴别4种疟原虫的方 法
疟原虫厚、薄血膜镜检优缺点
恶性疟 P.falciparum
● 分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病 ● 我国流行区域为云南省和海南省 ● 四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者 感染后出现急性症状,不及时治疗可危及 生命（脑型疟）
间日疟 P.vivax
● 遍布全球温带地区及大片热带地区。在热
带非洲，特别是西非则很少见
● 间日疟原虫分布于我国大部分地区,主要是中
●瑞氏染色法
WHO推荐使用吉氏染色法
疟原虫检验技术
中国CDC寄生虫病所疟疾室 郑 香
吉氏染液(原液)的配置
吉氏染粉 (Azure B type) 5g 甘油 (纯 ) 250ml 甲醇 (纯) 250ml
●吉氏粉放入研钵中，加少量甘油充分研磨, 然后边加边磨，直
至甘油加完，将研磨的染液倒入棕色瓶中，在 研钵中加入少 许甲醇清洗研钵，然后倒入棕色瓶中，再放入甲醇清洗，反 复数次，直至甲醇用完。盖好瓶盖，将染液充分摇匀，置于 室内，每天晃动数分钟，存放一周后经过滤即可使用。保存 时间越长染色效果越好。
疟原虫检验技术
● 采集血样
● 血片的制作与染色
● 原虫镜检
1.白细胞原虫密度计数法
2.原虫形态鉴定
采集血样
采血部位：耳垂或无名指， 取血方法：通常在耳垂取血，先 用75%酒精棉球消毒取血部位， 待酒精干后，用左手拇指和食 指紧捏耳垂上方或无名指指尖， 右手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用右手 中指轻轻挤压出血。厚血膜血 量约一粒米大小,薄血膜血量为 厚血膜的一半或1/3。
部地区 ● 病程良性, 有复发
三日疟 P.malariae
●遍及热带和亚热带地区，特别是东、西非洲，圭亚那及 印度部分地区，呈片状、块状分布 ●三日疟在我国非常少见，只在南方广西有过散在报告
卵形疟 （蛋形疟） P.ovale
●主要分布非洲。太平洋地区、缅甸、东南亚有散在报告 ●在我国已基本消灭
原虫镜检
质量好的染色
显微镜下核呈红色,胞浆呈蓝色，薄血膜平整，红细胞单层排 列 如果血片偏红,说明染液偏酸性 如果血片偏蓝,说明染液偏硷性
偏酸
外观吉氏染色血片 标准
偏碱
血片制作与染色注意事项
● 载玻片必须清洁无油污 ● 固定薄血膜时，甲醇不要触碰到厚血膜 ● 放置3天以上的血片，在染色之前先用清水滴加 在厚血膜上进行溶血，以防厚血膜染色后颜色发 黑，影响镜检. ● 固定时不要加热，加热使原虫变形，影响结果． ● 血片充分干燥后方可染色，防止冲洗染液时厚血 膜脱落. ● 配置母液时过滤可除去杂质颗粒，有助于
各期均 有
正常大小 或略涨大 ,
薛 氏 点
卵 圆 形 滋 养 体 ， 深棕色 明显 蓝色较深，核 较大
6-12
三日疟原 虫
各期均 有 裂殖体
正常或 略缩小
齐氏点 （西门 氏）但 少见
圆 形 ， 蓝 色 深 ， 深棕色，粗 明显 核紧缩，滋养 体胞浆呈带状
6-12
混合感染
● 在一个血膜上有2种以上疟原虫感染称为 混合感染，较常见的是间日疟原虫与恶性 疟原虫混合。 ● 镜检判断P.v+P.f混合感染,必须是看到 P.v各期原虫和P.f的配子体。 ● 看到一个虫种，要有意识地继续找另一 个虫种。
血片制作
厚血膜 用推片的一角，从取 血部位刮取约4微升血量 （相当于火柴头大小）， 使血滴与平置的载玻片接 触，再由里向外一个方向 旋转，转2~4圈，涂成直 径0.8~1厘米大小圆形厚 血膜 薄血膜再取一小滴血.将血置 于第一张玻片离厚血膜适 当远的地方.将 推片的边 缘紧贴载玻片，轻轻上下 移动，使血液沿边缘散开， 然后匀速地向前推进，形 成薄而平铺的薄血膜
操作1 （快染） 量筒内量2ml 缓冲液(PBSPH7.0) 或净水， 直接滴加吉氏原液7滴，混 匀，滴入待染标本的厚薄 血膜上，染色10min，清 水缓缓冲洗，晾干（血膜朝 内面）镜检。 操作2 (慢染) 在量筒内量2ml缓 冲液或净水， 再滴加吉氏 原液4滴，混匀，滴入待染 标本上，染色30min。清 水缓缓冲洗，晾干镜检。
白细胞原虫密度计数操作
在显微镜 里按顺序 由上而下、 之字形读 片
显微镜下厚血膜读片顺序
白细胞原虫密度计数方法
× 不需要计数的视野
● 需要进行白细胞、 疟原虫计数的视野 如果该视野无原虫，则 计胞疟原虫密度计数法
● 在厚血膜按视野顺序，从看到第一个疟原虫计数开
●整个染色液配制时间不能少于5个小时
稀释吉氏原液
●原液需经缓冲液（PH7.0）或净水（自
来水、矿泉水 、井水等）稀释后，方 可用于厚薄血片染色。
●吸取原液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物
泛起影响染色效果.
血片染色
用甲醇固定 薄血膜，平 放，等待厚 血膜充分干 燥 （要点：甲 醇不能触碰 到厚血膜）