肺癌相关蛋白N35亚细胞结构定位的研究

ａ 。用 ０２ 的 Ｔ ｔｎＸ一 ０透 化 ２ ｎ加 入 １ ｒｎ ｉ ．％ ｉ ｒｏ １ ０ ５ｍｉ， ％
３ 讨 论
．
目前 ， 肺癌是发病率和病死率增长最快 、 对人类
健康和生命威胁最大 、 病死率居各类肿瘤首位的恶 性肿瘤 ， 故对其发病机制 、 诊断及治疗 的研究广受人 们 的关注 。Ｎ ５是肿瘤相关蛋 白， ３ 本研究将肺腺癌 Ｇ Ｃ８ Ｌ－ ２细胞融合在 Ｎ ５ ， ３ 上 用激光共聚焦显微镜发
性。
细胞铺满瓶底 ２３ ／ 时进行传代 ， 移种于 ９ 孑 板和 ６ ６Ｌ
孔板中培养 ， 细胞密度约 ３× ０ ； １ 细胞铺满孑 底 ２ｌ Ｌ ／ ３
时用吸管轻轻 吸出培养 液 ， 加入 ０ ２ ％戊二 醛， ．５ 在 室温下 固定 ｌ ２ ｉ， Ｂ — ５— ０ ｒ ｎ Ｐ ＳＴ洗 ３次 ， 次 ｌ ａ 每 Ｏ
组基本相 同。抽取正常人静脉血约 ５ｍ ， ｌ放人干燥 的钠抗凝管 中， 中 ３ｍ 放入一次性离 心管 中， 其 ｌ 加 人约 ３ｍ 生理盐水稀释（ ：） 取 ３ｍ 淋巴细胞分 ｌ １１ ； ｌ 离液置入 １ ｌ Ｏｍ 离心管底 部 ， 用尖吸管沿倾斜管壁 缓慢叠加血于分离液面上 （： ） 水平离心 ２ ０ １１ ， ０ｒ ０ ／ ａ ； ｒ ｎ 用尖吸管收集中间白膜层细胞 （ ｉ 单个核细胞） ， 放人另一离心管 中， 用生理盐水洗涤两次 （ ０ １ ０ｒ ５ ／ ｍ ｎ １ ｉ） 将细胞用培养液稀释吹开后移 至 ６ ｉ， ｍ ｎ ； ０ 孔
绩， 但仍有 ７ ％ 的患者 由于就诊时 已属 中晚期 ， ０ 失
去手术机会而治疗效果不满意 ； 如能早期发现 ， 可使 患者的 ５ａ 生存率提高到 ８ ％。因此 ， ０ 肺癌的早期
洗３ ， 次 每次 １ ｉ。②对照组 ： ０ｍｎ 对人胚肺二倍体细 胞、 人皮肤纤维细胞 、 人淋巴细胞的操作步骤与实验
板 中培养 ， 其余步骤同实验组。
２ 结 果
在 肺腺 癌 Ｇ Ｃ８ Ｌ ．２细胞 、 淋 巴细 胞 、 胚 肺 二 人 人 倍 体 细胞 、 人皮 肤 纤 维 细胞 中 ， 通过 相 同 的 固定 、 封
１２ 方法 实验分两组 ： ． ①实验组 ： 将肺腺癌 Ｇ Ｃ Ｌ一 ８ 细胞和杂交瘤 Ｐ５细胞接种 于 １ ％灭活小 牛血 ２ ３ ０
诊断至关重要 。前期研究 表 明＿３， ２Ｊ肺癌 相关蛋 白 ．
Ｎ５ ３ 是一种糖蛋 白分子 ， 可能具有调节细胞生长作 用 。为探讨肿瘤相关蛋 白 Ｎ ５的亚细胞定位及其 ３ 在肿瘤细胞 中的分布和肿瘤细胞周期不 同时期的变 化， 为其 作为特有 的肿瘤 标志物提供依 据 ，０６一 ２０ － ２０ ０７年 ， 我们进行了相关研究。现报告如下 。 １ 材料 与方 法 １ １ 材 料及试 剂 肺 腺癌 Ｇ Ｃ８ ． Ｌ－ ２细胞 ， 交瘤 杂 Ｐ５ ３ 细胞 ， 抗人肺癌单克隆抗体 Ｎ３ ， 一 人胚肺二倍体 ５ 细胞 Ｋ Ｂ ７ 人皮肤纤维 细胞 ， 淋 巴细胞 。异硫 Ｍ １， 人 氰 酸 （ ＩＣ） ＦＴ 羊抗 鼠 ＩＧ 、 二醛 （ｉｍ ｇ 戊 Ｓｇ ａ公 司 ） 穿孔 ， 素 （ ｒｏ ． ０ 上海 生 物工 程公 司 ） Ｄ Ａ探针 ＴｉｎＸ １ ， ｔ ０ ，Ｎ （ ｉ ｙｅ ｓ Ｂｏ ｓ ｍ 公司） 激光共 聚焦扫描显微镜（ ｓｔ ； 德国） 。
清 的完全 １４ ６０培 养 液 中 ， １—２瓶 ， ３ 分 在 ７℃ ５ ％ 饱 和 湿 度 下 培 养 ， ２—３ｄ换 液 １次 。待 Ｇ Ｃ８ 每 Ｌ 一２
闭、 染色及荧 光镜下观 察 ， 现肿瘤相关 蛋 白 Ｎ ５ 发 ３ 存在肺腺癌 Ｇ Ｃ８ Ｌ一 ２细胞 ， 且其 细胞 的有丝分 裂期 定位 于中心粒结构 ； 而人淋巴细胞 、 人胚肺二倍体细 胞 Ｋ Ｂ ７ 人皮肤纤维细胞 的荧光观察结果均呈阴 Ｍ １、
［ 中图分类号 ］ Ｒ ３ ． ７４２
［６ （０８ ３－ ５ － ０２ ６Ｘ ２０ ）８ ０９ ２ ２ ０ ０
研究表明ｌ ， ｌ 余年来肺癌研究取得很大成 － 近 Ｏ 】 Ｊ
加 入 １ １０一 抗 （ ３ ）４ ℃过 夜 。用 吸 管 吸 出一 ：０ Ｎ－ ， ５ 抗 ，Ｂ — Ｐ ＳＴ洗 ３次 ， 次 １ ｎ 加 入 １ ２０ＦＴ 每 ０ｍｉ； ：０ ＩＣ标 记 的羊抗 鼠 ＩＧ（ 抗 ） 室 温 培 育 ｌｈ 再 用 Ｐ ＳＴ ｇ 二 ， ； Ｂ —
期时定位 于中心粒 结构上。提示 Ｎ ５可能是仅存在于肿瘤 细胞并 与其 增殖 活动 密切相 关的重要 肿瘤 细胞生 长调 ３ 节蛋 白 ， 功能可能与肿瘤细胞无 限制增殖活动有关 ， 其 可用 于肿瘤 的早期 诊断 、 疗效评估 、 监测 复发 、 预测转移 和预
后。
［ 关键 词］ Ｎ ５ 肿瘤 相关 蛋 白； ３， 激光共聚焦 ； 亚细胞定位 ； 有丝分裂 ； 中心粒
胞、 人淋巴细胞 、 人胚肺 二倍体细胞 Ｋ Ｂ１ 、 Ｍ 一 人皮 肤纤 维细 胞 的存在 及分 布 ， ７ 及其 在肿 瘤细 胞周期 不 同时期 的变 化 。结果显示 Ｎ ５仅存 在于肺癌细胞 蛋 白中； 细胞 结构 中主要分 布于胞核 ， 瘤细胞 有丝分裂 进入 ～ ３ 在亚 在肿 Ｍ
山东 医药 ２ ０ ０ ８年第 ４ ８卷 第 ３ ８期
肺 癌 相 关 蛋 白 Ｎ ５亚 细 胞 结 构 定 位 的研 究 ３
方 慧 云 陈 敬 国 。 秦秦 ， 王
（ １中山市人 民医院 ， 东 中山 ５ ８０ ２昆 明 医学院 第一 附属 医院） 广 ２ ４３；
［ 摘要 ］ 应用激 光共 聚焦技术观察肿瘤 相关蛋 白 Ｎ ５亚 细胞 结构定 位 ， ３ 测定其 相关抗原 在肺腺癌 Ｇ Ｃ８ Ｌ ．２细