细菌的生化试验
细菌的生化试验
一、枸橼酸盐利用实验 二、吲哚试验 三、硫化氢试验 四、脲酶试验细ຫໍສະໝຸດ 的生化实验简介部分细菌生化试验
细菌的生化反应是指用化学 反应来测定微生物的代谢产 物，生化反应常用来鉴别一 些在形态和其它方面不易区 别的细菌，简单来说，就是 鉴别细菌。因此细菌生化反 应是细菌分类鉴定中的重要 依据之一，检验中常用的生 化反应有：氧化酶试验，触 酶试验，氧化发酵试验等。
吲哚（indole）试验：有些细菌如大肠埃希菌、 变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨 酸生成吲哚（靛基质），经与试剂中的对二甲 基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈红色， 是为吲哚试验阳性。
三、硫化氢试验
有些细菌如变形杆菌等能分解胱氨酸，甲 硫氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢。若遇 醋酸铅或硫酸亚铁，则生成黑色硫化铅或 硫化亚铁。
一、枸橼酸盐利用实验
在以枸橼酸钠为唯一碳源的 培养基，某些细菌（如产气 杆菌）分解枸橼酸钠产生碳 酸盐，并分解铵盐生成氨， 使培养基由酸性变为碱性， 培养基中指示剂溴麝香草酚 蓝（BTB）由淡绿色变为深 蓝色，此为阳性。大肠杆菌 因不能利用枸橼酸盐，此试 验为阴性反应。
二、吲哚试验
吲哚：
1.其外观呈无色或 浅黄色片状结晶。 有特殊气味。露置 空气中或见光色即 变红并树脂化。 2.溶于热水、热乙 醇、乙醚、苯。能 随水蒸气同时挥发。
四、脲酶试验
脲酶又称尿素酶。某 些细菌有脲酶（如变 形杆菌）有脲酶，能 分解培养基中的尿素 产生氨，是其碱性增 加，可用酚红指示剂 检测，呈红色，为阳 性。沙门菌无脲酶， 则为阴性。
实验六细菌的生理生化试验教学
02
酶活性测定是了解细菌代谢途径的重要手段。
03
在实验中，我们对该细菌的几种关键酶进行了活性测定。通过分析酶活性，我 们发现该细菌具有较高的酶活性水平，这表明该细菌具有较为活跃的代谢状态 。这些结果有助于我们进一步了解该细菌的生化特性和代谢途径。
结果总结与讨论
总结
通过对生理和生化试验结果的综合分析，我们对该细 菌的生理生化特性有了更深入的了解。这些结果不仅 有助于我们更好地认识该细菌的生长、繁殖和代谢特 点，还为进一步研究该细菌的生物学特性和应用提供 了重要的参考依据。
糖发酵试验是鉴定细菌生化特性的重要手段。
生化试验一：糖发酵试验
在糖发酵试验中，我们观察到该细菌能够利用不同的 糖类作为碳源进行发酵。通过分析不同糖类的发酵产 物，我们可以了解该细菌对不同糖类的代谢能力和发 酵特性。这些结果对于进一步了解该细菌的生化特性 具有重要的意义。
生化试验结果与分析
01
生化试验二：酶活性测定
生理试验结果与分析
生理试验二：对数生长期的代谢产物
在细菌的对数生长期，其代谢产物具有一定的特点。
在对数生长期，我们观察到该细菌产生了一些具有特殊性质的代谢产物， 这些代谢产物可能对该细菌的生长和繁殖具有重要作用。通过对这些代 谢产物的分析，我们可以更深入地了解该细菌的生理特性。
生化试验结果与分析
实验六细菌的生理生化试验 教学
contents
目录
• 实验目的与简介 • 实验材料与试剂 • 实验步骤与操作 • 实验结果与分析 • 实验结论与建议 • 参考文献与拓展阅读
生理生化 特性，了解不同细菌 在生化反应中的差异。
通过实验结果分析， 能够对细菌进行初步 鉴定。
《细菌与人类健康》
细菌的常用生化试验
本实验主要用于迟缓发酵乳糖菌株
的快速鉴定。
4.七叶苷水解试验
原理 方法：将待检菌接种于七叶苷培养基中，培养后观察结 果。 结果：培养基变为黑色为阳性，不变色者为阴性。 应用：主要用于D群链球菌 与其他链球菌的鉴别，
前者阳性，后者阴性。
5.甲基红试验
原理：肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生 丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥 珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，可使培养基PH值下降至pH4.5 以下，使甲基红指示剂变红。 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，培养2～4d，于培 养基内加入甲基红试剂，立即观察结果。 结果：呈现红色为阳性；橘红色为弱阳性；黄色为阴性。
应用：主要用于鉴别大肠埃希菌与产气肠杆菌，前者为阳性，后者 为阴性。肠杆菌科中沙门菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆 菌属等为阳性，而肠杆菌属、哈夫尼亚菌属则为阴性。
6.V-P试验
原理 方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基中，于 35℃培养48h后加入甲液（6%α-萘酚酒精溶液）和乙液 （40%KOH溶液），振摇。 结果：在数分钟内出现红色为阳性；如无红色出现且于 35℃4h后仍如故者即为阴性。 应用：本试验常与甲基红试验 一起使用，因为前者阳性的细
产碱型
发酵型（产酸）
氧化型
应用Байду номын сангаас主要用于肠杆菌科细菌与非发酵菌的鉴别，前者均为发酵型， 而后者通常为氧化型或产碱型。也可用于葡萄球菌与微球菌间的鉴 别，前者是发酵型，后者是氧化型。
3.β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
细菌的生化试验
细菌的生化试验目的要求了解细菌生化试验的原理、方法及在细菌鉴定中的意义。
仪器及材料温箱、接种环、酒精灯、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、醋酸铅蛋白胨水培养基、柠檬酸盐琼脂斜面培养基、MR试剂、VP试剂、靛基质试剂、大肠杆菌、产气杆菌、沙门氏菌的24h纯培养物等。
方法与步骤细菌的生化试验，就是通过用生物化学的方法分析细菌的代谢产物来鉴别细菌的试验。
下面是几种常用的生化试验。
只有纯培养的细菌才能用来做生化试验。
1．糖发酵试验将细菌无菌操作接种于糖发酵培养基中，于37℃培养24～48h，结果：只产酸(＋)，产酸产气(⊕)，不发酵(-)。
2．甲基红(MR)试验与维－培(VP)试验取菌接种于2支含0.5%葡萄糖蛋白胨水培养基中，置37℃温箱培养4d，分别作甲基红和维－培试验。
（1）甲基红试验取上述培养基一支，加入甲基红试剂(甲基红0.1g溶于95%酒精300ml中)5～6滴，液体呈红色者为阳性，黄色者为阴性，橙色者为可疑。
（2）维－培试验取上述培养基一支，先加维－培甲液(6%α－甲萘酚酒精溶液)3ml，再加入维－培乙液(40%氢氧化钾水溶液)1ml，混和后静置于试管架内观察2～4h，凡液体呈红色者为阳性，不变色者为阴性。
3．靛基质试验有些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸产生靛基质(吲哚)，遇相应试剂而呈红色。
试验时，取菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养2～3d；于培养基中加入戊二醇或二甲苯2～3ml，摇均，静置片刻后，沿试管壁加入靛基质试剂(配法：对二甲基氨基苯甲醛1.0g，95%酒精95ml溶解后，再加浓盐酸50ml)2ml，若能形成玫瑰靛基质而呈红色，则为阳性反应，不变色为阴性反应。
4．HS试验某些细菌能分解培养基中含硫氨基酸如半胱氨酸等产生硫化氢，硫化2氢遇醋酸铅或硫酸亚铁则形成黑色的硫化铅或硫化亚铁。
用接种针取菌穿刺于含有醋酸铅或硫酸亚铁的琼脂培养基中，37℃培养4d，凡沿穿刺线或穿刺线周围呈黑色者为阳性，不变色者为阴性。
细菌的常用生化试验
应用：在革兰阳性球菌中只有金黄
色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌 科中沙雷菌和变形杆菌产生此酶，
故本试验可用于细菌的鉴别。
7.凝固酶试验
原理
由于细菌各自具有不同的酶系统，对糖的分解能 力不同，有的能分解某些糖产生酸和气体，有的 虽能分解糖产生酸，但不产生气体，有的则不分 解糖。据此可对分解产物进行检测从而鉴别细菌。
具体试验有：①糖类发酵试验；②葡萄糖代谢类 型鉴别试验；③七叶苷水解试验；④淀粉水解试 验；⑤甲基红试验；⑥V-P试验；⑦β-半乳糖苷 酶试验（ONPG试验）。
方法：从克氏双糖铁培养基上取菌，于0.25ml无菌生理盐水中制成 菌悬液，加入一滴甲苯并充分振摇，使酶释放。将试管置37℃水浴 5min，加入0.25ml ONPG试剂，水浴20min～3h观察结果。
结果：菌悬液呈现黄色为阳性反应，一般在20～30min内显色。 应用：迅速及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 试验为阳性，而不发酵乳糖的细菌为阴性。
四、酶类试验
1.氧化酶试验
原理：氧化酶（细胞色素氧化酶）是细胞色素呼吸酶系 统的最终呼吸酶。
方法：常用方法有三种； 菌落法：直接滴加试剂于被检菌菌落上。 滤纸法：取洁净滤纸一小块，沾取菌少许，然后加试剂。 试剂纸片法：将滤纸片浸泡于试剂中制成试剂纸片，取菌涂于试剂纸上。
结果：细菌在与试剂接触10秒内呈深紫色，为阳性。为保证结果的 准确性，分别以铜绿假单胞菌和大肠埃希菌作为阳性和阴性对照。
2.吲哚（靛基质）试验
原理
方法：将待检菌接种于蛋白胨水培养基中，于35℃培养 24～48h，沿试管壁慢慢加入吲哚试剂。
结果：于两者液面接触处出现红色为阳性，无色为阴性 。
细菌生化试验的主要用途
细菌生化试验的主要用途细菌生化试验是一种基础科学研究手段，主要用于研究和解析细菌的生物学特性、代谢途径、遗传机制等方面的问题。
细菌是一类存在于自然界中广泛分布的微生物，其研究对于理解细胞生物学、微生物学、生态学以及人类健康与疾病等领域具有重要的意义。
以下将从不同的方面介绍细菌生化试验的主要用途。
1. 细菌代谢研究：细菌代谢研究是细菌生化试验的重要应用之一。
通过细菌代谢试验，可以了解细菌对不同碳源、氮源和其他营养物质的利用能力。
通过测定细菌在不同代谢途径下的产物生成情况，可以推测细菌利用的代谢途径以及相关的酶系统。
此外，细菌代谢试验还可以研究细菌在特定环境条件下的生长情况，探究不同因素对细菌生长和代谢的影响。
2. 细菌酶活性分析：细菌生化试验还可以通过测定细菌酶的活性来研究细菌的特性。
利用研究细菌酶的催化反应过程，可以了解细菌代谢途径中不同酶的功能和调控机制。
例如，利用亚硝酸还原酶活性分析方法，可以判断细菌是否具有还原亚硝酸的能力，进而推测其可能的氮代谢途径和氮源选择性。
3. 细菌毒性和药敏性研究：细菌生化试验对于研究细菌的毒性和对抗微生物药物的敏感性也具有重要意义。
通过测定细菌对抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，可以评估抗生素对细菌的杀菌效果，并对细菌对抗生素的耐药性进行研究。
此外，细菌生化试验还可用于评估不同物质对细菌的毒性作用，如常用消毒剂、药物和化学试剂等。
4. 细菌遗传机制研究：细菌生化试验还可用于研究细菌的遗传机制，如水平基因转移和垂直基因转移等。
通过构建不同的遗传操作，如突变、基因敲除和表达等，可以了解细菌基因对细菌生长、代谢和适应环境的调控作用。
此外，通过分析细菌基因和基因产物的表达情况，还可以探究细菌的表观遗传调控机制和信号传导系统。
5. 细菌生态学研究：细菌生长和代谢的研究对于了解细菌在环境中的角色和功能具有重要意义。
通过细菌生化试验，可以探究细菌在不同环境条件下的适应性和竞争优势。
细菌的生化实验报告
细菌的生化实验报告细菌的生化实验报告细菌是一类微小而广泛存在于自然界中的生物体，它们在地球上的生物圈中起着重要的作用。
通过对细菌的生化实验，我们可以更深入地了解它们的生物特性和功能。
本文将介绍一系列细菌的生化实验，包括细菌的酶活性、代谢产物以及对环境的影响等方面。
实验一：酶活性研究酶是细菌体内的重要生物催化剂，它们参与了多种代谢过程。
我们可以通过测定细菌体内特定酶的活性来了解其代谢能力。
以大肠杆菌为例，我们可以使用酶活性检测试剂盒来测定其β-半乳糖苷酶活性。
实验结果显示，大肠杆菌中β-半乳糖苷酶活性较高，这表明其在代谢乳糖方面具有较强的能力。
实验二：代谢产物分析细菌的代谢过程会产生各种化合物，这些化合物可以作为细菌代谢的指标。
我们可以通过气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）来分析细菌培养液中的代谢产物。
以枯草杆菌为例，通过GC-MS分析，我们发现其培养液中存在着丰富的有机酸和氨基酸，这些代谢产物反映了枯草杆菌的代谢途径和能力。
实验三：抗生素敏感性测试细菌对抗生素的敏感性是临床治疗中的重要指标。
我们可以通过纸片扩散法来测试不同细菌株对不同抗生素的敏感性。
实验结果显示，金黄色葡萄球菌对青霉素敏感，而对庆大霉素耐药。
这些结果对于合理使用抗生素和治疗细菌感染具有重要的指导意义。
实验四：细菌对环境的影响细菌在自然界中广泛存在，它们对环境有着重要的影响。
我们可以通过测定细菌在不同环境条件下的生长情况来研究其对环境的适应性。
以耐盐菌为例，我们可以将其分别培养在不同盐浓度的培养基中，观察其生长情况。
实验结果显示，耐盐菌在高盐浓度环境中生长较好，这表明其对高盐环境具有较强的适应能力。
细菌的生化实验为我们深入了解细菌的生物特性和功能提供了重要的手段。
通过研究细菌的酶活性、代谢产物以及对环境的影响，我们可以更好地理解细菌的代谢途径、生态角色以及与人类健康的关系。
这些实验结果对于开发新的抗菌药物、改良环境治理策略以及预防细菌感染具有重要的指导意义。
细菌的生理生化反应
呼吸酶类试验——细胞色素氧化酶试验
原理：细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统旳最终呼吸 酶。具有氧化酶旳细菌，首先使细胞色素C氧化，再由氧化型 细胞色素C使对苯二胺氧化，生成有色旳醌类化合物
培养基：丙二酸盐培养基 措施：菌落法、滤纸法、试剂纸片法。前两者挥霍试剂， 后者节省 成果：10秒内呈深紫红色为阳性 意义：肠杆菌科细菌与假单胞菌旳区别，前者阴性，后者 多阳性奈瑟菌属、莫拉菌属也为阳性
糖酵解试验
大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌
葡萄糖
+
乳糖
-
-
葡萄糖：
-
糖酵解试验
麦芽糖：
-
+
+
糖酵解试验
甘露醇：
鼠李糖：
-
+
+ -
碳水化合物的代谢试验——氧化-发酵试验（O/F）
原理：细菌分解葡萄糖旳过程中，必须有分子氧参加旳， 称为氧化型；能够进行无氧降解旳，称为发酵型；不分解葡萄 糖旳称为产碱型
成果：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中旳指示剂 呈酸性反应。若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象
意义：肠杆菌科尤为主要
糖酵解试验
根据细菌分解利用糖能力旳差别体现出是否产酸产气 作为鉴定菌种旳根据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加 入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2下列呈黄 色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂旳颜色变 化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小 管观察。
呼吸酶类试验——硝酸盐还原试验
意义：肠杆菌科为阳性；铜绿、嗜麦芽能 产生氮气；链球菌肠球菌阴性，葡萄球菌阳性
注意：若加入试剂后无反应，可能是①硝 酸盐没有被还原，试验阴性②硝酸盐被还原为 氨和氮等其他产物而致假阴性，此时要加入少 许锌粉，若出现红色则为阴性，不产生红色则 为假阴性，实际为阳性
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细菌的生化实验
一、糖的发酵
培养基：糖培养基
PH7.6的蛋白胨水溶液（蛋白胨1%）（氯化钠0.5%）适量糖，1% 1.6%澳甲酚紫酒精溶液0.1% 分装10*100mm小试管，每管3-41^,内置一密闭端向上的发酵管， 10磅10分灭菌。
方法: 用接种环取少量纯培养物接种于培养基中，37摄氏度培养18-24小时后观察，一般观察2-3天。
结果: 产酸则培养基由兰紫变黄，用“ + ”表示。
产酸又产气，则培养基变黄，小管内有气泡，用“。
”表示，无变化则培养基仍为兰紫色，管内也无气泡，用“-”表示。
原理: 指示剂澳甲酚紫的指示范围为PH5.2-6.8（黄-紫）。
每一种糖（醇）培养基内只含一种糖（醇）的成分，接种进去的细菌若能发酵这种糖，则可产生乳酸，使PH下降，培养及就由兰紫色变为黄色，如果同时还产生CO2、H2、CH4等气体，则小管内留有气泡，如果不能发酵分解这种糖，则培养及不变色也无气泡。
培养基：蛋白胨水蛋白胨1%
氯化钠0.5%
蒸馏水适量
其中的蛋白胨最好选用含色氨酸较多的多价蛋白胨。
每支小试管分装3-4ml, 10磅10分灭菌。
试剂：（欧立希氏试剂）
对二甲基氨基苯甲醛 1g
纯乙醇95ml
浓盐酸20ml
以上物品依次混合溶解
方法：
接种细菌于培养基中，37摄氏度培养24-48小时后，取出加乙醚约
0.7cm厚，塞紧棉塞后摇震，使乙醚与培养物混匀，静置于试管架内
数分钟，待乙醚浮至培养基表面，打开棉塞，沿试管壁慢慢加入靛基
质试剂4-5滴，不要摇。
结果：
乙醚层现红色为阳性，以“ + ”表示，不变者为阴性，以“-”表示。
原理：
细菌若有色氨酸酶，就能分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质（吲哚）。
靛基质无色，但遇到对二甲基氨基苯甲醛，则可以生成红色的靛基质，以肉眼可见。
三、甲基红实验：
培养及：葡萄糖蛋白胨水（PH7.4）
葡萄糖0.5%
磷酸氢二钾0.5%
蛋白胨0.5%
蒸馏水适量
加热溶解后，分装小试管，每管3-4ml，10磅10分灭菌
试剂：0.1g甲基红溶于300ml95%乙醇中，加蒸馏水至500ml
方法：
接种细菌于培养液中，37摄氏度培养2-4天，取出加M、R试剂3-4 滴。
结果：红色者为阳性，以“ + ”表示，桔黄色者为阴性，以“-”表示。
原理：
甲基红是一种指示剂，其变色范围PH4.4-6.2 （红-黄）。
若细菌产酸量多，则培养PH下降，当加进M、R试剂时变为红色；若细菌产酸量少，或产酸后，又不断转化为其他物质（醇、醛、酮、气体和水）时，则PH 变化不大，培养基为桔黄色。
四、％P实验
培养及：同M、R实验
试剂：
甲液6%a-萘酚酒精溶液
乙液 40%KOH溶液
方法：接细菌于培养基中，37摄氏度培养2天后，取出加1滴管甲液和一滴管乙液，摇匀，37摄氏度放置30分钟。
结果：液体呈现红色者为阳性，以“ + ”表示，不变色者为阴性，以“-”表示。
原理：某些细菌能分解葡萄糖，产生丙酮酸，并将丙酮酸脱羧变为中性乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被空气中的氧气氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨水中的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色化合物为V-P试验阳性，a-萘酚的作用是加速反应进行。
五、枸橼酸盐利用实验
培养基：西蒙氏（SIIMMONS）枸橼酸盐培养基
磷酸二氢铵0.1g
硫酸镁 0.02g
磷酸二氢钾0.1g
枸橼酸钠（柠檬酸三钠）0.5g
氯化钠0.5g
蒸馏水100ml
PH 6.8
琼脂2g
10磅10分
1%澳麝香草酚兰1ml
混匀，分装小试管，每管4-5ml,10磅10分灭菌，趁热摆成斜面。
方法：
接种细菌于培养基斜面上37摄氏度培养24小时后观察。
结果：
斜面上有菌苔出现，培养基颜色变为深蓝色，为枸橼酸盐利用试剂阳性，以“+”表示，斜面上细菌不生长，无菌苔出现，培养基不变色为阴性，以“-”表示。
原理：指示剂澳麝香草酚兰的指示范围为PH6.0-7.6 （黄-兰）。
枸橼酸盐培养基中仅含有唯一的有机盐，即枸橼酸盐。
一般细菌能利用磷酸二氢铵作为氮源，但不一定能分解枸橼酸盐而去的碳源。
可分解枸橼酸盐取得碳源者，不仅能在本培养基上生长，形成菌苔，而且有碳酸盐生成，是培养基转为碱性，培养基由绿色变为深蓝色。
六、硫化氢实验
培养基：醋酸铅培养基
普通琼脂200ml
硫代硫酸钠0.5g
15磅20分灭菌，待冷至55摄氏度左右，灭菌加入8磅15分灭菌的10%醋酸铅溶液1ml，混匀，立即无菌分装，直立静止待凝。
方法：按东西南北四个方向将细菌穿刺接种于培养基与试管壁之间，37摄氏度培养24小时后观察结果。
穿刺部位呈褐黑色者为阳性（+），不变色者为阴性（-）。
原理：
某些细菌能分解胱氨酸等含硫氨基酸，生成硫化氢。
硫化氢与铅盐（铁盐，如硫酸亚铁），则形成黑褐色的硫化铅（硫化铁）沉淀物。
黑褐色
沉淀物愈多，表示生成的硫化氢量亦愈多。
硫化氢实验用的培养基
中含有硫代硫酸钠，是一种还原剂，能保持环境使形成的硫化氢不再被氧化。
七、尿素分解实验
培养基：Christensen氏尿素琼脂培养基
蛋白胨0.1g
氯化钠0.5g
磷酸氢二钾0.2g
蒸馏水100ml
PH7，4
琼脂 2g
10磅10分钟
0.6%酚红 0.2ml
10%葡萄糖1ml
20%尿素 1ml
混合，分装小试管，每管4-5ml，8磅15分灭菌后摆斜面
方法：
接种细菌于培养基斜面上，37摄氏度培养18-24小时
结果：
培养基呈红色者为阳性，以“+”表示。
原理：
酚红指示剂的指示范围为PH6.8-8.4 （黄-红）。
具有尿素分解酶的细菌，能分解尿素形成大量的氢，是培养基的碱度上升，培养基变为红色。
八、硝酸盐还原实验
培养基：硝酸钾蛋白胨水
蛋白胨1%
硝酸钾0.1%
蒸馏水适量
PH7.4
分装小试管，每管3-4ml,15磅15分灭菌。
试剂：
甲液：对位氨基苯磺酸0.8g
5N醋酸溶液100ml
乙液：a-萘胺0.5g
5N醋酸溶液100ml
方法：接种细菌后，37摄氏度培养24-48小时，沿管壁加入甲液、乙液各2-3滴，立即观察。
结果：
培养基立即呈现红色者为阳性，以“+”表示。
原理：
某些细菌能将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐遇醋酸可变成亚硝酸，亚硝酸遇对位氨基苯磺酸重氮苯磺酸，重氮苯磺酸遇a-萘胺生成红色的N-a-萘胺偶氮苯磺酸。