细胞培养实验报告
细胞的原代培养实验报告
细胞的原代培养实验报告一、实验目的细胞原代培养是指从机体取出细胞、组织或器官后，通过机械或酶学方法分散成单个细胞，在体外进行培养的过程。
本次实验的目的是掌握细胞原代培养的基本技术和方法，观察细胞在体外的生长和形态变化，为进一步的细胞生物学研究奠定基础。
二、实验原理细胞原代培养的关键在于保持细胞的活性和完整性，同时提供适宜的生长环境。
通常采用酶消化法或组织块培养法来获取单细胞或细胞团。
在培养过程中，细胞需要充足的营养物质、适宜的温度、pH 值和气体环境，以促进细胞的生长和分裂。
三、实验材料1、实验动物：新生小鼠2、试剂和培养基：DMEM 培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、EDTA、青霉素链霉素溶液、PBS 缓冲液等3、实验器材：超净工作台、CO₂培养箱、倒置显微镜、离心机、移液器、培养瓶、培养皿、手术器械等四、实验步骤1、取材处死新生小鼠，用 75%酒精消毒其腹部皮肤。
用手术剪剪开腹部皮肤和肌肉，取出肝脏组织，置于预冷的 PBS缓冲液中。
2、组织处理将肝脏组织转移至培养皿中，用 PBS 缓冲液冲洗 2-3 次，去除血液和杂质。
用眼科剪将组织剪成 1-2mm³的小块。
3、酶消化将组织小块转移至离心管中，加入适量的胰蛋白酶EDTA 溶液，置于 37℃水浴中消化 15-20 分钟，期间每隔 5 分钟轻轻振荡一次。
消化结束后，加入等量的含血清的培养基终止消化，用移液器轻轻吹打制成细胞悬液。
4、细胞过滤将细胞悬液通过 200 目滤网过滤，去除未消化的组织块和细胞团。
5、细胞计数和接种吸取少量细胞悬液，加入台盼蓝染液，在显微镜下计数活细胞数。
根据细胞计数结果，将细胞以适当的密度接种于培养瓶或培养皿中，置于 CO₂培养箱中培养。
6、培养和观察培养 24 小时后，在倒置显微镜下观察细胞的贴壁情况。
每隔 2-3 天更换一次培养基，观察细胞的生长和形态变化。
五、实验结果1、细胞贴壁情况培养 24 小时后，大部分细胞已贴壁，呈圆形或多边形，贴壁细胞周围有光晕。
光照培养细胞实验报告
一、实验目的1. 掌握光照培养细胞的基本操作方法。
2. 了解光照对细胞生长和发育的影响。
3. 分析不同光照条件对细胞生理特性的影响。
二、实验原理细胞培养是生物学研究的重要手段之一，通过模拟生物体内的生理条件，在人工培养条件下使细胞生长、繁殖或传代。
光照是影响细胞生长和发育的重要因素之一，适量的光照可以促进细胞的生长和分化，而过量的光照或黑暗环境可能抑制细胞生长，甚至导致细胞死亡。
本实验旨在探究不同光照条件下对细胞生长、形态和生理特性的影响，为后续研究提供实验依据。
三、实验材料与仪器1. 材料：小鼠胚胎成纤维细胞、细胞培养瓶、细胞培养板、细胞培养液、显微镜、细胞计数器、光照培养箱、超净工作台等。
2. 仪器：生物显微镜、荧光显微镜、细胞培养箱、细胞计数器、离心机、高压蒸汽灭菌器等。
四、实验方法1. 细胞培养：将小鼠胚胎成纤维细胞接种于细胞培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养，待细胞贴壁生长至80%左右时，进行实验分组。
2. 实验分组：将细胞分为四组，分别标记为A组、B组、C组和D组。
A组为对照组，置于正常光照条件下培养；B组为低光照组，置于光照强度为1000lx的培养箱中培养；C组为高光照组，置于光照强度为5000lx的培养箱中培养；D组为黑暗组，置于黑暗环境中培养。
3. 光照培养：将各实验组细胞置于相应条件下培养，每隔24小时观察细胞生长情况，记录细胞数量和形态变化。
4. 数据收集：采用细胞计数器对各组细胞进行计数，记录细胞数量；采用生物显微镜观察细胞形态变化。
5. 数据分析：对实验数据进行统计分析，比较各组细胞生长和形态变化差异。
五、实验结果1. 细胞数量：经过48小时、72小时和96小时培养，A组细胞数量显著高于其他三组，B组次之，C组和D组细胞数量明显减少。
2. 细胞形态：A组细胞生长良好，细胞形态规则，细胞器丰富；B组细胞生长较快，但部分细胞出现形态异常；C组细胞生长缓慢，细胞器较少，部分细胞出现凋亡现象；D组细胞生长停滞，细胞器严重受损，大部分细胞死亡。
实验报告细胞培养
一、实验目的1. 了解细胞培养的基本原理和方法。
2. 掌握哺乳动物细胞原代培养和传代培养的操作步骤。
3. 学习细胞培养过程中无菌操作的重要性。
二、实验原理细胞培养是指从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生长、繁殖或传代的过程。
细胞培养技术具有直接观察活细胞、避免体内实验的复杂因素、提供大量生物性状相同的细胞等优点，在生物学研究、医学等领域中得到广泛应用。
细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养是指直接从体内获取的组织细胞进行首次培养；传代培养是指原代培养的细胞增殖达到一定密度后，将其分散后转移到另一个或几个容器中扩大培养。
传代培养的累积次数即为细胞的代数。
三、实验用品1. 仪器：显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、移液器、离心机、恒温培养箱、超净工作台等。
2. 器材：胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM培养基、双抗、无菌水、75%酒精、无菌滤纸等。
3. 试剂：细胞培养液、胰蛋白酶消化液、细胞计数板、染色液等。
四、实验步骤1. 原代培养（1）取动物组织样本，用胰蛋白酶消化处理，得到细胞悬液。
（2）将细胞悬液加入培养皿，放入37℃恒温培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，待细胞贴壁生长后，用移液器将细胞分散，转移至另一个培养皿中。
（4）重复步骤（3），直至细胞增殖到一定密度。
2. 传代培养（1）取培养皿中的细胞，用胰蛋白酶消化处理，得到细胞悬液。
（2）将细胞悬液加入培养皿，放入37℃恒温培养箱中培养。
（3）观察细胞生长情况，待细胞贴壁生长后，用移液器将细胞分散，转移至另一个培养皿中。
（4）重复步骤（3），直至细胞增殖到一定密度。
3. 细胞计数（1）取一定量的细胞悬液，加入细胞计数板。
（2）在显微镜下观察细胞，计算细胞数量。
（3）根据细胞数量和体积，计算细胞密度。
4. 细胞染色（1）取一定量的细胞悬液，加入染色液。
（2）在显微镜下观察细胞，观察细胞形态和染色情况。
五、实验结果与分析1. 原代培养（1）细胞在培养皿中贴壁生长，呈梭形。
原代细胞培养实验报告
原代细胞培养实验报告实验名称：原代细胞培养实验实验目的：1.掌握原代细胞培养的基本技术和方法；2.观察和记录原代细胞在体外培养过程中的生长和变化；3.学习和探究细胞培养对细胞形态、功能和特性的影响。
实验材料和方法：1.实验材料：原代细胞，培养基，培养皿，培养瓶，培养箱等；2.实验方法：a.准备工作：消毒实验区域，准备适宜的培养条件；b.培养器皿预处理：将培养皿和培养瓶加热至高温，使其表面杀菌；c.细胞移植：用适量的培养基将原代细胞移植至培养皿或培养瓶中；d.细胞培养：将细胞培养在恒温恒湿的培养箱中，定期观察和记录细胞的生长情况；e.细胞传代：当细胞达到一定密度时，用消化液将细胞从原培养皿中剥离，并转移到新的培养皿中，促进细胞的继续生长和繁殖。
实验结果与分析：在进行原代细胞培养实验的过程中，我们发现原代细胞在培养基中可以维持一定的形态和生物活性。
经过一段时间的培养，细胞开始出现贴壁生长，并形成单层密集的细胞群。
这时，细胞的数量明显增加，可见其细胞分裂和增殖的效果。
细胞形态也逐渐变得规整，细胞质较为丰满，细胞核染色质着色精细。
随着培养的时间推移，细胞的代谢活动逐渐增强，细胞数量持续增加。
细胞形态和功能逐渐分化，并出现特定的细胞类型，如心肌细胞、肝细胞等。
这表明原代细胞在体外培养的过程中，依然能够保持其特定的细胞类型和功能特性。
然而，我们也发现在长时间的培养过程中，细胞的生长速度逐渐放缓，甚至停滞。
细胞形态也开始出现变异和退化，如细胞形状异常、质量变差等。
这可能是由于细胞的老化和突变导致，同时也与培养条件和传代的次数有关。
结论：通过本次实验，我们成功地进行了原代细胞的培养，并观察到了细胞在体外培养过程中的生长和变化。
我们发现原代细胞能够在适宜的培养条件下，维持其形态和功能的稳定性，并且能够分化成特定的细胞类型。
然而，在长时间的培养过程中，细胞的生长速度逐渐放缓，而细胞的形态也逐渐出现变异和退化。
因此，在进行原代细胞培养时，需要合理控制培养条件和适时进行细胞传代，以保持细胞的生长和特性。
细胞培养实验报告
动物细胞造就一.实验目标.1.控制无菌操纵技巧.2.控制原代和传代细胞造就.3.控制细胞冷冻和苏醒技巧.4.懂得造就成纤维细胞的形态.二.实验道理.将动物机体的组织从机体中掏出,经各类酶（经常运用胰蛋白酶）.螯合剂（经常运用EDTA）或机械办法处理,疏散成单细胞,置适合的造就基中造就,使细胞得以生计.发展和滋生,这一进程称原代造就.细胞在造就瓶长成致密单层后,已根本上饱和,为使细胞能持续发展,同时也将细胞数目扩展,就必须进行传代（再造就）. 传代造就也是一种将细胞种保管下去的办法.同时也是运用造就细胞进行各类实验的必经进程.悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才干分瓶.对具有移动特征的稳固细胞系或细胞株进行长期保管,一方面可以作为细胞研讨的实验材料,另一方面可以做细胞成品的临盆材料.今朝普遍运用的细胞保管办法是低温冷冻保管法,.细胞的冷冻保管的原则是慢冻快融,如许做是为了防止细胞因为冷冻进程中产生了冰晶而产生细胞决裂.三.实验器材及药品.器材：怀孕的小白鼠.造就箱.造就瓶.造就皿.移液器.眼科剪.镊子.酒精灯.离心计心情.水浴锅.倒置显微镜.CO2造就箱.超净工作台.离心管.高压灭菌锅.试管架等.药品：小牛血清.DMEM合成造就基.抗生素.DMSO冷冻剂.胰酶.PBS 缓冲液等.四.实验操纵.1.消毒灭菌.将实验所需用到的对象（如枪头.造就皿.眼科剪.镊子以及每小我的实验服等）分散灭菌.烘干.配制75%的酒精以备实验时所需.2.造就基的配制.分别取10ml的小牛血清.90ml的DMEM合成造就基,将两种造就基混杂在一路,再向个中参加1ml的抗生素,吹打混匀就得到了细胞造就的造就液.3.原代造就.（1）.预备.将实验进程中会用到的对象以及药品全体放在超净工作台长进行紫外消毒灭菌.实验开端前带好乳胶手套,用酒精敌手进行消毒.将怀孕的小白鼠放在酒精中杀逝世,掏出子宫内的胚胎组织.（2）.剪切与消化.将胚胎组织放于平板中,用眼科剪将组织块剪碎,剪得越碎越好.将剪碎的组织块放于离心管中,参加大约200µl 的胰酶进行消化.也可将其置于37度恒温箱中进行消化.（3）.分别细胞.消化到一准时光时,假如离心管中的溶液中消失了显著的污浊,可用吸管吸出少许消化液在镜下不雅察,如组织已疏散成细胞团或单个细胞,则应当参加与胰酶等量的造就液终止消化.离心管于离心计心情中离心,弃上清液,得到疏散的细胞.℃恒温CO2箱造就,瓶口极少拧的松一点.4.传代造就.（1）.倒置显微镜下不雅察细胞的形态.倒置显微镜下不雅察造就细胞的长势及密度,依据细胞密度决议传代的稀释倍数.（2）.收集原代造就的细胞.吸出造就瓶中的旧造就液,并用PBS 冲洗两遍.然后向造就瓶中参加200µl的胰酶进行消化.消化一段时光后用设置装备摆设好的造就液等比例终止消化.然后离心,收集到原代造就的细胞.（3）.传代细胞的造就.向离心管内参加大约7—8ml的造就液,吹打混匀.将造就液转移到造就瓶中,置于37度恒温CO2造就箱中造就.造就1—2天后于显微镜下不雅察细胞的形态.5.细胞冷冻保管.（1）.收集细胞.吸出造就瓶中的旧造就液,并用PBS冲洗两遍.然后向造就瓶中参加200µl的胰酶进行消化.消化一段时光后用设置装备摆设好的造就液等比例终止消化.然后离心,收集细胞.（2）.冷冻.向离心管中参加必定量的造就液以及10%—20%的DMSO冷冻液,吹打混匀并转移到冷冻管中.先将冷冻管在4度冰箱中放置10min,再放在—70度的冰箱中冷冻留宿.（3）.苏醒.将冷冻的细胞掏出来后,连忙放在40度水浴中,使其快速熔化.并对熔化的细胞进行进一步的不雅察.五.实验成果.传代细胞传代第一次换液细胞原代第一次的细胞原代第四天的细胞冷冻苏醒的细胞六.实验剖析与评论辩论.从本次实验的图片可以看出来,实验做得还算成功,细胞根本上没有被污染.在做的进程中必定要异常留意无菌操纵,这是决议实验成功的症结身分.在做原代造就的时刻,必定要将小鼠胚胎的组织块剪得够碎,确保在用胰酶消化后可以得到分别的单个细胞.在做传代造就时,要掌控好胰酶的消化时光.冷冻苏醒时,必定要按照步调进行冷冻,遵守慢冻速溶的原则.。
传代细胞培养实验报告单
实验名称：传代细胞培养实验实验日期：2023年4月10日实验者：张三一、实验目的1. 掌握哺乳动物细胞原代培养与传代培养的基本操作过程。
2. 熟悉细胞传代过程中所需的无菌操作技术。
3. 了解细胞传代对细胞生物学研究的重要性。
二、实验原理细胞培养是一种在人工条件下模拟体内生理环境，使细胞生长、繁殖或传代的技术。
细胞培养技术可以让我们直接观察活细胞，避免体内实验的复杂因素，为生物学研究提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象。
细胞培养分为原代培养和传代培养。
原代培养是指从生物体中取出组织或细胞进行首次培养，而传代培养则是在原代培养基础上，将细胞从一个容器转移到另一个容器中扩大培养。
传代培养的累积次数即为细胞的代数。
三、实验材料1. 培养基：DMEM培养基（含10%胎牛血清、1%青链霉素双抗）2. 细胞：小鼠成纤维细胞3. 工具：超净台、移液器、吸管、培养皿、离心机、显微镜、无菌操作箱、消毒剂等四、实验步骤1. 培养基配制：按照说明书配制DMEM培养基，加入胎牛血清和青链霉素双抗。
2. 细胞复苏：将冻存细胞从-80℃冰箱取出，放入37℃水浴中解冻，轻轻摇匀后移入离心管，1000 rpm离心5分钟，弃上清，加入适量DMEM培养基重悬细胞。
3. 细胞接种：将重悬细胞接种于培养皿中，放入培养箱中培养，保持细胞密度在80%-90%。
4. 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，进行细胞传代。
具体操作如下：a. 吸除旧培养基，用PBS缓冲液清洗细胞2-3次。
b. 加入适量胰蛋白酶，37℃水浴消化细胞，显微镜下观察细胞变圆、收缩，待大部分细胞脱离培养皿底面时，立即终止消化。
c. 加入适量DMEM培养基终止消化，用吸管轻轻吹打细胞，使其分散均匀。
d. 将细胞接种于新的培养皿中，放入培养箱中继续培养。
5. 细胞观察：在显微镜下观察细胞生长状态，记录细胞形态、生长速度等指标。
五、实验结果1. 细胞在培养皿中生长良好，细胞形态正常，呈梭形。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告一、实验目的本次细胞培养实验旨在掌握细胞培养的基本技术和方法，了解细胞在体外生长和增殖的规律，为进一步的细胞生物学研究和应用奠定基础。
二、实验原理细胞培养是指在体外模拟体内环境，将细胞从机体中取出，在无菌、适当温度和一定营养条件下，使其生长、繁殖并维持其结构和功能的一种技术。
细胞培养的关键在于提供适宜的生长环境，包括培养基、血清、气体环境、无菌条件等。
三、实验材料与设备1、细胞株：选用了_____细胞株。
2、培养基：使用了_____培养基，添加了_____血清和_____抗生素。
3、实验设备：超净工作台、CO₂培养箱、倒置显微镜、离心机、移液器等。
4、试剂：胰蛋白酶、EDTA 等。
四、实验步骤1、细胞复苏从液氮罐中取出冻存的细胞管，迅速放入 37℃水浴中，轻轻摇动使其快速融化。
将融化的细胞悬液转移至离心管中，加入适量的培养基，离心 5 分钟（＿____转/分钟）。
弃去上清液，加入新鲜的培养基重悬细胞，将细胞接种到培养瓶中，置于 CO₂培养箱中培养。
2、细胞传代当细胞生长至汇合度达到 80% 90%时，进行传代培养。
吸出原培养基，用 PBS 缓冲液冲洗细胞 2 次。
加入适量的胰蛋白酶EDTA 消化液，置于培养箱中消化2 3 分钟。
在倒置显微镜下观察细胞形态，当细胞变圆、脱壁时，加入适量的含血清培养基终止消化。
轻轻吹打细胞，使其形成单细胞悬液，按照 1:2 或 1:3 的比例进行传代接种，置于 CO₂培养箱中继续培养。
3、细胞计数采用血球计数板对细胞进行计数。
吸取适量的细胞悬液，加入等体积的台盼蓝染液，混匀。
取少量混合液加入血球计数板的计数室，在显微镜下计数。
4、细胞形态观察在倒置显微镜下，每天观察细胞的形态、生长状态和密度。
五、实验结果1、细胞复苏结果细胞复苏后，经过 24 小时的培养，大部分细胞贴壁生长，形态良好，表明复苏成功。
2、细胞传代结果细胞经过传代培养后，能够正常生长和增殖，形态和生长速度与原代细胞相似。
培养细胞计数实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞培养的基本原理和方法。
2. 学习使用血球计数板对培养细胞进行计数。
3. 了解细胞计数在细胞生物学研究中的应用。
二、实验原理细胞计数是细胞生物学研究中常用的一种方法，通过计数一定体积内细胞的数量，可以了解细胞的生长状况、细胞密度等参数。
本实验采用血球计数板对培养细胞进行计数，血球计数板是一种特殊的载玻片，其上刻有网格，用于计算细胞数量。
三、实验材料1. 培养细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）。
2. 血球计数板。
3. 试管、吸管、微量移液管。
4. 培养基：DMEM培养基，含10%胎牛血清。
5. 计数显微镜。
四、实验步骤1. 准备工作：将培养细胞置于37℃、5%CO2的培养箱中培养至对数生长期。
2. 制备细胞悬液：取适量培养细胞，用吸管轻轻吹打，使其成为细胞悬液。
3. 稀释细胞悬液：将细胞悬液稀释至适当浓度，以使细胞在计数板上分布均匀。
4. 计数：将稀释后的细胞悬液滴入血球计数板的计数室中，于显微镜下观察并计数。
5. 计算细胞密度：根据计数结果，计算每个大方格内的平均细胞数，进而计算整个细胞悬液的细胞密度。
五、实验结果1. 培养细胞生长状况良好，细胞形态正常。
2. 通过计数，得到每个大方格内的平均细胞数为N个。
3. 计算得到的细胞密度为X个/mL。
六、实验分析1. 实验结果表明，所培养的细胞生长状况良好，细胞密度与预期相符。
2. 细胞计数是细胞生物学研究中常用的方法，通过计数可以了解细胞的生长状况、细胞密度等参数，为后续实验提供数据支持。
七、实验讨论1. 在细胞计数过程中，应注意细胞悬液的稀释程度，避免细胞在计数板上分布不均，影响计数结果。
2. 实验过程中，操作要轻柔，避免细胞损伤。
3. 细胞计数结果受多种因素影响，如细胞悬液的浓度、显微镜的分辨率等，因此在实验过程中应注意这些因素的影响。
八、实验结论通过本次实验，我们掌握了细胞培养的基本原理和方法，学会了使用血球计数板对培养细胞进行计数，了解了细胞计数在细胞生物学研究中的应用。
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动物细胞培养
一、试验目的。
1、掌握无菌操作技术。
2、掌握原代和传代细胞培养。
3、掌握细胞冷冻和复苏技术。
4、了解培养成纤维细胞的形态。
二、试验原理。
将动物机体的组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。
同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。
悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
对具有移动特性的稳定细胞系或细胞株进行长期保存，一方面可以作为细胞研究的试验材料，另一方面可以做细胞制品的生产材料。
目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法，。
细胞的冷冻保存的原则是慢冻快融，这样做是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂。
三、实验器材及药品。
器材：怀孕的小白鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO2培养箱、超净工作台、离心管、
高压灭菌锅、试管架等。
药品：小牛血清、DMEM合成培养基、抗生素、DMSO冷冻剂、胰酶、PBS缓冲液等。
四、实验操作。
1、消毒灭菌。
将实验所需用到的工具（如枪头、培养皿、眼科剪、镊子以及每个人的实验服等）集中灭菌、烘干。
配制75%的酒精以备实验时所需。
2、培养基的配制。
分别取10ml的小牛血清、90ml的DMEM合成培养基，将两种培养基混合在一起，再向其中加入1ml的抗生素，吹打混匀就得到了细胞培养的培养液。
3、原代培养。
（1）、准备。
将实验过程中会用到的工具以及药品全部放在超净工作台上进行紫外消毒灭菌。
实验开始前带好乳胶手套，用酒精对手进行消毒。
将怀孕的小白鼠放在酒精中杀死，取出子宫内的胚胎组织。
（2）、剪切与消化。
将胚胎组织放于平板中，用眼科剪将组织块剪碎，剪得越碎越好。
将剪碎的组织块放于离心管中，加入大约200µl的胰酶进行消化。
也可将其置于37度恒温箱中进行消化。
（3）、分离细胞。
消化到一定时间时，如果离心管中的溶液中出现了明显的浑浊，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，则应该加入与胰酶等量的培养液终止消化。
离心管于离心机中离心，弃上清液，得到分散的细胞。
（4）、转移细胞并培养。
向含有分散细胞的离心管中加入配制好的培养液，吹打混匀，将培养液用移液器移到细胞培养瓶中。
置于36.5℃恒温CO2箱培养，瓶口少少拧的松一点。
4、传代培养。
（1）、倒置显微镜下观察细胞的形态。
倒置显微镜下观察培养细胞的长势及密度，根据细胞密度决定传代的稀释倍数。
（2）、收集原代培养的细胞。
吸出培养瓶中的旧培养液，并用PBS冲洗两遍。
然后向培养瓶中加入200µl的胰酶进行消化。
消化一段时间后用配置好的培养液等比例终止消化。
然后离心，收集到原代培养的细胞。
（3）、传代细胞的培养。
向离心管内加入大约7—8ml的培养液，吹打混匀。
将培养液转移到培养瓶中，置于37度恒温CO2培养箱中培养。
培养1—2天后于显微镜下观察细胞的形态。
5、细胞冷冻保存。
（1）、收集细胞。
吸出培养瓶中的旧培养液，并用PBS冲洗两遍。
然后向培养瓶中加入200µl的胰酶进行消化。
消化一段时间后用配置好的培养液等比例终止
消化。
然后离心，收集细胞。
（2）、冷冻。
向离心管中加入一定量的培养液以及10%—20%的DMSO冷冻液，吹打混匀并转移到冷冻管中。
先将冷冻管在4度冰箱中放置10min，再放在—70度的冰箱中冷冻过夜。
（3）、复苏。
将冷冻的细胞取出来后，立刻放在40度水浴中，使其快速融化。
并对融化的细胞进行进一步的观察。
五、实验结果。
传代细胞
传代第一次换液细胞
原代第一次的细胞
原代第四天的细胞
冷冻复苏的细胞
六、实验分析与讨论。
从本次实验的图片可以看出来，实验做得还算成功，细胞基本上没有被污染。
在做的过程中一定要非常注意无菌操作，这是决定试验成功的关键因素。
在做原代培养的时候，一定要将小鼠胚胎的组织块剪得够碎，确保在用胰酶消化后可以得到分离的单个细胞。
在做传代培养时，要把握好胰酶的消化时间。
冷冻复苏时，一定要按照步骤进行冷冻，遵循慢冻速溶的原则。