不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响
葛根总黄酮提取工艺比较研究
葛根总黄酮提取工艺比较研究杨丽维;陈颖;张峻【摘要】本研究采用乙醇浸提法和超声波辅助乙醇提取法对葛根黄酮进行提取,以期筛选出较佳的提取方法.通过试验对比,确定乙醇浸提法的工艺条件为乙醇浓度40％,固液比1∶20(g/mL),提取温度50℃,提取时间30 min.超声波辅助提取法的工艺条件为超声功率200 W,乙醇浓度40％,固液比1∶20(g/mL),提取温度50 ℃,超声时间20 min.在条件相近的前提下,超声波辅助提取法的葛根黄酮提取率为8.03％,比乙醇浸提法提取率提高了54％.可见,超声波辅助提取法提取效果较好,具有节时、简便、提取率高等优点.【期刊名称】《天津农学院学报》【年(卷),期】2016(023)003【总页数】4页(P27-30)【关键词】葛根;黄酮;乙醇浸提;超声波辅助提取【作者】杨丽维;陈颖;张峻【作者单位】天津市林业果树研究所,天津300384;天津市林业果树研究所,天津300384;天津市林业果树研究所,天津300384【正文语种】中文【中图分类】TS218葛根（Pueraria lobata（Willd.）Ohwi），别名鹿藿、黄斤、鸡齐，为豆科植物野葛的根，是一种常用的传统中药，也是药食两用的天然植物资源[1]。
理化分析表明，葛根中主要有效成分为黄酮类物质以及异黄酮类化合物，其中包括葛根素、大豆甙等。
这些有效成分具有预防心脑血管疾病，舒张平滑肌解痉，抗促癌及诱导癌细胞分化，抗氧化，解酒、解热及增强机体免疫力等功能[2]。
随着医药科学的发展，葛根有效成分的提取及开发利用价值备受研究者的关注。
葛根的主要应用一方面是加工各种淀粉类产品，二是提取葛根黄酮，将其作为食品、生物医药的重要原料[3]。
目前报道从葛根中提取有效成分的方法主要有：加热回流法、渗漉法、碱液法、浸提法（包括水提法、有机溶剂提取）、酶解法和物理强化辅助提取等，但普遍存在能耗大，时间长，效率低等问题[4]。
葛根总黄酮提取工艺的比较
收稿日期:2009 07 13; 修订日期:2009 09 20基金项目:湖北省高等教学优秀中青年科技创新团队项目(No .T200909);湖北省自然科学基金重点项目(No .2008CDA060)作者简介:甘 琳(1984 ),女(汉族),湖北荆州人,现为武汉工程大学在读硕士研究生,学士学位,主要从事天然产物的提取分离研究工作.*通讯作者简介:池汝安(1959 ),男(汉族),福建三明人,现任湖北省 楚天学者 计划特聘教授,博士学位,主要从事分离科学与技术研究工作.葛根总黄酮提取工艺的比较甘 琳1,周 芳2,张越非1,池汝安1*(1.武汉工程大学化工与制药学院,绿色化工过程省部共建教育部重点实验室,湖北省新型反应器与绿色化学工艺重点实验室,湖北武汉 430073;2.武汉工程大学国际学院,湖北武汉430073)摘要:目的优选葛根总黄酮的提取工艺。
方法采用水浴回流、微波和超声波辅助3种方法提取葛根总黄酮,正丁醇萃取纯化。
结果微波辅助提取所得总黄酮提取率最高,提取率为91.68%,纯化后,总黄酮纯度为87.56%;超声波辅助提取次之,提取率为87.88%;水浴回流提取最低,提取率为85.35%。
结论微波辅助提取法节能、高效,且污染小,具有应用前景。
关键词:葛根; 总黄酮; 水浴回流法;微波法; 超声波法中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008 0805(2010)04 0929 03Extraction Technology Co m parison of Total F lavonoids fro m Radix puerariaeGAN Li n 1,Z HOU F ang 2,Z HANG Y ue fe i 1,CH I R u an 1*(1.School of Che m icalE ng ineering&Phar macology,W uhan Institute of Technology,K ey Labora tory for G reen Che m ical P rocess o f M i n istry of Education,H ubei K ey Lab of N ovel R eactor &G reen Che m ical T echnology ;2.School of Internation,Wuhan Universit y of Eng ineering,Wuhan,430073,China )Abst ract :O bjective T o opti m ize the ex tracti on process o f tota l fl avono ids fro m radi x p uerariae .M ethods W a ter circu m fl uence ,m icro w ave-assisted ,u ltrasonic w ave-assisted and n-Butano l were e m ployed i n the ex trac ti on and purificati on processes o f to tal flavono i ds .Resu lts The ex tracti on rate o f t o ta l flavono ids obta i ned by m icrow ave -ass i sted w as hi gher t han the others,the y i e l d w as 91.86%,and t he purity was up to 87.56%afte r purificati on .T he ex tracti on rates of ultrason i c wave-assi sted and w ater c i rcu m fl uence w ere 87.88%,85.33%,respecti ve l y .Con cl u si on M icrow ave-assisted m ethod i s energy-sav ing ,effic i ent and has littl e poll uti on ,w hich can be used t o ex tract t o ta l fl avono i ds .K ey w ords :R ad i x Puerar i ae ; To ta l fl avone ; W ater c ircu m fl uence ; M icro w ave ; U ltrasonic wave葛根属豆科植物野葛Puerar i a lobata (W ill d .)O h w i 的块根[1,2],其所含有效成分总黄酮能降低心肌耗氧量,增加冠脉、脑血管血流量,明显缓解心绞痛、抗心律失常等[3],对防治心肌梗塞、心律失常等也有重要疗效[4,5]。
葛根总黄酮的提取及抗氧化特性研究
2.2 乙醇提取法提取条件优化
表1 正交试验提取结果及极差分析表
序 A乙醇浓度 B体积倍数
号
/%
S:l
C提取时 间 /min
葛根素得 率 /%
1
1(30)
2
1
3
1
4
2(60)
5
2
6
2
7
3(90)
8
3
9
3
K1
12.953
K2
10.669
K3Leabharlann 8.934R4.019
1(1：6) 2(1：8) 3(1:10)
邻苯三酚溶液、浓度梯度为2.0 g/L，1.5 g/L，1.0 g/
32对乙醇回流提取法的提取条件进行了摸索在在乙醇浓度为30料液比为11080下回流提取9033对葛根总黄酮乙醇提取物纯化后进行了颜色反应和薄层色谱等定性表征结果表明葛根总黄酮粗提物中含有葛根素粗提物中含有黄酮类化合34以新鲜豆油初始po葛根总黄酮的添加量为004利用80烘箱加速试验对葛根总黄酮的康油脂氧化的活性考察葛根总黄酮比空白样的油脂氧化诱导期延长60左右
powder iron[J], J. Food Sci.，1990，55(3):869-871. [6] 邓舜扬.食品保鲜技术.[M].北京：中国轻工业出版 社,2006,295-303. [7] 张志健，李新生.食品防腐保鲜技术.[M].北京：科学 技术文献出版社，2006，194-207. [8] 周霞凤.一种保鲜剂的研制及名优绿茶贮藏条件的研 究[D].华中农业大学园艺园林学院,2007. [9] 王钦德，杨坚.食品试验设计与统计分析[M].北京： 中国农业大学出版社，2003，331-351. [10] 林灿煌，张灿河.正交试验设计优化脱氧剂配方亚硫 酸盐系脱氧剂的研究 [J].福建化工，2003（4）：1-4. [11] 陈红兵，高金燕.D-饱和试验设计优化脱氧剂配方I.铁 系脱氧剂的研究[J].中国食品添加剂，1996，（3）：1-5.
葛根中黄酮提取工艺的研究
0
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注：A乙醇浓度、B提取温度、C提取时间、D料液比
D ● ： 0 0 ， ： ： o ，
6的 6铊 6鹬 2孙 2M 2够 0挖
y黄酮得率( r ag ／g)
1． 69 1． 88 1． 81 2．3 4 2． 53 2．3 6 2． 18 2． 13 2． 37
根 以上单因素试验结果选用影响葛根黄酮提取率的4个因素为乙醇浓度、提取温度、料液比、提取时 间设计正交试验( 表1) ．
92
湛江师范学院学报( 自然科学)
第33卷
表1提取条件优化正交试验因素表
2．3．2正交试验结果 从表2的结 果分析可 知各因素 对葛根黄 酮提取率的 影响顺序 为：A乙醇浓 度>C提取 时间>D料 液比
收稿日期：2 012—12一02 作者简介：周鲜娇( 1976一) ，女，江西东乡人，湛江师范学院生命科学与技术学院实验师，硕士研究生，从事酶与发酵工 艺的研究
比较几种炮制方法对葛根总黄酮含量的影响
待达到温度后 ， 将方盘放入 ， 关好 门， 进行烘制。４ ０ ａ ｒ ｉ ｎ后 ， 取出 １ ． １ 仪器 ： 紫外分光 光度计 （ Ｆ Ｚ ｕ ｖ 一 ２ １ ０ ０ ， 尤 尼可上海仪器有 限公 放 凉 。 司） 电炒 锅 ， Ｄ Ｆ Ｙ 一 ２ ０ ０型 打 粉 机 ， Ｋ Ｑ ２ ２ ０ ０ Ｂ型 超声 清 洗 仪 ， Ｄ ＨＧ 一 ２ ． ３ ． ２成 品性状 ： 炮制 后 ， 饮 片表面呈 黄色 ， 边上略带 焦黄色 ， 气 ９ ０ ７ ６ Ａ型 干燥 箱 ， Ｓ ａ ￣ ｏ ｉ ｆ ｕ ｓ Ｂ Ｐ ２ １ １ Ｄ型 十万分 之一分 析天平 ， 电 微 香 ， 有麦麸香味。 ２ ． ４滑石粉煨制品（ ４号样品 ） 炉， 电烘箱 。 １ ． ２药 品： 葛根（ ５ ０ ０ ｇ ） 购 自广州市药材公司旗 下的采之林 连锁药 店 ，并 经鉴定 为豆科 多年 生落叶藤 本植物 野葛 Ｐ ｕ ｅ ｒ ａ ｉ ｆ ａ ｌ ｏ ｂ ａ ｔ ａ （ Ｗｉ ｌ ｌ ｄ ． ） Ｏ ｈ ｗ ｉ 的根制作成 的中药饮片 。 １ ． ３ 试剂 ： 麦麸 ３ ０ ｇ 、 滑石粉 １ ５ ｇ 、 米 １ ５ ｇ 、 醋 １ ５ ｇ ， 购 自广东 省药物 ２ ． ４ ． １ 炮制 方法 ： 取 １ ５ ｇ滑石粉 于电炒锅 中 ， 将 电炒锅温度 调节 旋钮调至 中间档 ， 将滑石粉用铲 子堆至炒锅 中间 ， 稍作翻动 ， 使 之均匀受热 ， 然后静置受热 ， 待用手离锅十厘米测试感 到有烫热 感时 ， 投入 葛根饮片 ５ ０ ｇ ， 使受 了热的滑石 粉均匀包 裹好葛根饮
不同产地葛根中葛根素的对比
不同产地葛根中葛根素的对比不同产地葛根中葛根素的对比HPLC法对不同产地的柴葛、粉葛中的葛根素的含量进行了测定，表明柴葛中葛根素含量约为粉葛的3倍，紫外测总黄酮含量表明，柴葛中葛根素量占总黄酮量的55%左右，粉葛中葛根素量占其总黄酮量的48%左右。
同时比较了不同提取方法对葛根素和总黄酮含量测定的影响，发现回流提取法得到的葛根素含量较高，更有利于其提取。
葛根素HPLC图谱中葛根素峰易拖尾，分离度低，本文研究了甲醇：水不同配比对峰形、分离度和保留时间的影响，体积比为25∶75时葛根素峰拖尾，与后面的小峰分离度为1.3,体积比为35∶65时葛根素峰与前峰易重合。
甲醇∶水比（V/V）为32∶68时，在样品分析中葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间适中，柱效高，故选用为流动相。
1 仪器与材料1.1 仪器美国Waters 公司600-2487高效液相色谱仪，Millenium数据处理系统；Waters2487紫外检测器；岛津UV-2401PC型紫外分光光度计；岛津AY120型万分之一电子分析天平；SB3200型超声清洗器。
1.2 材料葛根素对照品：中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏超纯水；其它试剂均为分析纯。
柴葛产于安徽岳西，粉葛产于广西。
2 方法与结果2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量2.1.1 色谱条件色谱柱：Zorbax XDB-C18（4.6mm×250mm, 5μm）；流动相∶甲醇-水（32∶68）；流速1ml/min;检测波长250 nm;柱温22℃；进样体积10μl。
理论板数按葛根素峰计算不低于5000。
在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3 min左右。
2.1.2 对照品溶液的.制备精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。
分别移取0.5,1.0,2.0,2.5ml于5ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。
葛根黄酮的结构、提取、鉴定及活性
降低血压，减缓心率，降低心肌耗氧量。 扩张冠状血管，改善心肌的代谢 抑制动脉硬化，改善微循环 对血液流变学的影响
解酒作用
作用机理 影响酒精代谢 影响小肠对酒精的吸收
葛根黄酮
市场价值
葛根黄酮属于异黄酮类化合物，高纯度的葛根黄 酮价格可达3000美元/千克。葛根素注射液是国 内各大医院心血管疾病治疗用药的首选药物之一。 近几年来国际市场对葛根淀粉的需求量较大，其 价格为1400美元/千克。因此，开发葛根黄酮的 提取及葛根的综合利用技术，具有广阔的市场前 景。
葛根黄酮
性状 结晶性固体 无定形粉末（黄酮苷）
理化性质
颜色 黄色或更深（因7-位引入—OH助色团，促进电子位移、 重排，使颜色加深） 溶解性 溶于有机及稀碱液 因—OH及羟基糖苷化的影响，在水中溶解性增强
葛根黄酮
理化性质
显色反应 铝盐反应 生成的络合物黄色，有荧光
葛根黄酮
色谱鉴定
从葛根中提取和纯化药用成分-总黄酮
从葛根中提取和纯化药用成分-总黄酮
从葛根中提取和纯化药用成分-总黄酮
采用微波辅助萃取和AB-8型大孔树脂从葛根中提取和纯化总黄酮.分别考察了乙醇浓度、固液比、微波功率和辐射时间对提取率的影响;吸附柱类型、进液浓度、进波量、进液流速和pH值对吸附的影响和洗脱剂乙醇浓度、洗脱剂流速和洗脱剂体积量对脱附的影响,并分别确定了它们适宜的工艺条件.在适宜工艺条件下,微波辅萃总黄酮提取率为83.94%,纯化后产品总黄酮纯度迭70%.建立了AB-8型大孔树脂吸附葛根总黄酮的Freundlich等温吸附方程,模型与实验值基本相符.
作者：李岂凡白兰莉胥永张彬蒋柏泉作者单位：李岂凡,胥永,蒋柏泉(南昌大学环境科学与工程学院,江西南昌,330031)
白兰莉(新疆石河子大学化学化工学院,新疆石河子,832003)
张彬(南昌大学食品工程中心,江西南昌,330029)
刊名：安徽农业科学ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL SCIENCES 年，卷(期)：2007 35(27) 分类号：O652.62 关键词：葛根微波萃取总黄酮大孔树脂。
不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响
一
２ ４一 ３
江苏农业科学
２１ ０２年第 ４ Ｏ卷第 １ 期
表 １ 紫外分 光光度法测定不同提取物总黄酮含量的ｂ较
声 与冷浸结合使用法提取葛根总黄酮 。 １２ １ １ 冷浸法 ．．． 葛根粉各 ５ （ ） 提取溶剂为 ９ ％ 乙 ０ｇ ３份 ， ５ 醇各 ２ ０ｍ ， ５ Ｌ 常温浸泡 ２ 、８ ７ ， １ ４ ４ 、２ｈ 隔 ２ｈ搅拌 １ ， 次 减压过 滤， 回收乙醇， 药液浓缩至干 ， 得葛根提取物。 １２ １２ 超声法 葛根粉各 ５ （ ） 提取溶剂为 ９ ％ 乙 ．．． ０ｇ ３份 ， ５ 醇 各 ２０ｍ ， ５ Ｌ 分别 超 声 （ 率 ２０Ｗ ） 取 ２ 、０ １０ｍ ｎ 温 功 ０ 提 ０ ６ 、２ ｉ， 度为 ５ ０℃ ， 减压 过滤 ， 回收 乙醇 ， 药液浓 缩 至干 ， 葛根 提 得
研 究 。 Ｅ—ｍ ｉ ｑｕｕ ｃｔ．ｄ ．ｎ ａｌ ｉｌ＠ ｘ ｅｕ ｃ ｏ ： ｃ
１２ Ｉ 不同方法提取葛根 总黄酮 ． ．
采用冷浸法 、 超声法 、 超
（ 上接 第 ２ ２页） ３
可取性 。 ３ 结论
［ ］ ｅｒ ａＳＮ， ｏｋｖ Ｙ，ａ ｈｒｖＡ Ｇ ｘｄｔｅｄｌ ｎｉａｉ ３ Ｐｔ ｖ Ｖ ｌｏａＩ Ｚ ｋａｏ ．Ｏ ｉａ ｖ ｅｉ ｉｅｔ ｎｏ ｏ ｉ ｇｉ ｏ ｆ ｌ ｂｒ Ｊ ．Ｒ ｓｉ ｏｒ ｌｆ Ａｐｌ ｄＣ ｅ ｓｙ ２０ ７ ８ ： ｆｘｆ ｅ［ ］ ｕｓ ｎＪｕ ａ ｏ ｐｉ ｈｍｉｒ，０ ３，６（ ） ａｉ ａ ｎ ｅ ｔ
Ｂｏ ｏｗｅＴ ｃ ｎｌ ｙ２０ ，８ １ ：９—９ ． ｉ ￣ｓｕ ｈｏｏ ，０ １７ （ ）８ ｅ ｇ ４
［］ ７ 熊和平 ， 喻春 明， 王玉福 ， 麻类技术 １０问［ ． 等． ０ Ｍ］ 北京 ： 中国农
不同炮制方法对葛根中总黄酮及葛根素含量的影响
临床医药文献电子杂志Electronic Journal of Clinical Medical Literature2019 年第 6 卷第 55 期2019 Vol.6 No.55173不同炮制方法对葛根中总黄酮及葛根素含量的影响施泓亦（温州医科大学2018级药学类4班，浙江 温州 325035）【摘要】目的 探讨不同炮制方法对葛根中总黄酮及葛根素含量的影响。
方法 采用乙醇回流以及薄层层析联合法提取葛根中的总黄酮及葛根素，并采用紫外分光光度法对其含量进行检测。
结果 与麸烘品和生葛根相比，麸煨品中总黄酮及葛根素含量更高。
结论 麸煨法更适合在葛根炮制中应用。
【关键词】炮制方法；葛根；总黄酮；葛根素【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.55.173.011 仪器与试药1.1 仪器研究中需要使用的仪器包括DHG101电热恒温鼓风干燥箱、UV-9200紫外可见分光光度计、AR1140分析天平、SK3300H 超声提取器。
1.2 试药葛根饮片经鉴定为野葛的干燥根，同时包括葛根素、硅胶CF254以及相关的试剂。
2 方法与结果2.1 样品制备生葛根：取葛根片，先净制然后粉碎，然后过2号筛，定为1号粉。
麦麸烘制：取100 g 葛根片放置在方盘中，并在方盘上下各铺上一层麦麸（用量为每100 g 葛根使用30 g 麦麸）。
然后进行烘制，进行烘制时的条件为温度为165°C ，时间为40 min ，烘制完成后取出放凉，进行粉碎处理，过2号筛，定为2号粉。
麦麸煨制：参照文献将葛根片煨至焦黄色，筛去麦麸（用量同（2）），放凉粉碎，然后过2号筛，定为3号粉。
2.2 总黄酮含量测定2.2.1 线性关系考察取干燥至恒重的葛根素5 mg ，置于25 mL 量瓶中，定容并摇匀。
分别吸取上述溶液0.2 mL 、0.3 mL 、0.4 mL 、0.5 mL 、0.6 mL ，并分别置于10 mL 量瓶中，使用95%乙醇溶解定容至刻度，并摇匀。
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范树国，赵朝英，邱璐，等．不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响［J］．江苏农业科学，2012，40（1）：233－235．不同提取方法对葛根总黄酮得率的影响范树国1，2，赵朝英1，邱璐1，2，李国树1，2，李天星1，杨海艳1，梁晓华1（1．楚雄师范学院化学与生命科学系，云南楚雄675000；2．滇中高原生物资源开发与利用研究所，云南楚雄675000）摘要：以95%乙醇为提取剂，分别用冷浸法、超声法、超声与冷浸结合使用法提取葛根总黄酮，以紫外分光光度计法测量葛根总黄酮含量。
以葛根总黄酮的得率为评价指标，对3种方法进行综合评价，并筛选出各种方法所需的最佳提取时间。
试验数据经SPSS统计分析表明，超声与冷浸结合使用法对葛根总黄酮得率的提高影响不显著，实际生产应用时，冷浸提取48h效果较好。
关键词：葛根；总黄酮；提取方法；得率中图分类号：TS202．1文献标志码：A文章编号：1002－1302（2012）櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄01－0233－03（上接第232页）可取性。
3结论本试验对苎麻非纤维高效降解菌株的分离筛选方式方法进行了大量的摸索研究，最终确定了用处理苎麻纤维对菌株进行富集，并以水解圈和降解显色的双重初筛快速鉴定方法，减少了无效菌株的生长干扰，使得目标菌株得以富集，成为优势菌株，降解苎麻胶质，得到质量较好的苎麻纤维。
该筛选模型的建立为今后的试验者提供了一个良好的参考依据，大大降低了工作量，提高了工作效率。
但是这仅仅是一个开始，接下来还需要进行大量试验摸索。
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葛根的主要有效成分为异黄酮类化合物，根据理化性质和波谱数据，对野葛根的化学成分进行分析，共分离鉴定了14个化合物［1－2］。
其中葛根素是豆科葛藤属的特有成分，也是主要有效成分，是葛根及其制剂中异黄酮含量的收稿日期：2010－12－28基金项目：云南省中青年学术技术带头人后备人才培养计划（编号：2006PY01－61）；云南省高校2009—2012年重点建设学科和楚雄师范学院重点学科建设项目“植物学”（编号：05YJJSXK03）；楚雄师范学院学术带头人专项（编号：05YJDTR08）。
作者简介：范树国（1965—），男，河北青县人，博士，教授，主要从事植物生理生化及分子生物学研究。
Tel：（0878）3101953；E－mail：fansg@cxtc．edu．cn。
通信作者：邱璐，女，硕士，教授，主要从事植物组织培养及转基因研究。
E－mail：qiulu@cxtc．edu．cn。
评价指标［2］。
葛根具有改善脑循环和外周循环、收缩和舒张平滑肌、抗肿瘤、抗骨质疏松、治疗绝经期综合症、抗心肌梗塞和心律失常、扩张冠状血管、降血糖、增强记忆力及解热等功能与作用［3］。
葛根在食品工业、医药工业和日用化工方面均有较多应用。
目前对葛根总黄酮提取方法的研究大都采用单一提取方法，部分专家研究单一提取方法时采用过酶解回流法［4］，提高了葛根总黄酮的收率。
本研究探讨不同单一提取方法及结合使用方法对葛根总黄酮得率的影响。
1材料与方法1．1材料葛根粉，购自楚雄一心堂药房，为粉葛粉，200g/盒，批号：080201、071201，云南红云天然食品有限公司生产，原产地广西。
葛根素对照品（HPLC级，纯度＞98%），购自成都曼思特生物科技有限公司。
1．2方法1．2．1不同方法提取葛根总黄酮采用冷浸法、超声法、超—332—江苏农业科学2012年第40卷第1期声与冷浸结合使用法提取葛根总黄酮。
1．2．1．1冷浸法葛根粉各50g（3份），提取溶剂为95%乙醇各250mL，常温浸泡24、48、72h，隔12h搅拌1次，减压过滤，回收乙醇，药液浓缩至干，得葛根提取物。
1．2．1．2超声法葛根粉各50g（3份），提取溶剂为95%乙醇各250mL，分别超声（功率200W）提取20、60、120min，温度为50ħ，减压过滤，回收乙醇，药液浓缩至干，得葛根提取物。
1．2．1．3超声与冷浸结合使用法葛根粉50g（3份），提取溶剂为95%乙醇各250mL，先超声（功率200W）提取20min，温度为50ħ，再分别用95%乙醇常温浸泡24、48、72h，隔12h搅拌1次，减压过滤，回收乙醇，药液浓缩至干，得葛根提取物。
1．2．2葛根总黄酮含量的测定1．2．2．1标准曲线的绘制参照文献［5］绘制标准曲线。
称取干燥至恒重的葛根素5mg于25mL容量瓶中，加95%乙醇溶解，并稀释至刻度，分别吸取0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL 置10mL比色管中，以10．0mL95%乙醇加水至100mL的溶液稀释至刻度，摇匀。
以上述溶剂作空白对照，在250nm波长处测定吸收度。
将溶液浓度和吸光度进行线性回归，得回归方程：y=49．2500+x0．0028，r2=0．9996，y为吸光度，x 为溶液浓度。
1．2．2．2葛根提取物中总黄酮含量的测定称取各种方法提取物，相当于葛根黄酮5mg，置25mL容量瓶中，加95%乙醇溶解，并稀释至刻度，吸取1．0mL至10mL比色管中，以10．0mL95%乙醇加水至100mL的溶液稀释至刻度，摇匀。
同时以上述溶剂作空白对照，在250nm波长处测定吸收度，在标准曲线上换算出葛根总黄酮含量。
总黄酮含量=CˑVˑ25mˑ100%式中：C为浓度（mg/mL）；V=10mL；m为测量时所称取的提取物的量（mg）。
提取物得率=m2－m150ˑ100%式中：m1为蒸发皿干燥至恒重的重量（g）；m2为提取物和蒸发皿干燥至恒重的重量（g）。
总黄酮得率=总黄酮含量ˑ（m2－m1）50ˑ100%式中：m1为蒸发皿干燥至恒重的重量（g）；m2为提取物和蒸发皿干燥至恒重的重量（g）。
1．2．3数据分析运用SPSS11．5软件对数据进行均值分析及多重比较分析。
1．2．4提取物的鉴定用紫外分光光度计光谱扫描进行鉴定。
以葛根素（浓度0．004mg/mL）为对照，对冷浸提取72h、超声提取120min、超声提取20min+冷浸提取72h等3种方法的提取物分别进行光谱扫描鉴定。
提取物鉴定溶液配制方法与“1．2．2．2”一致。
2结果与分析2．1不同提取方法提取物总黄酮含量及得率比较3种不同方法提取的总黄酮含量及得率测定结果见表1。
表1紫外分光光度法测定不同提取物总黄酮含量的比较提取方法提取时间（h）葛根粉批号重复提取物总黄酮含量（%）总黄酮得率（%）总黄酮（mg）冷浸法24080201117．160．27132．6213．250．23114．5平均15．210．25123．6071201130．990．48242．4223．900．37187．0平均27．450．43214．748080201119．650．34170．1221．250．37183．9平均20．450．36177．0071201134．630．83417．1238．510．93463．9平均36．570．88440．572080201124．840．53266．4223．210．50248．9平均24．030．52257．7071201138．890．95472．9245．241．10550．1平均42．071．03511．5超声法0．33080201119．240．40197．5218．350．38188．4平均18．800．39193．0071201135．730．91454．3256．851．45722．8平均46．291．18588．61080201116．040．39196．0219．680．48240．4平均17．860．44218．2071201132．170．99494．0231．110．96477．7平均31．640．98485．92080201121．940．53263．6215．280．37183．6平均18．610．45223．6071201126．590．87433．5241．161．34671．0平均33．881．11552．3冷浸+超声法0．33+24080201119．020．47236．2212．730．32158．0平均15．880．40197．1071201134．400．64322．1255．131．03516．2平均44．770．84419．2 0．33+48080201124．140．57283．5218．570．44218．1平均21．360．51250．8071201148．391．30647．9242．051．13563．0平均45．221．22605．5 0．33+72080201122．340．53266．4211．310．30134．9平均16．830．42200．7071201138．811．44721．6240．701．51756．7平均39．761．48739．2 2．2SPSS统计分析对表1进行SPSS统计分析。