猪伪狂犬病病毒gB蛋白表达及免疫原性分析
猪伪狂犬病的病因分析 猪伪狂犬病的防控对策 - 养猪技术
猪伪狂犬病的病因分析猪伪狂犬病的防控对策-养猪技术猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus，PrV）引起的猪的急性传染病。
猪伪狂犬病是一种急性传染病，是由于感染疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科Ⅰ型疱疹病毒而导致，具有多种症候群，主要是呼吸困难、繁殖障碍、神经症状等。
猪群发病后，往往会导致仔猪死亡率升高，母猪出现繁殖障碍等，公猪利用性能较差或者失去利用价值，严重损害养猪业的经济效益，必须加强防治。
下面一起来看看猪伪狂犬病的病因分析及猪伪狂犬病的防控对策。
1、病因分析引种不符合要求。
近几年，随着猪肉价格逐渐升高，规模化养猪场的数量也在不断增加，部分新建猪场为快速扩大养殖规模，建立繁殖种群，随处引进种猪。
有的小型规模养猪场甚至购买集市上销售或者散养户饲养的仔猪进行补栏，由于没有经过严格把关，对商品猪或者后备母猪都没有采取严格的隔离、检疫制度，从而造成猪伪狂犬病呈现较高的阳性率，无法长时间促使猪群健康保持稳定。
免疫程序不合理。
有的猪场由于受到资金、科学水平等因素的限制，在接种疫苗前没有测定猪群免疫抗体滴度水平，而直接注射疫苗，但如果此时仔猪具有较高的母源抗体，就非常容易导致疫苗中的病毒被母源抗体中和，从而体内生成抑制抗体，导致免疫失败，使猪群容易发生该病。
疫苗使用不合理。
由于有些防疫人员没有掌握足够的疫苗使用常识，也没有仔细阅读疫苗的使用说明书，各种疫苗都使用生理盐水进行稀释，从而无法确保对疫苗的效价没有任何不良影响。
据报道，猪伪狂犬疫苗使用普通生理盐水稀释后，会导致免疫效价降低。
发生免疫抑制性疫病。
当猪群发生某些免疫抑制性疾病，如猪瘟、细小病毒病、繁殖障碍与呼吸系统综合征、猪圆环病毒病等，都会增强机体对其他病原体的易感性，导致机体对各种疫苗的免疫应答减弱，从而引起免疫失败，或者无法形成适宜的免疫抗体水平，无法使免疫效果达到预期。
滥用抗生素。
疫苗的免疫效价在一定程度上还受饲料添加剂的影响，之前普遍认为，猪群在接种疫苗前后一段时间内禁止使用抗生素类药物。
一例猪伪狂犬病的诊断和治疗
疗2023-11-08contents •病原学和流行病学•临床症状和诊断方法•治疗方法和药物选择•预防和控制措施•案例分析和讨论•结论和建议目录01病原学和流行病学为疱疹病毒科、猪疱疹病毒属的病毒，呈圆形或椭圆形颗粒，直径100～150nm，有囊膜和核衣壳。
病原学伪狂犬病毒伪狂犬病毒对乙醚、氯仿等脂溶剂，福尔马林和紫外线照射等敏感，加热100℃5分钟可灭活。
抵抗力伪狂犬病毒的基因组为双链DNA，约143kb，编码至少11种病毒蛋白。
基因组流行病学患病猪、隐性感染猪和带毒猪为主要传染源。
传染源传播途径易感动物流行特点伪狂犬病毒主要通过直接接触或间接接触传播，如唾液、鼻分泌物、尿液等。
猪、牛、羊等家畜和野生动物均易感，但不同品种、日龄和性别的动物易感性有所差异。
伪狂犬病在猪群中呈地方流行性，常与猪瘟等其他疾病混合感染，导致病情复杂，死亡率升高。
02临床症状和诊断方法母猪表现流产、死胎、木乃伊胎，初生仔猪表现神经症状，出现运动失调、肌肉震颤、呜叫、呕吐、口吐白沫、倒地抽搐等，病死猪的脑部可见明显的神经元损伤和坏死。
病猪出现寒战、发热，精神沉郁，食欲减退，眼结膜潮红，有眼眵，鼻孔流出黏性分泌物，咳嗽，打喷嚏，呼吸急促，流涎，呕吐，便秘和腹泻交替出现。
哺乳仔猪出现神经症状，如运动失调、肌肉震颤、倒地抽搐等，并伴有呕吐、腹泻、流涎等症状。
临床症状根据病猪的临床症状和病理变化进行诊断。
临床诊断采集病猪的血液、脑组织等样品进行实验室检测，如病毒分离、血清学检测等。
实验室诊断与其他疾病进行鉴别诊断，如猪瘟、猪脑炎等。
鉴别诊断采取有效的防治措施，如隔离、消毒、疫苗接种等。
防治措施诊断方法03治疗方法和药物选择预防是控制伪狂犬病的关键，应采取综合防控措施，包括免疫接种、生物安全措施等。
预防控制及时治疗针对性治疗对于已经感染伪狂犬病的猪只，应尽早发现并采取有效的治疗措施。
根据病猪的症状和病情，采取针对性的治疗方法，以提高治愈率。
猪(Porcine)伪狂犬病病毒gB抗体(PRV gB-Ab)-定性ELISA试剂盒说明书
使用说明书 检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预 先包被猪伪狂犬病病毒的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检 测抗原，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶 的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标 仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判 定标本中猪伪狂犬病病毒gB抗体（PRV gB-Ab）的存在与否。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细 胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心 地分离。 2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
均值≤0.15，说明试验结果有效。 2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。 4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。 5. 有效期：6 个月 免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所 产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者 承担。
Sample collection and storages
Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes
before centrifugation for 10 minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or -80℃.Avoid repeated
猪伪狂犬病毒gB基因在大肠杆菌中的分段表达
方 法 ， 测 猪 血 清 临床 样 品 。结 果 检
构 建 的 ４种 表 达 质 粒 均 可 在 大 肠 杆 菌 中 表 达 ， Ｓ ＳＰ Ｇ 经 Ｄ —Ａ Ｅ分 析 ， 达 分 子 量 表
分 别 为 ７ ．５ ５ ． ６４ ． ６和 ４ ．２×１ ａ 其 中 ｇ 一 、Ｂ４和 ｇ 一 达 量 较 高 ， 达 产 物 主 要 存 在 于 包 涵 体 中。 ５ Ｏ 、３８ 、９９ ９７ ０Ｄ ， Ｂ３ ｇ － Ｂ５表 表
【 要 】 目的 摘
研 究。方法
分 段 表 达 伪 狂 犬 病 毒 （ ｓｕ ｏａｉ ｉ ｓＰ Ｖ） Ｂ基 因 ， 于 Ｐ Ｖ疫 苗 免 疫 抗 体 评 估 试 剂 盒 ｐｅ ｄｒｂｅ ｖ ｕ ， Ｒ ｇ ｓ ｒ 用 Ｒ
分析 ｇ Ｂ抗 原 表 位 ， 计 ４对特 异性 引 物 ， Ｐ Ｖ 新 疆 分 离 株 中 扩增 ｇ 设 从 Ｒ Ｂ基 因 的 ４个 片 段 ， 另命 名 为 分 Ｉ Ｊ
Ｗｅｔ ｎＢｏｉｇ 定 显 示 ， 融 合 蛋 白均 可 被 猪 伪 狂 犬 阳性 血 清 特 异 识 别 。 以 ｇ 一 、Ｂ４和 ｇ － 立 的 Ｅ ＩＡ方 ｓ ｒ ｌ ｎ 鉴 ｅ ｔ ４种 Ｂ３ ｇ － Ｂ５建 ＬＳ
法 与 ＩＥ Ｘ 公 司 的 ｇ — ＬＳ Ｄ Ｘ Ｂ Ｅ ＩＡ试 剂 盒 符 合 率 分 别 为 ４ ． ％ 、 １ ８ 和 ８ ． ％ 。 结 论 本 研 究 成 功 表 达 了 Ｐ Ｖ 的 ０９ ８．％ １８ Ｒ ｇ 一 、 Ｂ３ ｇ － Ｂ １ ｇ 一 、 Ｂ４和 ｇ 一 组 蛋 白 ，Ｂ ３ ｇ － Ｂ ５重 ｇ 一 、 Ｂ４和 ｇ － 达 量 较 高 ； 中 以 ｇ ４ 和 ｇ 一 立 的 间 接 Ｅ ＩＡ 方 法 与 Ｂ ５表 其 Ｂ Ｂ ５建 ＬＳ
猪伪狂犬病野毒阳性场gE和gB抗体检测以及与阴性场gB抗体对比分析
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ （ 酶联 免疫吸附试验 ） 方法检测 阳性场 ｇ Ｅ和 ｇ Ｂ抗体水平 、 阴性场 邸 抗体水平 。阳性场结果 显示： ｇ Ｅ抗体 总阳性 率为 ４ ９ ％， 每个 阶段猪群均有伪狂 犬病野毒感染 ， 经产母猪和公猪 抗体 阳 性率分别 为 ４ ０ ％和 ｌ ６ ％； ３ ０ ～ １ ５ ０日龄 ｇ Ｅ抗体 阳性率逐 渐上升 ，从 １ ４ ％上升到 １ ０ ０ ％， ｇ Ｅ抗体 Ｓ ／ Ｎ 值呈下 降趋势。说 明仔猪在保育和肥育 阶段再次感染 了伪狂犬病 野毒 ， 提 示转群 是猪伪狂犬病 野 毒攻击点。ｇ Ｂ抗体 总 阳性率为 ８ ９ ％， 其 中种猪群 高达 １ ０ ０ ％， ３ ０ — ４ ０日龄 ｇ Ｂ抗体 阳性率为 ９ ３ ％， 与 母猪抗体 水平 一致 ， ６ ０ ～ ７ ０ 日龄母源抗体 急剧下 降， ｇ Ｂ抗 体 阳性 率只有 ５ ０ ％， ９ ０日 龄 后抗体水 平 逐 渐上升 ， 到１ ５ ０日龄 时达 １ ０ ０ ％， 说 明伪狂犬 病 ｇ Ｂ母 源抗体在 ６ ０ ～ ７ ０ 日龄消 失， 而９ Ｏ 日龄后 抗 体上升 ， 可能是野毒感染和免疫抗体综合作用所致。阴性场 结果显示 ： ｇ Ｂ抗体 总 阳性率为 ９ ２ ％， 比 阳性场 高 ，其 中种猪群 ｇ Ｂ抗体 阳性率 均高达 １ ０ ０ ％， ３ ０ ～ ４ ０ 日龄 ｇ Ｂ抗体 阳性率为 ８ ３ ％， ６ ０ ～ ７ ０ 日龄时母 源抗体 开始消退 ， 抗体 阳性率 只有 ６ ０ ％， ７ ０ 日龄后经过两次疫苗 免疫， ｇ Ｂ抗 体水平显 著提 升 ， 到９ ０日 龄 后阳性率一直保持 １ ０ ０ ％。阳性场和 阴性场 ｇ Ｂ抗体 比较而言 ， ｇ Ｂ抗体 水平种猪 群 都比较稳定 ； 仔猪母源抗体都在 ６ ０ ～ ７ ０日龄消退 ， 母源抗体下 降趋势基本 一致 ； 阳性场的 抗体 总体 阳性率 比阴性场低 ， Ｓ ／ Ｐ平均值反 而更 高， 因此 离散度 大 ， 阴性场 ｇ Ｂ抗体水 平 的整齐度 更好 ； 阳性场 Ｓ ／ Ｐ ＞ ４ ． ０的比例 比阴性场高 ６个百分点 ； 阳性场肥育猪疫苗免疫效果不及 阴性场 明显 ， 疫苗 第 １次免疫后 抗体 水平提升速度 比阴性场慢 ， 第 ２次免疫后 抗体均 能达 到理想水平 ， 都 具 有很好 的保 护性 ， 但阳性场 ｇ Ｂ抗体无法 区分是来 自于疫苗 免疫还是野毒感染。综上分析 ， 猪 伪狂 犬病 野毒 阳性场和 阴性场疫苗免疫不能“ 一刀切 ” ， 而应该根据其血清学检测结果及 阴、 阳性场的特 殊性制定合理 的免疫程序， 对 于阳性场还要狠抓 野毒攻 击点， 以期达 到伪狂 犬病净化 的 目的。 关键词 伪狂 犬病； 阴性场 ； 阳性场 ； ｇ Ｅ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ ； ｇ Ｂ — Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ
猪伪狂犬病毒糖蛋白B细胞表位编码序列的克隆及融合表达
猪伪狂犬病毒糖蛋白B细胞表位编码序列的克隆及融合表达猪伪狂犬病毒(Rabies virus)是一种令人担忧的病毒，可以感染多种动物，包括狗、猪和人类。
与典型的狂犬病相比，猪伪狂犬病在猪身上表现出更为复杂的病理变化。
目前，防控猪伪狂犬病的主要手段是疫苗接种。
然而，现有的疫苗对于预防这种疾病的效果并不理想，因此需要研发更为有效的疫苗。
疫苗的主要成分是病原体的抗原部分，它们可以激发机体产生免疫应答从而进行防御。
在猪伪狂犬病疫苗中，糖蛋白G是最主要的抗原。
糖蛋白G是病毒表面的蛋白质，它具有多个B细胞表位(epitope)，这些表位是免疫系统识别病原体的关键。
因此，克隆和融合表达猪伪狂犬病病毒糖蛋白B细胞表位编码序列的研究对于开发新型疫苗具有重要意义。
为了实现这一目标，研究人员首先从猪伪狂犬病毒的基因组中选取糖蛋白G基因，并通过PCR扩增获得所需的DNA序列。
接下来，这段DNA序列被插入到适当的表达载体中，以便在宿主细胞中产生糖蛋白G蛋白质。
同时，为了方便检测和纯化融合蛋白，研究人员引入了一些标签序列。
经过以上步骤，研究人员成功获得了猪伪狂犬病毒糖蛋白G的表位融合蛋白。
这种融合蛋白包含了糖蛋白G的多个B细胞表位编码序列，因此有望在机体中诱导更强的免疫应答。
接着，研究人员将融合蛋白转染到哺乳动物细胞中，利用细胞的表达机制和代谢途径，使蛋白质得以正确表达和折叠。
在融合蛋白的表达过程中，研究人员进行了一系列的实验和优化。
他们调整了转染的细胞系、转染的时间和蛋白的表达量，以确保融合蛋白在细胞内得到高效表达。
同时，为了增加蛋白的稳定性和纯度，研究人员对细胞培养基进行了优化，添加了一些特殊的培养物质，并利用亲和层析等方法对蛋白进行纯化。
经过以上实验步骤，研究人员成功获得了猪伪狂犬病毒糖蛋白B细胞表位编码序列的克隆及融合表达产物。
通过进一步的免疫学实验，研究人员将测试这些融合蛋白的免疫原性和保护性，评估其在预防猪伪狂犬病中的应用前景。
石泉县猪伪狂犬病免疫抗体检测及分析
石泉县猪伪狂犬病免疫抗体检测及分析作者：雷维和蔡俊波来源：《乡村科技》 2018年第12期近年来，陕西省石泉县的生猪养殖量逐年增加。
2017年，全县生猪饲养量40.0万头，其中出栏量21.2万头，生猪养殖成为当地群众脱贫致富的主导产业之一。
随着生猪养殖量的不断增加、饲养密度的加大，猪群中传染病的发生概率也在不断增加，特别是一些对生猪健康危害大、传染病强的疫病时有发生，对当地的养猪产业危害较大。
当前，伪狂犬病( Psedorabies，PR)已在石泉县部分区域呈点状发生，成为对石泉县生猪养殖危害严重的传染病。
该病是引发猪呼吸系统疾病综合征( Porcine Respiratory Disease Syndrome，PRDC)的重要原发性病原之一，除了影响猪生长性能外，还能降低猪生殖性能，是生猪产业风险较大的传染病。
因此，必须对该病开展免疫抗体检测，这样既可以了解疫病在全县范围内的具体流行情况，又可以帮助养殖户全面了解当前猪抵御疫病的能力，为及时采取预防措施提供依据。
在生猪养殖过程中，动物免疫接种仅仅是生物安全中疫病防控的一方面，消毒环节和病死处理环节的存在对阻断疫病传人也有着非常重要的意义。
本文就是从抗体水平检测和养殖过程中的消毒环节和病死处理环节人手，抽取石泉县养殖户174户，其中年出栏生猪1 000头以上的规模场共计22户，年出栏生猪1 000头以下100头以上的散养户共计152户，分别通过查阅消毒记录、询问饲养员2种方式了解饲养环节场区消毒情况，为改善石泉县生猪养殖水平提供科学依据。
1材料与方法1.1材料1.1.1血清样品。
从调查户猪群中采集血液5 mL，分离血清、编号分装，- 206C保存，待统一检测。
共采集血清样品1 195份，从年出栏生猪1 000头以上的规模场中采集血清692份，其中哺乳母猪198份、妊娠母猪200份、哺乳仔猪121份、保育仔猪113份、育肥猪20份以及公猪42份；从年出栏生猪1 000头以下100头以上的散养场采集血清503份，其中哺乳母猪33份、妊娠母猪15份、哺乳仔猪73份、保育仔猪60份、育肥猪255份以及公猪65份。
两种检测猪伪狂犬病gB抗体方法比较
2020.3作者简介:张晓亭(1982-),男,河南省许昌市人,兽医师,研究方向:动物疫病防控。
两种检测猪伪狂犬病gB 抗体方法比较张晓亭(河南省许昌市建安区动物疫病预防控制中心461000)摘要:为评价化学发光免疫分析法在临床检测猪伪狂犬病gB 抗体中的适用性,将其与IDEXX 公司ELISA 抗体检测方法进行比对试验。
对110份猪血清进行猪伪狂犬病gB 抗体化学发光免疫分析法与ELISA 法的检测。
结果显示,以ELISA 法为标准,化学发光免疫分析法检测猪伪狂犬病gB 抗体的灵敏度、特异性、符合率分别为98.31%、100%、99.10%,Kappa=0.96,说明化学发光免疫分析法与ELISA 法的符合率较高,且其操作步骤更简便,更省时,可以用于临床猪血清样品的猪伪狂犬病gB 抗体的检测。
关键词:猪伪狂犬病gB ;抗体;方法;比较猪伪狂犬病(Pseudorabies)是由猪伪狂犬病病毒(Pseu⁃dorabies virus,PrV)引起的可致妊娠母猪流产、种公猪不育、育肥猪生长停滞、仔猪死亡的一种急性传染病[1]。
一旦猪场发生该病,将给养殖户带来巨大的经济损失。
目前还没有有效的方法治疗该病,疫苗免疫接种是预防与控制该病的根本措施。
而血清抗体水平检测可以反映出猪群的免疫抗体水平,对猪场免疫程序的制订具有一定指导意义[2]。
目前,国标上推荐的方法依然是ELISA,ELISA 方法具有快速、简便、特异性好等优点,是当前常用的适合大规模应用的抗体检测方法。
化学发光免疫分析法结合了抗体免疫方法与化学发光技术,其灵敏度更高,已广泛应用于医学、环境监测、食品检测等方面。
为了解化学发光免疫分析法在检测猪伪狂犬病gB 抗体方面的应用价值,本实验将某国产猪伪狂犬病病毒gB 化学发光抗体检测试剂盒(化学发光免疫分析法)与美国IDEXX 公司生产的猪伪狂犬病病毒gB 抗体ELISA 检测试剂盒进行比较分析,以期为临床猪血清样品猪伪狂犬病gB 抗体的检测寻找更为简便、快速且准确的检测方法。
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ＪＩＡ Ｇａｎｇ１，ＦＡＮ Ｍｅｉ－ｎａ２＊ ，ＧＵ Ｗｅｉ １ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｂａｏｌａｉ－ｌｅｅｌａｉ Ｂｉｏ－ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｇｒｏｕｐ，Ｔａｉ’ａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｔａｉａｎ ＤａＦａｎＳｈｅｎＮｏｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｔａｉ’ａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ）
伪 狂 犬 病，又 称 Ａｕｊｅｓｚｋｙ’ｓ病，是 一 类 由 疱 疹 病毒科 α疱疹病毒亚科伪狂犬病病毒（ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）引 起 的 危 害 家 畜 及 多 种 野 生 动 物 的 急 性传染病［１］，主要感染猪等动物，可造成怀孕母 猪 流 产或死胎，新生仔 猪 发 热，出 现 神 经 症 状 等，极 大 地 影响了中国养殖业的健康发展 。 ［２－４］ 该病传 播 快、传 播范围广、传播途 径 多、死 亡 率 高，已 成 为 危 害 养 猪
收 稿 日 期 ：２０１６－０７－０６ 基 金 项 目 ：国 家 ８６３ 计 划 专 项 基 金 （新 型 抗 感 染 功 能 型 微 生 态 制 剂 的 研 制 与 应 用 ）（２０１３ＡＡ１０２８０６） 作 者 简 介 ：贾 刚 （１９８８－），男 ，山 东 泰 安 人 ，硕 士 ，研 究 方 向 ：动 物 微 生 态 学 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｇａｎｇ０７１２＠１６３．ｃｏｍ ＊ 通 信 作 者 ：樊 梅 娜 （１９８７－），女 ，河 南 南 阳 人 ，硕 士 ，研 究 方 向 ：动 物 微 生 态 学 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｅｍｅｉ４１２．ｃｏｍ＠１６３．ｃｏｍ
业最为严重的疾病之一，需要加以重视 。 ［５］ ＰＲＶ 作为一种猪疱疹病毒，基因组为双链线 性
ＤＮＡ，其病毒粒 子 脂 质 囊 膜 由 多 达 １６ 种 糖 蛋 白 组 成［６］。其中，ｇＢ 蛋 白 是 ＰＲＶ 最 主 要 的 保 护 性 抗 原 蛋白，是 ＰＲＶ 复 制、感 染 必 不 可 少 的 囊 膜 组 分，不 仅能够诱导宿主产 生 免 疫 应 答，而 且 也 是 病 毒 入 侵 增殖和在细胞间传播的必需组分［７－９］。ｇＢ 基因位 于
（１．山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院，泰安 ２７１０００；２．泰安大凡神农制药有限公司研究院，泰安 ２７１０００）
摘 要：本试验旨在研究猪伪 狂 犬 病 病 毒 （ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）ｇＢ 蛋 白 的 表 达 并 分 析 其 免 疫 原 性，以 ＰＲＶ 病毒液为模板，设计特异性引物，扩增大小为６１２ｂｐ的保守片段并 测 序，将 其 克 隆 到 表 达 载 体 ｐＥＴ－２８ａ中，转 化 表 达菌 ＢＬ２１（ＤＥ３），经诱导表达、纯化得到目的蛋白，进行 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析验证并分析免疫原性。结果表明，表 达的 ｇＢ 蛋白大小为３０ｋｕ，主要以包涵体形式存在，复性后浓度为１０６μｇ／ｍＬ，且具有良好的反应原性。应 用 市 售 试剂盒检测到样品中含１３份 ＰＲＶ 阳性血清和１６份阴性血清，利用检出的 阳 性 血 清，初 步 可 建 立 以 ＰＲＶ ｇＢ 蛋 白 为包被抗原的 ＰＲＶ 抗体 ＥＬＩＳＡ 检测方法。 关键词：猪伪狂犬病病毒；ｇＢ 蛋白；原核表达；免疫原性 中图分类号：Ｓ８５２．６５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１－７２３６（２０１７）０４－１１７５－０７
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ （ＰＲＶ）ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ ｏｆ ＰＲＶ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ６１２ｂｐ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｇｅｎｅ ｆｒａｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ，ｔｈｅｎ ｉｔ ｗａｓ ｃｌｏｎｅｄ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＥＴ－２８ａａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１ （ＤＥ３），ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｔｏ ａｎａｌｙｓｅ ｉｔｓ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ３０ｋｕ，ｗｈｉｃｈ ｍａｉｎｌｙ ｅｘ－ ｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｆｏｒｍ ｏｆ ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ ｂｏｄｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ １０６μｇ／ｍＬ，ｗｉｔｈ ｗｅｌｌ ｒｅａｃｔｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．１３ＰＲＶ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ １６ｎｅｇａｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ ｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ｏｎ ｓａｌｅ，ｕｓｉｎｇ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｓｅｒｕｍ，ｔｈｅ ＰＲＶ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＰＲＶ ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｓ ａｎｔｉｇｅｎ ｐａｃｋａｇｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｒｃｉｎｅ ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ ｖｉｒｕｓ；ｇＢ ｐｒｏｔｅｉｎ；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ
中 国 畜 牧Ｃｈｉｎａ Ａｎｉｍａｌ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ＆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
ｄｏｉ：１０．１６４３１／ｊ．ｃｎｋｉ．１６７１－７２３６．２０１７．０４．０３３
猪伪狂犬病病毒ｇＢ 蛋白表达及免疫原性分析
贾 刚１，樊梅娜２＊ ，谷 巍１