线粒体复合体Ⅲ试剂盒说明书
血液线粒体DNA抽提试剂盒说明书
血液线粒体DNA抽提试剂盒说明书近几年,从有报告暗示糖尿病、阿尔茨海默病和线粒体DNA(mtDNA)变异有关开始,mtDNA分析变得盛行1),2),3),4)。
可是，想要抽提高纯度mtDNA，需要繁杂的操作和很多的时间，不适合以多样品处理为目的的研究。
目前进行的mtDNA分析，从细胞中抽提total DNA时，产物中含有微量mtDNA与大量基因组DNA。
mtDNA 抽提WB试剂盒可短时间从全血中容易的抽提出高纯度mtDNA，适合多样品处理。
〔特点〕Ⅰ. 简单操作，可短时间（约90分钟）抽提出mtDNA。
Ⅱ. 可从EDTA 处理血及肝素处理血中抽提出mtDNA。
Ⅲ. 抽提出的mtDNA混入了少量高纯度基因组DNA，可用于限制性内切酶处理或DNA扩增反应。
Ⅳ. 适合少量多样品的DNA扩增反应的预处理。
Ⅴ. 不使用苯酚、氯仿等有害剧毒溶剂。
〔内容〕1) Leukocyte Isolation Solution 5.0 ml 1支2) DNA Extraction SolutionⅠ 26.5 ml 1支3) DNA Extraction SolutionⅡ(A) 1.3 ml 1支4) DNA Extraction SolutionⅡ(B) 1.3 ml 1支5) DNA Extraction SolutionⅢ 1.9 ml 1支6) Sodium Iodide Solution 7.5 ml 1支7) Washing Solution 50.0 ml 1支〔储存方法〕2～10℃保存〔除试剂盒外，实验所必备的东西〕试剂1) 异丙醇（特级，Code 166–04836）12.5 ml2) TE缓冲液（基因工程学研究，Code 316–90025）适量器具1) 1.5 ml 微管（已灭菌）2) 涡流搅拌器3) 微量高速离心机（最大12,000×g）4) 减压干燥机〔使用方法〕(1) 将100μl的人类新鲜血液放入微管中*1。
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）
纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途纯化线粒体呼吸控制率（RCR）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在ADP存在（III态呼吸）与否（IV态呼吸）的情况下溶解氧（dissolved oxygen）的消耗差异，即呼吸控制率（RCR），以评价线粒体结构和功能完整性以及氧化磷酸化效率的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。
技术背景线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。
电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体。
线粒体结构完整，功能正常，底物充分，电子传递形成的质子梯度不断被消耗，电子得以顺畅传递，氧气快速消耗，其耗氧率大，为III态呼吸。
ADP耗竭，质子梯度不能消耗，阻碍电子传递，氧气消耗减少，为IV态呼吸。
呼吸控制率（respiratory control ratio或respiratory control index；RCR），又称呼吸调节比，是指III态（加入ADP）的呼吸速率与IV态（ADP耗竭）的呼吸速率之比。
正常线粒体的RCR为3至10：RCR降低意味着线粒体ATP 合成功能损伤，呼吸障碍；RCR增高意味着细胞活动旺盛，代谢加快。
产品内容介质液（Reagent A）毫升态底物液（Reagent B）微升态底物液（Reagent C）微升产品说明书 1份保存方式保存在－20℃冰箱里，有效保证6月用户自备CLARK氧电极仪：用于测定溶解氧浓度实验步骤实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。
然后进行下列操作。
1．加入xx毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽2．使用微型磁力子搅拌，充分混匀3．密封反应槽4．开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为0.240微摩尔分子氧/毫升（25℃）5．持续记录1分钟后，注射加入xx微升待测的线粒体（总量2毫克）（注意：氧浓度可能瞬时增加5％）6．持续记录1分钟后，注射加入xx微升态底物液（Reagent B）――开始IV态呼吸（注意：参见注意事项9）7．持续记录2分钟：出现氧浓度缓慢下降）（8．继续注射加入xx微升态底物液（Reagent C注意：氧浓度在10秒钟内开始下滑）――开始III态呼吸（注意：参见注意事项9）9．持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点10．分别测算III态呼吸速率和IV态呼吸速率：氧浓度降低值÷实际时间（分钟）11．计算呼吸控制率：III态呼吸速率÷IV态呼吸速率注意事项1．本产品为20次操作2．操作时，须戴手套3．确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入4．线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用GENMED线粒体分离试剂盒－GMS10006.15．注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入6．避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注10微升7．保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高8．反应液充分混匀，和环境氧保持平衡9．加注态底物液（Reagent B）和态底物液（Reagent C）前，须充分冻融和混匀10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量11．本公司提供系列线粒体检测试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能稳定2．本产品经鉴定检测敏感。
SAB 线粒体膜电位测定试剂盒说明书CA003
O I.II.III.IV.V.Order:order@Kit cStorStora Peri One Prot1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Re@signalwayanti contents:SpecificaJC-1Incubation concentrate rage age it at -20od of validitYeartocol:. Collect samp are about 2-The cells arePreparation Prepare Incusamples and incubation b buffer; then staining worResuspend minutes in 5CentrifugateCells were reAnalysis resfluorescence esult Analys 1. Detect c FL1 cha are nor 2. Observ filter , anRed + b M ation 1 n buffersolution℃ without lig ty ples cells as -5×105.e washed tw of Incubationubation buffe d the followin buffer concen add 5μl JC-1rking solution the cells with5% CO2 incu e to collect ce esuspended sults by flow c e microscopy sis cell apoptosi annel and re mal cells, FL e under fluornd observe th by two-color Mitocho For Resea 20 as 1004m ght, and avoi well as nega wice with PBS n buffer solu er and JC-1 s ng proportion ntrate solutio 1 to the 500u n; h 500μl JC-1bator; ells at room t with 500μL cytometry or y or laser sca is by flow cyt d fluorescen L-1+, FL-2- a rescence mic he yellow-gre filter , and ob ondrial M Cat. arch Use On ssays 0ulml d repeated f ative, positiv S, then Centr tion and JC-staining work ns. Add 900n, mixing an ul incubation staining wo temperature;preheat incu r fluorescenc anning confo tometry : the nce detected are apoptotic croscope: ob een by single serve the gre Membra . No: CA0 CA0 CA0nlyS 50 assay 250ul 10ml freezing and e control cel rifuge and co -1 staining so king solution μl sterile deio d preheating buffer and v rking solutio ; ubation buffe ce spectropho ocal microsco e green fluore through the cells.bserve Green e filter are no een by single ane Pote 003-1 20003-1 50003-2 100Support:tech@ys 10thawing.ls, and the n ollect cells; olution: according to onized water g to 37 ° C to vortex mixing n, 37 °C, and r; otometer, or opy.escence dete FL2 channe n ++, Red + ormal cells; o e filter are ap ential A 0T 0T 0T @signalwayan 0 assays 500ul 20ml number of ce o the number to 100μlo get incubati dubbed JC-d incubate fo observations ected through l. FL-1+, FL-+ by two-colo bserve Gree poptosis cells Assay ki CA003CA003t llsr of ion -1or 15 s by h the-2+ or en ++, s.。
组织线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书
组织线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂盒产品说明书主要用途组织线粒体内钙离子浓度荧光定量检测试剂是一种旨在通过线粒体钙离子特异性荧光探针Rhod-2，与钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光分光光度仪下观察相对荧光峰值的变化，来测定组织线粒体中总钙离子浓度的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种组织（动物、人体等）内线粒体钙离子的浓度检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。
技术背景钙是人体中的一种重要电介质和矿物质，占1150克。
其中99％的钙以氟磷灰石钙（calcium fluorophosphate apatite）形式存在于骨组织中。
非骨组织钙成分主要存在于细胞内。
钙具有两种主要形式：一种是非弥散型蛋白结合钙，其构成约40％至50％的血清中的总钙含量；另一种为弥散型游离钙，其进一步分成具有活性的复合钙（complexed calcium）和离子钙（ionized calcium）。
钙对神经肌肉兴奋性（neuromuscular excitability）、血液凝固、酶的激活、离子跨膜运输、释放神经传导介质、信使传导等方面起着重要作用。
在细胞内，钙离子主要储存在线粒体和内质网等细胞器中。
其中线粒体钙离子在调节线粒体代谢、保持线粒体的ATP产量达到细胞需求，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。
线粒体钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求，以及需要线粒体纯化。
Rhod-2，罗丹明123（rhodamine 123）的衍生产物，一种与钙离子结合产生荧光，同时其正电荷特性，特异性地聚集在线粒体里，由此用于测定线粒体内钙离子水平。
在荧光分光光度仪下，激发波长550nm，散发波长590nm，来定量测定线粒体的钙浓度。
线粒体乙醛脱氢酶（ALDH2）活性检测试剂盒说明书
线粒体乙醛脱氢酶（ALDH2）活性检测试剂盒说明书微量法货号：BC5515 规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称 规格 保存条件 提取液 液体110 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂一 液体15 mL×1瓶 2-8℃保存 试剂二 粉剂×2支 -20℃保存 试剂三 液体0.5 mL×1支 2-8℃保存 试剂四 液体1 mL×1支 2-8℃保存 试剂五液体2.8 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、 试剂二：临用前取一支试剂二加入1.5mL 蒸馏水溶解，用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、 试剂五：沸点低，在使用时保持低温以保证正确的吸取量。
用后及时封口。
3、 工作液：临用前根据样本数量按照试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=110µL ：20µL ：4µL ：6µL ：20µL （160µL ，1T ）的比例配制工作液，现用现配。
产品说明：线粒体乙醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase 2，ALDH2）属于乙醛脱氢酶蛋白家族，存在于很多组织，特别是肝脏组织内含量较高。
该酶主要参与乙醇代谢过程的第二步，在线粒体内将乙醛氧化成羧酸，然后进入三羧酸循环，被彻底分解，解除乙醛对生物体的毒害作用。
另外，ALDH2也可作为酯酶参与硝酸甘油的代谢途径，是硝酸甘油重要的生物活性剂。
ALDH2催化乙醛和NAD +转化为乙酸和NADH ，利用NADH 在340nm 处吸光值的变化即可计算得到ALDH2的活性。
Acetaldehyde + NAD + Acetic Acid + H + +NADH (340nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书中文版
全血线粒体DNA萃取试剂盒产品说明书（中文版）主要用途全血线粒体DNA萃取试剂是一种旨在通过化学溶解纯化血白细胞、物理或化学破膜及离心处理获得线粒体，然后进一步生物酶处理以获得高质量的线粒体DNA的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种动物血细胞中的线粒体核酸成分处理。
用于后续的杂交、克隆、酶切、PCR 分析等。
产品即到即用，操作简易，性能稳定，无核酶污染，萃取纯度和产量皆高。
技术背景线粒体细胞器的研究是现代细胞生物学的最重要的课题之一。
线粒体成为生物衰老、古生物、细胞凋亡、肿瘤、HIV、老年痴呆症、糖尿病、肌肉疾病等研究的主要对象。
线粒体DNA的分离和定量以及突变分析是研究中必不可少的。
产品内容溶血液（Reagent A）毫升清理液（Reagent B）毫升裂解液（Reagent C）毫升净化液（Reagent D）毫升强化液（Reagent E）毫升保存液（Reagent F）毫升破膜液（Reagent G）毫升去干扰液（Reagent H）微升酶解液（Reagent I）微升萃取液（Reagent J）毫升浓缩液（Reagent K）毫升助沉液（Reagent L）微升沉淀液（Reagent M）毫升纯化液（Reagent N）毫升缓冲液（Reagent O）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（Reagent D）、去干扰液（Reagent H）、酶解液（Reagent I）、萃取液（Reagent J）和助沉液（Reagent L）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备1.5毫升离心管：用于核酸操作的容器15毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备的容器50毫升锥形离心管：用于血细胞处理的容器涡旋震荡仪：用于混匀4℃微型台式离心机：用于沉淀细胞和核酸4℃超速离心机：用于分离细胞器成分DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞58℃恒温水槽：用于孵育反应物实验步骤一、白细胞分离实验开始前，室温预热血溶液（Reagent A），同时4℃预冷清理液（Reagent B）。
普利莱基因技术线粒体提取试剂盒说明书
升级版线粒体提取试剂盒C0010描述：线粒体制备试剂盒(Mitochondria Isolation Kit)用于从组织或培养细胞中分离线粒体和细胞胞浆成分。
加入分离溶液，匀浆破碎组织细胞，经过数次800g和12000g离心，在60分钟内即可分离出完整的线粒体和胞浆成分。
制备的线粒体具有很高的生物学活性，可进行各种功能研究如酶学测定，更可用于Western Blot、2D-胶、线粒体蛋白或DNA提取、蛋白质组学等研究。
严格按照说明操作，总是能制备获得高纯度线粒体。
一篇方法学研究论文发现，用普利莱试剂盒制备线粒体的得率、活性、纯度优于蔗糖密度梯度离心法和Invotrogen/Pierce线粒体提取试剂盒方法。
适用：从组织、培养细胞制备高纯度线粒体，同时分离细胞胞浆成分。
组成：Mito Solution100ml for50次制备200ml for100次制备储存：−20ºC12个月有效操作步骤：以下所有操作均在4ºC进行1.组织匀浆：100~200mg新鲜组织如肝、脑、肾、心肌等，剪为0.5cm2碎块放入小容量玻璃匀浆器内。
估计组织块总体积。
加入1.5ml冰预冷的Mito Solution。
用间隙严紧的研杵上下研磨组织20次。
培养细胞匀浆：800×g5min离心收集细胞。
单次提取需2-5×107个细胞。
加入1.5ml冰预冷Mito Solution 重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，用间隙严密的研杵研磨细胞30次。
2.将匀浆液转移到离心管中，800×g，4ºC离心5min。
（胞核、膜碎片、未裂解细胞等在管底，弃去）3.收集上清液并转移到新的离心管。
再次800×g离心5min at4ºC，弃沉淀。
4.将上清液转移到新的离心管。
10,000×g离心10min4ºC。
线粒体沉淀在管底。
离心后的上清含胞浆成分，可收集用于对照实验。
线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒说明书
线粒体呼吸链复合体Ⅲ活性检测试剂盒说明书可见分光光度法货号：BC3240规格：25T/12S、50T/24S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称/规格25T50T保存条件提取液液体20 mL×1瓶液体40 mL×1瓶4℃保存试剂一液体20 mL×1瓶液体20 mL×2瓶4℃保存试剂二粉剂×1支粉剂×2支-20℃保存试剂三液体3 mL×1支液体5.5 mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、工作液的配制：临用前把试剂二转移到试剂一中混合溶解，用不完的试剂4℃可保存一周；产品说明：线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2）又称CoQ-细胞色素C还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C，生成还原型细胞色素C。
与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm 光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、4 ℃ 600 g离心10min。
将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。
3、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。
4、在沉淀中加入200μL提取液，超声波破碎（功率20%，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅲ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。
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货号: QS3302 规格：25管/24样
线粒体复合体Ⅲ试剂盒说明书
可见分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2）又称CoQ-细胞色素C还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C，生成还原型细胞色素C。
测定原理：
与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
自备实验用品及仪器：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
试剂一：25mL×1瓶，-20℃保存；
试剂二：5mL×1瓶，-20℃保存；
试剂三：0.5 mL×1支，-20℃保存；
试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；
试剂六：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①准确称取0.1g组织或收集500万细菌或细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀
浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率
20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定
（1）工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）在1mL玻璃比色皿中加入40μL样本、100μL试剂六和800μL工作液，立即混匀，记录550nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。
复合体Ⅲ活力单位的计算：
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（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1 nmol 还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V样) ÷T=615×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol 还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=124×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.248×ΔA
V反总：反应体系总体积，9.4×10-4L；ε：细胞色素C摩尔消光系数，1.91×104L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.04 mL；V样总：加入提取液体积，0.202 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。
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