蛋壳膜中透明质酸的提取及部分特性研究
鸡蛋膜提取实验报告
一、实验目的1. 学习和掌握鸡蛋膜的基本提取方法。
2. 了解鸡蛋膜的结构和成分。
3. 探究不同提取方法对鸡蛋膜质量的影响。
二、实验原理鸡蛋膜是一种天然生物材料，具有良好的生物相容性和降解性，广泛应用于食品包装、医药、环保等领域。
本实验通过物理和化学方法提取鸡蛋膜，分析其结构和成分，为后续研究提供基础。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜鸡蛋、蒸馏水、白醋、氢氧化钠、氯化钠、无水乙醇、乙醚、甲醇、滤纸、剪刀、烧杯、电子天平、显微镜、烘箱、电热恒温水浴锅等。
2. 仪器：显微镜、烘箱、电子天平、烧杯、剪刀、滤纸等。
四、实验步骤1. 鸡蛋膜提取（1）将新鲜鸡蛋洗净，剥去蛋壳，取出鸡蛋膜。
（2）将鸡蛋膜剪成小块，放入烧杯中。
（3）加入适量蒸馏水，用剪刀剪碎鸡蛋膜，使鸡蛋膜充分溶解。
（4）将烧杯置于电热恒温水浴锅中，加热至60℃，搅拌溶解。
（5）待鸡蛋膜溶解后，用滤纸过滤，收集滤液。
2. 鸡蛋膜成分分析（1）将滤液置于烧杯中，加入适量氢氧化钠溶液，调节pH值至7.0。
（2）用电子天平称取一定量的滤液，加入无水乙醇，充分搅拌。
（3）静置，观察沉淀形成。
（4）将沉淀用滤纸过滤，烘干，称重。
（5）重复步骤（2）至（4），分别加入乙醚、甲醇，观察沉淀形成。
3. 不同提取方法对鸡蛋膜质量的影响（1）分别采用物理方法和化学方法提取鸡蛋膜。
（2）比较两种方法提取的鸡蛋膜在结构、成分和质量上的差异。
五、实验结果与分析1. 鸡蛋膜提取结果通过实验，成功提取了鸡蛋膜。
在显微镜下观察，鸡蛋膜呈半透明状，具有网状结构。
2. 鸡蛋膜成分分析结果（1）氢氧化钠溶液提取的鸡蛋膜沉淀质量最大，说明其主要成分是蛋白质。
（2）乙醚和甲醇提取的鸡蛋膜沉淀质量较小，说明其成分中可能含有其他物质。
3. 不同提取方法对鸡蛋膜质量的影响（1）物理方法提取的鸡蛋膜质量较好，结构完整，成分丰富。
（2）化学方法提取的鸡蛋膜质量较差，结构受损，成分单一。
六、实验结论1. 成功提取了鸡蛋膜，并对其结构、成分进行了分析。
酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的工艺优化_朱文婷
提取物与应用
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2016年 第 41卷 第 01期
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2.3.3 验证实验设计 通过正交实验得出各因素 的最佳组合水平，若在单因素实验中未出现该最 佳组合则需进行验证实验，即将正交实验中的最 佳因素组合与通过正交实验得出各因素的最佳水 平组合通过实验计算透明质酸的提取量，选择最 佳提取工艺条件。 2.4 透明质酸提取物成分分析的方法 2.4.1 氨基葡萄糖的测定方法 利用Elson-Morgan 法测定透明质酸中氨基葡萄糖的含量。配制浓度 为100 mg/L的盐酸氨基葡萄糖标准溶液，分别吸 取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于5支具塞 试管中，补水至2.0 mL，另一支管中加2.0 mL蒸 馏水作为空白对照；分别加入7%乙酰丙酮试液1 mL，沸水浴加热25 min，冰浴5 min，放至室温， 加入对-二甲氨基苯甲醛试液1 mL，加乙醇至10 mL，60 ℃水浴1 h，测定530 nm波长下的吸光度。 以盐酸氨基葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐 标制作标准曲线。 2.4.2 残留蛋白质的测定方法 以牛血清白蛋白 为参考标准，选用考马斯亮蓝法测定提取物中残 留蛋白质含量。配制浓度为100 mg/L的蛋白标准 溶液，分别吸取标准溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL于5支试管中，补水至0.5 mL，另取一支试管中 加0.5 mL蒸馏水作为空白对照，分别在6支试管中 加入5 mL考马斯亮蓝G-250试液，混匀并静置10 min，测定595 nm波长下的吸光度。以蛋白质浓度 为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线。 2.4.3 提取物成分的测定方法 称取透明质酸提 取物，加入6 mol/L盐酸溶解，沸水浴2 h，冷却 至室温，调pH至7，定容，吸取1 mL至具塞试管 中，加水1 mL，按标准曲线操作方法进行测定。
【CN109970883A】一种由蛋壳中回收透明质酸钠及其分离与纯化的方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910188289.7(22)申请日 2019.03.13(71)申请人 世界家庭用具制品厂有限公司地址 中国香港新界葵涌华新街18号18楼(72)发明人 何嘉仪 桑梓叶 郑婉珊 欧阳涛 克里斯蒂安.维博沃 刘佩诗 (74)专利代理机构 深圳市千纳专利代理有限公司 44218代理人 胡坚(51)Int.Cl.C08B 37/08(2006.01)C08K 3/26(2006.01)(54)发明名称一种由蛋壳中回收透明质酸钠及其分离与纯化的方法(57)摘要一种由蛋壳中回收透明质酸钠及其分离与纯化的方法，本发明属于废料回收领域，本发明的目的在于提供一种无需将蛋壳与蛋壳膜预先分离而直接回收其中透明质酸钠的方法，同时提供一种分离纯化方法，将回收所得透明质酸钠由提取液中分离出来，进一步纯化，从而得到具有更高价值的高纯度透明质酸钠。
本发明的有益效果在于：1、由废弃物中提取价值较高的透明质酸钠，既可减少废物堆填，又能提高经济收益；2、无需将蛋壳与蛋壳膜预先分离，通过碱性水解方法直接提取透明质酸钠，程序简化；3、分离与纯化方法安全环保，过程中不产生有害污染物，得到高纯度透明质酸钠，增加经济价值；4、所得透明质酸钠经消毒处理后，具有较高安全性。
权利要求书2页 说明书5页 附图1页CN 109970883 A 2019.07.05C N 109970883A权 利 要 求 书1/2页CN 109970883 A1.一种分离与纯化蛋壳中回收的透明质酸钠的方法，所述方法包括如下步骤：取带膜蛋壳的水解提取液，向水解提取液中加入2-4倍体积的无水乙醇，同时降低温度，静置沉淀；采用离心进行固液相分离，移除上清液；将固相溶于溶剂中，所述的溶剂由超纯水与无水乙醇按重量比1:0.5～1:3配置而成，加入溶剂的重量为沉淀的30-80倍，溶解时间为4-8小时；溶解结束后，采用离心将沉淀与溶液分离，保留沉淀；所得沉淀置于pH值为11-14的碱性溶液中，持续搅拌，添加碱性溶液的重量为待溶沉淀的1500-2000倍更优，溶解温度为30-45℃，溶解时间为2-4小时；通过离心分离移除沉淀，保留含有透明质酸钠的溶液；调节含有透明质酸钠的溶液的pH值以避免透明质酸钠在碱性溶液中逐渐降解；采用透析法滤除小分子杂质，得到纯化后的透明质酸钠溶液；对纯化后的透明质酸钠溶液进行干燥，得到透明质酸钠粉末。
蛋壳膜中透明质酸的提取及部分特性研究
食品工业科技S cience and Technology of Food Industry研究与探讨2008年第06期172 蛋壳膜中透明质酸的提取及部分特性研究赵玉红1,2,迟玉杰1,3(11东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;21东北林业大学林学院,黑龙江哈尔滨150040)摘 要:分别采用胰蛋白酶和胃蛋白酶降解蛋壳膜,从中提取透明质酸。
通过正交实验考察酶解温度、pH 、酶用量、料液比和酶解时间对透明质酸提取量的影响,确定采用胰蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为50℃,时间为7h,料液比为1∶40,酶用量为8000U /g,pH 为815,提取率为131294mg/g;采用胃蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为37℃,时间为5h,料液比为1∶40,酶用量为11000U /g,pH 为310,提取率为241494mg/g 。
结果表明,胃蛋白酶提取透明质酸的效果好于胰蛋白酶,且壳膜中含有重要数量的透明质酸。
通过红外光谱分析和测定葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖的含量,对提取的透明质酸进行分析鉴定。
关键词:蛋壳膜,透明质酸,提取,酶,特性Extrac ti o n and p a rti a l cha rac te ri za ti o n o f hya l u r o n i c ac i d fr om egg she ll m em b raneZHAO Y u -hong 1,2,CH IY u -ji e1,3(11Food College,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;21Forestry College,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China )Ab strac t:Hya lu ron ic a c i d (HA )w a s e xtra c te d from e g g s he llm em b ra ne w ith tryp s in a nd p ep s in,re sp e c ti ve ly 1The e ffe c ts of e xtra c ti on tem p e ra tu re,p H,the am oun t of e nzym e,the ra tio of m a te ria l -fl u i d,a nd e xtra c tion ti m e w e re i nve s tig a te d w ith o rthog ona l e xp e ri m e n t 1The op ti m ize d p a ram e te rs of tryp s i n w e re ob ta i ne d a nd s how n a s fo llow s:e xtra c tion tem p e ra tu re 50℃,p H 815,am oun t of e nzym e 8000U /g,the ra tio of m a te ria l -flu id in 1∶40,e xtra c ti on ti m e 7h,the yi e l d ing ra te of hya lu ron ic a c id w a s 131294m g /g (e g g s he ll m em b ra ne )1The op ti m i ze d p a ram e te rs of p ep s in w e re ob ta i ne d a nd s how n a s fo ll ow s:e xtra c tion tem p e ra tu re 37℃,p H 310,am oun t of e nzym e11000U /g,the ra tio of m a te ria l -flu id in 1∶40,e xtra c tion ti m e 5h,the yi e l d ing ra te of hya lu ron ic a c i d w a s 241494m g /g (e g g s he llm em b ra ne )1Th i s i nd ic a te d tha t the e ffe c t of the yie ld ing ra te w ith p ep s in w a s b e tte r tha n tryp s in 1A nd i nd ic a te d tha t the re w e re s i g n ifi c a n t q ua n titie s of HA c ou ld b e e xtra c te d in e g g s he ll m em b ra ne 1The c on te n t a nd p u rity w e re te s te d b y infra c tion sp e c trum ,g luc u ron i c a c i d a nd N -a c e tylg luc os am ine 1Ke y wo rd s:e g g s he llm em b ra ne;hya lu ron i c a c i d;e xtra c tion;e nzym e;c ha ra c te ri za ti on中图分类号:TS25311 文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2008)06-0172-03收稿日期:2008-04-11 3通讯联系人作者简介:赵玉红(1968-),女,副教授,博士研究生,研究方向:食品深加工及综合利用。
蛋壳壳膜分离技术的研究
2020 年第 2 期
第 2 期 （总第 498 期）
用，不仅可以消除废弃蛋壳对环境造成的污染，而 且可以充分挖掘蛋壳这种天然无毒生物组织中潜藏 的利用价值，从而达到保护人类赖以生存的生态环 境的目的。
1 蛋壳壳膜分离方法
目前，国内对蛋壳进行壳膜分离主要是将收集 的蛋壳经过清洗、干燥、粉碎处理后，分别采用物 理法、化学法[5]或生物酶法对其进行处理，使蛋壳膜 和真壳发生脱离，再进行分类回收，从而达到壳膜 分离的目的。
窑 66 窑
农产品加工
2020 年第 2 期
获取蛋壳粉和蛋膜粉，这就是物理法壳膜分离。李 涛等人[6]研究了水对鸡蛋壳与蛋膜分离的影响，并分 别以蛋壳收率和蛋膜收率为指标摸索出了最佳分离 条件，取得较好的壳膜分离效果。王瑞环等人[7]将蛋 壳粉碎后过 80 目分样筛，再利用水对蛋壳细粉进行 浮选分离，最终蛋膜得率达到 2.20%，回收的蛋膜粉 中钙残留率为 3.30%。迟媛等人[8]设计制造了一种机械 搅拌式鸡蛋壳膜分离装置，通过试验研究发现以膜回 收率最大化为指标时，得到了该种壳膜分离装置在搅 拌转速 168 200 r/min，搅拌时间 8.515 min，料液比 1∶120，温度 20 ℃时的膜回收率可达 68%以上。采 用物理法进行壳膜分离具有条件简单、污染小等优 点，但膜回收率不高，且回收的蛋膜中还残留了部 分蛋壳，对其后续的利用造成影响。
eggshell；separation；technology；research
透明质酸的提取工艺[发明专利]
![透明质酸的提取工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/f1b95ff8a216147916112874.png)
专利名称：透明质酸的提取工艺专利类型：发明专利
发明人：肖汉
申请号：CN201110214144.3申请日：20110729
公开号：CN102898540A
公开日：
20130130
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：透明质酸的提取工艺涉及一种化妆品原料的提取工艺，更具体地说，是涉及透明质酸的提取工艺。
本发明提供了一种原料易得、提取率高的透明质酸的提取工艺。
本发明采用如下技术方案，本发明的工艺步骤为：将蛋壳膜过筛，用蒸馏水浸泡5～6h，加入1～3％的NaCl，在90～95℃下搅拌10～15min，冷却至室温，加入4000～9000U的蛋白酶，在30～80℃下酶解3～8h；离心、过滤，收集上清液；调节体系的pH值为5.0～10.0，加入2倍的95％乙醇醇沉12h；离心收集沉淀；脱水、干燥、成品。
申请人：肖汉
地址：110168 辽宁省沈阳市浑南新区科幻路9号0818室
国籍：CN
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酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的研究
关键 词 ： 鸡蛋壳膜 ； 明质酸 ； Nhomakorabea透 酶解
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Ｚ Ａ ｕ ｈｎ Ｈ ＮＬｎ ｌ Ｃ Ｉ ｕ ｊ 。 Ｈ ＯＹ — ｏ ｇ ． Ａ ｉ—ｉ ． Ｈ －ｉ ＇ ｎ Ｖ ｅ （ ． ｏ ｓｙＣ ｌ ｇ， ｏ ｈ ａｔ ｏ ｓ ｎｖｒ ｔ Ｈ ｒｉ １ ０４ ， ｅ ｏｇ ａｇ Ｃ ｉ ； １ Ｆｒ ｔ ｏｅｅ Ｎ ｒ ｅｓＦ ｒ ｔ Ｕ ｉ ｓｙ ａｂ ５０ ０ Ｈ ｉｎ ｊｎ ， ｈ ａ ｅｒ ｌ ｔ ｅｒ ｙ ｅ ｉ， ｎ ｌ ｉ ｎ
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４ ０
第 第期 卷 １
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科 研 学究
酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的研究
酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的研究
酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的研究
赵玉红;韩琳琳;迟玉杰
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2008(029)001
【摘要】对酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的工艺进行了研究,通过单因素试验和正交试验考察了酶解温度、pH、酶用量、料液比和酶解时间对透明质酸提取量影响,确定了胰蛋白酶提取透明质酸的最佳工艺条件为温度50℃,pH为8.5,酶用量为8 000 U,料液比1∶40,提取时间7 h.在此条件下,蛋壳膜中透明质酸的提取量为13.294 mg/g.
【总页数】4页(P40-43)
【作者】赵玉红;韩琳琳;迟玉杰
【作者单位】东北林业大学,林学院,黑龙江,哈尔滨,150040;东北农业大学,食品学院,黑龙江,哈尔滨,150030;东北林业大学,林学院,黑龙江,哈尔滨,150040;东北农业大学,食品学院,黑龙江,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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食品工业科技S cience and Technology of Food Industry研究与探讨2008年第06期172 蛋壳膜中透明质酸的提取及部分特性研究赵玉红1,2,迟玉杰1,3(11东北农业大学食品学院,黑龙江哈尔滨150030;21东北林业大学林学院,黑龙江哈尔滨150040)摘 要:分别采用胰蛋白酶和胃蛋白酶降解蛋壳膜,从中提取透明质酸。
通过正交实验考察酶解温度、pH 、酶用量、料液比和酶解时间对透明质酸提取量的影响,确定采用胰蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为50℃,时间为7h,料液比为1∶40,酶用量为8000U /g,pH 为815,提取率为131294mg/g;采用胃蛋白酶酶解的最佳条件为:温度为37℃,时间为5h,料液比为1∶40,酶用量为11000U /g,pH 为310,提取率为241494mg/g 。
结果表明,胃蛋白酶提取透明质酸的效果好于胰蛋白酶,且壳膜中含有重要数量的透明质酸。
通过红外光谱分析和测定葡萄糖醛酸、氨基葡萄糖的含量,对提取的透明质酸进行分析鉴定。
关键词:蛋壳膜,透明质酸,提取,酶,特性Extrac ti o n and p a rti a l cha rac te ri za ti o n o f hya l u r o n i c ac i d fr om egg she ll m em b raneZHAO Y u -hong 1,2,CH IY u -ji e1,3(11Food College,Northeast Agricultural University,Harbin 150030,China;21Forestry College,Northeast Forestry University,Harbin 150040,China )Ab strac t:Hya lu ron ic a c i d (HA )w a s e xtra c te d from e g g s he llm em b ra ne w ith tryp s in a nd p ep s in,re sp e c ti ve ly 1The e ffe c ts of e xtra c ti on tem p e ra tu re,p H,the am oun t of e nzym e,the ra tio of m a te ria l -fl u i d,a nd e xtra c tion ti m e w e re i nve s tig a te d w ith o rthog ona l e xp e ri m e n t 1The op ti m ize d p a ram e te rs of tryp s i n w e re ob ta i ne d a nd s how n a s fo llow s:e xtra c tion tem p e ra tu re 50℃,p H 815,am oun t of e nzym e 8000U /g,the ra tio of m a te ria l -flu id in 1∶40,e xtra c ti on ti m e 7h,the yi e l d ing ra te of hya lu ron ic a c id w a s 131294m g /g (e g g s he ll m em b ra ne )1The op ti m i ze d p a ram e te rs of p ep s in w e re ob ta i ne d a nd s how n a s fo ll ow s:e xtra c tion tem p e ra tu re 37℃,p H 310,am oun t of e nzym e11000U /g,the ra tio of m a te ria l -flu id in 1∶40,e xtra c tion ti m e 5h,the yi e l d ing ra te of hya lu ron ic a c i d w a s 241494m g /g (e g g s he llm em b ra ne )1Th i s i nd ic a te d tha t the e ffe c t of the yie ld ing ra te w ith p ep s in w a s b e tte r tha n tryp s in 1A nd i nd ic a te d tha t the re w e re s i g n ifi c a n t q ua n titie s of HA c ou ld b e e xtra c te d in e g g s he ll m em b ra ne 1The c on te n t a nd p u rity w e re te s te d b y infra c tion sp e c trum ,g luc u ron i c a c i d a nd N -a c e tylg luc os am ine 1Ke y wo rd s:e g g s he llm em b ra ne;hya lu ron i c a c i d;e xtra c tion;e nzym e;c ha ra c te ri za ti on中图分类号:TS25311 文献标识码:A 文章编号:1002-0306(2008)06-0172-03收稿日期:2008-04-11 3通讯联系人作者简介:赵玉红(1968-),女,副教授,博士研究生,研究方向:食品深加工及综合利用。
蛋壳膜中含有的N -乙酰氨基葡萄糖半乳糖、葡萄糖醛酸、透明质酸、硫酸软骨素等活性大分子[1]正逐步被人们所认识并利用。
透明质酸(Hyalur onic acid,简称HA ),是一种酸性多聚粘多糖,是由N -乙酰葡萄糖胺和葡萄糖醛酸通过β-1,4和β-1,3糖苷键反复交替连接而成。
由于其独特的保水、润滑等高分子多糖的性质及天然、无过敏和与人体组织良好的生物相容性,被广泛应用于化妆品、保健食品和医药领域[2]。
目前从动物组织中提取透明质酸主要以鸡冠、人脐带、动物眼球等为原料[3～5],从其他原料也有提取HA 的研究[6,7]。
但是由于原料资源的限制,不能满足市场对透明质酸的需求。
最近,国外学者探测到蛋壳膜中含有高浓度的透明质酸[8],而蛋壳是一类容易获得且数量巨大的废弃物,因此,若以蛋壳膜作为提取透明质酸的原料,对蛋壳的深加工利用及提高产品附加值具有重要意义。
1 材料与方法111 材料与设备原料 鸡蛋壳、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶;葡萄糖醛酸标准品、盐酸氨基葡研究与探讨食品工业科技V ol .29,N o .06,20082008年第06期 173 萄糖标准品、咔唑 购于美国Sig ma 公司;其它试剂 均为分析纯。
电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9240,上海一恒科学仪器有限公司;紫外可见分光光度计 岛津UV -2401PC;pH 计 pH s-3c,上海伟业仪器厂;高精度电子分析天平 JA2003,上海良平仪器仪表有限公司;电热恒温水浴锅 HHS,上海博迅实业有限公司医疗设备厂;控温磁力搅拌器 85-2,常州国华电器有限公司;台式高速离心机 JDL -5,上海安亭科学仪器厂;组织匀浆机 JJ -2,常州国华电器有限公司;高速万能粉碎机 F W 100,天津市泰斯特仪器有限公司;真空旋转蒸发仪 RE -52A ,上海亚荣生化仪器厂。
112 实验方法11211 原料预处理 清洗鸡蛋壳,对鸡蛋壳进行破碎,采用简易水分离法使蛋壳和蛋壳膜分离。
蛋壳膜经40℃烘干后,用万能粉碎机将其粉碎,过60目筛备用。
11212 工艺流程 过筛蛋壳膜→蒸馏水浸泡→加入1%氯化钠→搅拌加热90℃,保温10m in →冷却至室温→分别加胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解→离心过滤收集上清液→浓缩→调pH →2倍体积的95%乙醇醇沉12h →离心收集沉淀→无水乙醇脱水3～5次→干燥得透明质酸中间品11213 HA 纯化工艺流程 透明质酸粗品Ⅰ→溶解→除蛋白色素等杂质→浓缩→95%的乙醇醇沉→离心→无水乙醇洗涤→冷冻干燥→透明质酸粗品Ⅱ→溶解→CPC 法纯化HA →透明质酸纯品Ⅰ11214 透明质酸含量的测定 透明质酸含量采用B itter-M uir 咔唑法[9]测定。
精密称取葡糖醛酸(AR )10mg,置50mL 量瓶中,加水溶解至刻度,摇匀备用。
精密量取标准溶液015、110、115、210、215mL ,分别加入10mL 量瓶中,加水稀释至刻度,得10、20、30、40和50μg /mL 浓度的对照品溶液。
取6只具塞刻度试管分别加入硼砂硫酸液5mL ,置冰浴中冷至4℃左右。
然后分别取空白溶液(蒸馏水)和不同浓度的对照品溶液各1mL ,加入试管中,先轻轻振摇,再充分混匀,并不断用冰浴冷却,将试管置沸水中加热10m in,置常水中冷至室温。
加入咔唑试剂012mL ,混匀,水浴中再加热15m in,冷至室温。
在530n m 处测定吸光度A 。
取本品011g /L 的溶液1mL ,照标准曲线项下的方法测定吸收度。
从标准曲线上查出相应的葡糖醛酸浓度,按下式计算含量:葡糖醛酸%=(标准曲线查出的浓度/样品液浓度)/(1-干燥失重%)×100%,由于葡萄糖醛酸的含量占整个产量的46143%,因此测得醛酸的含量除以46143%,就可以得到HA 的产量。
HA 得率=处理后HA 含量×样品液体积处理前HA 含量×样品液体积×100%11215 氨基葡萄糖的测定 氨基葡萄糖标准曲线测定采用改进的Els on -Morgan 法,盐酸氨基葡萄糖(105℃干燥至恒重)配成100μg /mL 作为标准溶液。
分别吸取标准溶液0、012、014、016、018、110mL 置25mL 具塞试管中,分别加水到2mL ,加入7%乙酰丙酮试液1mL ,置沸水浴中加热25m in,取出后冰浴5m in,放至60℃,再加入216%对-二甲氨基苯甲醛试液1mL ,加乙醇至10mL ,放置60m in,以空白管为空白,在530n m 波长处测定吸收度(A ),以氨基葡萄糖浓度对吸收度作标准曲线[5]。
11216 胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解作用的正交实验因素和水平[10] 见表1、表2。
表1 影响胰蛋白酶酶解作用的因素和水平水平A 温度(℃)B pHC 酶用量(U /g )D 料液比(g/mL )E 时间(h )14571575001∶35615250880001∶40735581585001∶45715460990001∶508表2 影响胃蛋白酶酶解作用的因素和水平水平A 温度(℃)B pHC 酶用量(U /g )D 料液比(g/mL )E 时间(h )130********∶30410233310100001∶35415335315110001∶40510437410120001∶4551511217 HA 红外光谱分析 用酒精擦拭研钵、镊子、压片用器具等,在研钵中放入少量样品,加入适量K B r,调整样品浓度以保证较高的透光率。