高效液相色谱培训 HPLC使用与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种高效分离和分析样品成分的仪器，广泛应用于医药、化工、环境监测、食品等领域。
在使用HPLC 的过程中，保养和维护工作非常关键。
良好的保养和维护能够延长设备寿命，保证分析结果的准确性和可靠性。
本文将就HPLC的保养和维护进行较全面的探讨，以期为相关使用者提供帮助和指导。
一、日常保养1. 清洗：定期对HPLC进行清洗是保持设备正常工作的关键。
清洗前，首先应关闭色谱柱开关，拔掉电源，然后用无水乙醇清洗柱及管路，最后用纯水冲洗干净。
在一些需要不断更新样品溶剂的实验中，还需要对溶剂瓶、进样器等部件进行定期清洗。
2. 检查密封性：检查HPLC各接口的密封性，确保各部件之间无漏气、不漏液，避免因为漏气或漏液造成分析数据的误差。
3. 检查压力：在使用HPLC过程中，经常检查色谱柱前后的压力表读数，确保在正常范围内。
如果发现异常，应及时排查原因并进行处理。
4. 校准：定期对HPLC进行校准，保证设备和检测器的准确性。
可以借助标准物质进行定期的校准维护。
5. 检查溶剂余量：定期检查溶剂瓶的余量，确保实验过程中不会因为溶剂用尽而中断。
6. 检查灯管：若HPLC设备配备有紫外-可见检测器，需要定期检查和清洗灯管，以保证检测器的灵敏度和准确度。
二、周期性维护1. 良好的使用环境：保持HPLC设备使用环境的干净整洁，避免灰尘、化学气体等对设备造成影响。
需要注意设备周围的温度和湿度，避免影响设备的正常工作。
2. 正确存放标准溶液：在使用标准溶液时，要注意存放条件，避免因为存放不当导致标准溶液的失效。
3. 定期更换消耗品：HPLC设备的使用需要大量耗材，比如柱、进样器、检测器灯管等，这些耗材的使用寿命有限，需要定期更换，以保证设备的正常工作。
4. 记录维护情况：建立设备的维护记录，记录设备的使用情况、维护情况以及出现的问题及处理情况，为设备的维护提供参考。
hplc高效液相色谱仪工作原理操作、维护要点的梳理总结
HPLC高效液相色谱仪工作原理操作、维护
要点的梳理总结
HPLC（高效液相色谱）是一种常见的分析仪器，用于分离、鉴定和定量分析化合物。
下面是HPLC高效液相色谱仪的工作原理、操作和维护要点的梳理总结：
工作原理：
1. 样品通过高压注射器注入进入液相色谱柱，柱内填充有固定相（如硅胶或离子交换树脂），流动相（溶剂）通过柱子，样品中的化合物在不同的固定相上有不同的分配系数，从而被分离出来。
2. 分离后的化合物通过检测器进行检测，检测器将化学信号转换为电信号，然后通过数据系统进行数据处理，得到化合物的保留时间、峰面积等信息。
操作要点：
1. 准备工作：检查仪器是否正常工作，准备好样品，选择合适的溶剂进行样品制备和提取。
2. 启动仪器：启动仪器，调节流速、温度等参数，使其达到预设值。
3. 注入样品：通过注射器注入样品，注意控制注入速度和量。
4. 运行分析：启动色谱柱和检测器，开始进行分析。
5. 数据处理：通过数据系统对分析结果进行数据处理，得到化合物的保留时间、峰面积等信息。
维护要点：
1. 定期清洁和维护仪器：定期清洁仪器，更换滤芯和柱子，保证仪器的正常工作。
2. 定期校准仪器：定期对仪器进行校准，保证分析结果的准确性。
3. 注意安全操作：在操作过程中应遵守安全规范，避免意外事故发生。
4. 储存样品：储存样品时应注意保存条件，避免样品变质或污染。
总之，HPLC高效液相色谱仪的工作原理、操作和维护要点都需要认真掌握，才能保证分析结果的准确性和仪器的正常工作。
高效液相色谱仪的操作与维护指南
高效液相色谱仪的操作与维护指南高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）作为一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
为了保证仪器的正常运行和获得可靠的分析结果，正确的操作和科学的维护是非常重要的。
本指南将详细介绍高效液相色谱仪的操作和维护方法，以帮助用户正确使用该仪器。
一、高效液相色谱仪的操作方法1. 准备工作在操作前，需要先进行一些准备工作。
首先，检查仪器是否处于稳定的工作环境中，以确保仪器不受外界干扰。
其次，检查所有的连接与密封件是否完好，确保流体不会泄漏。
最后，检查溶剂和样品的储存条件，保证其符合要求。
2. 开机与关闭正确的开机和关闭步骤可以延长仪器的寿命。
开机前，需要检查电源和其他外部连接。
按照仪器的说明书，按顺序打开电源和其他必要的开关。
关闭仪器时，应按照相反的顺序关闭开关，并断开电源。
3. 样品准备与进样在进行进样操作前，需要准备好样品和溶剂。
样品准备时，应遵循相应的样品制备方法，确保样品的准确性和稳定性。
进样时，应根据实验需求设置适当的进样方式，并注意定量准确。
4. 仪器参数设置在进行分析之前，需要设置仪器的参数，以调整流速、温度、检测波长等参数。
仪器的参数设置应根据实验目的和样品特性进行优化调整，确保获得准确的分析结果。
5. 分析运行与数据处理设置好仪器参数后，可以开始进行分析运行。
根据实验要求和样品特性，选择合适的分析方法和梯度程序。
在分析过程中，应定期检查仪器运行状态，注意观察流速、峰面积、保留时间等数据，并记录相关结果。
6. 仪器清洗与维护分析结束后，必须对仪器进行清洗和维护。
首先，关闭流体通道，清除流体残留物和样品残留物。
然后，根据仪器说明书的要求，进行仪器的常规清洗和维护工作。
定期检查和更换液相柱、检测器等易损件，以保证仪器的正常运行。
二、高效液相色谱仪的维护方法1. 液相柱维护液相柱作为HPLC分离的重要组件，需要定期维护和保养。
高效液相色谱仪安全操作及保养规程
高效液相色谱仪安全操作及保养规程前言高效液相色谱仪（HPLC）是一种用于化学分析和检测的重要工具。
为了确保高效液相色谱仪的安全运行和最佳性能，需要遵守一系列的安全操作和保养规程。
本文档提供了详细的操作和保养步骤，以协助用户正确地使用和保护高效液相色谱仪。
安全操作规程操作前1.确保操作人员已经接受了高效液相色谱仪的操作培训并掌握了正确的操作方法。
2.在操作前检查仪器的电源是否正常，仪器的机械结构是否稳定，是否有明显损坏或松动的部件。
3.确保试剂和溶剂的选择和准备符合分析要求，并遵守相关安全规程，如使用防护手套和护目镜。
4.加载样品前必须确定样品的性质和浓度，并根据需要适当稀释和过滤。
操作时1.操作人员应当始终注意安全。
在操作过程中避免直接接触样品和溶剂，避免口误和吞咽样品或溶剂。
2.操作过程中，若发现异常状况，如机器停滞或跑偏、压力急剧增高等，应立即停止操作并检查仪器或相关部件。
3.调整某些参数时，如流速、温度、压力等，应尽量保持小幅度调整，避免快速快速调整。
4.操作结束后，必须关闭仪器并注销相关操作，清理工作区域和操作台面，清洗使用的管道、器皿和附件，并将物品归位。
操作恢复1.若长时间未使用高效液相色谱仪，请在使用前仔细检查机器各部位是否存在异常。
2.重新启动仪器时，请按照操作手册上的步骤重新进行仪器的初始化和调试。
废物处理高效液相色谱仪所使用的溶剂和其他化学废物，必须按照当地的环保规定进行处理和处置。
在处理前应该咨询相关专业人员。
保养规程日常检查和保养1.每天开始操作前，检查仪器的所有零部件是否齐全，零部件是否完整，清洁状态如何。
2.操作后，每天对样品室、管路等部位进行清洁，确保无污物堆积和管路没有堵塞现象。
3.每周对色谱柱进行洗涤和清洁，可以使用去离子水和乙醇为主要清洗溶剂，以确保柱子的性能和使用寿命。
4.定期对机械结构和电子部件进行检查和保养，保证设备运行的稳定性。
液路检查和保养1.定期检查操作中常温箱的工作状态和温度。
保养维护高效液相色谱仪的要点
保养维护高效液相色谱仪的要点高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分离和定量分析仪器。
为了保证其正常运行和延长使用寿命，需要进行定期的保养和维护。
下面是保养维护高效液相色谱仪的主要要点：1.保持色谱仪周围环境清洁干燥：色谱仪应该放置在无尘、无水、无振动、无干扰的环境下。
养成定期清理仪器外壳和工作台面的习惯，防止灰尘和异物进入仪器内部。
2.定期检查和更换耗材：液相色谱柱是色谱仪的核心部件，需要定期检查柱子的状况，包括柱液的流量、背压、峰形等参数。
当出现异常时，需要及时检查和更换柱子。
此外，溶剂瓶、垫片、接头和密封件等耗材也需要定期检查和更换。
3.保持良好的进样系统：进样系统是色谱仪样品进入柱子的关键部件。
需要注意致样器、进样针和进样管的清洁和灵敏度。
定期检查进样系统的各个部件，保证样品进入柱子的准确性和稳定性。
4.注意溶剂和流速的选择：溶剂和流速的选择对色谱分离的质量和分析结果有很大的影响。
应该选择优质的溶剂，在使用过程中定期更换，并注意保持合理的流速。
在使用有机溶剂时，要避免过高浓度的有机溶剂对仪器造成损害。
5.定期校准和质控：定期校准色谱仪可以保证分析结果的准确性和可靠性。
常见的校准包括柱液流量校准、波长和检测灵敏度的校准等。
此外，在样品分析过程中应该加入合适的质控标准品，并定期检查质控品的回收率和重复性。
6.注意样品的准备和处理：样品的准备和处理对HPLC分析结果有直接影响。
样品准备过程中应注意去除杂质和颗粒，避免对色谱柱和检测器造成污染或损坏。
对有机样品，要避免过高浓度的有机溶剂对进样系统造成损害。
7.定期维护仪器：除了日常保养，还应定期对仪器进行维护和检修。
定期检查和更换仪器中的各种装置、阀门、泵、检测器等关键部件。
根据仪器厂家的推荐，进行润滑和清洗等维护工作，保持仪器的正常运行。
8.进行严格的记录和文档管理：在使用和维护过程中应该做好记录和文档管理。
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项
高效液相色谱仪在使用和维护中的注意事项高效液相色谱仪（HPLC）是一种常见的分析仪器，用于分离、检测和定量化合物。
在使用和维护HPLC时，需要注意以下几点：1. 样品处理在样品处理过程中，必须避免样品受到污染，否则会影响分析的准确性。
因此，在样品的制备和处理过程中应该使用高质量的试剂和纯水，并避免使用有机溶剂和其他可能对分析产生干扰的物质。
2. 色谱柱选择选择合适的色谱柱是非常重要的，因为不同的色谱柱会对分析结果产生影响。
在选择色谱柱时，应该考虑要分析的样品和分离的目标化合物，以及柱的反相、离子交换、凝胶过滤等不同类型。
3. 溶液配制HPLC中的溶液应该严格按照配方进行配制，以确保分析结果的准确性。
溶液中可能存在的离子、杂质或气泡都会对流速、峰形和灵敏度产生影响。
4. 色谱条件在进行分析时，需要根据样品和柱的特性，选择适当的流速、洗脱剂和温度等条件。
这些条件对分析结果的准确性和分离效率都有很大的影响。
5. 维护和保养为了保证仪器的长期稳定和良好工作状态，需要定期进行维护和保养。
维护包括冷却系统、压力检测、检测器等组件的检查和清洗。
保养包括柱的定期调整和更换、溶液的更换等。
在使用和维护HPLC时，需要严格按照实验室规程操作，注意安全和环保，并做好记录和统计分析工作。
只有保证仪器操作正确、保养到位，才能获得准确、可重复的分析结果。
6. 检测器选择HPLC检测器的选择对分析结果的准确性和可重复性起着至关重要的作用。
常用的检测器包括紫外线（UV）检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
根据需要分析的化合物的性质进行选择。
7. 校正和标定在使用HPLC进行分析之前，必须进行校正和标定，以确保分析结果的准确性。
校正过程中通常涉及标准曲线的制备、内标物的选择和添加等。
8. 数据照实记录HPLC分析结果的准确性需要依赖于实验数据的准确记录。
在使用过程中应保持谨慎和可重复性，制定实验方案，不断记录实验数据，并评估结果的准确性。
超高效液相色谱安全操作及保养规程
超高效液相色谱安全操作及保养规程超高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种分离、分析化学组分或化合物的重要技术之一。
HPLC技术已广泛应用于各种化学、生物化学、食品、医药、环保等领域。
然而，由于其操作难度大、操作步骤多等特点，HPLC的安全操作和保养工作显得尤为重要。
本文将详细介绍超高效液相色谱安全操作及保养规程，以确保实验人员在操作过程中的安全，并保障设备的正常运行。
安全操作规程1.准备工作在操作前，应认真查看设备的相关操作手册，以熟知设备的基本工作原理、技术参数、管路系统和防护装置等。
另外，操作人员需要穿戴相应的安全防护装备，如实验室常用的实验服、手套、口罩、护目镜等等。
2.试剂、溶液处理试剂、溶液处理也是HPLC操作过程中十分重要的环节，正确处理可有效提高实验结果的精确性。
在此，我们简述一下关于试剂、溶液处理的相关注意事项：•所有的试剂和溶液必须符合相关的国家标准，并应在存储前严格检验其纯度和质量。
•对于不同的试剂和溶液，应在相应的安全操作区进行，保证不同试剂之间不会相互交叉污染。
•试剂、溶液处理时，应使用审查手册所提供的相应的实验方法。
•禁止将试剂或溶液直接倾倒到下水道或其他不安全的区域中，必须遵循正确的环保处理流程。
3.技术操作HPLC操作过程中，技术操作是至关重要的一步，对于实验结果的影响也最大。
因此，在技术操作环节中，操作人员必须掌握与之相关的啤酒定律、浓度计算法、pH值等结合结果、结合实验要求进行操作。
在操作过程中，操作人员必须做到以下几点：•严格按照操作规程操作，确保操作流程的正确性。
•在使用试剂和溶液时，注意超标会对实验结果产生显著影响。
•禁止随意调节设备参数，以免对实验产生影响。
•在技术操作过程中，操作人员必须严格按照标准时间、标准方法进行操作，确保数据精确度。
4.废料处理操作人员在完成实验后，应及时对废液进行处理，防止废液对环境造成污染。
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护
浅谈高效液相色谱仪的保养与维护高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于医药、化工、环境监测等领域。
为了确保HPLC仪器的正常运行和分析结果的准确性，保养和维护工作是至关重要的。
下面将从各个方面浅谈HPLC仪器的保养与维护。
一、日常清洁HPLC仪器在长时间使用后，会有一些污垢积聚在各个部件上，为了保证正常运行，需要经常进行仪器的清洁工作。
需要对仪器外壳进行清洁，可用棉布蘸取少量的乙醇进行擦拭，注意不要使用含有颗粒的清洁剂，以免划伤表面。
对移液器、注射器等部件进行清洁，可以用纯水或乙醇进行清洗，并用吹气枪将部件表面的水分吹干。
需对进样针、柱和检测器进行清洁，确保各个部件的表面保持干净。
二、流路清洗HPLC仪器的流路是非常关键的部件，需要经常进行清洗以保证分析结果的准确性。
需要使用纯水对流路进行冲洗，然后使用一定比例的甲醇和水混合液进行清洗，最后再用纯水进行冲洗，以确保流路内没有残留的有机溶剂。
还需要注意定期更换流路上的过滤膜和密封圈，确保流路畅通，避免堵塞和泄漏的情况发生。
三、柱的保养HPLC柱是色谱分析的核心部件，需要经常进行保养和维护以确保分析结果的准确性。
需要在柱使用前对其进行条件耐用性测试，以确定柱的性能是否符合要求。
在使用过程中，要注意避免超压和超温，避免对柱产生损害。
需要及时更换柱前的过滤器，避免杂质进入柱内影响分析结果。
需要注意柱的存放条件，避免受到光照和高温的影响，导致柱的性能降低。
四、检测器的调试HPLC仪器的检测器对分析结果的准确性有着重要影响，需要定期进行调试和校准工作。
需要对检测器进行零点漂移的校准，以确保检测器读数的准确性。
需要对检测器的灵敏度进行调节，以确保检测器对样品的响应能力。
需要注意避免检测器的震动和碰撞，避免损坏检测器内部的光学组件。
五、维护记录对HPLC仪器进行日常保养和维护工作时，需要及时记录下关键数据和操作情况，以便日后进行分析和查找问题。
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基本原理和特点 液相色谱仪器部件 实验操作与应用 日常维护
基本原理和特点
➢ 基本原理：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固 定相时,由于与 固定相(stationary phase)发生作用(吸附,分 配,离子吸引,排阻,亲和)的大小,强 弱不同,在固定相中滞留 时间不同,从而先后从固定相中流出.
2.1 x 50 2.1 x 30 2.1 x 15
柱内 体积 (Vm)
0.10 mL 0.06 mL 0.03 mL
平衡时间 流速
0.2 mL/min
5 min 3 min 1.5 min
单次样品运行时间 = 分析时间 + 色谱柱平衡时间 色谱柱平衡时间 = 10倍柱内体积 ÷ 流速
1.0mL/min
• 理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水，并通过 0.22um的滤膜，除去热源、有机物、无机离子及空气
等。
过滤与脱气
过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使
用无机盐配制的缓冲液。 脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 气泡对测定的影响：
1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积 2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形 3）检测器中的气泡产生基线波动
pH变化值 0.1
RS变化值 1.6
2. 流动相类别
按流动相组成分：单组分和多组分 按极性分：极性、弱极性、非极性 按使用方式分：等度洗脱和梯度洗脱
对溶剂的要求
水：
去离子水 自动纯水仪
纯净水
商品瓶装水
溶剂:
色谱纯（甲醇，乙腈，乙醇，丙酮，异丙醇）
试剂: 分析纯
• 不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水，水质要 求越高放置时间越短。
色谱柱柱内体积和平衡时间
色谱柱 尺寸
(mm)
4.6 x 50 4.6 x 30 4.6 x 15 4.6 x 150
柱内 体积
(Vm)
0.5 mL 0.3 mL 0.15 mL 1.54 mL
平衡时间 流速
1.0 mL/min
5 min 3 min 1.5 min 15 min
色谱柱 尺寸 (mm)
测量通过溶液后的紫外或可见光光强度的损失 吸光度与样品浓度呈线性关系 在被测物的最大吸收波长处检测时灵敏度最大
吸光度检测器（UV/Vis）－ 优点
这种检测器简单、可靠 多数人熟悉并喜欢这种技术 可以作梯度实验并且是非破坏性的 大多数有机化合物有一定程度的吸光度 一般来说灵敏度还可以
AU
Parabens at 254 nm
0.15
0.10
0.05
0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
5.50
6.00
Minutes
吸光度检测器（UV/Vis）－ 缺点
由于不是所有化合物都有吸光度，因此不是通用检测器 对某些化合物的检测灵敏度不及其他检测器 样品中不同化合物的最大吸收波长不同时，需要使用多波
染；
柱的保养：
柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动； 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净； 要注意流动相的脱气； 避免使用高粘度的溶剂作为流动相； 进样样品要提纯； 严格控制进样量； 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品； 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱； 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭；
图1；好的梯度系统 图2；一般的二元梯度系统 图3；一般的四元梯度系统
为何如此重要？
五个小肽的5ng进样，好的色谱系统非常容易鉴别出所有 峰。在不好的色谱系统中，第一个峰则消失在基线噪音中。
基线噪音对积分的影响
Caffeine @ 271 nm
1.183
1.183
1.224
维护流程图 线路过滤器
线路过滤器
流动相
线路过滤器 压力传感器
排液阀
故障：堵塞 现象：系统压力波动大或压力
偏高 措施：5％稀硝酸，超声波清洗 判断依据：关闭排液阀，断开出
口管路，设定流速1mL/min， 如压力>3kgf/cm2，则堵塞。
泵的保养：
使用流动相尽量要清洁； 进液处的砂芯过滤头要经常清洗； 流动相交换时要防止沉淀； 避免泵内堵塞或有气泡； 每次分析结束后，要反复冲洗进样口，防止样品的交叉污
灵敏度：信噪比
灵敏度是信号与噪音的比值；即峰高与基线噪音的比值
（S/N）
6:1
检测限（LOD）：S/N = 2~4
定量限（LOQ）：S/N = 8~10
好的信噪比有利于：
更好的色谱峰确认
S
更好的定量
更好地完成色谱峰纯度/均一性
N
吸光度（Absorbance UV/Vis）检测
目前实验室中最流行的选择 多数公司约75%的检测器是吸光度检测器（其中50% 是多波长，25%是PDA）
灯的保养：
在分析前、柱平衡得差不多时，打开检测器；在分析完成 后，马上关闭检测器。
样品池要保养
谢谢！
高效液相色谱仪组成
输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据记录处理系统
液相色谱流程图
溶剂
HPLC色谱柱
数据处理系统
自动进样器 色谱泵
检测器
废液
液相色谱的流动相
液相柱---保留值与pH的关系
色谱柱：Zorbax StableBond C18 4.6*250mm,5um
流动相：27%甲醇：73%磷酸 pH： 2.5&2.6 温度： 50℃ 流速： 1.0mL/min.
HPLC检测器应提供的功能
对样品有响应并有一个输出信号 应该提供在检测器响应值与样品浓度之间的线性关系；并
且所设计的校正技术应该促进这种关系
理想的HPLC检测器
高灵敏度；可忽略的基线噪音 宽的线性范围 独立于流动相及操作参数的响应
对压力、温度及流速等变化不敏感 长时间操作的稳定性 低死体积 非破坏性 选择性
单向阀
检测器 柱塞密封圈 进样器
吸滤头
吸滤头－－定期清洗，更换溶剂时 单向阀－－定期清洗，压力波动大时 泵－－自动清洗 在线过滤器－压力大时清洗
吸滤头
材料：不锈钢烧结，孔径10um 故障：堵塞 表现：管路中不断有气泡生成 措施：用5％稀硝酸，超声波清洗，
再用蒸馏水清洗
单向阀
故障：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好 表现：系统压力波动大 措施： 打开排液阀，以异丙醇为流动相输液 拆下单向阀，放入异丙醇中，超声波清洗
60 sec 36 sec 18 sec
色谱柱清洗保存
反相色谱柱：用20%甲醇溶液清洗10个柱体积，保存在 90%的甲醇溶液中。
分子筛色谱柱：用纯水清洗10个柱体积，保存在5%叠氮 化钠水溶液中。
离子色谱柱：用0.02M盐，pH6.5溶液清洗10个柱体积， 保存在含5%叠氮化钠0.02M盐，pH6.5溶液中。短期保存 在低盐的流动相中。
流动相的保存
有机溶剂流动相：
室温下密封，避光保存
缓冲盐流动相：
当日现配现用： 低温下密封保存，一般不超过3天 防止微生物生长
有机溶剂与水（缓冲盐）混配的流动相：
低温密封保存 防止有机相的挥发
选用适宜的容器
1．梯度洗脱的特点
（1）改善分离, 加快分析速度； （2）改善峰形, 减少拖尾, 有利于痕 量组分的检测； （3）增加峰容量； （4）强烈滞留的组分不容易残留在 柱上, 保持柱性能长期良好； （5）下次分析时, 流动相需要一段平 衡时间；不同溶剂的UV吸收程度稍有 差异, 可能会引起基线漂移
200.00
UV Spectrum of Eluents with 0.1% TFA Against HPLC Grade H2O Blank
H20 with 0.1% TFA
50% ACN with 0.1% TFA
210.00
220.00
230.00
240.00
250.00 nm
260.00
270.00
长检测，或使用折衷的波长 受流动相组成的影响：
用截止波长以上至少5～10nm作为工作波长 缓冲盐、离子对试剂、胺改性剂也会有影响
背景吸收对紫外检测器噪音的影响
AU
1.50 1.40 1.30 1.20 1.10 1.00 0.90 0.80 0.70 0.60 0.50 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00
保留时间
液相色谱的色谱柱
色谱柱的连接
Stop_depth长度不合适造成柱前死体积
色谱柱的连接
锥箍锥度不合适造成渗漏
可能提高柱效的方法
除去柱上端固定相变色部分 (约3mm左右)，再补充新的 固定相。
色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱效将明显下降，选合适 的溶剂进行洗净。
采用梯度洗脱时，柱在重复使用前，用泵把几倍于柱体 积的起始溶剂压经柱子，以重新建立起始的平衡来得到再 生。
➢ 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动 化。
流动相 脱气装置
四元泵
一些商品化仪器
检测器 柱温箱 样品盘
控温箱
启动液相色谱仪器的流程
开启HPLC系统各个设备的电源 打开泵、自动进样器、检测器电源，
待设备通过自检后，打开计算机启动 色谱管理软件 准备流动相
过滤，脱气 色谱泵排气
用新配制的流动相灌注泵
滞后体积变化的影响
设计不好的HPLC系统，滞后体积随反压变化 滞后体积随反压变化的后果：
梯度的准确性不好，造成：方法的适应性不好 用静态梯度混合器；固定滞后体积可明显改善梯度特性