不同采收期的附子中三种乌头碱的含量比较
草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究_随志刚
(药理药化(收稿日期:2008-10-09; 修订日期:2008-12-20基金项目:国家自然科学基金(N o .30873360);吉林省科技发展计划资助课题(No .20080105)作者简介:随志刚(1979-),男(汉族),吉林长春人,现为吉林大学药学院在读博士研究生,硕士学位,主要从事质谱分析化学研究工作.*通讯作者简介:刘忠英(1964-),女(汉族),吉林白城人,现任吉林大学药学院教授,博士生导师,博士学位,主要从事生物化学分析研究工作.草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究随志刚1,陈明玉1,刘志强2,皮子凤2,刘忠英1*(1.吉林大学药学院,吉林长春 130021; 2.中国科学院长春应用化学研究所,吉林长春 130022)摘要:目的优化草乌中乌头类生物碱提取方法,比较草乌、附子生品及市售炮制品中乌头类生物碱的含量,为相关中药中生物碱的测定和临床应用提供参考。
方法分别用7种提取方法提取附子中乌头类生物碱,比较各方法对3种双酯型生物碱的提取效率,并测定乌头类生药及其炮制品中乌头类生物碱含量。
结果10%氨水乙醚冷浸法对3种双酯型生物碱的提取效率最高。
炮制品中的乌头类生物碱含量明显低于生药,各种炮制品中乌头类生物碱的含量差别也比较大。
结论采用10%氨水乙醚冷浸法,高效液相色谱-紫外光谱(H PLC-UV )法对药材中乌头类生物碱进行提取和含量测定,能真实反映药材中药效和毒性成分。
不同的炮制品中各生物碱含量差别较大,临床应用应有差别。
关键词:提取方法; 草乌; 附子; 乌头碱类生物碱中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2009)03-0513-02Co mparison of D ifferent Extraction M ethods of Aconitu m A lkaloids fro m Radix Aconiti Kus nezoff iiS U I Z h-i gang 1,C H EN Ming -yu 1,L I U Z h-i q iang 2,P I Z -i feng 2,L I U Z hong -y i n g1*(1.College of Phar m acology,J ilin Un i v ersit y ,Changchun 130021,China;2.Changchun Institute of App lied Che m istry ,Chinese Acade m y of Sciences ,Changchun 130022,China )Abst ract :O bjective T o optim ize the ex tracti on techno logy of acon itu m a l ka l o i ds from R adi x A con iti K usnezoff ii ,and to de ter -m i ne the contents o f acon it u m a l kalo i ds i n R ad i x A conitiK usnezoffii ,Fuzi and their processed produc ts so l d i n Ch i nese phar m acy .M ethods The effi c iency of seven ex tracti on m ethods w ere compared by deter m i n i ng the conten ts o f acon i tine ,m esacon iti ne and hypacon iti ne of sa m ples extracted by d ifferent m ethods .The H PLC -UV m ethod w as used to deter m i ne t he contents o f acon itu m a l ka l o i ds i n R ad i x A conitiK usnezoffii ,Fuzi and their processed products .Re s u lts The m ost e fficient me t hod was to ex tract sa m ple w it h e t her from the herb sub m erged i n 10%a mm onia .T he three diester-d iterpeno i d a l ka l o i ds o f processed products w ere m uch lo w er than t hose o f the raw herbs and the con tents o f acon it u m a l kalo i ds i n d iffe rent processed products we re different w i de l y .Conc l u sion The me t hods used i n ex tracti on and ana l ysis f o r acon itu m a l ka l o i ds from herbs are e ffecti v e ,reli able and si m ple .D i -f ferent k i nds o f processed products of ra w herbs shou l d be d i scri m i nati ng l y treated in cli nic applica ti on .K ey w ords :Ex tracti on m ethod ; R ad i x A coniti Kusnezoff ii ; Fuz;i A conitu m a l kalo i ds 在乌头类生药及炮制品中,生物碱成分既是药效成分同时也是毒性成分[1],而且稳定性不好,很容易降解[2],所以生物碱的提取方法在其成分分析中十分重要。
四川道地产区乌头药材不同部位6种生物碱含量对比研究
四川道地产区乌头药材不同部位6种生物碱含量对比研究摘要目的：研究四川道地产区6种乌头生物碱在不同部位的分布差异，比较母根、子根基于化学成分的区别。
方法：采用超高效液相色谱法（UPLC）测定19批四川道地乌头药材母根、子根、须根中6种乌头生物碱含量，并结合SPSS 统计软件对数据进行显著性差异、聚类分析和主成分分析研究。
结果：6种乌头生物碱在3个部位的分布差异各不相同。
母根、子根中苯甲酰新乌头碱、新乌头碱含量有显著性差异，为两者的差异性指标成分。
聚类分析、主成分分析也将供试样品分成母根、子根两大类。
结论：母根、子根的物质基础有差别，可为临床正确使用提供参考。
关键词UPLC；乌头；母根；子根；乌头生物碱；区别1 材料1.1 仪器超高效液相色谱系统（ACQUITY UPLC，美国Waters公司，包括二元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、TUV检测器、Empower2工作站），电子天平（XS205，瑞士METTLER TOLEDO公司），粉碎机（MF10，德国IKA 公司），高速冷冻离心机（ST16R，美国Thermo公司），平行溶剂蒸发仪（Q-101，瑞士BUICH公司），Milli-Q超纯水系统（美国Millipore公司）。
1.2 药品与试剂苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、新乌头碱、乌头碱、次乌头碱（纯度和批号分别为99.6%，111795-200901；96.5%，111794-201102；99.5%，111796-200901；100%，110799-200505；100%，110720-200410；99.5%，110798-200805；均购于中国食品药品检定研究院）；乙腈、甲醇（色谱纯，德国Merck公司）；醋酸铵（优级纯，天津市光复科技发展有限公司）；碳酸氢铵（优级纯，天津市元力化工有限公司）；醋酸（色谱纯，天津市康科德科技有限公司）；异丙醇、醋酸乙酯（分析纯，天津市化学试剂二厂）；氨水（分析纯，天津市化学试剂三厂）；超纯水（Milli-Q制备）。
附子不同组织中生物碱含量的测定
Vol. 24 No. 1 M ar. 2009
附子不同组织中生物碱含量的测定
侯大斌 赵祥升 王 惠 许 源
(西南科技大学生命科学与工程学院 四川绵阳 621010)
摘要 :对附子不同组织中乌头总碱和 3种双酯型生物碱 —新乌头碱 、乌头碱和次乌头碱的含量进行了测定 。用酸性 染料比色法测定乌头类总生物碱的含量 ;反相高效液相色谱法测定新乌头碱 、乌头碱 、次乌头碱的含量 ,色谱柱为 : Zorbax extend - C18 (150 mm ×4. 6 mm , 5. 0μm ) ,流动相为乙腈 —0. 1%乙二胺 ,梯度洗脱 ,流速为 l mL /m in,检测波 长为 240 nm ,柱温 30 ℃。结果表明 :附子不同组织中生物碱的含量呈现明显的差异性 。子根 、茎秆 、叶 、须根和母 根中乌头类总生物碱含量分别为 : 5. 53, 3. 81, 14. 77, 8. 87和 4. 58 mg/ g; 3种双酯型生物碱含量在不同组织中的含 量顺序为 :须根 >子根 >母根 >叶片 >茎秆 。该研究可为附子资源的综合利用提供科学依据 。 关键词 :附子 新乌头碱 次乌头碱 乌头碱 高效液相色谱法 中图分类号 : R282; S567 文献标识码 : A 文章编号 : 1671 - 8755 (2009) 01 - 0098 - 04
不同海拔栽培附子的毒性指标和药效指标比较分析
不同海拔栽培附子的毒性指标和药效指标比较分析张美华1，谭奕为1，李伟强1，黄倩盈1，吴耿寰1，徐天才2*，（1广西壮族自治区亚热带作物研究所，广西南宁530001；2云南省农业科学院高山经济植物研究所，云南丽江674100）摘要：为了解云南不同海拔栽培附子与道地产区出产附子的品质差异，以云南西北地区9个不同海拔栽培的附子为试材，以四川江油附子为对比样，参照《中华人民共和国药典》，采用高效液相色谱法（HPLC ）对附子样品中的3种毒性检测指标物（新乌头碱、次乌头碱、乌头碱）和3种药效检测指标物（苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰乌头原碱）进行含量分析。
结果表明，云南9个高海拔试验田种植的附子毒性检测指标物含量明显低于四川江油对比样、药效检测指标物含量明显高于四川江油对比样；且在海拔为2169m 的云南迪庆藏族自治州维西县永春乡拖枝村等地，附子的毒性检测指标物含量较低，接近药典规定的毒性指标，药效检测指标物含量远高于药典规定的药效指标。
此发现，可为利用海拔优势推广种植高效低毒附子的栽培研究提供参考，为当地布局优势产业提供理论依据。
关键词：附子；海拔；生物碱；毒性检测指标；药效检测指标中图分类号：R286.0文献标志码：AComparative Analysis of Toxicity and Efficacy Indi ‐cators of Radix Aconiti Lateralis Preparata Culti ‐vated at Different AltitudesZHANG Meihua 1,TAN Yiwei 1,LI Weiqiang 1,HUANG Qianying 1,WU Genghuan 1,XU Tiancai 2*(1Guangxi Subtropical Crops Research Institute,Nanning,Guangxi 530001,China;2The Alpine Economic PlantResearch Institute,Yunnan Academy of Agricultural Sciences,Lijiang,Yunnan 674100,China)Abstract:In order to understand differences in quality of Aconiti Lateralis Radix Preparata (Fuzi)cultivated at different altitudes in Yunnan Province and those produced in original areas,the Fuzi cultivated at 9different altitudes in northwest of Yunnan Province were used as the test materi ‐基金项目：云南省科学技术厅，三年行动计划“迪庆藏区附子良种筛选与优质高产栽培技术研究及示范”项目（2017DC013）。
附子中新乌头碱的含量测定
附子中新乌头碱的含量测定贾金艳，彭小冰，沈洲卿，杨卫平【摘要】目的成立以高效液相色谱法测定附子中新乌头碱含量的方式。
方式采纳Welchrom-C18 色谱柱(5 μm , mm×250 mm)，以甲醇－水－三乙胺（75∶25∶）为流动相，流速为 ml·min-1，检测波长为233 nm，柱温为30℃。
结果新乌头碱在 4～ 8 μg范围内呈良好线性关系，r= 9；平均回收率为%，RSD=%。
结论该方式操作简便、准确、重复性好，可用于附子中新乌头碱的含量测定。
【关键词】附子；新乌头碱；高效液相色谱法附子为毛茛科植物乌头Aconitum carmichaeli Debx.子根的加工品，具有回阳救逆、补火助阳、逐风寒湿邪的功效［1］。
附子的要紧成份是乌头类生物碱，可分为单酯类、双酯类和胺基醇类生物碱。
其中以双酯型类生物碱如乌头碱、次乌头碱、新乌头碱成份毒性较大，但又同时是附子的药性成份。
历代医家都超级重视附子的毒性及其用量［2］。
为保证用药的平安性，本文在参考有关文献的基础上［3，4］，对附子生品中的新乌头碱进行含量测定，希望能够为其在质量操纵方面提供必然的依据。
1 仪器与试药仪器岛津LC-20A高效液相色谱仪,HS10260D超声洗洁器，XS205电子天平（十万分之一），JT1003电子天平（千分之一）。
试药新乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号： 110799－200404）；甲醇为色谱纯；三乙胺、乙醚为分析纯；盐酸；氨水；纯净水。
2 方式与结果色谱条件色谱柱： Welchrom-C18 (5 μm ， mm×250 mm)；流动相为甲醇-水-三乙胺（75∶25∶）；流速： ml·min-1；检测波长：233 nm；柱温：30℃。
进样量：5 μl。
在该色谱条件下，新乌头碱与杂峰分离良好。
结果见图1～ 2。
溶液的配制对照品溶液的制备周密称取新乌头碱对照品适量，配制成·ml-1的对照品溶液，再周密吸取此对照品溶液，，，，，，， ml别离定容于5 ml容量瓶中。
HPLC法测定不同产地附子中主要成分的含量
HPLC法测定不同产地附子中主要成分的含量目的考察不同产地的西南附子中新乌头原碱，次乌头原碱和乌头原碱的含量。
方法采用HPLC进行测定，色谱柱为Diamonsil C18 柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相A为四氢呋喃-乙腈（15∶25）；流动相B为醋酸铵溶液（0.1 mol/L），检测波长λ=235 nm；流速1 ml/min；柱温25 ℃。
结果不同产地的西南附子样品中生物碱类成分的含量有着明显差异，新乌头碱的含量以贵州小河的最高为0.17%，贵州兴义的最低为0.06%；次乌头碱的含量以四川江油的最高为0.28%，贵州花江的最低为0.13%；乌头碱的含量以云南腾冲与贵州水口寺的最高为0.04%，四川江油与贵州龙里的最低为0.01%。
结论西南附子中三种乌头碱的总含量以四川江油和云南腾冲产者最高。
另外，HPLC测定法简单、易行，可为附子的产区扩大研究提供科学依据。
Abstract：Objective To investigate the content of new aconitine，sub aconitine and aconitine in Aconitum monkshood from different habitats.Methods The chromatographic column is determined by HPLC，the column is Diamonsil C18 column（150mm×4.6 mm，5μm），the mobile phase A is tetrahydrofuran acetonitrile （15：25），the mobile phase B is ammonium acetate solution（0.1mol/L），the detection wavelength is λ=235 nm，the velocity is 1 ml/min，and the column temperature is 25℃.Results The contents of alkaloids in the samples from different habitats were significantly different.The content of neoaconine was 0.17% in Guizhou Xiaohe and 0.06% in Guizhou Xingyi.The content of sanaconine was Sichuan Jiangyou.The highest was 0.28%，and the lowest in Guizhou Huajiang was 0.13%；the content of aconitine was 0.04% in Yunnan Tengchong and Guizhou Shuikou Temple，and the lowest in Sichuan Jiangyou and Guizhou Longli was 0.01%.Conclusion The total content of three aconitines in Aconite in the southwest is highest in Sichuan Jiangyou and Yunnan Tengchong.In addition，the HPLC assay is simple and easy to perform，which can provide scientific basis for the expansion of aconite production areas.Key words：Aconite；New aconitine；Subaconitine；Aconitine；HPLC附子为毛莨科植物乌头的子根的加工品。
中国药典收载附子3种加工品中生物碱的含量分级对比测定
《中国药典》收载附子3种加工品中生物碱的含量分级对比测定作者：余葱葱，彭成，郭力，叶强【摘要】目的系统对比研究盐附子、黑顺片、白附片3种附子加工品的生物碱含量。
方法采用常用滴定、UV、HPLC方法分别测定附子3种加工品的总生物碱，酯型生物碱，乌头碱、乌头次碱、新乌头碱等双酯型生物碱的含量。
结果盐附子同黑顺片、白附片相比，总生物碱含量下降80%～85%，酯型生物碱下降70%～85%，乌头碱等等双酯型生物碱下降90%以上，其中乌头碱下降92%以上。
结论在生物碱含量方面，盐附子与黑顺片、白附片有显著差异，后二者差异较小。
建议新版药典单列盐附子质量控制标准。
【关键词】分级对比加工品生物碱Abstract：ObjectiveTo research alkanoid contents in 3 kinds of prepared Radix Aconiti Lateralis Praeparata:salty Aconiti Root,black slice of Aconiti Root,white slice of Aconiti Root.MethodsNormal titration method,UV,HPLC were used to determine the total alkanoid,ester alkanoid,double ester alkanoid involved aconitine,hypaconitine,mesaaconition.ResultsCompared withblack slice of Aconiti Root and white slice of Aconiti Root,the total alkanoid declined 80%～85% ester alkanoid declined 70%～85%,double ester alkanoid declined over 90% in salty Acontit Root.ConclusionIn term of alkanoid, there is significant difference between Salty Aconiti Root and black slice of Aconiti Root,white slice of Aconiti Root.Black slice of Aconiti Root is similar with white slice of Aconiti Root in alkanoid content.It is recommended that salty Aconiti Root is unilined in new edition Chinese Pharmacopoeia.Key words：Radix Aconiti Lateralis Praeparata；Processing； Alkanoid附子Radix Aconiti Lateralis Preparata来源于毛茛科乌头属植物乌头Aconitum carmichaeli Debx．的侧生子根及加工品。
附子不同部位及其炮制品生物碱的含量比较
生物碱 大小为 ： 附子皮＞ 生附子＞ 制 附子皮＞ 黑顺片＞ 白附片。结论 ： 附子 皮中生物碱 的含量高， 毒性 大， 为了保证其 临床有效性与
安全性 ， 黑 顺 片 与 白附 片 临床 应 用应 有 所 区分 。 关键 词 ： 附子 炮 制 品 酯 型 生物 碱 总 生 物碱 含 量 测 定
摘要 ： 目的 ： 比较 附子 不 同部 位 及 其 炮 制 品 生物 碱 含 量 变化 。 方 法 ： 采用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 同 时测 定 附子 不 同部 位 及 其 炮 制 品 中 ６种 单 、 双酯型生物碱 的含量 ， 采用滴定法测定其总 生物碱含量 ， 分析其不 同部位及其 炮制 品生物碱含 量的变化。结果 ： 单酯型生物碱 大 小依 次 为 ： 制 附子 皮＞ 黑 顺 片＞ 白附片＞ 附子皮＞ 生 附子 ， 双 酯 型 生 物 碱 大 小为 ： 附子 皮＞ 生附子＞ 制 附子 皮 ＞ 黑 顺 片＞ 白附片． 总
ｏ ｆ Ｔ ＣＭ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ， Ｇ ｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ， ５ １ ０ １ ２ ０ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ； ２ ． Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｚ ｈ ｏ ｕ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ ，
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不同采收期的附子中三种乌头碱的含量比较
不同采收期的附子中三种乌头碱的含量比较
不同采收期的附子中三种乌头碱的含量比较
2006-11-26
基础医学论文
不同采收期的附子中三种乌头碱的含量比较
不同采收期的附子中三种乌头碱的含量比较目的考察不同采收时间的附子中新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量。
方法采用高效液相色谱法进行测定，色谱柱为Diamonsil C18柱（150mm×4.6mm,5μm）；流动相A:乙腈-四氢呋喃（25:15）；流动相B:0.1mol/L醋酸铵溶液，检测波长：λ=235nm;流速：1ml/min;柱温：25℃。
结果不同采收时期附子中三种乌头碱的含量发生了明显变化，随着时间（7 —— 9月份）的推移，新乌头碱的含量呈下降趋势，次乌头碱、乌头碱的含量呈上升趋势。
结论此方法简单、易行，可为附子的进一步研究提供科学依据。
附子；新乌头碱；次乌头碱；乌头碱；高效液相色谱法 [Abstract] Objective To study the content mensuration of Hypaconitine,Mesaconitin and Aconitine of Aconite root in different period of harvest.Methods The Diamonsil C18 column （150mm×4.6mm,5μm） was used,and mobile phase was composed of CH3CN - C4H8O （25:15）and 0.1 mol/L of ammonium acetate solution,detection wavelength was at 235 nm; the flow rate was 1.0ml/min;column temperature was at 25℃。
Results The content mensuration of three types of aconitine of aconite root in different period of harvest has chenged apparently,the content of hypaconitine appears to be decline tendency,instead,the content of mesaconitin and aconitine is ascent tendency from July to September.Conclusion This method is not only easy
but also practical,it could be the evidence of further research of aconite root. [Key words] Aconite root; Hypaconitine;Mesaconitin;Aconitine;HPLC 附子具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛之功效，为回阳救逆之要药[1].常用于大汗亡阳，吐泻厥逆，肢冷脉微，心腹冷痛，风寒湿痹，阳痿，宫冷，阳虚外感，阴疽疮疡以及一切沉寒痼冷之疾。
现代研究表明，附子的主要化学成分除乌头类生物碱外，还有醇胺、脂类及多糖等。
乌头碱是附子的有效成分同时也是毒性成分[2].为保证用药的安全有效，本文以附子为对象，以新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的含量为指标进行研究，比较不同采收期三种生物碱的含量差异。
进而为附子质量评价和临床应用提供借鉴。
1 仪器与试药 1.1 仪器 Aglient 1100高效液相色谱仪（自动进样器，四元泵，DAD检测器），HP1100/ WIND3D化学工作站；超声波清洗机（北京创新德超声电子研究所）；AE240电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。
1.
2 试药新乌头碱（批号：110799-200404,供含量测定用），次乌头碱（批号：110798-200404,供含量测定用），乌头碱（批号：0720-9807,供含量测定用），均购于中国药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为乐百氏纯净水；其他试剂均为分析纯。
1.
3 药材附子药材均采自贵州龙里，经贵阳中医学院药学系贺祝英教授鉴定为毛茛科植物乌头Aconitum carmichahli Debx.的子根。
2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱为Diamonsil C18柱（150mm×4.6mm,5μm）；流动相A:乙腈-四氢呋喃（25:15）；流动相B:0.1mol/l醋酸铵溶液；洗脱程序见表1;检测波长：λ=235nm;流速：1ml/min;柱温：25℃；进样量10μl[3].表1 洗脱程序 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备取新乌头碱、次乌头碱和乌头碱对照品适量，置25ml容量瓶中，加异丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液制成浓度为（新乌头碱0.2820mg/ml,次乌头碱0.2817mg/ml,乌头碱0.0802mg/ml）的混合对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约2g,精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml,精密加入异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液50ml,称定重量，超声处理30min,放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得[3]. 2.2.3 阴性样品溶液的制备按上述供试品溶液的制备方法，制备不含附子的阴性样品溶液。
2.3 系统适用性试验分别取混合对照品溶液、供试品溶
液及其阴性溶液各10μl,按“2.1”项下色谱条件进样。
结果：阴性样品在新乌头碱、次乌头碱、乌头碱峰位置对应处无干扰峰出现。
样品中三种乌头碱与其他成分完全分离，且分离度大于1.5.见图1.A阴性对照品；B混合对照品；C样品；1新乌头碱；2次乌头碱；3乌头碱图1 三种溶液高效液色谱图 2.4 线性关系考察精密吸取混合对照品2、4、8、10、16、18μl,按“2.1”项下色谱条件进样。
以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得新乌头碱回归方程为：Y=1225.9X+39.463,R2=0.9989;在0.56——5.08μg 范围内呈良好线性关系。
次乌头碱回归方程为Y=1301.5X+18.581,R2=0.9996;在0.56——5.07μg范围内呈良好线性关系。
乌头碱回归方程为1011.4X+46.369,R2=0.9989;在0.08——1.44μg范围内呈良好线性关系。
2.5 精密度试验取“2.2”项下的对照品溶液10μl,按“2.1”项下色谱条件进样，重复测定6次。
新乌头碱峰面积的RSD=0.51%;次乌头碱峰面积的RSD=0.76%;乌头碱峰面积的RSD=1.71%.结果表明，仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验取“2.3”项下的供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分别在0、2、4、6、8、10、12h进样，记录其峰面积。
新乌头碱峰面积的RSD=1.55%,次乌头碱峰面积的RSD=1.08%,乌头碱峰面积的RSD=2.95%,结果表明供试品溶液在12h内稳定。
2.7 重复性试验按“2.3”项下的方法，平行制备6份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样，记录峰面积，计算含量。
新乌头碱含量的.RSD=2.05%,次乌头碱含量的RSD=1.34%,乌头碱含量的RSD=2.98%.结果表明此方法重复性良好。
2.8 加样回收试验称取同一附子样品1.00g（精密称定），共9份。
分别按高中低三个量加入新乌头碱、次乌头碱和乌头碱的对照品，按“2.3”项下的方法，制备供试品溶液。
按“2.1”项下色谱条件测定，计算回收率，结果新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的平均回收率分别为98.61%、97.52%、97.41% ;RSD分别为1.71%,1.64%、1.89%. 2.9 样品含量测定精密称取不同采收时间的附子样品，按供试品溶液制备方法分别制备，按“2.1”项下色谱条件测定，计算含量。
结果见表2.表2 附子样品含量测定 3 结果分析测定结果表明，同一采收时间的附子中次乌头碱的含量最高，新乌头碱次之，乌头碱最低；不同采收时间的附子，随着时间（7 —— 9月份）的推移，新乌头碱的含量呈下降趋势，次乌头碱、乌头碱的含量呈上升趋势；三种生物碱的含量之和随采收时间呈上升趋势。
然而不能单凭含量来确定附子的最佳采收期，因为附子的有效成分恰是其毒性成分，用得妙可救人于危难，反之可害人于顷刻之间。
为了科学合理地采收和利用附子资源，确保临床用药的安全有效，还应与附子的毒性及临床疗效结合起来，综合分析，方能全面系统地评价“最有用亦最难用”的中药附子，本实验可为附子的进一步研究提供科学依据。
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