大肠杆菌噬菌体的研究进展

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噬菌体侵染大肠杆菌实验

噬菌体侵染大肠杆菌实验

将噬菌体与大肠杆菌混合 ,一定时间后观察噬菌体 的侵染情况。
通过离心去除未侵染的大 肠杆菌,洗涤以去除多余 的噬菌体。
在适宜条件下培养,观察 噬菌体的繁殖情况。
通过显微镜观察、计数等 方法检测实验结果。
实验操作注意事项
无菌操作
确保整个实验过程在无 菌条件下进行,以避免
污染。
精确测量
确保所有试剂的准确测 量,以保证实验结果的
04
结论与展望
实验结论
噬菌体侵染大肠杆菌实验证明了噬菌 体的存在和侵染机制。
实验结果证明了噬菌体的专一性,即 一种噬菌体只能侵染对应种类的细菌 。
通过实验观察到了噬菌体对大肠杆菌 的吸附、侵入、复制和释放过程。
实验的优缺点分析
优点
实验操作简单,结果直观,能够 很好地展示噬菌体的侵染过程。
缺点
实验过程中无法控制噬菌体的数 量和侵染时间,可能会影响实验 结果的准确性。
作为宿主细胞,用 于噬菌体的侵染。
缓冲液
用于维持实验过程 中的pH值稳定。
噬菌体
用于侵染大肠杆菌 的病毒。
培养基
用于培养大肠杆菌 。
其他试剂
如抗生素、染色剂 等。
实验方法与步骤
01
02
03
04
05
1. ห้องสมุดไป่ตู้备噬菌体和 2. 感染实验 宿主…
3. 离心与洗涤
4. 培养与观察
5. 结果检测
将噬菌体稀释至适当浓度 ,同时培养大肠杆菌至对 数生长期。
噬菌体的生命周期包括吸附、 注入核酸、复制和组装新噬菌 体等步骤。
噬菌体侵染大肠杆菌的过程
噬菌体通过识别大肠杆菌表面的受体 ,吸附到细菌表面。
噬菌体的核酸利用大肠杆菌的代谢系 统和基因表达机制进行复制。

噬菌体对肠杆菌科细菌的治疗作用

噬菌体对肠杆菌科细菌的治疗作用

爾卜畜牧唾菌体对肠杆菌科细菌的治疗作用郝贺12,王海英3郭炳博U 译,石玉祥U 校(1.河北工程大学,河北邯郸〇56000;2.河北省禽病技术创新中心,河北部郸 056000; 3.河北中贝佳美生物科技有限公司,河北邯郸056000)肠杆菌科是一类革兰氏 阴性菌。

该类所有细菌都与腹 膜炎和其他腹腔内感染有关。

此外,大肠杆菌常引起泌尿器 官感染;肺炎克雷伯菌被认为 也是肺炎的重要病因;肠沙门 氏菌可引起胃肠炎;志贺氏菌株可引起志贺氏菌病,通常以 传染流行形式出现,且有相当 高的发病率和死亡率。

但耐药 性的存在是处理肠杆菌科感 染的一个严重问题,并有可能 诱发耐药物种产生。

目前迫切 需要寻找控制肠杆菌科感染 的替代方法,而噬菌体治疗是 有效的方法之一。

噬菌体治疗有着悠久的 历史,起源于20世纪初。

但自 从青霉素和其他抗生素被发 现以来,噬菌体治疗研究几乎停止。

然而,由于抗生素的滥 用,越来越多的致病菌对药物 产生了耐药性,对人类健康造 成了极大的威胁,抗生素不良 反应刺激了研究人员对噬菌 体治疗的研究,并取得了很大 的进展。

噬菌体疗法是利用噬 菌体来分裂致病细菌的治疗 方法。

噬菌体吸附到细菌后, 开始溶菌过程。

根据是否需要 溶血素,宿主细胞裂解机制可 分为两种基本模式。

一种模式 依赖于噬菌体K 和T 4等带有 双链DNA 的噬菌体产生的溶 菌酶来分裂细菌;另一种模式 不需要溶菌酶。

1大肠杆菌的噬菌体疗法据世界卫生组织估计,每年约有500万儿童死于急性 腹泻。

发展中国家1/3的儿童 腹泻病例是由大肠杆菌引起 的,大肠杆菌是所有细菌中致 病谱最广的细菌之一,给家禽 造成的死亡率也很高。

用噬菌体来治疗大肠杆菌 感染。

Smith 等人用噬菌体混 合物治疗犊牛、仔猪和羔羊腹 泻,取得有效成果。

Huff 等人 证实雏鸡感染大肠杆菌后,在 饮用水中添加109PFU /毫升噬 菌体悬浊液,死亡率显著下 降。

奥利维拉等人的研究证 实,噬菌体以lx l 09PFU /毫升 的剂量口服和喷雾,鸡的死亡 率平均降低25%,发病率平均 降低41.7%。

大肠杆菌噬菌体的分离、纯化及其特性研究

大肠杆菌噬菌体的分离、纯化及其特性研究

10n 尾宽约 1 2 i 有尾鞘 、 3 m, 8— 2r m, 基板 、 尾丁 、 尾丝等结构 , 该类噬菌体在污水中 占绝大多数. 三是短尾 噬菌体 , 其头部
为二十面体 , 大小为 2 m, 0r 尾部长约 2— m, i 3n 在污水 中占有一定 的比例. 2种噬菌体在 一1  ̄ 冰箱可存活 5 8( 2 6天. 噬菌 经
体处理的污水 , 总菌数下降了 3 %左右 , 0 大肠杆菌总数下降 9 % 以上. 0
关 键词 : 大肠杆菌; 噬菌体 ; 分离; 纯化; 特性
中图分类号 : 3.8 Q 994
文献标识码 : A
文章编 号 : 3- 7(08 ¥- 7- 0 8 4920 )2 23 5 4 0 0 0
不衰 , 已证 明利用 噬菌 体 可 以控 制 大肠 杆菌 引起 的 现 犊牛 、 仔猪 、 羔羊 的腹 泻 , 治疗 大 鼠的大肠杆菌感 染 , 在
1 材 料 与方 法
1 1 菌株来源及培养 .
菌种 : 大肠杆 菌( ciC E. l MCC( 4 13 由厦 门 o) B)4 0 (
大学生命 科学学 院教学部提 供 ) 培养基 参 考文献 [ ] , 7 配制 , 3倍 L B培 养基 ,H . 7 4 其 中 L p 7 2— . ; B底层 平 板培养 基加 2 琼脂 , % 上层 培 养基 加 10 .%琼 脂 .MB E 固体 培养基 .
对鸡肉接种大肠杆菌的同时在鸡体不同部位注射噬菌 体, 则可保 护 鸡免 受 大 肠 杆 菌 的 感染 .92年 ,otl 19 Soi l 发现 噬菌 体可 以保 护小 鼠免受 鲍 曼不 动 杆菌 、 脓假 绿 单胞菌的感染. 现在, 噬菌体在人、 鱼的传染性疾病 畜、 的防治方面发挥 着重 要 的作 用 . 国 内, 在 自上 世 纪 5 0年代应用绿脓 杆菌 噬菌体 治疗 大 面积烧 伤病 人 , 成 功地解 除 因耐药性 而 长期 不 能治 愈 的 问题 以来 , 菌 噬

噬菌体治疗鸡大肠杆菌病研究进展

噬菌体治疗鸡大肠杆菌病研究进展

噬菌体治疗鸡大肠杆菌病研究进展任晚霞1,陈玉武21.山东省寿光市稻田镇畜牧兽医工作站,山东寿光 262706;2.山东省寿光市洛城街道畜牧兽医工作站,山东寿光 262705摘要噬菌体治疗鸡大肠杆菌病是当前研究的一个热点。

本文综述了近年来该领域的研究进展,介绍了鸡大肠杆菌病的病原性及其对养殖业的危害,详细阐述了噬菌体的特点及其在鸡大肠杆菌病治疗中的应用潜力。

噬菌体具有高度专一性、低毒性和广泛的宿主范围,可以针对不同的大肠杆菌菌株进行定向治疗。

尽管噬菌体治疗鸡大肠杆菌病在实践中仍面临稳定性、安全性和规模化生产等问题,但作为1种新型治疗方法,它具有广阔的应用前景。

关键词噬菌体;大肠杆菌;抗生素;治疗近年来,大肠杆菌病在养殖业中呈现严重的流行趋势。

大肠杆菌是1种革兰氏阴性菌,它在动物体内能引发多种疾病,包括泌尿生殖道感染、呼吸系统感染以及消化系统感染等。

特别是在家禽和畜牧业中,大肠杆菌病已成为1种常见的疾病,给动物健康带来了极大的危害[1]。

对于家禽而言,大肠杆菌病通常表现为腹泻、贫血和死亡等症状。

家禽感染大肠杆菌后,该菌可在家禽的消化系统中持续存活数周甚至数月,难以完全根除。

同样地,在畜牧业中,大肠杆菌病也会导致动物消瘦和死亡等问题。

传统药物在治疗大肠杆菌病方面存在一些局限性。

大肠杆菌病原体具有高度的变异性,容易产生耐药菌株,且许多传统药物在治疗大肠杆菌病时效果存在较大差异,长期使用抗生素还会引发药物耐受性和环境污染等问题。

除了传统药物治疗,科学家们正在积极探索其他治疗手段,如预防性接种、新型抗生素开发以及微生物代谢工程等方法都得到了广泛研究。

此外,一些养殖业者也开始采用生物技术手段来提高动物的免疫力,增强其对病原体的抵抗能力。

通过这些新的治疗手段,能有效克服传统药物治疗的局限性,并更好地应对大肠杆菌病的挑战。

这些方法的研究和应用将为大肠杆菌病的防控提供新的途径和可能性,有助于减少药物耐受性的发展,并降低环境污染的风险。

噬菌体侵染大肠杆菌实验

噬菌体侵染大肠杆菌实验
噬菌体侵染大肠杆菌 实验
目录
CONTENTS
• 实验背景 • 实验材料与方法 • 实验结果与分析 • 结论与讨论 • 参考文献 • 附录
01 实验背景
噬菌体的概述
01
02
03
噬菌体的定义
噬菌体是一类感染细菌的 病毒,具有高度的宿主特 异性,只感染特定的细菌 种类。
噬菌体的形态
噬菌体通常呈蝌蚪形、棒 状或微球形,其核心部分 为核酸(DNA或RNA), 外面由蛋白质外壳包裹。
对照实验
设置对照组,即未加噬菌体的培养基,以排除培养基变化对实验 结果的影响。
数据处理
采用统计软件对实验数据进行处理和分析,以确保结果的准确性 和可靠性。
04 结论与讨论
结论总结
1
噬菌体侵染大肠杆菌实验证明了DNA是遗传物质。
2
该实验表明,噬菌体通过将其DNA注入大肠杆菌, 利用大肠杆菌的合成机制复制自身,并最终释放 出大量的噬菌体粒子。
参考文献
噬菌体是一种侵染细菌的病毒, 能够利用细菌的物质来合成自 身的组成成分,最终繁殖出许 多噬菌体后代。
噬菌体侵染大肠杆菌的过程可 以分为吸附、注入、合成、组 装和释放五个阶段。
噬菌体侵染大肠杆菌实验是生 物学领域中经典的实验之一, 具有重要的理论和实践意义。
06 附录
实验材料
噬菌体
用于侵染大肠杆菌的病毒。
大肠杆菌
作为宿主细胞,用杆菌。
显微镜和载玻片
用于观察噬菌体侵染大肠杆菌的 过程。
离心管和离心机
用于分离和纯化噬菌体和大肠杆 菌。
缓冲液
用于调节pH值和保持实验过程中 溶液的稳定性。
实验步骤
1. 准备噬菌体和大肠杆菌

噬菌体P1侵染大肠杆菌Nissle 1917(EcN)机理研究

噬菌体P1侵染大肠杆菌Nissle 1917(EcN)机理研究
P1 是在革兰氏阴性菌中被普遍应用的转导工具。 P1 能 够包装供体菌的基因组 DNA 形成子代的噬菌体。 由于噬菌 体基因组的高突变性,导致部分的子代噬菌体成为缺陷噬菌 体,在侵染受体菌时,不能裂解宿主细胞,而是通过同源重组 的方式整合到宿主基因组上。 虽然 P1 作为转导工具具有方 便、快速、高效等优点,但是它的使用范围有诸多限制:①对 于一些细胞表面覆盖荚膜多糖的细菌,P1 不能侵染[6] ;②对 于一些细胞表面表达 O 抗原的细菌,P1 也不能侵染;③P1 的侵染位点被认为位于细胞表面的脂多糖( LPS) 的核心上, 但是具体是位于哪一位的糖基上,至今还未被发现。
Study on the Mechanism of Phage P1 Infecting Escherichia coli Nissle 1917 ( EcN) YU Yan-ying,ZHOU Xian-xuan ( School of Food Science and Engineering, Hefei University of Technology, Hefei, Anhui 230009) Abstract [ Objective] To find out the infection site of Escherichia coli infected by bacteriophage. [ Method] We selected E. coli Nissle 1917 ( EcN) , serotype O6 ∶K5 ∶H1 as the experimental strain. The K antigen and O antigen synthesis genes were mutated by λ-RED system, and the infection sites of P1 were determined by detecting the transduction efficiency of P1 to these mutants. [ Result ] The double mutant EcNΔkfiAΔwaaG::Cm had the highest transduction efficiency. The mutation of kfiA gene led to the deletion of K antigen. The mutation of waaG gene led to the exposure of second heptanes ( Hep Ⅱ) in LPS core oligosaccharides, which made it easier for P1 to contact with HepⅡ and to infect bacteria. [ Conclusion] HepⅡ may be the recognition site of phage P1. Key words Bacteriophage P1;Nissle 1917;K antigen;O antigen

2020大肠杆菌的分型方法及其研究进展

2020大肠杆菌的分型方法及其研究进展

2020大肠杆菌的分型方法及其研究进展肠埃希氏菌是一种条件性致病菌,致病性的大肠埃希氏菌具有高度的传染性,会严重危害健康。

快速准确地测定大肠埃希氏菌的污染来源对有效缩小疫情影响范围极有帮助,从而避免对人类健康和经济贸易造成重大损失。

建立简便高效的分型方法是微生物溯源的关键,常见的大肠埃希氏菌分型方法可分为表型分型和分子分型,这些分型方法各有优劣,具有不同的适用范围。

大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E. coli)又称大肠杆菌,属革兰氏阴性菌,于1885年首次被发现[1],是人和动物体内的正常寄居菌。

大肠埃希氏菌是一种条件致病菌,在正常情况下不致病,然而一些特殊血清型菌株可导致人或动物腹泻、腹痛甚至会产血性粪便,重症病例会并发溶血性的尿毒综合征以及血小板减少性紫癜[2-3]。

根据大肠埃希氏菌对人类的致病机理不同,可将其分为5种类型:.肠致病性大肠埃希氏菌(Enteropathogenic escherichia coli,EPEC).肠产毒性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenic escherichia coli,ETEC).肠侵袭性大肠埃希氏菌(Enteroinvasive escherichia coli,EIEC).肠出血性大肠埃希氏菌(Enterohemorrhagic escherichia coli,EHEC) .肠集聚性大肠埃希氏菌(Enteroaggregative escherichia coli,EAEC) 大肠埃希氏菌的肠道传染具有比较广泛的特性,而食品在生产、包装及运输过程中极易感染此菌,进而引发传染性疾病[5]。

2018年6月,大肠埃希氏菌O157:H7污染生菜事件的暴发,影响了美国36个州,事件造成96人住院和5人死亡[6]。

2019年4月,美国的10个州暴发牛肉感染大肠埃希氏菌O103事件,导致177人感染,其中21人住院,涉事公司紧急召回了53 200磅牛肉[7]。

作用于大肠杆菌噬菌体的筛选

作用于大肠杆菌噬菌体的筛选

健康养殖·诊疗84畜牧业环境 2020.06摘 要:大肠埃希氏菌(E.coli),属称大肠杆菌。

在特定条件下大肠杆菌可致病。

近年来,由于兽医临床耐药大肠杆菌的不断出现,新抗生素的研制困难重重,而噬菌体(bacteriophage 或phage)是一类细菌依赖性的病毒,能在菌体内快速增殖并最终裂解细菌从而达到抗菌效果。

因此研究大肠杆菌噬菌体用于防治大肠杆菌感染受重视。

为了筛选出作用于大肠杆菌的噬菌体,通过水样法、双层平板法和点滴法从污水中筛选出噬菌体并进行分离纯化。

结果发现,滴了噬菌体的部位出现了明显的噬菌斑,说明噬菌体对大肠杆菌发挥裂解作用。

为进一步研究噬菌体与大肠杆菌相互作用提供理论基础。

关键词:大肠杆菌;噬菌体;筛选;水样法;双层平板法;点滴法1 研究目的和意义本研究通过试验筛选出作用于大肠杆菌的噬菌,研究大肠杆菌噬菌体的形态并对其进行分离纯化。

为进一步的噬菌体与大肠杆菌相互作用研究提供理论基础。

2 材料与方法2.1 材料(1)污水:来自长江大学河滨公寓旁水沟的不同位置。

(2)标准大肠杆菌:长江大学实验室保存。

2.2 试验主要仪器及器材培养皿、恒温箱、离心机、高压蒸汽锅、酒精灯、滴管、接种环、0.22 μm滤膜,注射器、锥形瓶、移液器等长江大学相关实验室提供。

2.3 试验方法污水采集:在长江大学河滨公寓旁水沟中的不同位置采集3瓶(555ml)污水,分别编号1、2、3,将样品放入泡沫箱中保存。

LB培养基制备:分别称取NaCl 4.5 g、蛋白胨9g、酵母提取物4.5 g放入500 ml锥形瓶中,加入300 ml蒸馏水,充分摇匀加热至沸腾,待冷却后分别倒入3个锥形瓶(250 ml)中,每瓶50 ml,放入高压立式蒸汽灭菌器内灭菌。

SM缓冲液配制:Nacl 5.8 g,MgSO 4·7H 2O 2 g,1M Tris·CL(pH 7.5)50 ml,2%明胶5 ml,加双蒸水至1 000 ml,121℃高压灭菌20 min,4℃保存,该试剂用于噬菌体的保存及稀释。

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大肠杆菌噬菌体的研究进展作者:吴伟胜李玉保王守荣等来源:《江苏农业科学》2015年第08期摘要:大肠杆菌病为畜牧养殖业常见疾病之一,目前临床上主要依赖于抗生素进行控制。

随着大肠杆菌耐药性增强以及人们对食品安全意识的提高,急需寻找安全、高效的抗生素替代品。

噬菌体是能够感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒总称,具有巨大的潜在应用价值。

对近几年国内外有关大肠杆菌噬菌体的分布、分离纯化方法、保存方法、形态、pH值稳定性、温度稳定性、分子生物学以及应用方面作了简要概述,并对以后的科研和应用进行了思考和展望。

关键词:大肠杆菌;噬菌体;研究进展中图分类号:S852.61+2 文献标志码: A[HK]文章编号:1002-1302(2015)08-0008-03近年来,由于畜牧养殖业大量使用抗生素,导致病原微生物的耐药性升高 [1],同时,抗生素的使用对食品安全构成威胁。

噬菌体作为一类能够感染和裂解大肠杆菌等微生物的病毒,具有宿主专一、不产生耐药性 [2]、使用安全 [3-4]等优势,在美国已应用于儿童腹泻疾病的治疗 [5]。

因此,噬菌体有望在防控畜牧业肠道性疾病中替代抗生素。

本文对近几年国内外关于大肠杆菌噬菌体的分离和保存方法、生物学特性等进行综述,希望能够对大肠杆菌噬菌体更深入的研究和应用提供思路和方法。

1 大肠杆菌噬菌体的分布目前研究发现的病毒种类数量庞大,其中大部分是噬菌体 [6]。

大肠杆菌噬菌体在我们生活的周围环境中普遍存在。

到目前为止,学者们已经从不同的样品中分离出来多种大肠杆菌噬菌体,并对所分离的噬菌体进行了分类和命名。

在养殖场的鸡粪 [7-8]和污水中 [9],以不同的大肠杆菌为宿主菌分离到不同种类的大肠杆菌噬菌体;在养猪场的粪便中,以产肠毒素性大肠杆菌K88 为宿主菌分离并纯化了1株噬菌体PK88-4 [10];在城市的污水中,以肠出血性大肠杆菌O157 ∶ H7为宿主菌分离出裂性噬菌体 [11]。

此外,在医院的污水中,用大肠杆菌E1~E17共17种细菌做指示菌分离出1种广谱噬菌体IME11 [12]。

2 大肠杆菌噬菌体的分离纯化方法对于噬菌体的分离纯化,大致可以分为采样、富集、分离、纯化4个步骤。

每个步骤又包含1种或多种不同的方法,可以根据自身的试验条件和试验状况将不同方法组合,进而得到最佳的分离纯化方法。

2.1 采样采样大致可以分为直接法、间接法和诱导法 [13]3种。

直接法是指直接从对象菌生活的生物体上采集样本的方法。

李灏等 [14]、Connerton [15]都采用直接法从发病鸡的肠道中采样并分别分离出大肠杆菌噬菌体和空肠弯曲杆菌噬菌体。

间接法是指根据对象菌的特性,从相应的非生物坏境中采集样本的方法。

如从养鸡场的污水、粪便和土壤中采样进而分离噬菌体 [8-9,16-17]。

诱导法是指用对象菌去感染生物体进而在生物体或其生活环境中采样的方法。

郭海萍等用痢疾志贺氏菌感染小鼠,采取小鼠的粪便进而分离得到相应噬菌体。

2.2 富集富集也称增殖,即将对象菌悬液与样品液共同培养,增加样品液中噬菌体的含量,富集之后的样品液更易分离出噬菌体。

郭秋菊等从生活污水中采样分离噬菌体,进行了富集和不富集的对照试验,结果显示,富集之后的样品很容易检测到噬菌体,而不经富集的样品未检测到噬菌体 [19]。

虽然不经富集的样品中未检测到噬菌体,但并不表示样品中不含噬菌体。

2.3 分离分离方法可以分为双层琼脂平板法、琼脂平板涂布法、琼脂平板倾注法3种 [13]。

各种方法有自己的优缺点,学者们通常根据自己的试验条件和操作习惯进行选择。

2.4 纯化纯化可以分为液体纯化法和平板纯化法 [13]。

液体纯化法中,用无菌枪头或牙签挑单个噬菌斑,然后接入含对象菌的液体培养基中进行适温培养,再经过滤除菌即得到纯化噬菌体[20]。

平板纯化法中,也是用无菌枪头或牙签挑单个噬菌斑于缓冲液进行洗脱,洗脱液经适当稀释后再用双层琼脂平板法、琼脂平板涂布法或琼脂平板倾注法进行培养,如此操作 3~5次,即可得到纯化噬菌体 [10,19]。

3 大肠杆菌噬菌体的保存方法在对噬菌体的保存方法上,研究学者们尝试过很多种方法,不同的保存方法对噬菌体活性的保持影响很大。

陈萍等取3组500 μL噬菌体裂解液:第一组加入了100 μL 氯仿,第二组加入500 μL LB 液体培养基,第三组加入CaCl2和MgCl2至终浓度10 mmol/L、0. 1%明胶, 4 ℃保存1个月,结果显示第三组噬菌体的活性很少降低,效价最高 [21]。

有很多关于-18 ℃保存噬菌体的研究。

陈海阳将1株广谱大肠杆菌噬菌体EX01裂解液放于-18 ℃低温保存,每隔一周测定其效价,结果显示噬菌体EX01在35 d时仍具有较高的效价,56 d时仍有感染性,63 d时感染性消失 [13]。

郭秋菊等对比了在-18 ℃保存已纯化的噬菌体平板或噬菌体悬液的2种方法。

结果显示,2种方法都能保存1个月以上,但平板保存法优于噬菌体悬液保存法 [19]。

另外报道显示,T4-Like大肠杆菌噬菌体在10 mmol/L的镁离子中,30 ℃保存超过1个月,效价都没有降低 [22]。

4 大肠杆菌噬菌体的形态噬菌体个体微小,不具有细胞的完整结构,只含有单一核酸。

噬菌体按蛋白质结构可以分为无尾部的二十面体、有尾部的二十面体和线状体3种。

无尾部的噬菌体外表由蛋白外壳组成,核酸被包裹在内部。

有尾部的噬菌体除了头部外,还有尾部和基部:尾部由1个中空的针状结构及外鞘组成,基部由尾丝和尾针组成。

线状体噬菌体没有明显的头部结构,而是由壳粒组成的盘旋状结构。

已知的噬菌体大多都是有尾部的二十面体。

许多研究人员分别对从养殖场粪便中、河水中和污水中分离出的噬菌体进行了电镜拍照,照片显示噬菌体都由头部和尾部组成,且头部呈正多面体状,直径45~95 nm,尾部粗长、含有尾鞘,长100~120 nm [7,10-11,23-24]。

此外,郭秋菊等从生活污水中分离了3种类型的噬菌体,经电镜拍照显示:一种类型的噬菌体尾部不能收缩,头部为二十面体,直径110~120 nm,尾长220~230 nm,尾宽13~15 nm,没有尾鞘、基板、尾丁、尾丝;一种类型的噬菌体尾部可以收缩,头部为三十面体,直径70~110 nm,尾长120~130 nm,尾宽18~22 nm,有尾鞘、基板、尾丁和尾丝结构;一种类型为短尾噬菌体,头部直径约20 nm,尾长2~3 nm [19]。

5 大肠杆菌噬菌体稳定性5.1 pH值稳定性噬菌体生长和其他微生物一样,除了其他必要的生长条件外,还需要有适合其生长的pH 值。

在其他生长条件相同的情况下,pH值不同对噬菌体生长的影响也不同。

何觅之将Bp9B1226噬菌体纯培养液分别加入不同pH值(4、5、6、7、8、9、10、11)的LB液体培养基中,放于37 ℃恒温水浴24小时,用双层平板法测定噬菌体效价,结果显示Bp9B1226噬菌体在pH值=6~9时,噬菌体效价指数无明显变化,当pH值10时,噬菌体效价指数明显下降[25]。

另外,代保英对大肠杆菌噬菌体BpD的pH值的稳定性也做了类似的试验,结果显示:在pH值=5~9时,噬菌体BpD活性较高,尤其在pH值=7~8时,活性最高;在pH值9时,活性明显下降 [26]。

由此看出,大肠杆菌噬菌体对pH值的适应范围较广。

5.2 温度稳定性温度对噬菌体的感染力有很大影响,找到噬菌体保持感染力的温度范围,将会对进行噬菌体更深入的研究与应用起到关键作用。

张培东等对大肠杆菌噬菌体Bp6的热稳定性做了测定,他们将具有一定效价的噬菌体Bp6悬液分别经40、50、60、70、80、90 ℃水浴30 min和1 h,随即将悬液冰浴冷却测其效价,结果显示噬菌体Bp6在40 ℃下作用30 min和 1 h 活性基本不变,50 ℃和60 ℃下作用 30 min 和1 h仍有较高活性,70 ℃下作用30 min和1 h基本失去活性,80 ℃和90 ℃下作用30 min和1 h完全失去活性 [7]。

何觅之 [25]和代保英 [26]也分别对相应的大肠杆菌噬菌体做了类似试验,结果显示,噬菌体对温度的稳定性比较高,但长时间处于70 ℃以上高温,噬菌体的活性会迅速降低以至失去。

6 大肠杆菌噬菌体分子生物学噬菌体所含的核酸可以分为4种:单链RNA(ssRNA)、双链RNA(dsRNA)、单链DNA(ssDNA)和双链DNA(dsDNA)。

在近几年的研究中发现,多数大肠杆菌噬菌体的遗传物质为DNA。

尹雅菲等对分离出的1种宽谱噬菌体IME11做了遗传物质的鉴定,他们分别用DNaseⅠ和RNaseA 处理噬菌体IME11的遗传物质,证明噬菌体IME11的遗传物质为DNA,并用限制性内切酶处理其遗传物质,证明其遗传物质为dsDNA [12]。

同时,王冉等对分离出的1株噬菌体PK88-4也做了基因组分析及酶切鉴定,证明噬菌体PK88-4的遗传物质为dsDNA,基因组大小约为60 kb [10]。

此外,有些关于大肠杆菌噬菌体的研究显示,其遗传物质为RNA。

徐焰等对1株分离自医院污水的宽宿主谱大肠杆菌噬菌体和1株单一宿主谱噬菌体f2进行了遗传物质测定,结果显示,宽宿主谱大肠埃希菌噬菌体和f2 噬菌体均为 6 000 bp 左右的单链RNA [27]。

7 大肠杆菌噬菌体的噬菌谱根据噬菌体的噬菌谱不同,可以大致将噬菌体分为宽宿主谱噬菌体和专一宿主噬菌体。

宽宿主谱噬菌体是指能够裂解多种宿主菌的噬菌体。

徐焰等从医院污水中分离出1株大肠杆菌噬菌体,经宿主范围测定,发现该噬菌体可以裂解5株大肠杆菌,所以可以确定该噬菌体为大肠杆菌宽宿主谱噬菌体 [28]。

此外,王礼伟等 [9]和杜崇涛等 [11]也分别从养鸡场污水和城市污水中分离出了大肠杆菌宽宿主谱噬菌体。

专一宿主噬菌体是指只能够裂解专一宿主菌的噬菌体。

因其具有严格的宿主专一性,在细菌的检测、细菌分型以及特异性裂解方面都有很强的优势 [29]。

8 大肠杆菌噬菌体的安全性[JP3]和抗生素相比,噬菌体不易造成细菌的抗性。

相关性研究表明,细菌对噬菌体产生抗性的突变频率为10 -7,产生抗性的几率很小 [30],而且噬菌体也可以为适应宿主菌产生适当的变异 [2]。

噬菌体在清除宿主菌的同时,也不会影响动物体内周围的正常菌群。

Chibani-Chennoufi等用4种大肠杆菌噬菌体饲喂小鼠,结果显示噬菌体几乎对正常菌群没有影响 [31]。

Bruttin等让15个志愿者服用T4噬菌体,受试者均无不良反应,且没有影响肠道内正常菌群 [3]。

9 大肠杆菌噬菌体的应用噬菌体生物制剂在治疗疾病中有很多的优势:噬菌体的特异性强,能专一地裂解宿主菌,且不会破坏一些正常菌群;噬菌体的增殖周期比较短,产生子代噬菌体的数量大,对疾病的治疗会更加快速有效;在噬菌体将病原菌裂解之后,噬菌体会随着病原菌的清除而自动灭亡,不会残留在动物体内 [32]。

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