大鼠海马突起坍塌蛋白Sema3A及其受体neuropilin-1 mRNA的表达

数 为 １ ％ 水 合 氯 醛 １Ｉ 腹 腔 内注 射 麻 醉后 迅 速 取 出 ５ ｌ Ｉ ｌ 海 马 组 织 ， 生 、 年 大 鼠在 体 积 分 数 为７ ％酒 精 中浸 新 幼 ５
泡 １ｒｉ 迅 速 取 出 海 马 组 织 ， 出 组 织 后 用 Ｄ— ａ ｎ后 取
坍塌 和神经元突触联系的丢失被认为是神经退行性 疾
Ｈ ｎ ’液 冲洗 ２次 ， 后 入 普 通 玻 璃 匀 浆 器 内并 加 入 ａｋ ｓ 然 １ ｌ ｒｏ匀 浆 ； 温 放 置 ５ｒｎ 按 每 毫 升 Ｔｉ ｌ 入 Ｔｉ ｌ ｍ ｚ 室 ｉ后 ａ ｒｏ加 ｚ
０２Ｉ ． Ｉ ｌ 仿 涡 旋 混 匀 ， 浴 １ ｉ； ２００ｒｒｎ ｌ氯 冰 ０ｒｎ １ ａ ， ａ ０ ／ｉ
采用 Ｒ Ｔ—Ｐ Ｒ方法检测大鼠海马发育 不同阶段 Ｓｍ ３ Ｃ ｅ ａＡ及其 受体 Ｎ Ｐ一１ Ｎ ｍＲ Ａ的表 达。结果 Ｓｍ ３ ｅ ａＡ电泳条带 灰度呈下降趋势， 在胚胎期 、 新生期有较 高的表达 ， 幼年期 、 成年期和 老年期表达较 弱。Ｎ Ｐ一１电泳 条带在大 鼠海 马发育的各个时期 均有较 高的表达 ， 以胚胎期 最高， 新生期 表达相对其他 时期 弱， 但在 幼年期 、 成年 期和老年 维持 较高表 达水平。结论 大鼠海马在胚胎期和新生期是非 目的性突起 坍塌的活跃期 ， 幼年 、 成年 和老年期 处于相对 休 眠期 ；Ｐ一１ Ｎ 始终 处于高表达状 态， 可能参与神 经退行性疾病的发生。
【 关键词 】 Ｓｍ３ ｎｕ ｐｉ一１ 海马 发 育 ｅａＡ ｅｒ ｉ ｏｌ ｎ
大鼠
表 １ 各种 ｍ Ｎ Ｒ Ａ序 列的 上 下游 引物 列表
神 经 元 从 干细 胞 发 育 为 成 熟 的 神 经 元 ， 历 从 细 经
胞极 化 、 起 生 成 、 突 目的性 突起 生 长 延 伸 和非 目的 性 突 起 回缩 一 系 列 动 态 的 发 育 过 程 。 ＳｍａＡ 由胶 质 细 胞 ｅ ３
１ ｒｎ４Ｃ离 心 ； 上 清 液 ， 管 加 入 １Ｉ 异 丙 醇 ， ５ａ ，ｏ ｉ 取 每 ｌ Ｉ ｌ 置 于 一２ ｃ ；２００ｒｍｎ １ ｉ， ｏ离 心 ， 心 弃 去 ０Ｉ ｈ １ ０ ｉ，０ｍ ｎ４Ｃ ＝２ ／ 小 上清 液 ； 入 体 积 分 数 为 ８％ 异 丙 醇 １Ｉ 加 ０ ｌ 心 Ｉ ｌ离 （ ５０ｒｒｎ２ｒｎ ， 去 上 清 液 ， 重 复 此 步 操 作 ２ ７ ０ ａ ， ｉ） 弃 ／ｉ ａ 并 次 ； 入 异丙 醇 １ Ｉ 离 心 （ ０ ｒｎ ２ｒｎ ， 上 清 加 ｌ Ｉ ｌ ７５０ｒａ ， ｉ） 弃 ／ｉ ａ 液 ； 空抽 湿 ２ ｉ； 沉 淀 的 Ｒ Ａ分 别 溶 解 于 ２ 真 ０ｍｎ 将 Ｎ ０ ＤＰ Ｅ Ｃ水 中 。用 紫 外 分 光 光 度 仪 测 ２０ｎ ６ ｌ 吸 收 值 和 ｎ光
病 发 生 的原 因之 一 Ｌ ， 是 对 Ｓｍ ３ ３但 Ｊ ｅ ａＡ及 其 受 体 在 发 育
过程中的增龄变化并 不 了解 ， 为了解其 在神 经发育 过
程 中的 作 用 ， 文 用 ｌ —Ｐ Ｒ方 法 从 ｍ Ｎ 本 ｉ ｔ Ｃ Ｒ Ａ表 达 的 角
度 观 察 大 鼠海 马 从 胚 胎 到 老 年 的 表 达 规 律 ， 进 一 步 为
郭 国庆 陈静 辛莉 沈伟 哉 邱 小忠 钟世镇 △
南方医科 大学临床解剖学研究所生物力学实验室（ 广州 ５０ １） 暨南大学医学院解剖学教研 室（ 州 ５０３ ） １５５ ； 广 １６０
【 要】 目的 探讨大鼠海马 Ｓ ａＡ 摘 ｅ ３ 及其 受体 ｎ ｒ ｉ — （Ｐ ） Ｒ Ａ ｍ ｅ ｏｌ ＩＮ 一１ ｍ Ｎ 在发 育过程 中 ｕ ｐｉ ｎ 表达的规律 。方法
分 泌 ， 过 吸引 和 排 斥制 突 起 的 形 成 和 生 长 Ｌ 。其 作 用 的 受 体 包 并 １ Ｊ 括 ｎｕ ｐｉ 一１Ｎ 一１ 和 Ｈ ｘ Ａ Ｎ ｅｒ ｉｎ （ Ｐ ） ｏｌ ｅｉ ， Ｐ一１ 细 胞 内 片 ｎ 无 断， Ｐｘ 与 ｌ Ａ结 合激 活 细 胞 内 信 号 转 导 通 路 ， 挥 控 制 ｅ 发 细 胞 突 起 生 长 和 方 向 的 作 用 Ｌ 。 Ｓｍ ３ ２ ｅ ａＡ导 致 的 突 起 Ｊ １４ 总 Ｒ Ａ提 取 ． Ｎ 孕 鼠 、 年 鼠 和 老 年 鼠用 体 积 分 成
公 司 ； 物 由上 海 生 物 工 程 技 术 服务 有 限公 司合 成 。 引 １２ 实验 动 物 ． 取发育不同阶段 的 ＳＦ 清洁 Ｓ Ｐ 级 Ｄ大 鼠（ 自南 方 医 科 大 学 实 验 动 物 中 心 ） ５只 。 大 鼠 发 购 ２ 育 分 期 以 大 鼠 胚 胎 期 、 生 期 、 年 期 、 年 期 及 老 年 新 幼 成 期 进行 分 期 ， ５ 阶段 ， 组 ５只 。 共 个 每
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ｏＩ ｅ ｉａ ｏ ｒ ａ Ｏ ｔ ２０ ， ｏ．２ ，Ｎ ．１ ｌ Ｍ ｄｃｌＪ ｕ ｎ ｌ ｃ． ０６ Ｖ １ ７ ｏ ０ ２
大 鼠海 马 突 起 坍 塌 蛋 白 Ｓｍ ３ ｅ ａ 其 受 体 Ａ及
ｎ ｕｏ ｉｎ一１ｍＲ Ａ 的 表 达 ＊ ｅ ｒｐｌ ｉ Ｎ
探讨它们的功能 、 突起 的发生 以及与神 经退行 性疾病
的 关 系提 供 实 验 资料 。
１ 材 料 与 方 法
１１ 试 剂 ． （ Ｔ ｚｌ ｉｖ ｒｇｎ公 司 产 品 ； ＮＡ Ｐ Ｒ Ｋｔ ｎｏ 为 ｎｉｏ ｅ ｔ Ｒ Ｃ ｉ
） ｅ３ ０及 １０ｂ Ｎ ａ ｄ ｒ ｒｅ 购 自 Ｔ Ｋ Ｒ Ｖ ｒ． ５ ｐＤ Ａ Ｌｄ ｅ ｋ ｒ Ｍａ ａａ ａ