高效液相色谱-串联质谱法测定保健酒中西地那非含量
高效液相色谱法测定保健品中西地那非柠檬酸盐
！笪墨生焦曼曼查垫丝！！旦箜１２查筮２塑些ｉ燮±！！型匹幽虫竖垫璺！里旦些血！！丝：血些：望：坠：！［文章编号］１００４－－８６８５（２００２）０２—０１９７—０１高效液相色谱法测定保健品中西地那非柠檬酸盐潘恒亮，赵士权，黄微，林明珠（南京市疾病预防控制中心，江苏２１０００３）［中圈分类号］０６５７７＋２（文献标识码］＾西地那非柠檬酸盐（“伟哥”主要成分），是由美国辉瑞公司研制开发，现主要用于治疗男性性功能障碍疾病的药物。
它通常以柠糠酸盐形式作为原料药使用。
一些厂家为了达到一般中药保健品难以达到的短期药效，将原本只能作为原料药西地那非柠檬酸盐添加到一些中药保健品中。
为了对保健品中添加的该成分有一定的了解和有效的监控．我们抽检了一些市售保健品，采用高效液相色谱法测定，并与标准品对照。
摸索出一些有效的测定方法。
１材料与方法ｌ１仪器与试荆１１１ＷａｔｅｅａＱ６６ＨＰＩ』１桂测嚣Ｐ＇ｎｏｔｏｄｌｏｄｅａｒｒａｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｅｒ色谱桂Ｃ—１８１１２西地那非柠檬酸盐标准溶液精密称取ｌＯＯｍｇ西地非那柠檬酸盐（经反复纯化含量大于９９８％），用甲醇定容至ｌＯＯｍｌ作为贮备液，取贮备液１０００ＩＩｄ定容至１００ｍｌ作为标准溶液，含量１００／』ｇ／ｍｔ。
１．１．３检测样品取送检的不同品牌的保健品胶囊３份（经薄层分析，巳初步判断舍有西地那非柠檬酸盐）。
ｌ２色谱条件：色谱柱ｃｌＢ流动相，甲醇，流速１０ｍｌ／ｎｆｉｎ检测波长２９２ｎｍ，进样量１０Ｌｄ１３样品前处理取一粒胶囊，将内部粉状体溶予２５０ｍｌ甲醇，加０．５９活性炭磁力搅拌脱色３０ｍｌｎ，过滤，取滤液备用。
１．４标准曲线分别取标准溶液０．０、２．０、４０、６．０、８０、１０．０ＩＩｌｌ于２５ＩＤＩ容量瓶中，用甲醇定容至刻度，浓度分别为００、８．０、１６．０、２．４．０、３２．０、柏咄∥血分别注人１０ｍｌ进行唧比分析，绘制标准工作曲线，回归方程为Ｙ＝３．６Ｘ＋２４０，回归系数ｒ＝０．９９８７。
液质联用法测定保健品中西地那非含量的不确定度评定
第35卷第16期2019年*月Vol.35No.16Aug.2019甘肃科技Gansu Science and Technology液质联用法测定保健品中西地那非含量的不确定度评定王小乔，许晓辉，张虹艳，张文，赵波，闫君，朱天虹，李晨曦（兰州市食品药品检验所，甘肃兰州730050）摘要：评定了液相色谱-质谱联用法测定补肾壮阳药中掺入西地那非含量的不确定度。
通过对测定过程中的不确定度来源进行分析，建立测量模型,并考察影响不确定度的因素，计算出各个分量的标准不确定度，再由标准不确定度得到合成不确定，最后得到扩展不确定度，计算出了测定的不确定度结果。
关键词：液质联用；西地那非；不确定度中图分类号:R286.0不确定度是用来表征被测量值所处的量值范围，是评测定结果是否准确的量化指标叫验过程中，受所用的对照、玻璃仪器、天平、测量仪器、操作人员的技术水因素的影响，测量的结果只能是，同时，检测准验准检测准验须建立测量不确定度评定的程序文件巴因此，不确定度评定到检测验的，是检测验质量$，不确定度评定、品、中成药、食品检测等领域，保健品中非法掺入药含量测定的不确定度$，丫品中非法药果，行危害了人民群众的身体健康?3%6@,家也陆续发布了一些保健品中非法药的补充检验方法$肾壮阳药，应用液质联用法对补肾壮阳药中非法西地那非含量测定的不确定进行了定，并计算出了测定不确定度结果，期液质联用法测定品中非法掺入药含量的不确定度定考$1材料与方法1.1试验仪器与设备液相色谱-质谱联用仪（安捷伦6460）；天平（梅特勒MS105DU）枸缘酸西地那非对照品（纯度99.0%；批号（1305-007A1；来源:TLC）1.2试验方法1.2.1检验依据《国家食品药品监督管理局2016年第196号公告》1.2.2供试样制备称取约0.5g样品研细后转移至50mL容量瓶中，加乙@40mL,超声处理15min，冷至室温，用乙@稀释至刻度，摇匀，精密量取上述溶液1.00mL置10mL容量瓶中，用乙@定容至刻度，摇匀，过0.22!m的滤膜，待测。
高效液相色谱-串联质谱测定食品中西地那非等11种非法添加药物的方
高效液相色谱-串联质谱测定食品中西地那非等11种非法添加药物的方高效液相色谱-串联质谱测定食品中西地那非等11种非法添加药物的方法改进及比较研究作者：暂无来源：《中国食品》 2018年第19期摘要：西地那非等均属于5磷酸二酯酶（PDE5）抑制剂的处方药，于1998年经美国食品药品监督管理局批准，是治疗男子阴茎勃起功能障碍（ED）的有效药物，但长期或超剂量服用易对心血管系统、神经系统、消化系统等造成严重损伤。
随着人们健康意识的增强，各种含有人参、枸杞、红枣、蛹虫等中药或动植物的保健酒越来越多，而不法商家为了谋取暴利，在保健酒中随意添加西地那非，给消费者的健康埋下极大隐患，也造成行业中乱象丛生。
2015年7月31日，国家食品药品监管总局发布通告，近51家企业，在69种保健酒、配制酒中非法添加了西地那非等化学物。
因此，我们有必要建立对于西地那非等非法添加药物的检测。
关键词：高效液相色谱-串联质谱；西地那非；非法添加；比较与改进对于PDE5及其衍生物的检测方法，国内基本采用的是高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法，其仅通过保留时间和光谱图定性，会经常受杂峰干扰，出现假阳性的情况。
而高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-tandem mass spectrometry，HPLC-MS/MS）具有高灵敏度和高选择性，可成为非法添加化学成分定性确证的有效工具。
目前，关于西地那非、豪莫西地那非、羟基豪莫西地那非、那莫西地那非、硫代艾地那非、那红地那非、伐地那非、伪伐地那非、他达那非、氨基他达那非、红地那非11种物质的方法检测尚未形成国家标准，现国内关于那非等非法添加物的检测还只局限于一种或几种。
本文通过高效液相色谱-串联质谱法测定11种非法添加药物残留量的定性、定量分析方法。
通过对样品前处理、色谱柱、流动相等条件进行比较，采用乙腈水提取，HypersilGold-C18 分离柱（150mm×4.6mm，3μm）分离，乙腈和水（0.1%甲酸+5mM乙酸铵）为流动相，以电喷雾离子源正离子多反应监测（MRM）模式进行MS/MS检测。
高效液相色谱串联质谱法检测西地那非血浆浓度
高效液相色谱串联质谱法检测西地那非血浆浓度目的：建立高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中西地那非的浓度。
方法：以西地那非-d8为内标，血浆经甲醇沉淀蛋白后，采用Titank-C18色谱柱分离，流速0.5 mL/min；以选择反应检测（SRM）方式进行检测。
结果：西地那非的线性范围为4.00ng/mL~1000 ng/mL，提取回收率和内标平均提取回收率分别为82.32%～84.75%和99.69%，日内和日间准确度精密度均＜15%。
结论：本法操作简便、快速、灵敏，重现性好，适应于西地那非人体内血药浓度的测定及其药代动力学和生物等效性研究。
关键词：西地那非；高效液相色谱串联质谱法；含量测定西地那非是一种5型磷酸二酯酶（PDE5）抑制剂，PDE5在阴茎海绵体中高度表达。
当性刺激引起局部一氧化氮（NO）释放时，一氧化氮激活鸟苷酸环化酶，导致环磷酸鸟苷（cGMP）水平增高，使海绵体平滑肌松弛，血液流入而使阴茎勃起。
西地那非对人海绵体无直接松弛作用，通过选择性抑制PDE5，升高环磷酸鸟苷（cGMP）水平高而导致阴茎海绵体平滑肌松弛，从而对阴茎血流水平进行调控。
西地那非临床上用于治疗勃起功能障碍（ED），能安全有效的改善各种ED患者的勃起功能[1]。
西地那非口服后吸收迅速，10～40min起效，绝对生物利用度约为40%。
空腹口服30～120min后达血药浓度峰值（Cmax），餐后口服90～180min达Cmax。
本文建立HPLC-MS/MS法测定人血浆中西地那非的浓度，采用甲醇蛋白沉淀法，简单，快速，稳定，可同时满足临床药代动力学及生物等效性研究中大批量样品分析的要求。
1.仪器与对照品Thermo TSQ Altis 三重四级杆质谱仪；Vanquish UHPLC超高效液相。
枸橼酸西地那非来源：中国食品药品检定研究院，批号：420012-202003；西地那非-d8来源：TLC，批号：1390-029A2。
1.方法1.液相色谱-质谱条件1.色谱条件：色谱柱为Titank C18 5μm 50x2.1mm；流动相5mM乙酸铵溶液（A）和乙腈溶液（B）；流速0.5mL/min；梯度洗脱程序为0minA：B（80:20）→2.5minA：B（90:10）→3.4minA：B（90:10）→3.5minA：B（80:20）→3.5min A：B（80:20）(stop)，0.8min质谱切入，3min质谱切出；柱温35℃；进样量2L。
高效液相色谱-高分辨质谱快速筛查和确证保健品中非法添加的壮阳药物
８ ９ ８・
色
谱
１ ． ２ 标 准 溶 液 的 配 制
第 ３ ３卷
近 些年 ， 抗疲劳类保健 品（ 尤 其 是 号 称 纯 中药
成 分 的保 健 品 ） 在市场上大量销售 ， 但 由 于 一 些 不 法 分子牟 利 心切 ， 在 中 药 保 健 品 中 大 量 非 法 添 加 壮
子 水
描范 围 ： 一 级 质 谱 ｍ／ ｚ １ Ｏ ０～１ ０ ０ ０ ， 二 级 质 谱 ｍ／ ｚ
５ ０ ～１ ０ ０ ０ ； 离子 源温 度 ： ６ ０ ０℃ ； 气 帘气 （ Ｃ Ｕ Ｒ） 压力 ： ２ ． ４ １ ｘ ｌ ０ Ｐ ａ ； 雾化 气 （ Ｇ Ｓ １ ） 压 力 ：３ ． ７ ９ × １ ０ Ｐ ａ ； 辅 助加热 气 （ Ｇ Ｓ ２ ） 压力 ： ３ ． ７ ９ ×１ ０ Ｐ ａ 。Ｉ １种 待 测 物 的保 留时 间等见 表 造 成 了很 大危 害 。消 费者 在
不 知 情 的 情 况 下 服 用 这 些 含 有 壮 阳 类 化 学 成 分 的 保
健品， 会 出现 头晕 、 恶心 、 青光 眼等 症状 ， 严重 者会 造 成 肾功能 、 心脏 功 能及 心血 管 系 统 的严 重 损 伤 ¨ 。 因此 ， 有 必要建 立 专属性 强 、 能快速 准 确检测 此类 非
筛 查方 面应 用仍 然较 少 。
１ ． ３ ． ２ 片剂、 胶 囊 剂 及 颗 粒 剂 等 固体 样 品
本 实验所 取 片 剂 、 胶 囊 剂 及 颗 粒 剂 样 品 均 为 市
售抗 疲 劳类保 健 品 ， 准确 称 取约 ０ ． ２ ５ ｇ粉碎 均 匀 的
样 品于 ２ ５ ｍＬ具 塞 试 管 中 ， 加入约 １ ５ ｍＬ 甲 醇 ， 超
高效液相色谱-质谱法分析(西地那非 伐地那非)原始记录
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检测项目
西地那非 伐地那非
检测开始时间
年月日
检测依据
国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件 2009030 第三法
检测结束时间
年月日
检测方法
高效液相色谱质谱联用法
温度/相对湿度
℃％
仪器名称/型号
PE Qsight220/A30
质控
（自控）
情况
样品总数
平行样个数
加标样个数
仪器使用情况使用前：使用后：
检验人：复核人：审核人：
高效液相色谱-质谱法分析（西地那非 伐地那非 ）原始记录(续页）第页，共页
样品编号
试样质量
(g)
定容体积
（mL）
组分浓度
（ng/mL）
稀释倍数
结果
（μg/kg）
平均值（mg/kg）
相对
偏差（%）
仪器使用情况使用前：使用后：
仪器编号
××/××-070 -2
电子天平FA2004
××/××-074-2
样品处理情况
按照国家食品药品监督管理局药品验补充检验方法和检验项目批准件 2009030对样品进行处理。
标准溶液名称/浓度
标准溶液浓度：100μg/ml
色谱条件
色谱柱：UPLC-C18
柱温：40℃
流速：0.4mL/min
进样量：10μL
流动相：甲醇+0.1%甲酸水溶液梯度洗脱
质谱条件
离子化模式：ESI +
质谱扫描模式：MRM
母离子
西地那非
伐地那非
子离子
西地那非
保健食品中11种西地那非类药物的检测分析
保健食品中11种西地那非类药物的检测分析摘要：目的试探究对保健食品中含有的西地那非类药物的高效检测方法。
方法选择具有抗疲劳功能的保健品为样本，经过乙腈提取，对样品利用优化色谱、质谱条件进行初步判断，对疑似西地那非类药物实施离子扫描和监测。
结果通过优化后的液相色谱、液质联用分析，可高效的在保健食品中检出所含有的西地那非类药物，且检测线均低于1μg/ml。
结论对保健食品实施液质联用分析后，并采取液相色谱定量检测法，可有效检测出非法添加的西地那非类药物，使保健食品的安全性得到保证。
关键词：保健食品；西地那非类药物；非法添加；液质联用随着生活水平及医疗条件的提高，健康及养生问题得到高度重视，而为了满足人们需求，保健食品不断得到研发，种类及功效也逐渐增多。
随着市场竞争压力的剧增，部分企业为了利益而非法添加违禁药物的现象屡见不鲜，使保健品不仅未发挥保健作用，甚至对健康造成影响[1]。
为此，本文主要对抗疲劳保健品中西地那非类药物实施拟建检测，并将结果作如下总结阐述。
1仪器与试剂选用QTRAP 4500/UPLC 安捷伦1290超高效液相-质谱联用仪及XSE105DU梅特勒天平，所选用的试剂：超纯水、色谱纯：甲醇、乙腈；分析纯试剂：那红地那非、红地那非、氨基他达拉非、羟基豪莫西地那非、盐酸伐地那非三水合物、豪莫西地那非、硫代艾地那非、那莫西地那非、枸橼酸西地那非、他达拉非、伪伐地那非。
选用具有抗疲劳功能的保健品作为检验样本。
2实验方法2.1制备对照液试品将适量对照品分别置于量瓶，加入适量甲醇，浓度为5μg/ml，超声溶解、摇匀，形成对照品储备液。
将各照品储备液置于同一量瓶，利用甲醇稀释，作为混合对照品。
2.2样品制备2.2.1液体样品在50ml量瓶中放置一次口服剂量的保健食品，并加入适量乙腈稀释保健食品至刻度，振荡摇匀，用0.22μm过滤膜获得制剂。
2.2.2固体样品混匀、研磨固体保健食品，剂量为一次口服剂量，并将研细保健食品置于25ml量瓶中，并将20ml乙腈加入量瓶中进行稀释，经过15min超声处理后置于室温，摇匀后用0.22μm过滤膜进行过滤，获取制剂。
高效液相色谱法测定保健食品中他达_省略__西地那非_伐地那非违禁药物含量_沈志武
法, 但都是用在药品和一些生物制品的研究中[ 1-3] , 对于在保健食品中 应用未见报道。本研究在文 献 [ 1- 4] 的基础上, 通过试验条件的优化, 达到了他达 拉非和西地那非、伐地那非的完全分离, 建立了一种 灵敏准确、快速简便的保健食品中他达拉非、西地那 非、伐地那非的高效液相色谱测定方法。
理化检验- 化学分册
P T CA( P ART B: CH EM. ANAL. )
2008 年第 44 卷 6
工作简报
高效液相色谱法测定保健食品中他达拉非、 西地那非、伐地那非违禁药物含量
沈志武1 , 唐宏兵1 , 李 群1 , 段晋仁2
( 1. 常州市疾病预防控制中心, 常 州 213003; 2. 常州市卫生监督所, 常州 213003)
62. 6
50
95. 9
20
68. 1
50
103. 0
回收率 R ecovery
/%
107. 0 101. 0 103. 0
95. 8 102. 0
97. 0
图 2 他达拉非、西地那非、伐地那非标准( a) 和样品( b) 的色谱图 Fig. 2 C hromat ograms of st andard s ol ut ions of t adalafil,
1 试验部分
1. 1 主要仪器与试剂 Wat ers 510 型高效液相色谱仪; 996 二极 管阵
列 检 测 器; P rodig y 5 ODS3 柱 ( 250 m m 4. 60 mm ) 。
他达拉非、西地那非、伐地那非标准储备溶液: 1. 0 g L- 1 , 分别称取他达拉非、西地那非、伐地那 非标准对照品 0. 100 0 g 于 100 mL 容量瓶中, 以少 量乙腈溶解, 用乙腈- 水( 40+ 60) 溶液定容, 使用时, 用乙腈- 水( 40+ 60) 溶液稀释成 100 mg L - 1 标准 工作溶液。
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高效液相色谱 -串联质谱法测定保健酒
中西地那非含量
摘要：建立高效液相质谱法测定酒中违禁药品西地那非含量方法。
样品采用
乙腈超声提取，经安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18分离，梯度洗脱，在LC-MS
多反应检测MRM模式下进行定量分析。
结果表明西地那非在0~500ng/ml范围内
呈良好的线性关系，回收率97.2-105.4%，RSD(n=5) :1.7%。
关键词：高效液相质谱法保健酒西地那非
西地那非商品名为“万艾可”，用于治疗男性勃起功能障碍，属于处方药。
长期服用对人体具有一定危害，对患有心血管系统疾病、高血压、糖尿病患者的
身体危害极大，严重者可致心肌梗死。
市场上保健酒品种多，2014年以来，湖北、广西多地就有酒厂因在保健酒中
添加伟哥成分药物，称喝某品牌的一瓶125毫升的保健酒相当于吃两粒伟哥。
检
验保健酒的检验方法和质量控制标准尚不完善，导致一些保健酒企业铤而走险，
钻不规范空子。
”西地那非为处方药，在食品或保健食品等特殊食品中添加属于
违法行为，必须予以打击。
因此，建立一种准确、快速的测定方法，为市场安全
监管工作提供有效的技术支撑。
1实验部分
1.1试药与仪器
1.1.1试药：甲醇/乙腈（HPLC级，默克公司）；乙酸铵（优级，国药集团
化学试剂）；水（Milli-Q Advantage A10超纯水机制备超纯水）；西地那非标
准物质（ Panphy chemicals corporation）
1.1.2仪器：液质联用仪 Agilent Technologies 6430 Triple Quad LC/MS
1.2仪器条件
色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18 3.0×100m m 1.8um
波长230 nm；流速：0.2mL/min；柱温：30℃；进样量：3μL；
流动相：甲醇+乙酸铵(0.1%乙酸)=35+65
扫描模式：多反应监测（MRM）ESI+
定量离子：475.2 定性离子：58.1 100.1 Frag(V)：190
1.3实验方法
1.3.1标准储备液的制备：
标准物质来源: Panphy chemicals corporation
精密称取10mg标准品置20ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，
即0.5mg/ml。
吸取上述0.5mg/ml 溶液1ml，用50%乙腈溶液稀释制50ml，即10μg/ml。
再吸10μg/ml 1ml用50%乙腈溶液稀释至20ml,即得每1ml含0.5μg的溶液。
1.3.2样品前处理
精密量取2ml试样置50ml量瓶中，加乙腈40ml,超声处理15min,冷至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀备用。
吸取1ml上述溶液用50%乙腈稀释制50ml，摇匀
备用。
微孔滤膜（0.22μm）过滤上机。
2实验结果
2.1质谱条件的优化
根据待测物的化学结构，对待测物进行质谱参数优化。
先优化电压，使母离子的影响最大，再产生子离子，通过优化碰撞能量使子离子的响应最大，得到MRM离子对及质谱采集参数。
多反应监测（MRM）质谱采集参数
名称
母离子
（m/z）
子离子
（m/z）
Frag(V
)
碰撞能量
Collision
Energy
西地那非475.2
100.1/5
8.1
58.1定
量离子
190
30
50
2.2色谱条件的优化
按照流动相比例甲醇+乙酸铵(0.1%乙酸)=35+65，分离效果好，理论塔板数满足要求。
通过实验发现，在流动相中添加0.1%乙酸，可以减少峰拖尾，优化色谱峰型。
标准品多重反应监测（MRM）总离子流图
2.3样品提取条件的优化
2.3.1本实验中，用乙腈作提取溶剂，超声15min,，回收率高。
2.3.2对于食品的非法添加药物监测，质谱法监测灵敏度高，高浓度对于待
测物应将提取液进行稀释后检测。
2.4线性方程、线性关系及检出限
在选择的LC-MS条件下，采用选择的定量离子，选择一系列不同浓度的西地
那非，在1ng/ml-800ng/ml范围内呈线性良好。
线性方程y=546.2x-162.66。
相
关系数0.9997。
以信号噪声比（S/N=3），计算出西地那非的检出限0.2μg /kg。
2.5系统适应性
2.5.1方法精密度：在仪器最佳实验条件下，连续进行5次0.5μg/ml标液，结果表明重现性好， RSD为2.1%。
2.5.2分别称取样品3份，加入标准品，按照分析步骤进行操作。
根据峰面
积带入标准曲线并按照计算公式计算得（对照品+样品）测定值。
进行回收率计算，结果表明回收率在97.2-105.4%。
2.6一级质谱定性分析
按照LC-MS质谱条件测定标准溶液和待测物质样液，在标准品出峰时间选择
合适峰半峰宽积分，看是否存在与保准溶液出峰时间一致的定性离子，且定性离
子的相对丰度与标准溶液的相对丰度一致，才可判断样品中是否存在对应的待测
目标物。
2.7样品含量的测定
按照1.3.2样品前处理方法对10保健酒进行检测，采用比较供试品与对照
品的色谱图、质谱图的方法进行定性分析，确定供试品中添加的化学成分。
结果
中有2批检测出非法添加西地那非。
3结论
目前市场中部分保健酒及其他保健食品中存在添加西地那非的现象，建立一
种简单、快速、灵敏、准确地鉴定保健酒中是否添加西地那非的高效液相色谱串
联质谱的分析方法。
本方法在ESI正离子采集模式下,采用LC/MS的多反应监测(MRM)对西地那非进行定量监测,采用外标法定量满足分析要求。
实验结果表明，样品中杂质对西地那非无干扰，峰形良好，结果准确，灵敏度高。
该方法对将强质量管理，建立准确有效的违禁药物检测技术，保障身体健康都具有重要意义。
参考文献：
[1]康军，刘爱宁“补肾、壮阳”类中成药中违法成分枸橼酸西地那非的检测实用药物与临床，2006,9（3）：178
[2] 国家食品药品监督管理局药品检验补充检验方法和检验项目批准件批准件编号 2009030
[3]庞小峰，吕华冲，张怡红，等中成药及中药保健品中添加西地那非的快速检测方法中国医院药学杂质，2008,28（8）：673-674。