影响细胞ELISA结果的主要因素

文章编号： （9118） 8111L6<1< 1:L13:8L19
经验交流
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李蓉芬， 陈 敏， 康运生， 钟小林， 何凤田
（第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室， 重庆 <111;3） 温） ， 1 2 964 的戊二醛较 <4 的多聚甲醛的固定效果好。
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细胞内源性过氧化物酶的检测和去除
对固定过的细胞， 直接加入邻苯二胺 （/C[） 底物显色， 观察 内源性过氧化物酶的情况。对内源性过氧化物酶水平很低的 细胞无需进行内源性过氧化物酶的处理， 而对内源性过氧化物 酶水平较高的细胞则需用甲醇配制的 1 2 ;4 双氧水于室温下作 用 ;1 .$- 予以去除。
作者简介： 李蓉芬 （8?7; @ ） ， 女， 安徽省宿州市人， 硕士， 实验师， 主要从事蛋 白酶体的结构与功能方面的研究， 发表论文 3 篇。电 话： （ 19; ） 73:69978 万方数据 收稿日期： 修回日期： 9111L89L16； 9118L19L83
我们使用 C=0 配制的 814 小牛血清、 94 牛血清白蛋白、 结 64 绵羊血清、 64 市售脱脂奶粉等几种不同试剂进行封闭， 果以 64 脱脂奶粉的封闭效果最好。
参考文献：
［!］ -2345 . 6，7489: 7 1，;2<=> ? @， !" #$ " .:A4B9C4=> A9 :=DE9B32>A9F2 ［ L］ G=33> 4: E5=DF2A94C 2EA5E4A4>： 2 H9A=:A423 F2EI=E J9E :=DE9H2A5K " M34: *8H （!） ： (###， !N (O ’ O# " /5=DF2A93， ［(］ +4D P，QDE39 @，R9:SQE2J=:>A=4: T" M=33S*+,-. D>4:U B=A2SU232GA9>4C2>= ［ L］ （! ’ (） ： G9:VDU2A=C 2:A4B9C4=> " L ,FFD:93 6=A59C>， (###， (O) !&O ’ !0W " ［O］ +== L M，M=R2339> . 6，72==F .，!" #$ " ;=A=GA49: 9J 2:A4SG939: 2:A4B9C4=> ［ L］ 4: 4:J32FF2A9EK B9<=3 C4>=2>= D>4:U 5DF2: GD3ADE=C G939:4G G=33> " QDA， （(） ： !XXX， )) !X0 ’ (#( "
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应设多孔重复
尽管采取了上述措施， 但有时无法确保每孔的细胞数完全 一致， 也不能保证细胞 !##$ 均匀铺于孔底， 故无论是对照孔， 还是实验孔， 都应设 ) % & 个复孔， 取其结果平均值， 从而最大 限度消除系统误差。 影响因素较多， 综上所述， 细胞 *+,-. 与常规 *+,-. 相比， 操作过程中应多加注意。 关键词：细胞； 酶联免疫吸附试验； 影响因素 万方数据 文献标识码：1 中图法分类号：/))0 " 0!
3.学位论文 荆结线 卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞的测定以及与细胞因子关系的研究 2007
目的：探讨卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞在CD4+T细胞的分布，分析CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与卵巢癌患者临床病理学特征的关系；研究 CD4+CD25+调节性T细胞与Th1、Th2类细胞因子、CD44、CA199、CA125的相关性。 方法：流式细胞仪测定53例卵巢癌患者、44例卵巢良性疾患、45例健康人外周血CD4+CD25+调节性T细胞、CD44的比例；Th1类细胞因子白介素-2(IL-2)、 γ-干扰素(INF-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)；Th2类细胞因子白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)的水平；采用酶联免疫吸附试验 (ELISA)法检测卵巢癌患者血清中的CA199、CA125的水平。 结果：(一)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(21.95±6.80)％、CD44的比例(128.45±34.72)％明显高于卵巢良性疾患(12.57±5.12)％、 (83.75±19.49)％和健康对照组(10.77±3.02)％、(79.92±21.83)％，(均P<0.001)良性疾患与健康对照组无差异；手术前的卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细 胞(21.95±6.80)％、CD44比例(128.45±34.72)％明显高于手术后的患者(16.41±5.84)％、(103.41±37.25)％，(均P<0.001)。 (二)：CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与患者的年龄、职业没有关系；卵巢浆液性腺癌CD4+CD25+调节性T细胞为(23.58±7.08)％，明显高于混合性 (18.30±5.46)％，有统计学意义(P<0.05)；与黏液性腺癌(22.06±6.08)％无差异；Ⅳ期卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞比值(28.79±4.26)％、CD44比值 (157.24±33.57)％明显高于Ⅲ期(20.01±6.27)％、(124.31±29.46)％和Ⅰ-Ⅱ期患者(17.97±4.50)％、(116.08±30.93)％，(均P<0.001)；Ⅲ期与Ⅰ-Ⅱ期 之间无差异；CD4+CD25+调节性T细胞、CD44与肿瘤的浸润(23.61±6.52)％、(143.38+35.11)％；淋巴结转移(24.05±6.74)％、(146.32±35.87)％；腹水的形 成(24.06±6.73)％、(146.52±35.86)％有关，(P<0.05～P<0.001)；低分化的卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞(25.05±5.96)％、CD44(152.50±32.49)％与 高分化患者(16.03±0.80)％、(105.95±15.43)％比较，有统计学意义，(P<0.05)，而与中分化(21.82±6.53)％、(126.26±36.00)％比较无差异。 (三)：卵巢癌患者Th1类细胞因子IL-2、TNF-a、IFN-r的水平(0.87±0.25)pg/ml、(1.09±0.34)pg/ml、(7.56±2.25)pg/ml明显低于健康对照 (2.38±1.09)pg/ml、(3.28±1.36)pg/ml、(19.04±4.59)pg/ml，(均P>0.001)。而Th2类细胞因子IL-6的水平(86.28±55.92)pg/ml与对照组 (5.04±2.69)pg/ml比较显著升高，(P<0.001)，IL-4(4.86±2.94)pg/ml、IL-10(1.07±2.30)pg/ml与健康人(5.62±3.59)pg/ml、(4.46±2.31)pg/ml之间无差 异。通过nonparametric相关分析，卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与IL-2、TNF-a、IFN-r存在负相关，相关系数分别为r=-0.658，P<0.05：r=0.591，P<0.05;r=-0.695，P<0.05。与Th2类细胞因子IL-6存在正相关，相关系数r=0.784，P<0.001。 (四)：卵巢癌患者CD4+CD25+调节性T细胞与CD44、CA125之间存在着正相关，分别r=0.406，P<0.05； r=0.563，P<0.001；而与CA199之间没有相关性 ，r=0.036，P>0.05。 结论：(一)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞、Th2类细胞因子增高、Th1类细胞因子降低，这可能是卵巢癌患者免疫功能下降的一个重要原因。 (二)：CD4+CD25+调节性T细胞、CD44比例与肿瘤的分期、组织学类型、分化程度、浸润、淋巴结转移、腹水的形成有关。 (三)：卵巢癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞与Th1类细胞因子之间存在着负相关，而与Th2类细胞因子之间存在正相关。CD4+CD25+调节性T细胞可能通 过Th1、Th2类细胞因子的调节发挥对效应性T细胞的抑制作用。 (四)：同步检测卵巢癌患者血清CA125及细胞黏附因子CD44以及与卵巢癌和细胞免疫功能有关的细胞因子水平，这不仅从肿瘤细胞产生癌蛋白水平上可以判 断肿瘤的恶性程度及发展特征，还可以从机体的免疫状态上了解肿瘤的发展状况。对疾病的控制，治疗方案的制定有重要的意义。
相似文献(10条) 1.期刊论文 朱晴晖 细胞-酶联免疫吸附试验及其应用 -检验医学2006,21(z1)
酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)问世数十年来,广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体.在传统的ELISA中,微孔板 上包被的是可溶性的抗体或抗原,然而在免疫学研究和临床检测时,需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类,亦需测定抗某种细 胞的抗体或评价某种细胞的功能,因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代,检测模式有所改变.1971年,Avrameas等[1]首次用酶标记抗体定量测定细胞 表面的免疫球蛋白,又经数年的发展,形成了以细胞包被酶标板测定细胞表面特定分子的细胞-ELISA.近年来细胞-ELISA衍生出多种模式(方法),并筛选出适合细 胞-ELISA的标记酶.目前已有多种成熟的细胞-ELISA的模式,并在检验医学中得到应用.