JYT024—1996高效液相色谱方法通则

8.2.4 进样 进样量应适宜检测器的线性范围，并能满足待测组分两相邻谱峰的分离度及其定性定量
重复性的要求。 8.3 定性分析
在相同的色谱条件下，分别测定标准物质(或对照物)和样品中待测组分谱峰的保留时 间，若样品中的全部组分已经确定且达到了完全的分离，组分的保留时间可作为定性的依据。 8.4 定量分析
≤±5×10－4AU ≤±5×10－3AU/h ≤±5×10－10g/ml
≥103
折射率检测器
≤±5×10－7RIU ≤±5×10－6RIU/h ≤±5×10－6g/ml
≥103
8.2 测定前准备 8.2.1 试料的制备：用流动相将试样稀释到适合色谱进样的浓度，试料溶液应不含有任何不 溶解的物质，必要时，可进行适当的过滤或超高速离心法除去其不溶物。 8.2.2 整机检查
×100%
(4)
式中 Xi——第i次测得的保留时间或峰值
X－——n次测得的保留时间或峰值的算术平均值
i——测量序列号 n——测量次数 9.4.2 准确度 准确度以回收率表示，回收率应在90～110(ω×102)范围内。 计算公式：
回收率＝ WR－W ×100%
(5)
Wi
式中 WR——组分i检出量
W——组分i原含量
仪器的主要性能及技术指标应符合JJG(教委)024—1996高效液相色谱仪计量检定规程 的技术要求。见表1。
7 样品
样品应能溶解于适当的溶剂中，试料溶液应能保持待测组分的稳定性。
8 分析步骤
8.1 开机 按仪器操作规程开机。根据样品的测定方法或特性选定色谱条件，逐步使仪器系统达到
平衡。
编号
1 2 3 4 5 6 7
(1)
式中 Xi——试料中待测组分i的含量
Ei——试料中标准组分i的含量
Ai——试料中待测组分i的峰值
AE——试料中标准组分i的峰值
9.3.2 内标法
Xi＝
Ms×Ai×Fsi M×As
×100
(2)
式中 Xi——样品中待测组分i的百分数 Ms——样品中内标物的加入质量 Ai——样品中待测组分i的峰值 Fsi——样品中待测组分i与内标物的相对校正因子 M——样品的质量
在一定的色谱条件下，组分最大浓度点的洗脱时间(柱保留时间)是一定的，可作为色谱 法组分定性的依据，而组分的洗脱浓度即正比于色谱峰的峰高或峰面积，这是色谱法定量分 析的依据。
5 试剂和材料
5.1 色谱柱(固定相) 待测组分与相邻组分之间的色谱分离度(R)应不小于1.0。
5.2 流动相(洗脱液) 5.2.1 有机溶剂： 高效液相色谱(HPLC)纯试剂，或在满足样品测定的条件下，用其它等 级的试剂。使用前应通过0.5μm的滤膜过滤和脱除溶解的气体。 5.2.2 水：高效液相色谱(HPLC)纯水，或实验室自制并预先经过吸附法除去痕量有机杂质 的脱离子高纯水，使用前应经过0.45μm的滤膜过滤和脱除溶解的气体。 5.2.3 无机试剂：无机酸、碱、盐为分析纯试剂；离子对试剂为HPLC纯专用试剂。 5.3 标准样品 5.3.1 标准物质：经国家或部门许可生产的标准物质或标准溶液。 5.3.2 标准溶液：可以直接使用标准物质部门提供的标准浓度的溶液，或按需要稀释成适用 于校正浓度的标准储备液。
对同一组分，在相同的色谱条件下和线性范围内，可用外标法、内标法或叠加法进行定 量测定。 8.4.1 外标法：在相同的色谱条件下，分别测定和比较标准物质和样品待测组分的峰值。计 算试料中待测组分的含量。采用外标法，必须满足下列条件：
a)用称量法(准确至0.01mg)配制外标溶液，其组分浓度应接近试料中待测组分的含量； b)进样量应相同，且在检测器的线性范围内重复测定。 8.4.2 内标法：在已知量的样品中加入定量的标准物质，测定和比较试料中待测组分和内标 物的峰值。用相对校正因子求出样品中待测组分的百分数，采用内标法定量，必须满足下列 条件： a)内标物在样品的全处理过程中应能保持化学稳定性。其浓度应接近待测组分的含量。 b)内标物和样品中的所有组分应能完全分离。 c)进样量应在检测器的线性范围内。 8.4.3 叠加法：在相同的色谱条件下，测定试料中待测组分及其相邻组分的峰值，然后加入 一定量的待测组分于该试料中，再次测定上述两组分的峰值，用外标法计算试料中待测组分 的百分数。采用叠加法，必须满足下列条件： a)不适宜用外标法或内标法测定微量的组分。 b)进样量应在检测器的线性范围内重复测定。 8.5 测定后的检查 样品测定后，应再次测定溶剂空白，以确证色谱柱在每次进样前均已达到平衡。否则， 应再次测定标准样品的峰值，其偏差应在分析误差的允许范围内。
MV_RR_CNJ_0024 高效液相色谱方法通则
1. 高效液相色谱方法通则的说明
编号 名称
归口单位 起草单位 主要起草人 批准日期 实施日期 替代规程号 适用范围
主要技术要求
是否分级 检定周期(年) 附录数目 出版单位 检定用标准物质
JY/T 024—1996
(中文) 高效液相色谱方法通则
(英文) General rules for high performance liquid chromatography
仪器稳定后，检查仪器的基线噪声和基线漂移，以及色谱柱的主要性能，即柱的理论板 数(n)、两相邻谱峰的分离度(R)和色谱峰拖尾因子(T)即谱峰的不对称性(见附录A)，均应达 到分析方法规定的要求。 8.2.3 溶剂空白
在样品测定的相同色谱条件下，测定溶剂色谱峰，溶剂峰对待测组分的分离不应产生干 扰，并应在样品的测定过程中将其剔除。
Wi——组分i加入量
注: 需要查阅全文, 请与出版发行单位联系.
6 仪器
6.1 仪器组成 仪器主要组成见图1。
输液系统
进样系统
色谱柱系统
检测器
储液器
打印绘图机
图1 仪器组成框图
色谱工作站 (或记录仪)
6.1.1 储液器：储存流动相的容器应耐流动相的化学腐蚀、方便脱除溶解于液体的气体。 6.1.2 输液系统：输液泵及其控制系统应包括流动相组成及流量梯度的程序控制部分。接触 液体的泵体材料应耐化学腐蚀、泵流量稳定无脉冲，且有足够的精度和重复性。 6.1.3 进样系统：样品引入到色谱柱系统的装置，样品管应为可更换的定体积管。 6.1.4 色谱柱系统：包括保护(预)柱、色谱柱和柱恒温箱，并有足够的恒温精度。 6.1.5 检测器：通用的有紫外-可见光、荧光及折射率检测器。 6.1.6 色谱工作站(或记录仪)：控制色谱仪的整机操作、采集和处理色谱数据的微型计算机 系统，或为积分仪或简单的记录仪。 6.1.7 打印绘图机：打印分析数据和绘制色谱图的打印机和绘图机。 6.2 仪器性能
A′i——试样中加入(或第二次加入)待测组分i的Mi质量后，组分i的峰值 Aj——试样中未加(或第一次加入)待测组分i前，相邻组分j的峰值
9.4 方法误差
9.4.1 重复性(定性或定量)
同一样品应连续测定8次，计算其相对标准偏差(RSD)。
计算公式：
n
RAS＝∑ i =1
(Xi－X－
)2/
(n－1)×―-X1
1 科学技术文献出版社
相关技术文件 备注
2. 高效液相色谱方法通则的摘要
本通则规定了用高效液相色谱仪测定有机化合物的一般方法，适用于具有紫外—可见 光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱仪器。
3 定义
本通则等同采用GB 9008—1988 中有关液相色谱法术语部分的定义。
4 方法原理
高效液相色谱是一种以液体作流动相和固体微粒作固定相，待测组分在柱内的两相之间 进行高速分配和高效分离的柱液体色谱方法。样品溶液中的各组分，因其物理化学性质的微 小差异，当其随流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之间产生不同的相互作用力，从而导致 柱上迁移速率的微小差异。随着流动相的连续推移，这种微小的差异被不断扩大，直至出现 明显不同的迁移速率，使最终达到组分完全分离。分离后的组分在柱的出口处依次通过色谱 检测器、检测其洗脱浓度随时间变化的输出电信号。这种电信号经放大后，可由记录仪直接 记录为组分的色谱峰，或再经模拟数字转换器将色谱峰数据变换成计算机语言，为色谱工作 站所采集和存储，然后按色谱分析的要求对各组分的色谱峰进行任选处理。
As——内标物的峰值
9.3.3 叠加法
Xi＝
Mi×Ai×A′j M(A′i Aj－AiA′j )
×100
(3)
式中 Xi——待测组分i的质量 Ai——试料中未加(或第一次加入)待测组分i的峰值
A′j ——试料中加入(或第二次加入)待测组分i的Mi质量后，其相邻组分j的峰值 M——试料的质量
9 分析结果的表述
9.1 数据处理 利用色谱工作站或数据处理机处理色谱数据时，应根据其峰处理功能设定处理方法，对
同一样品的测定，处理方法应相同。 9.2 定量值的表示方法
根据测定方法的要求，可以用百分数(质量、体积克分子数)或体积质量数表示。 9.3 计算公式 9.3.1 外标法
Xi＝Ei×
Ai AE
国家教育委员会 国家教育委员会 马卿云 陈培榕 1997 年 1 月 22 日 1997 年 4 月 1 日 无
本通则规定了用高效液相色谱仪测定有机化合物的一般方法，适 用于具有紫外—可见光、荧光和示差折光率检测器的高效液相色谱仪 器。 1. 定义 2. 方法原理 3. 试剂和材料 4. 仪器 5. 样品 6. 分析步骤 7. 分析结果的表述 无
项目
基线噪声 基线漂移 最小检测浓度 线性范围 泵流量稳定性 定性重复性 定量重复性
表1 主要性能及技术指标
技术指标
紫外-可见光检测器 ≤±5×10－4AU ≤±5×10－3AU/h ≤±5×10－8g/ml ≥103 RSD≤±2ω×102 RSD≤1.5ω×102 RSD≤3ω×102
荧光检测器