实验操作指导书

实验室作业指导书

四川福仁缘农业开发有限公司

一、质量方针和质量目标

质量方针："科学严谨、公正准确、严肃认真、求新发展"。

质量目标：不断提高检测水平，确保公司质量目标的实现。

公正声明：

1、实验室不从事任何影响公正性地位的活动。

2、实验室工作人员严格遵守实验室有关规定，诚实地进行工作。

3、实验室的检验工作质量不受任何外权的影响。

4、实验室不进行自身技术能力范围外的任何检验工作。

二、化验室管理制度

1每次实验须进行培养的材料，应标明时间与组别，认真、及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则须记下每次观察的现象和结果，以便分析。

2、实验室内应保持整洁、安静。

3、实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，万一遇有盛菌试管或

瓶子不慎打破、皮肤损伤、或菌液吸入口中等意处情况时，应及时处理，切勿拖延。

4、使用酸碱时一定要按操作要求进行。

5、实验过程中，切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃物品接近火源。如遇火险，

应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火器。

6、使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材料和

物品等要力求节约，用完后放回原处。

7、每次实验完毕后，必须把所用仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦净案

面，如有菌液污染桌面或其他地方，可用百分之三来苏尔液或百分之五石炭酸液覆盖半小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具（如吸管、玻璃棒等）在洗涤前须浸泡在百分之三来苏尔液中进行消毒。

8、禁止使用化验室内任何器皿盛装食品。

9、禁止在化验室内吃东西和吸烟。

10、遵守用电规章。

11、每日工作前后应认真检查水、电、煤气、门窗等的安全。

12、做检验记录，认真填写检验结果报告，对检验工作中发现的问题，及时

向有关领导或负责人汇报，以便指导生产。

三、化验室职责

1、做灭菌效果检验记录，协助生产制订一套合理的消毒灭菌方案，确保生产

卫生。

2、对采购原料、辅料进行验收，确保不合格的产品不投入使用或生产加工。

3、做好水质余氯、水质微生物的检测，以免不洁净的水污染食品。

4、对生产所用的工器具、案面、工人所用的围裙、套袖、生产车间的空气、

更衣室的空气、内包装物进行严格的检测，以免这些表面对产品造成污染。

5、每天对成品和半成品进行严格的检测，做好检验记录，认真填写检验结果

报告，对检验工作中发现铁问题及时向有关领导或负责人汇报，以便指导生产。

6、负责检验、检测、实验设备的校准，维护和控制，严格控制、保证各项测

试数据的正确、可靠、可信。

7、贯彻国家、企业、待业标准，提高产品的技术检测水平。

8、接受上级部门的业务指导和培训，提高产品的技术检测水平。

9、整理保存化验室的各种检测记录，保证其完整性、正确性及可追溯性。

10、协助经理对各部门进行质量审核并验证其整改效果。

四、检验项目及方法

检验项目包括：

理化检验：pH值、可溶性固形物，总酸；

微生物检验：菌落总数，大肠菌群。

1、pH值的测定

⑴仪器：pH计

⑵使用方法：

使用时，先打开开关，将仪器预热半小时。调节温度旋钮，我们一般调到25摄氏度。（我们配置的标定液的pH值分别为6.86和4.00。）仪器校正：打开电极套管，用蒸馏水洗涤电极头部，用吸水纸仔细将电极头部吸干，将复合电极放入pH值为6.86的标准缓冲溶液，使溶液淹没电极头部的玻璃球，轻轻摇匀，待读数稳定后，调定位旋钮，使显示值为该溶液25oC时标准PH值6.86。

将电极取出，洗净、吸干，放入pH值为4.00的标准缓冲溶液中，摇匀，待读数稳定后，调节斜率旋钮，使显示值为该溶液25oC时标准PH值4.00。

校正过程结束后，进入测量状态。将复合电极放入盛有待测溶液的烧杯中，轻轻摇匀，待读数稳定后，记录读数。

完成测试后，移走溶液，用蒸馏水冲洗电极，吸干，套上套管，关闭电源，结束实验。

2、可溶性固形物的测定

⑴仪器：糖度仪（折光仪）

仪器校正：滴2滴纯净水于糖度仪的玻璃镜片上，观察刻度线是否在0刻度线上。可用微旋螺丝调零。

⑵测定方法：打开盖板，用软布仔细擦净检测棱镜，取待测溶液数滴，

置于检测棱镜上，轻轻合上盖板，避免气泡产生，使溶液遍布棱镜表面。将仪器进光板对准光源或明亮处，眼睛通过目镜观察视场，转动目镜调节手轮，将视场的黑白分界线清晰，分界线的刻度值即为测试溶液的浓度。

3、总酸的测定

⑴仪器：酸度计（附磁力搅拌器）

仪器校正：将酸度计预热30min后，调温度为25℃，用pH6.86的标准缓冲溶液定位，用pH4.00的标准缓冲溶液调斜率。

⑵测定方法：

取本品5ml于烧杯中，加入适量蒸馏水，再加酚酞指示剂2滴。将烧杯置于磁力搅拌器上，电极插入烧杯内试样中适当位置。开动电磁搅拌器，用0.1mol/L氢氧化钠慢慢中和试样中的柠檬酸，至酸度计指示pH8.2记录消耗

0.1mol/L氢氧化钠标准溶液的毫升数。平行试验两次，同时做空白试验。

⑶结果计算：

按下列公式计算总酸的的含量

(V1－V0)×K

X = ————————×100

m

式中：X ——果汁中总酸的含量，g/100ml

V1 ——样品滴定耗用氢氧化钠标准溶液的体积，ml

V0 ——空白试验耗用氢氧化钠标准溶液的体积，ml

C ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L

m ——样品的质量，ml

K ——换算果汁中适当酸的系数：柠檬酸0.064

4、菌落总数的检测

⑴检样稀释及培养

a、用1mL灭菌吸管吸取1mL待测液，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不是触及管内稀释液），振摇试管混合均匀，制成1:10的稀释液。

b、另取1mL灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。

c、根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移取1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。我们选取原液以及稀释10倍和100倍三个浓度值进行检测。

d、稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46±1℃水浴保温）注入平皿约15mL，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。

e、待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出，计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。

⑵菌落计数方法

作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。

5、大肠菌群的检测

⑴准备工作：

1、乳糖胆盐发酵管9支（3支双料，6支单料）

2、生理盐水管2支

3、 10ml移液管1支、1ml移液管2支

4、伊红美蓝营养琼脂150ml

5、培养皿9个

6、乳糖发酵管9支

上述器具及试剂杀菌处理后备用。

⑵操作步骤：

1、吸取10ml水样于发酵管中，接种三管；

2、吸取1ml水样于发酵管中，接种三管，同时取1ml水样于9ml生理盐水试管中，形成1:10稀释度；

3、 1:10稀释液1ml于发酵管中，接种三管；

完成以上操作后，置于36±1℃恒温箱内，培养24±2h。如所乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性；如有产气者，按如下步骤进行。

⑶分离培养

产气发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养18h～24h，然后取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实实验。

⑷证实实验

在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1个～2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置36±1℃培养箱内培养24±2h，观察产气情况，凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。

革兰氏染色

结晶紫染色液

结晶紫 1g

95%乙醇 20ml

1%草酸铵水溶液 80ml

将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。

革兰氏碘液

碘 1g

碘化钾 2g

蒸馏水 300ml

将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300ml。

沙黄复染液

沙黄 0.25g

95%乙醇 10ml

蒸馏水 90ml

将沙黄（番红花红），溶解于乙醇中，然后用蒸馏水水稀释。

染色法

涂片：取干净的载玻片，加1滴蒸馏水，挑取少许菌于载玻片上，均匀，干燥。

1、将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液1min，水洗。

2、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗。

3、滴加95%乙醇脱色，约30s；或将乙醇滴满整个涂片，立即倾去，再

用乙醇滴满整个涂片，脱色10s。

4、水洗，滴加复染液，复染1min，水洗，待干, 镜检。

结果，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

五、实验室相关操作要求及注意事项

（一）无菌室操作程序及要求

1、接种检样前要做以下准备工作：

1）将台面、地面消毒（千分之三的来苏尔），再清洁。

2）将所有要用的灭菌玻璃器皿、灭菌培养基等摆放好。

3）要备好酒精灯、酒精棉球（75%、95%）、定量吸球等。

4）准备完毕打开紫外线灯，消毒30分钟。

2、带检样进入无菌室，换鞋、更衣、戴帽。进入后不可随便进出。手用

75%酒精消毒后再进行样品的称量、均质、操作等操作。

接种时要用吸耳球吸样，不可用口直接吸。

若无均质器则用灭菌剪刀（擦拭95%酒精后通过灼烧消毒）最大可能的将样品剪碎。

做样时在旁边要放有一条沾有消毒水的毛巾，当样液不当心溅出时可以即时擦拭。

做样时要把标识清楚：测样的编号、稀释倍数，以免发生化验室事故。

工作完毕后对台面、地面进行消毒（千分之三来苏尔），再清洁。打扫完毕后打开紫外线灯灭菌30分钟。

（二）化验室洗涮消毒灭菌操作要求

1、没用过的玻璃器皿有清洗后要用弱酸浸泡30分钟，再用洗洁精清洗干净。

2、玻璃器皿洗干净时在表面既无应有水珠滴下，也不应该有水流流下，而应

是形成一层透明水膜。

3、用过的所有带菌的工器具能灭菌的都应放入菌锅中121℃30分钟灭菌后再

清洗干净。不能高压灭菌的应先用500PPM的次氯酸钠浸泡4小时后再清洗干净。

4、洗净后的玻璃器皿用牛皮纸所好后放入干燥灭菌箱中160℃2小时灭菌备用。

5、培养基灭菌应注意含糖的培养基与不含糖的培养基不能一同灭菌，含糖的培养基115℃20分钟灭菌，不含糖的培养基121℃15-20分钟灭菌。

6、有些培养基不能高温灭菌，只能煮沸灭菌，有些培养基成份不能加热，要在50-60℃时加入，一定要注意。

7、高压灭菌锅在使用前要先加水，水位达到三个小支架处即可，使用时要先排汽，当热汽平行排出时才可关闭排汽阀进行灭菌，灭菌完毕后，要等压力达到0时，打开排汽阀排汽后开锅。

（三）检验记录的填写的要求

1、要认真正确的填写各种表格。

2、表格的使用格式要与检验方法相吻合，如水质、表面样品的检验等不能使用成品检验的表格。

3、每项检验都应有原始检验记录，且应保存在实验室，向厂内有关部门报告时，可用检验报告单。

一个项目检验数个样品时，在报告单上可列出最低数和最高数。向检验检疫部门提供结果报告时同样。

报告单要表述准确，报告单与原始记录的检验结果应一致。

4、要有取样记录，对样品编号要有描述。

5、记录不能有过多涂改，检验人、审核人要签字。

（四）检验注意事项

1、培养基要配制要严格按照要求配制。

2、显微镜的使用：观察前可先将被检物用革兰氏染色法染色，干燥后在玻璃片上滴一滴香柏油，用油镜观察，使用要先用擦镜纸擦掉香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦净，并随即用干净的擦镜纸擦去残留的二甲苯。

3、高压灭菌锅的使用一定要按要求操作，以免灭菌不充分，或损坏设备，或发生危险事故。

4、当有可疑菌落需进一步验证时，操作一定要心，操作完毕后要反复洗手，用50PPM的消毒液擦拭案面、地面，半小时后再用清水擦洗干净，在操作过程中不要用手动头、脸等地方，以免致病菌散播。

5不能在化验室吃东西，以免被致病菌侵入。

（五）不合格产品的控制

对检测出的不合格产品化验室应协同有关部门（不合格品发生的车间和部门）进行评价和处理，对未分析原因、查清责任并提出纠正措施的不合格产品均不得随便处置。

如发现不合格产品，首先应查找原因，然后根据不同情况制定不同的纠正措施。不合格产品含各个环节出现的不合格品。

对不合格品采取的控制步骤为：判定—记录—标识—隔离—处理

不合格产品的处置方法有：返工、拒收、长期冷冻、改做他用、销毁

1、进行返工，以达到规定的质量要求。

2、对原料拒绝接受。

3、对于细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌略有超标的产品冷冻六个月以上，

使其符合要求。

4、对于细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌超标严重，以及检出其他致病菌

的产品则要销毁。

造成产品不合格的原因及处理措施：

1、产品原料本身所带有的，拒收原料。

2、辅料不合格，拒收辅料。

3、车间密封不好，密封好车间。

4、表面样品消毒不彻底，如因消毒时间不够的要加长消毒时间，如因气

温升高，则要降温的同时缩短消毒间隔时间。

5、工人入厕后消毒不彻底，则要加强工人的卫生观念和卫生班的监督力

度。

6、污染产品则要对水进行处理或更换水源。

六、安全操作规程

（一）防火：

1、平时要注意偶然着火的可能性，应备有灭火器。

2、对易燃、易暴、自燃、强氧化剂等类药品，一定要妥善保存。

3、开启易挥发性药品时，不要将瓶口对着自己或他人，在夏天气温较高时，

开启前应事先设法冷却。

4、身上或手上粘有易燃物或氧化剂液漏时，不得靠近火源，要立即清洗干

净。

5、使用易挥发可燃性试剂时，要尽量防止其挥发，要保持室内通风良好，

绝对不可靠近明火。

6、要定期检查电器设备，电源线路是否正常，要遵守安全用电规程，防止

用电火花、短路、超负荷引起线路着火。

7、室内严禁吸烟。

8、严禁氧化剂、可燃物一起研磨。在工作中不要使用不知其成份的物质。

9、避免浓硫酸与松节油、乙醇等相遇，以防止引起易燃。

（二）灭火：

1、发现起火，要立即切断电源，扑灭着火源，移走可燃物。

2、针对着火源的性质，采取相应的灭火措施：

（1）普通可燃物，如、纸、木等着火时，可用沙子、湿布、石棉布等灭火。

（2）衣服着火时，应立即离开化验室，也可用厚衣物、湿布包裹压灭或躺到滚灭，或用水浇灭。

（3）有机物在敞口容器中燃烧时，可用石棉布盖灭，但绝不能用水。

（4）有机溶剂洒在桌面、地面上遇火引燃时，可用石棉布、沙子泡沫灭火器或干粉灭火器等灭火，绝不能用水。

（5）电线或精密仪器着火时，应用四氯化碳灭火器灭火，不能用水和泡沫灭火器。

（三）防爆：

1、有些药品虽然单独存放或使用时比较稳定，但若与其它药品混合就会变

成易爆品，如高锰酸钾与硫酸、甘油或有机物；过硫酸铵与铝粉遇水；硝酸钾与醋酸钠；硝酸铵与锌粉遇少量水；苯、甲醇、乙醇、丙醇、乙醚与空气等等。因此，在工作中应尽量避免因以上药品混合而生产的爆炸物。

2、干燥爆炸性药品时，绝对禁止关闭烘箱门。

3、在测定瓶装啤酒二氧化碳或对瓶装啤酒水浴加热时，要防止酒瓶爆炸，摇动或加热升温时不可面对酒瓶。加热酒温不能大于30度。

4、在蒸馏操作中，要保证蒸馏气（液）体畅通，以防止由于器皿内和大气间压力差逐渐加大，而产生爆炸。

·（四）防毒：

1、剧毒药品应由专人进行保管，使用者应严格执行领用登记手续。

2、毒性药品散落时，应立即全部收拾起来，并把落过毒物的桌子和地面洗净。

3、严禁试剂入口或以鼻子接近试剂瓶口鉴别试剂。若必须以鼻子鉴别试剂，应将试剂瓶远离鼻子，开盖后以手轻轻煽动，稍闻其味即可。

4、严禁食具和仪器互相代用。

5、有毒药品必须在固定位置通风柜使用，用后应仔细洗手和漱口。

（五）防伤：

1、取用腐蚀性药品，如、、硫酸、盐酸、冰醋酸等时，尽可能戴上橡皮手套。搬用较大瓶子时，必须一手托住底一手拿住瓶颈。

2、腐蚀性药品不得在烘箱内烘烤。

3、稀释硫酸时，必须在烧杯等耐热容器中进行，而且必须在玻璃棒不断搅拌下，仔细缓慢地将浓硫酸加入水中，而绝对不能将水加注到浓硫酸中。在溶解氢氧化钠等发热物时，也必须在耐热容器中进行。若需将浓酸和浓碱中和，则必须先稀释。

4、取下正在沸腾的水或溶液时，须先用烧杯夹子摇动后才能取下使用，以防使用时突然沸腾溅出伤人。