抗生素效价检测

抗生素效价测定

⒈准备工作

①干热灭菌（150-160℃干热灭菌2小时）：带盖培养皿，陶瓦盖（定期清洗灭菌），钢管，刻度吸管（25ml，10ml，1ml各一根）

②湿热灭菌（121℃蒸汽灭菌30分钟）：水，缓冲液，培养基（根据要求设置灭菌温度和时间）

③试验用菌悬液活化

④效价操作间紫外灯消毒30分钟后开通风，室温控制在20-25℃

⑤实验前检查酒精灯，打火机，酒精棉球，洗耳球，温度计，移液枪，枪头等

⒉对照溶液和样品溶液的制备

①一步用灭菌水稀释至1000μ/ml（即称样量=稀释浓度×1000/标识效价），黏菌素稀释至10000μ/ml（即称样量=稀释浓度×10000/标识效价），称样量必须大于等于理论值，根据实际称样量补水

②二步以后用灭菌缓冲液稀释，根据兽药典稀释到要求的浓度范围

⒊双碟的制备（一批需6个以上）

①底层：用25ml刻度管吸取20ml培养基注入双碟内，静置待其凝固

②菌层：待培养基温度降至实验菌适应范围（一般细菌48-50℃，芽孢可至60℃），加入适量菌悬液摇匀，用10ml刻度管吸取带菌培养基5ml，使均匀分布在底层培养基上（一边放带菌培养基一边在平面上摇晃培养皿）

③放置钢管，做好标记，静置

④滴加对照溶液和样品溶液，移液枪调至245μL，注意枪头不能挂壁

⑤滴加完毕后盖上陶瓦盖，移入培养箱，于35-37℃培养至所需时间

⒋抑菌圈的测量与计算

测量抑菌圈直径，根据公式P=log-1[(T2+T1-S2-S1)/ (T2+S2-T1-S1)×0.301]×100％计算