抗生素效价计算过程
效价与可信限率计算
估计效价 对数值 自由度 标准误差 ～ 0.8143 ～ 101790.9531
t= 2.1788 样品方差 输入：剂距 M= -0.1117 回归系数 R= 0.7732 PT= 96652.0743 R上下限 Pt上下限 FL%= 5.31%
检验人:
输入 可信限的显著性水平 复核人：
样 品 低浓度
实验日期： 高浓度 批 号：
dt2（H）
18.70 18.40 18.42 18.78 18.70 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
样 品
单位：mm
∑ym 72.02 71.10 70.80 72.98 输入各个双碟测量 73.12 所得的直径数据 0.00 （不用时输入 0.00 0） 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 360.02 不显著 非常显著 不显著 输入：估计效价值 或公式自动计算 At= ########## I= 0.3010 f= 12 Sm= 0.0106
96.20 P= 0.05 P= 0.01 P= 0.05 P= 0.01 输入： P= 0.01 双碟4.75
93.00 P>0.05 P<0.01 P>0.05
P<0.01 F= 5.95 输入：浓度比 P>0.01 F= 5.41 值或公式计算 K= 4 D= 1.0000 S2= 0.0183 g= 0.0051 0.7322 91529.3063 (P= 0.05 )
dt1（L）
16.54 16.60 16.28 16.98 17.20 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
∑yk
试品间 回 剂 碟 碟数 剂间比 t表 R的对数 对数比值 测定效价 PT的可信限率 归 间 间 偏离平行
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
抗生素效价计算过程
USP Cylinder-plate assay 美国药典 管碟法---（标准曲线法）1、 美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。
除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。
待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：图1：标准及样品管碟放置方式图例2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例： 下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：表2：抗生素效价检测测量结果表Replicate1Replicate2Replicate3Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；U1表示待测样品1。
2.1 进行初始计算：对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。
例如：15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值2.2 变异性的适用性检查：然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。
例如：标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *1002.3 进行平板间的差异校正：计算公式如下。
X C = X S– (X R– P)X C = 标准品平均值的校正值X S = 原始的标准品的平均值X R = 对照值的平均值P = 校正值例如：14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.1452.4 建立标准曲线：标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。
抗生素效价测定
项目２青霉素效价测定一、知识连接(一)抗生素效价表示方法效价就是评价抗生素效能得标准,也就是衡量抗生素活性成分含量得尺度。
效价一般指得就是生物活性得大小或者高低,生物活性得大小与高低就是与效价成正比得。
实际应用中,合理使用抗生素得剂量十分重要。
抗生素应用时剂量小,因此除重量外,常用特定得效价单位(unit)表示,效价单位也称抗菌活性单位。
最初,由于抗生素无法制得纯品,用其生物活性得大小来表示其剂量、一个青霉素得效价单位(Ｕ):能在5０mL肉汤培养基中完全抑制金黄色葡萄球菌标准菌株得发育得最小青霉素剂量。
一个链霉素效价单位(U):能在1mＬ肉汤培养基中完全抑制大肠杆菌(ATCC9６3７)发育得最小剂量。
重量单位(μg):以抗生素得有效成分(生理活性成分)得重量作为抗生素得基准单位(大多数使用)。
(二)抗生素效价测定抗生素微生物检定法可分为稀释法、比浊法与琼脂扩散法(管碟法与打孔法)。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素得效价。
管碟法就是利用抗生素在琼脂培养基得扩散渗透作用,在含有高度敏感性试验菌得琼脂平板上放置小钢管(内径6、0±0。
l mm,外径8、0±０。
l mm,高1０±０.lmm),管内放入标准品与检品得溶液,经16～1８小时恒温培养,当抗生素在菌层培养基中扩散时,会形成抗生素浓度由高到低得自然梯度,即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此,当抗生素浓度达到或高于MIC(最低抑制浓度)时,试验菌就被抑制而不能繁殖,从而呈现透明得无菌生长得区域,常呈圆形,称为抑菌圈。
抑菌圈得大小代表药剂抗菌力得高低。
在一定得药剂浓度范围内,药剂得浓度越高则抑菌圈得直径越大。
目前最常用得就是游标卡尺与直尺直接测量抑菌圈直径、根据扩散定律得推导,抗生素总量得对数值与抑菌圈直径得平方成线性关系,即通过检测抗生素对微生物得抑制作用,比较标准品与供试品产生抑菌圈得大小,计算出供试品得效价。
管碟法得基本操作与设计适用于各种抗生素,试验结果较稳定;样品用量少,灵敏度高;适合于大批样品得测定。
抗生素的生物效价测定法(管碟法)
抗生素的生物效价测定法(管碟法)work Information Technology Company.2020YEAR抗生素的生物效价测定法测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。
这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。
所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。
由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法原理及操作大致与稀释法相同。
比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。
这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。
这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。
经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。
抗生素效价
用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml 及0.7u/ml。
链霉素的效价测定抗生素微生物检定法本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。
第一法管碟法本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液取枯草芽孢杆菌［CMCC（B）63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。
用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液取藤黄微球菌［CMCC（B）28001］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在26～27℃培养24小时，或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
大肠杆菌（Escherichia coli）悬液取大肠杆菌［CMCC（B）44103］的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。
效价计算
样 品 低浓度
实验日期： 高浓度 批 号：
dt2（H）
18.70 18.40 18.42 18.78 18.70 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
样 品
单位：mm
∑ym 72.02 71.10 70.80 72.98 输入各个双碟测量 73.12 所得的直径数据 0.00 （不用时输入 0.00 0） 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 360.02 不显著 非常显著 不显著 输入：估计效价值 或公式自动计算 At= ########## I= 0.3010 f= 12 Sm= 0.0106
96.20 P= 0.05 P= 0.01 P= 0.05 P= 0.01 输入： P= 0.01 双碟数 圈数 浓度比
83.60 F= 4.75 F= 9.33 F= 4.75
93.00 P>0.05 P<0.01 P>0.05
P<0.01 F= 5.95 输入：浓度比 P>0.01 F= 5.41 值或公式计算 K= 4 D= 1.0000 S2= 0.0183 g= 0.0051 0.7322 91529.3063 (P= 0.05 )
dt1（L）
16.54 16.60 16.28 16.98 17.20 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00
∑yk
试品间 回 剂 碟 碟数 剂间比 t表 R的对数 对数比值 测定效价 PT的可信限率 归 间 间 偏离平行
87.22 F1= 127.2917 F2= 924.5331 F3= 0.4828 F6= 350.7692 F7= 15.2748 m= 6 5 r= 2
管碟法测定抗生素效价详解
管碟法的操作步骤
预试验→试验准备→ 双碟底层的制备→
供试品、标准品溶液的制备→菌层的制备
→滴加抗生素溶液→双碟的培养→ 抑菌圈
的测量→结果的可靠性检验及效价测定
• 预试验：
确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、 使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑 菌圈的大小符合规定：高剂量浓度溶液所 致的抑菌圈直径在18～22mm。高剂量与 低剂量的抑菌圈直径之差最好不小于2mm。 高低剂量之比为2:1（如高、低剂量所致的 抑菌圈差别较小时，可用4:1的剂量比率）。
• 试验准备： 双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭 菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、 缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。
• 供试品、标准品溶液的制备： 估计供试品的效价，根据试验要求设计供 试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供 试品、标准品相关剂量的溶液。
1. 称量 称量前，将标准品从冰箱取出，使与温室平衡； 供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。供试品与标准品 应用同一天平；吸湿性较强的抗生素，在称量前1～2 ｈ更换 天平内干燥剂。标准品与供试品的称量最好一次取样称取， 不得将已取出的标准品或供试品倒回原容器内，标准品称量 不可少于 20mg，取样后立即将称量瓶及被称物盖好，以免吸 水。样品的称样量最好不少于50mg。
一、试验前准备
• 双碟的挑选
内径约90mm，硬质玻璃或 塑料培养平皿，水平透明， 无色斑气泡
• 物品的清洗、灭菌
培养皿、钢管、刻度吸管清 洗后160℃干热灭菌2小时或 121℃高压蒸汽灭菌30min， 放置室温备用；陶瓷瓦盖要 定期清洗干燥。
牛津杯的挑选
内径（6.0±0.1）mm，高 （10.0±0.1）mm，外径 （7.8±0.1）菌的来源：检定菌种由中监所所提 供的冷冻干燥品。 检定菌的传代和接种： 芽胞杆菌3～6个月（其他细菌每个月） 用普通琼脂斜面传代1次，将新传代的培养物 代替原有的菌种，作为工作用（阳性对照）菌 种。传代和接种在菌种接种室内按无菌操作要 求进行。
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USP Cylinder-plate assay 美国药典 管碟法---（标准曲线法）
1、美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：
首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。
除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。
待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：
图1：标准及样品管碟放置方式图例
2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例： 下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：
表2：抗生素效价检测测量结果表
Replicate1
Replicate2
Replicate3
Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1
备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；
Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个S i的直径值；
U1表示待测样品1。
2.1 进行初始计算：
对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。
例如：
15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值
14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值
2.2 变异性的适用性检查：
然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。
例如：
标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)
相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *100
2.3 进行平板间的差异校正：
计算公式如下。
X C = X S– (X R– P)
X C = 标准品平均值的校正值 X S = 原始的标准品的平均值 X R = 对照值的平均值 P = 校正值 例如：
14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.145 2.4 建立标准曲线：
标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc 和标准品浓度值的对数值构成。
（使用适宜的计算软件或手动计算）（注意----可以使用自然对数或底数为10的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果） 例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。
表3：标准曲线数据表
图4：线形回归结果
抗生素效价标准曲线
y = 3.5502x + 9.9794
R 2 = 0.9968
12
141618201
1.5
2
2.5
ln(C)
校正抑菌圈直径(m m )
标准曲线：Z = [3.5502* ln(C)] + 9.9794
Z=校正抑菌圈大小
C=浓度
R2 = 0.9968
2.5 待测样品效价：
估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值（三个平板的）。
用上面介绍的标准品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。
的对数值[注意---另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度S
3
在估计效价的回归线中进行校正]。
在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样品的含量对数值L U。
L U = (Z – a)/b
a = 回归线的截距
b =回归线的斜率
要得知待测样品的效价，取L U的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为参考值浓度的百分比。
例如：
待测样品校正值(表 2中) = 15.522
待测样品效价的ln值：L U = (15.522 – 9.978) / 3.5502= 1.562
待测样品效价值：C U = e1.562 = 4.765
待测样品效价与对照中间浓度的百分比为：(4.765/5.000) *100% = 95.3%。