抗生素效价测定操作规程
抗生素的效价测定方法
抗生素的效价测定方法一、引言抗生素是指能够抑制或杀灭某些细菌的化学物质，被广泛应用于临床医学和兽医学中。
为了保证抗生素的质量和安全性，需要对其效价进行测定。
本文将详细介绍抗生素效价测定的方法。
二、理论基础1. 抗生素效价抗生素效价是指单位体积或单位重量的抗生素所能杀灭或抑制的菌落数量。
通常使用最小抑菌浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC）来表示。
2. 测定原理抗生素效价测定是通过比较不同浓度的抗生素与一定数量的细菌接触后，确定其最小有效浓度来评估其功效。
通常使用微量稀释法、滤纸片扩散法、管式稀释法等方法进行测定。
三、实验步骤1. 实验前准备（1）准备所需试剂和设备：包括培养基、试管、移液管、显微镜等。
（2）选择适当的细菌株：选取适合该种类药物敏感性测试的细菌株，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
（3）制备细菌悬液：将选定的细菌株接种于含有适当营养成分的培养基中，培养至对数生长期，然后用生理盐水将其稀释到一定浓度。
2. 测定方法（1）微量稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
③ 观察并记录结果：观察每个试管内是否有细菌生长，记录最低有效（2）滤纸片扩散法① 准备不同浓度的抗生素滤纸片：将抗生素溶解于无菌蒸馏水中，然后在无菌平板上放置一张过滤纸片，在过滤纸片上滴入不同浓度的药物溶液。
② 在平板上接种细菌悬液：在已经凝固的无菌平板上均匀涂布一层细菌悬液。
③ 孵育并观察结果：将含有药物滤纸片的平板孵育，观察抑菌圈的大小，记录最小有效浓度。
（3）管式稀释法① 准备不同浓度的抗生素溶液：将抗生素溶解于含有适当营养成分的培养基中，制成不同浓度的药物溶液。
② 在试管中加入细菌悬液和药物溶液：取一系列标准试管，分别加入相同数量的细菌悬液和不同浓度的药物溶液，混匀后孵育。
抗生素效价操作规程
抗生素效价标准操作程序1、目的：建立一个抗生素效价的标准操作程序2、范围：抗生素效价的检测相关工作3、责任：生测组检验员4、内容：4.1 仪器用具与试药4.1.1 180℃干热灭菌2h：陶瓦盖20个；试管(30×200mm) 1支（依据菌液浓度方法而论）；镊子(23mm) 1把；100ml量筒1个（依据菌液浓度方法而论）；25ml量筒1个；锥形瓶1个；钢管80个；1ml吸管2根；大口5ml吸管2支；10ml移液管2根；碟子20个4.1.2 121℃高压湿热灭菌20分钟：抗生素Ⅰ号培养基；工服；pH7.8磷酸缓冲液约；无菌水；烂烧杯3个（盛放有菌试管）；一次性塑胶手套。
4.2操作步骤4.2.1对照品称量4.2.1.1从对照品管理人员处领取一支硫酸庆大霉素标准品（200mg），因标准品刚从冰箱取出，需放置室温平衡30分钟，然后拿到称量室，用已稳定(早点打开电源就能稳定)的万分之一天平称。
4.2.1.2取一张滤纸（1／4）称出重量，然后清零，按“F”键把“g”转化为“mg”,小心加对照品，直至39.2mg，可以多称一点，也许会粘纸。
把对照品轻轻倒入容量瓶，再复称一下称量纸，记录下来。
4.2.1.3称取量加无菌水在容量瓶颈部口径处冲洗，观察到对照品溶解后加无菌水至刻度，充分摇匀，放置在冰箱。
4.2.2 供试品称量4.2.2.1 准备一个干净50ml容量瓶，口径上附一个小漏斗（漏斗口径尽量挑选大一点的，可使供试品快速落到容量瓶）。
把上述装备放到已稳定的万分之一天平称出数据，然后清零。
从干燥器中取出供试品，倒入一部分到研钵中，顺时针快速研细颗粒，颗粒易吸潮，称取速度一定要快。
4.2.2.2从万分之一天平中取出已清零的（容量瓶+漏斗），用药匙挑取供试品到漏斗中，再轻轻振动漏斗，使供试品落到容量瓶，加到一定量，拿容量瓶+漏斗+供试品到天平称重，如已接近12.5g，就打开天平上面的玻璃门，从上面慢慢加样，直到12.5g。
抗生素效价测定操作规程
抗生素效价测定操作规程1. 主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准《中国药典》2010年版二部。
3. 术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）4.1 操作室：光线明亮，操作间分 a.一般操作间b 半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2 双蝶：内径90mm 高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4 钢管：内径 6.0±0.1mm 高7.8±0.1mm 或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h 以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min 或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW 冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用. 4.5 钢管放置器4.6 恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml 、20ml ），用后立即置5%石碳酸或QCA/QC-SOP-006山东良福制药有限公司起草人 日 期 抗生素效价测定操作规程审核人 日 期 批准人 日 期 第五版实施日期总页数共5页1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡,水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
实验三 抗生素效价的测定
实验三抗生素效价的生物测定一、实验目的1．熟悉抗生素效价测定的原理2．掌握培养基的配制、灭菌3、掌握接种技术二、实验原理抗生素的医疗价值决定于它的抗菌特性，因此利用它们各自的抗菌活性来测定其效价有着特殊的意义。
效价的测定法有：液体稀释法，比浊法和扩散法等。
本实验采用国际上最为常用的杯碟扩散法来定量测定洁霉素的效价。
测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含敏感菌的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入己知浓度的标准青霉素溶液和未知浓度的青霉素发酵液。
于是，抗生素就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈。
在一定的范围内，抗生素浓度的对数值与抑菌圈直径呈线性关系。
因此，只要将被测样品与标准样品抑菌圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价。
三、材料和器皿1 菌种：大肠杆菌（E.coli）。
2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加25％葡萄糖）。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g Nacl 5g 琼脂15-20g 1000ml 水pH 7.4-7.63试剂（1）l％pH6磷酸缓冲液：K2HPO4 0.2g（或K2HPO4·3H20 0.253g）KH2P040.8g，蒸馏水100ml。
（2）25% 葡萄糖溶液100ml。
（3）苄青霉素钠盐：1667U／mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。
4其他：牛津小杯（不锈钢小管，内径6土0.lmm，外径8土0.lmm，高10土0.1mm），培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5ml）、移液枪（1ml）、枪头、镊子、涂布棒等。
四、方法和步骤1标准曲线的测绘(1）倒底层培养基：取无菌培养皿5套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白陈底层琼脂培养基，置水平待凝，备用。
（2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到50℃左右时再加入25%葡萄糖液2ml和大肠杆菌菌液5ml(加入菌液的浓度应控制在使IU／ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20－24mm），充分混匀后，用移液管吸取4ml于底层平板上迅速铺平，然后移水平位置凝固。
抗生素效价测定实验报告
抗生素效价测定实验报告抗生素效价测定实验报告引言：抗生素是一类能够抑制或杀灭细菌生长的药物，广泛应用于医疗领域。
然而，由于抗生素的滥用和不当使用，导致了细菌的耐药性问题日益严重。
为了更好地控制抗生素的使用和开发新的抗生素药物，了解抗生素的效价是非常重要的。
本实验旨在通过测定抗生素的效价，为抗生素研发和临床应用提供参考。
材料与方法：1. 实验菌株：选择一种常见的细菌菌株，如大肠杆菌。
2. 抗生素：选择一种常见的抗生素，如青霉素。
3. 培养基：选择适合实验菌株生长的培养基。
4. 细菌培养器：提供适合细菌生长的环境条件。
5. 稀释液：用于制备不同浓度的抗生素溶液。
6. 培养皿：用于培养细菌和抗生素溶液的混合物。
7. 灭菌器：用于灭菌培养皿和其他实验用具。
8. 显微镜：用于观察细菌生长情况。
实验步骤：1. 准备工作：将培养皿和其他实验用具放入灭菌器中进行灭菌处理，以防止实验中的污染。
2. 制备抗生素溶液：根据实验要求，将抗生素溶解在稀释液中，制备不同浓度的抗生素溶液。
3. 制备菌液：将实验菌株接种到含有适合其生长的培养基中，培养至合适的生长期。
4. 稀释菌液：将培养好的菌液按照一定比例稀释，以获得一定浓度的菌液。
5. 实验操作：在灭菌的培养皿中加入一定量的抗生素溶液和稀释后的菌液，使其均匀混合。
6. 培养细菌：将培养皿放入细菌培养器中，提供适合细菌生长的条件，培养一定时间。
7. 观察结果：使用显微镜观察培养皿中细菌的生长情况，记录下不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
结果与讨论：根据实验结果，我们可以得到不同抗生素浓度下的细菌生长情况。
通常情况下，抗生素浓度越高，细菌的生长受到的抑制作用也越强。
通过对比不同浓度下的细菌生长情况，我们可以确定抗生素的效价。
效价越高的抗生素，其抑菌作用越强，对细菌的杀灭效果也越好。
实验中还可以进行一些控制实验，以确保结果的准确性。
例如，可以设置对照组，即不加入抗生素的培养皿，以观察细菌的正常生长情况。
抗生素效价测定操作规程
QCA/QC-SOP-???1.主题内容和适用范围本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准《中国药典》2010年版二部。
3.术语抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）4.1操作室：光线明亮，操作间分a.一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注意抗生素的污染。
4.2双蝶：内径90mm高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4钢管：内径6.0±0.1mm高7.8±0.1mm或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用.4.5钢管放置器4.6恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃4.7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h4.11天平:分析天平,感量0.1mg4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)4.13超净工作台5.菌悬液制备取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
实验三 抗生素效价的测定
实验三抗生素效价的生物测定一、实验目的1．熟悉抗生素效价测定的原理2．掌握培养基的配制、灭菌3、掌握接种技术二、实验原理抗生素的医疗价值决定于它的抗菌特性，因此利用它们各自的抗菌活性来测定其效价有着特殊的意义。
效价的测定法有：液体稀释法，比浊法和扩散法等。
本实验采用国际上最为常用的杯碟扩散法来定量测定洁霉素的效价。
测定时，将规格完全一致的不锈钢小管（即牛津小杯）置于含敏感菌的琼脂平板上，并在牛津小杯中加入己知浓度的标准青霉素溶液和未知浓度的青霉素发酵液。
于是，抗生素就自牛津小杯处向平板四周扩散，在抑菌浓度所达范围内敏感菌的生长被抑制而出现抑菌圈。
在一定的范围内，抗生素浓度的对数值与抑菌圈直径呈线性关系。
因此，只要将被测样品与标准样品抑菌圈直径进行比较，就可在标准曲线上查得未知样品的抗生素效价。
三、材料和器皿1 菌种：大肠杆菌（E.coli）。
2培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（作生物测定用时，平板应分上下两层，上层须另加25％葡萄糖）。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g Nacl 5g 琼脂15-20g 1000ml 水pH 7.4-7.63试剂（1）l％pH6磷酸缓冲液：K2HPO4 0.2g（或K2HPO4·3H20 0.253g）KH2P040.8g，蒸馏水100ml。
（2）25% 葡萄糖溶液100ml。
（3）苄青霉素钠盐：1667U／mg（1U即1国际单位，等于0.6ug）。
4其他：牛津小杯（不锈钢小管，内径6土0.lmm，外径8土0.lmm，高10土0.1mm），培养皿（直径90mm，深20mm；大小一致，皿底平坦），试管、滴管、移液管（5ml）、移液枪（1ml）、枪头、镊子、涂布棒等。
四、方法和步骤1标准曲线的测绘(1）倒底层培养基：取无菌培养皿5套，每皿移入20ml牛肉膏蛋白陈底层琼脂培养基，置水平待凝，备用。
（2）铺含菌上层培养基：将装在三角瓶中的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基（100ml）融化，待冷却到50℃左右时再加入25%葡萄糖液2ml和大肠杆菌菌液5ml(加入菌液的浓度应控制在使IU／ml青霉素溶液的抑菌圈直径在20－24mm），充分混匀后，用移液管吸取4ml于底层平板上迅速铺平，然后移水平位置凝固。
CHB-1型抗生素效价测定仪标准操作规程
一、目的：制定抗生素效价测定仪标准操作规程，便于操作者的正确操作。
二、适用范围：适用于抗生素效价测定仪的操作。
三、责任者：QC检验员。
四、正文：1.准备：1.1开机前的检查1.1.1检查仪器与计算机的信号线及控制线是否联好。
1.1.2检查计算机、显示器、打印机的连线。
1.1.3检查计算机、显示器、打印机及仪器的电源线是否连接好。
2.开机检查：2.1分别依次打开计算机、仪器和打印机的电源开关。
2.2 POWER总电源指示灯及CAMERA摄像指示灯亮后方可正常工作。
2.3 LIGHT SOURCE2照明光源指示灯应点亮，再打开测量室门，检照明光源是否亮。
2.4用手按下“¤”键，检查测量室内主光源是否点亮。
2.5用手按下“¤”键，检查测量室内菌碟的放置台是否清洁。
3.系统的进入：打开计算机，在“开始”菜单中单击“程序”选项后，单击“抗生素效价测量仪”即可测量。
4. 各种工作的步骤4.1 测量抑菌圈菌碟的步骤文件----建立报告----测量4.2 校正滴错位的菌圈，即菌圈定位编辑----菌圈定位4.3 仪器所测量的若干组数据，进行组间合并计算文件----组间合并计算4.4 手工测量的抑菌圈数据的处理实验步骤按照（见说明书，7-1测量）开始进行，直到（图7-6），这时直接选择关闭项将进入下图，单击上面的数据进入手工输入。
4.5 以f、Sm、Pt数值，进行合并计算文件----建立报告----合并计算4.6 删除旧文件的菌碟步骤文件----删除记录4.7 旧报告的查看及输出文件----打开记录4.8 如何放置菌碟将待测菌碟放置在测量台上，分别按正确方向放置，将标准溶液的低剂量抑菌圈，对准仪器测量内的箭头，即放置在外侧。
每次测量时，即在Light Sources批示灯亮时，严禁打开测量室门，待其熄灭后，即可开门取出菌碟，再依照前图示放入下一个菌碟。
5 结束5.1 退出系统5.2 关机当测量工作全部完成后，其关机顺序与开机时的顺序相反，并关闭测量室门，盖上防护罩。
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QCA/QC-SOP-006
1.主题内容和适用范围
本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2.引用标准
《中国药典》2010年版二部。
3.术语
抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生
素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
本法采用的是管碟法。
4.操作技术（仪器与用具）
4.1操作室：光线明亮，操作间分a.一般操作间b半无菌操作间。
室温控制20-25℃。
注
意抗生素的污染。
4.2双蝶：内径90mm高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液
中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4钢管：内径6.0±0.1mm高7.8±0.1mm或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.
用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或
用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时
备用.
4.5钢管放置器
4.6恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃
4.7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000
苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.
4.8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水
洗、PW冲3次
4.9称量瓶:具塞,重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW冲
3次,置洁净的大平皿中.120℃干热3h,待冷到70-60℃时,取出置干燥器中备用.
4.10毛细滴管: 清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次.120℃干燥3h
4.11天平:分析天平,感量0.1mg
4.12抑菌圈测量仪(多功能微生物自动测量分析仪)
4.13超净工作台
5.菌悬液制备
取短小芽孢杆菌工作用菌种营养琼脂斜面培养物，加灭菌水1~2ml将菌苔洗下，制成悬液，用吸管将此悬液接种至盛有营养琼脂培养基的扁培养瓶内，摊布均匀，在35~37℃培养7天。
取菌苔少许涂片，革兰氏染色镜检，应有芽孢85%以上，用灭菌水10ml将芽孢洗下，制成芽孢悬液，合并至灭菌大试管内，在65℃水浴中加热30分钟将菌体杀死，待冷后置4℃冷藏箱贮藏。
此菌液为浓菌液。
日常试验用菌液取上述浓菌液，用灭菌水1∶3稀释至灭菌试管中，冷藏箱保存备用。
6.培养基
称取培养基干粉g溶于ml水中，制备好的培养基，在121℃蒸汽灭菌30min。
制成的培养基不应有沉淀，临用前应置于水浴中或微波炉中融化，避免直火加热。
7.缓冲溶液制备
磷酸盐缓冲溶液（PH7.8）称取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g，加水使成1000ml,滤过，在121℃蒸汽灭菌30min。
8.灭菌水制备
取纯化水500ml，在121℃蒸汽灭菌30min。
9.样品及供试品制备（标准品的取用量不得少于20mg）
9.1称样量计算
V ×C
W=-----------------
P
式中W 为称取标准品或供试品的重量（mg）
V 为溶解标准品或供试品制成浓溶液时用容量瓶的体积（ml）
C 为标准品或供试品浓溶液的浓度(u/ml或μg/ml)
P 为标准品的纯度或供试品的估计效价(u/mgμg/mg)
9.2稀释(每步稀释，量取量不得少于2ml，稀释步骤一般不超过3步)
标准品及样品（以红霉素为例）
乙醇+灭菌水
mg (u/mg) ---------------------→ ml (u/ml)
PH7.8磷酸盐缓冲溶液
ml (u/ml) ---------------------→ ml (u/ml)
高剂量
PH7.8磷酸盐缓冲溶液
ml (u/ml) ---------------------→ ml (u/ml)
低剂量
PH7.8磷酸盐缓冲溶液
ml (u/ml) ---------------------→ ml (u/ml)
10.双碟制备
10.1在半无菌室内进行，应注意微生物及抗生素的污染。
10.2底层用灭菌大口20ml吸管或其他灭菌分装器，吸取已融化的培养基20ml注入双
碟内，使底层摊布均匀，盖上陶瓦盖，待凝固。
10.3菌层取出实验用菌悬液，按预试好的加菌量，用灭菌吸管吸取菌悬液适量，加入
已融化并保温在水浴中的培养基（65℃以下）内，摇匀，作为菌层培养基。
用灭菌大口5ml吸管或其他适宜分装器，吸取菌层培养基5ml，加于底层培养基上，使其均匀摊布，放置20~30分钟，待凝固。
10.4放置钢管用小眼科镊子夹持钢管，轻轻地放置在培养基上。
相应剂量的钢管，对
角放置。
钢管放妥后，应使双碟静置5~10分钟，钢管在琼脂上沉稳后，再开始滴加抗生素溶液.
10.5滴加抗生素溶液
10.5.1每批样品不少于6个双碟，用灭菌的毛细滴管滴加，在滴加之前须用溶液洗2~3
次。
10.5.2滴加标准品及供试品溶液顺序：SH-TH-TL-SL
滴加溶液至钢管口平满，注意滴加溶液的间隔不可过长，否则因钢管内溶液的扩散时间不同会影响测定结果。
加液要满，但不能溢出，同一双碟内4个钢管的加液量要一致。
10.5.3每种溶液要各用一支毛细滴管，每1份滴加的溶液为同一单位，但双碟数不超过
5个，如果一份溶液滴加双碟数目多，可分次滴加。
10.5.4加完抗生素后，用陶瓦盖覆盖双碟，平稳置于双碟托盘内，双碟叠放不可超过3
层，置入隔水式培养箱内培养，设置温度为35℃～37℃。
10.6培养14~16h后取出置多功能微生物自动测量分析仪检测。
11.颁发部门
技术质量部
12.发放范围
办公室1份，技术质量部2份，共3份。