抗生素效价的测定
抗生素效价测定操作规程
第 1 页，共 4页
1. 主题内容和适用范围
本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准
《中国药典》2010年版二部。
3. 术语
抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。本法采用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）
4.1 操作室：光线明亮，操作间分a.一般操作间b半无菌操作间。室温控制20-25℃。注意抗生素的污染。
4.2 双蝶：内径90mm高16-17mm.用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min,备用。
4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4 钢管：内径6.0±0.1mm高7.8±0.1mm或8.0±0.1mm,10.0±0.1mm.重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160℃干热灭菌2小时备用.
4.5 钢管放置器
4.6 恒温培养箱:隔水式为宜35-37℃
4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150-160℃干热灭菌2小时备用.
4.8 玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次 QCA/QC-SOP-006
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抗生素效价测定操作规程 审核人 日 期
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《生物制药技术》实验五
1 《生物制药技术》实验指导
实验五、四环素生物效价测定（选作）
一、实验目的
1、了解杯碟法测定抗生素生物效价的基本原理。
2、掌握杯碟法测量抗生素效价的方法。
二、实验原理
衡量发酵液中抗生素的含量称效价(titer或titre)，效价是评价抗生素效能的标准，也是衡量抗生素活性成分含量的尺度，它代表抗生素对微生物的抗菌效力，人们以1µg金霉素或四环素标准品为1个单位，0.6µg青霉素G钠盐为1个单位。抗生素的生物测定方法有三大类：稀释法、比浊法以及扩散法。扩散法中杯碟法(cup and plate method)或称管碟法(tube and plate method) 一种是常用的方法。它是将已知浓度的标准抗生素溶液与未知浓度的样品溶液分别加到牛津杯
(Oxford cup，一种标准的不锈钢小管)中，置于含有敏感试验菌的琼脂平板上进行扩散渗透，一定时间后抗生素在菌层培养基形成浓度由高到低的自然梯度，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。测量出抑菌圈的大小，以计算抗生素的浓度。在一定的浓度范围内，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，且在一定的试验条件下，可直接利用抑菌圈的直径近似地代替其平方，因而从样品的抑菌圈直径可在标准曲线上求得样品的生物效价。将已知效价的金霉素标准液先制成标准曲线，根据被检品溶液的抑菌圈的大小，就可从标准曲线上查出效价的对数值，从中计算出相应效价，再乘以稀释倍数，即计算出待测样品中抗生素的效价。因杯碟法是利用抑制敏感细菌的直接测定方法，所以符合临床使用的实际情况，而且灵敏度很高，不需要特殊的设备，故多被采用。但此法也有缺点，即操作步骤多，培养时间长，获得结果慢。尽管如此，由于它的独特优点，仍然被世界各国所公认，作为国际通用的方法被列入各国药典中。
三、实验材料及设备
（一）实验材料 2 1、菌种：
兽用抗生素生物效价测定中注意事项及分析
2024年第3期品牌与标准化
PrecautionsandAnalysisin
theBiotiterDeterminationofVeterinaryAntibiotics
GUOYucui1,LIUXiaojing2,HANJuanzhu1,QIUYue1,ZHANGMingyang3,LIXinnan1*
(1.LiaoningInspection,Examination&CertificationCentre〔LiaoningInstituteforAgro-productVeterinaryDrugsandFeedControl〕,Shenyang110036,China;2.ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China;3.DalianMedicalUniversity,Dalian116000,China)
Abstract:Testingtechnologyplaysanimportantroleinensuringthequalityofveterinaryantibioticproducts.Thetubeplatemethodis
oneofthecommonlyusedmethodsfordeterminingthepotencyofantibiotics.Thisarticlesummarizedandsortedoutsomecommon
biningwithdailypractice,itanalyzedthekeylinksthataffected
theaccuracyofresults,andputforwardreasonablesuggestionsforreferencebyveterinarydrugtestinglaboratories.
抗生素的生物效价测定法管碟法
抗生素的生物效价测定法
测定抗生素效价的方法比较多，一般可以分为物理学方法、化学方法、生物学方法、和两种方法配合等四大类，可根据具体情况选择使用。
生物学方法以抗生素的杀菌力作为衡量效价的标准，其原理恰好和临床应用于的要求一致这是它的优点；又其灵敏度较高，需用检品的量较小，也是其它方法所不及的。
抗生素的生物效价测定法，常用的有稀释法、比浊法和扩散法（或称渗透法）。
稀释法 这一方法是用培养基将检品抗生素稀释到各种浓度，并依次分装到一系列的容器内，再加入等量“试验菌种”菌种菌液，并放在37 ℃ 保温箱内培养一定时间，观察何种稀释度适能抑制细菌的生长，该稀释度即为测定终点（或以细菌生长所引起的PH改变及溶血现象等生化反应作为测定终点），再与同样处理的标准抗生素的终点作比较，即可求得检品的效价。这种方法可以使用液体培养基，也可以使用固体培养基。所用的材料及培养基都必须严格无菌，并要注意无菌操作。由于测定终点是以有无细菌生长来判断的，因此所得结果公是一个范围。
比浊法 原理及操作大致与稀释法相同。比浊法也是将不同量的检品及标准品分别加入培养基中，观察其对“试验菌种”的效应——即细菌生长所引起的混浊。这一方法和稀释法的区别有二：a.比浊法的稀释间隔的密度比较近，准确度高一些；b.比浊法不以细菌有无生长的区分为终点，而是将标准品浓度和细菌生长所引起的混浊度求得一定的比例，再由检品的细菌生长混浊度推算检品的效价。这一方法易受杂质的影响，并且不适用于有色或混浊的检品。
扩散法 使用固体培养基，在培养基凝固以前将“试验菌种”混合进去，在这样备妥的培养表面，可以用种种设计使检品液或含有抗生素的物质与有菌种的培养基接触。经过培育后，由于抗生素向培养基中扩散，凡抑菌浓度所能达到之下细菌不能生长因而形成透明的抑菌范围，此种范围一般都呈圆形，称为“抑菌圈”。扩散法有几种，或中一种叫管碟扩散法（筒称管碟法）为国际上常用的方法，在我国也作为法定的抗生素检定法。
抗生素效价测定原理
抗生素效价测定原理
宝子们！今天咱们来唠唠抗生素效价测定的原理呀。这可挺有趣的呢！
抗生素效价测定呢，就像是给抗生素来一场能力大考验。咱都知道抗生素是用来对抗那些讨厌的细菌的小能手。那怎么知道它有多厉害呢？这就需要测定效价啦。
想象一下啊，那些细菌就像是一群小坏蛋，在培养基这个小世界里兴风作浪。而抗生素呢，就是超级英雄。当我们把抗生素加到有细菌的培养基里的时候，就像是超级英雄闯进了小坏蛋的老巢。如果这个抗生素超级英雄很厉害，那细菌小坏蛋就会被打得很惨。
从科学的角度来说哈，效价测定有好几种方法呢。有一种是稀释法。这就好比是把超级英雄的力量一点点削弱，看看削弱到什么程度就打不过小坏蛋了。我们把抗生素溶液稀释成不同的浓度，然后把这些不同浓度的抗生素溶液分别加到含有相同数量细菌的培养基里。如果某个浓度的抗生素溶液加到培养基里后，细菌几乎都长不起来了，那就说明这个浓度的抗生素很有威力哦。
还有一种是比浊法呢。这个就更有意思啦。细菌在培养基里生长的时候啊，会让培养基变得浑浊。就像一杯清水里加了很多泥沙一样。如果抗生素很有效，那细菌就长不起来，培养基就不会变得那么浑浊啦。我们可以通过仪器来测量培养基的浑浊程度，从而判断抗生素的效价。这就像是看一杯水有多浑，来判断超级英雄有没有把小坏蛋收拾得服服帖帖的。
另外呀，扩散法也是常用的。我们把含有抗生素的小纸片或者小钢圈放到长满细菌的培养基表面。抗生素就会像水波一样，从这个小纸片或者小钢圈周围扩散开来。如果抗生素很厉害，在它扩散的范围内，细菌就不敢靠近，就会形成一个没有细菌生长的小圈圈。这个圈圈的大小就和抗生素的效价有关系啦。就像是超级英雄散发的气场，气场强，周围空出来的地方就大。 抗生素效价测定可重要啦。它能让医生知道给病人用多少抗生素才合适呢。如果用得太少，就像派了个小喽啰去打大怪兽，根本打不过呀。可如果用得太多，也不好，就像用原子弹去炸小蚂蚁，太浪费而且可能对身体还有其他不好的影响呢。
抗生素效价
用管碟法（2.2）法，测定链霉素活菌剂的效价，估计效价为1 000 000 u/g，供试品最终浓度为1.4u/ml及0.7u/ml。
链霉素的效价测定
抗生素微生物检定法
本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效性）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不 得大于5%。
第一法 管碟法
本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液
取枯草芽孢杆菌［CMCC（B） 63501］的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液
取短小芽孢杆菌［CMCC(B)63202］的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液
取金黄色葡萄球菌［CMCC（B）26003］的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
藤黄微球菌（Micrococcus luteus）悬液
抗生素效价测定操作规程 2
QCA/QC-S0P-006
山东良福制药有限公司 起草人
日期
抗生素效价测定操作规程 审核人
日期
批准人
日期
第五版 实施日期
总页数 共4页
1. 主题内容和适用范圉
本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求。 本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准
《中国药典》2010年版二部。
3. 术语
抗生素微生物检定法：在适宜的条件下，根据量反应平行原理设计，通过检测抗生 素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法。
抗生素微主物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。本法釆用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）
4.1操作室：光线明壳，操作间分&一般操作间b半无菌操作间。室温控制20-25°Co 注意抗生素的污染。
4. 2双蝶：内径90mm高16-17呗用后经高压灭菌倒出培养基后，置专用洗液或清洁液 中浸泡过夜，冲洗，沥干150-160°C干热灭菌2小时或高压灭菌121oC30min,备用。
4. 3陶瓦盖：内径103mm,外经108mm,吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4. 4 钢管：内径 6. 0±0. 1mm 高 7. 8±0. 1mm 或 8. 0±0. 1mm, 10. 0±0. lmm.重量差异不超 ±0. 05g.用后置1:1000苯扎澳钱溶液内浸泡2h以上，再灭菌洗涤，先用水洗,超声波 30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁，水冲洗,淋干,PW冲洗3次150-160°C干热灭 菌2小时备用.
4. 5钢管放置器
4. 6恒温培养箱：隔水式为宜35-37°C
4. 7灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml）,用后立即置5%石碳酸或1:1000 苯扎漠鞍溶液中消毒后再常规洗涤.150- 160°C干热灭菌2小时备用.
4. 8玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡, 水洗、PW冲3次 4. 9称量瓶:具塞，重量在10g以下.水冲洗、淋干,置清洁液浸泡2小时以上,水洗、PW 冲3次，置洁净的大平皿中.120°C干热3h,待冷到70-60°C时,取出置干燥器中备用.
抗生素效价测定操作规程 3
第 1 页，共 4页
1. 主题内容和适用范围
本规程规定了公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定方法及要求.
本规程适用于公司外购原料药品及生产成品中抗生素的效价测定。
2. 引用标准
《中国药典》2010年版二部.
3. 术语
抗生素微生物检定法：在适宜的条件下,根据量反应平行原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）方法.
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。本法采用的是管碟法。
4. 操作技术（仪器与用具）
4.1 操作室：光线明亮，操作间分a。一般操作间b半无菌操作间.室温控制20-25℃。注意抗生素的污染。
4.2 双蝶：内径90mm高16—17mm。用后经高压灭菌倒出培养基后,置专用洗液或清洁液中浸泡过夜，冲洗,沥干150—160℃干热灭菌2小时或高压灭菌121℃30min，备用.
4.3 陶瓦盖：内径103mm,外经108mm，吸水性强，定期清洗、干燥或干热灭菌。
4.4 钢管：内径6.0±0.1mm高7。8±0。1mm或8.0±0。1mm，10.0±0。1mm。重量差异不超±0.05g.用后置1:1000苯扎溴铵溶液内浸泡2h以上,再灭菌洗涤,先用水洗,超声波30min或用去污粉的沙布条串擦内外壁,水冲洗，淋干，PW冲洗3次150—160℃干热灭菌2小时备用.
4.5 钢管放置器
4.6 恒温培养箱：隔水式为宜35-37℃
4.7 灭菌刻度吸管:用于吸取菌液及培养基（5ml、20ml），用后立即置5%石碳酸或1:1000苯扎溴铵溶液中消毒后再常规洗涤.150—160℃干热灭菌2小时备用.
4.8 玻璃容器:滴定管、移液管、刻度吸管、容量瓶.符合一等品规定用前用清洁液浸泡， QCA/QC—SOP-006
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第五版 实施日期 总页数 共4页
微生物检定法测抗生素活性效价
微生物检定法测抗生素活性效价
概述
由于抗生素多为结构复杂的多组分物质，异构体多，且不稳定，容易产生降解杂质，故各国药典均以微生物检定法为主要含量测定法，因为抗生素药品的医疗作用主要是它的抗菌活力，而微生物检定法正是以抗生素的抗菌活力为指标来衡量抗生素效价的一种方法，其测定原理与临床要求相一致，能直接反映抗生素医疗价值，因此一直为各国药典所采用的主要测定方法。
微生物检定法测定抗生素效价，一般可分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法三类。以琼脂扩散法应用最广泛，为目前国际上测定抗生素效价的通用方法。
琼脂扩散法，亦称管碟法。系采用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，采用量反应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
2015版药典四部通则
1201 抗生素微生物检定法
本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。
抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。
测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90％或高于估计效价的110％时，应调整其估计效价，重新试验。
除另有规定外，本法的可信限率不得大于5％。
第一法 管碟法
本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。
菌悬液的制备
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）悬液 取枯草芽孢杆菌〔CMCC（B）63 501〕的营养琼脂斜面培养物，接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中，在35～37℃培养7日，用革兰染色法涂片镜检，应有芽孢85％以上。用灭菌水将芽孢洗下，在65℃加热30分钟，备用。
短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）悬液 取短小芽孢杆菌（CMCC（B）63 202〕的营养琼脂斜面培养物，照上述方法制备。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）悬液 取金黄色葡萄球菌〔CMCC（B）26 003〕或〔ATCC29 213〕的营养琼脂斜面培养物，接种于营养琼脂斜面上，在35～37℃培养20～22小时。临用时，用灭菌水或0.9％灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下，备用。
抗生素微生物效价测定法中一剂量法及二剂量法计算公式的推导_百.
所 得 计 算 公 式 。一 二 , 音 。 』 一 , 。 斜率 一 , 抑 菌圈 直 径 之 差 、 一
斜率 一 吕 抑菌圈 直径 之差 。 ‘ “ , 百 示叶 ・ ,。 。 不 亩 翁 , 一 , 行渝 一 留 斜率
抑 菌 圈 直 径 平 方 之差 , 兀 公式 , 主 要 是 斜 率部 分 不 同 , , 斜率 , 恰 是斜 测 定
法 中 一 剂量 法 和 二 剂 量 法 的 计 算 公 式 率 的 倒数 体 现 于座 标 图 上 由 于
将 抗 生 素 轴 上 所 得 的 标 准 曲 线与 习 轴 上 所得 的 曲线 , , 并 与 以 往 的 一
些 推导 相 比 较 绍 了斜 率 导 最小 二 平方 法 。 , 加 以讨 论 , 介 浓 度的对数置
于 , 的计 算公 式 及 其 简 化公 式 的 推 惯 上 使抗 生 素 浓 度 置 于 用直 线 方 程
十 其 斜 率必 然 不 同 前 者 的 值 将 是 后 者 的 倒数 。 本 文 承 卫 生 部 药品 生
物 制 品所 郑 昌 亮 同 志 审 阅 特 此 , 来 推 导 所 得 的一 , 感谢 。 剂 量 法计 算 公
式 与 上 海 药 检 所 用 回 归 直 线方 程 一 。 。 推导 所得 完全 相 同 但推 张绪敏
参 考 资 料 抗 菌 素 微生 物 效 价 测 定 法 , , 导 过 程 明显 简化 二 剂 量 法 的 推
导方 式 与 以 往 用 氏 扩 散 动 力 学方 程 来 推 导 的相 同 由于 二 , 人 民 卫生 剂
量 法 可 以 消 去 斜 率 与截 距 的 影 响 得 的计 算 公 式 与 以 往 的 完 全 相 同 。 ,
因而所 按 本文 的 推导 方 式 推导 过 程 , 可 将 一 剂 量 法和 二 剂 量 法 的 推导 ,
统 一 于 同 一 直 线方 程 下 来 进 行 。 简 化 了整 个 抗 菌 素 效 价 的 生 物 检定