抗生素效价计算过程

USP Cylinder-plate assay 美国药典 管碟法---（标准曲线法）

1、 美国药典规定的管碟法抗生素效价方法简述：

首先制备5个标准溶液浓度（U/ml ），分别为S1、S2、S3、S4和S5，其中S3为中间浓度。除S3外的每个浓度准备3个碟子，每个碟子放置6个牛津杯，其中不相连的三个分别加入Si （i 为1、2、4或5），另外三个不相连的加入S3。待检样品（Unknown ）加样方式如Si ，具体放置方法如下图1：

图1：标准及样品管碟放置方式图例

2、在以上方法的基础上以具体数据进行计算举例： 下表2为按以上方法进行抗生素效价检测的一组测量结果：

表2：抗生素效价检测测量结果表

Replicate1

Replicate2

Replicate3

Set S1 Set S2 Set S4 Set S5 Sample U1

备注：Zone1、3、5表示每个平皿中不相连的三个S3的直径值；

Zone2、4、6表示每个平皿中不相连的三个Si的直径值；

U1表示待测样品1。

2.1 进行初始计算：

对于每种浓度的三个平板，分别求出得到的9个中间浓度标准品的平均值以及9 个Si和U1直径的平均值。

例如：

15.867=（16.1,15.6,15.8,16.0……15.8）9个数据的平均值

14.167=（14.6,14.1,13.5,14.5……14.1）9个数据的平均值

2.2 变异性的适用性检查：

然后求出每三个平板得到的9个数值的标准偏差（包括标准对照和样品的），进而计算出其相对标准偏差值（RSD，该值应不超过10%）。

例如：

标准偏差0.200 = s(16.1, . . ., 15.8)

相对标准偏差1.3% = (0.200/15.867) *100

2.3 进行平板间的差异校正：

计算公式如下。

X C = X S– (X R– P)

X C = 标准品平均值的校正值

X S = 原始的标准品的平均值

X R = 对照值的平均值

P = 校正值

例如：

14.022 = 14.167 – (15.867 – 15.722) = 14.167 – 0.145

2.4 建立标准曲线：

标准曲线由2.3计算的标准品平均值的校正值Xc和标准品浓度值的对数值构成。（使用适宜的计算软件或手动计算）（注意----可以使用自然对数或底数为10的对数建立标准曲线中以确定回归方程，这样可以得到同样的结果）

例如：下表3是针对下列计算中会用到的数据从表2中截出的部分。

表3：标准曲线数据表

图4：线形回归结果

标准曲线：Z = [3.5502* ln(C)] + 9.9794

Z=校正抑菌圈大小

C=浓度

R2 = 0.9968

2.5 待测样品效价：

估算一个待测样品的效价，计算对照抑菌圈和样品抑菌圈的平均值（三个平板的）。用上面介绍的标准品平均值的校正值Xc以计算待测样品的浓度平均值。[注意---另一个可以接受的用校正值的方式为，根据标准品中间浓度S3的对数值在估计效价的回归线中进行校正]。在标准曲线中使用公式用校正平均值计算样品的含量对数值L U。

L U = (Z – a)/b

a = 回归线的截距

b = 回归线的斜率

要得知待测样品的效价，取L U的反对数值乘以适当的稀释因子，该值也可描述为参考值浓度的百分比。

例如：

待测样品校正值(表2中) = 15.522

待测样品效价的ln值：L U = (15.522 – 9.978) / 3.5502= 1.562

待测样品效价值：C U = e1.562 = 4.765

待测样品效价与对照中间浓度的百分比为：(4.765/5.000) *100% = 95.3%

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