佐剂制备的情况
弗氏完全佐剂制备
弗氏完全佐剂制备弗氏完全佐剂是一种特殊的辅助药物制剂，它通过将多种药物或药品结合在一起，形成一种配方，达到协同作用，提高药物疗效或减少药物副作用的效果。
下面将详细介绍弗氏完全佐剂的制备方法。
弗氏完全佐剂的制备包括以下几个步骤：物质准备、制剂配方、制剂制备、制剂封装和贮存。
首先，需要准备配方中所需的物质。
这些物质包括原料药、辅料和溶剂。
原料药是佐剂中起主要作用的药物成分，辅料用于提高药物的稳定性和流动性，溶剂用于制剂制备时的溶解。
接下来，需要进行制剂配方。
配方的制定需要根据弗氏完全佐剂的具体功能和要求来确定，一般需要根据临床实践和科学研究的结果进行调整和改进。
在配方中，需要考虑药物之间的相容性，以及药物与辅料之间的相互作用。
然后，进行制剂的制备。
制剂制备的方法有多种，常见的有干混法、湿混法、溶剂法等。
具体选择何种方法需要根据佐剂中所使用的药物和辅料的性质以及制剂的要求来决定。
在制剂制备的过程中，需要注意控制温度、湿度和加料的顺序，以确保最终制得的佐剂符合要求。
制剂制备完成后，需要进行封装。
封装的方式有很多种，常见的有胶囊、片剂、注射剂等。
封装时需要注意保持无菌环境，并按照规定的药物剂量将制剂分装入相应的包装中。
最后，将制备好的佐剂进行贮存。
贮存要求佐剂防潮、防光、防氧和保持在低温下。
在贮存过程中需要定期检查佐剂的质量，确保其有效期内保持稳定。
弗氏完全佐剂的制备是一个复杂而细致的过程，需要严格按照药典和相关规定进行操作。
在制备过程中，需要密切关注药物的稳定性和相容性，以及药物与辅料之间的相互作用。
只有正确地控制每个步骤，才能制得质量稳定、疗效显著的弗氏完全佐剂。
05生物制品的佐剂保护剂灭活剂
(二) 白油Span佐剂
用 轻 质 矿 物 油 ( 白 油 ) 作 油 相 ， 用 Span-80( 去 水 山 梨 醇 单 油 酸 酯 ) 或 Span-85(去水山梨醇三油酸酯)及吐温-80(Tween-80)(聚氧乙烯脱水山梨 醇单油酸酯)，作为乳化剂制成的油乳佐剂，是当前兽医生物制品中最常 用最有效的佐剂之一。白油佐剂的配制方法很多，比例互有差别，仅举一 例作为参考，即：
存
化十八烷基三甲铵。
型
胺及其类似物：癸胺、癸胍及其他。
核酸及类似物：DNA、RNA、低核苷酸、多聚核苷
酸、环磷酸腺苷等。
药物：左旋咪唑及蜂胶等
佐剂的作用机理
各种佐剂的作用机理不尽相同，但概括起来有如下方面
1．对抗原的作用
(1) 增加抗原分子的表面积 某些佐剂颗粒表面可以吸附许多抗原，使抗原表面积明显
这些细胞增殖发挥更大作用。有些佐剂，如短小棒状杆菌、百日咳杆菌和 葡聚糖等，主要作用于巨噬细胞，使之激活，大量增殖分化，释放白细胞 介素-1等细胞因子，再去活化T细胞和B细胞。被激活的T细胞进一步分泌 各种细胞因子，进而促进B细胞和巨噬细胞功能。 对T细胞的作用
一些佐剂的主要作用对象是T细胞，通过T细胞的介导，增强各种免 疫功能。胸腺素、分枝杆菌及其有关成分如卡介苗及MDP等、香菇多糖、 异丙肌昔、左旋咪吐、二乙胺基二硫代甲酸钠（DTC）等均为T细胞增强 剂。它们作用于胸腺细胞系统，诱导T细胞前体细胞的产生，T细胞大量增 殖分化，形成效应淋巴细胞，产生淋巴因子。
被分散的物质称为分散相，承受分散的液体称为连续相，这两相间的 界面活性物质称为乳化剂。当以水为分散相，以加有乳化剂的油为连续相
时，制成的乳剂为油包水型(W/O)，反之为水包油型(O/W)。 油包水型油乳佐剂粘稠，在机体内不易分散，抗原从乳剂中缓慢释
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书
sigma弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂说明书生物商城 / 2011-02-08一、定义：弗氏佐剂（Freundadjuvant）,这是目前最常用于动物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温80）制成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。
如在不完全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐剂。
二、制备方法：弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。
不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。
不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。
一般首次注射时用1／2体积FCA 加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。
如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。
因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。
抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。
一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。
待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。
本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。
as01佐剂制备
氢氧化铝佐剂在疫苗中的应用以氢氧化铝佐剂在疫苗中的应用为标题，本文将探讨氢氧化铝佐剂在疫苗中的作用以及其在疫苗研发中的重要性。
疫苗是预防传染病的重要手段之一，它通过激发人体免疫系统产生抗体来增强人体对特定病原体的抵抗力。
疫苗通常由病原体的部分成分或者灭活的病原体制成，但这些成分往往不足以激发人体充分的免疫反应，因此需要佐剂来增强疫苗的免疫原性。
氢氧化铝是一种常用的佐剂，它是一种无机化合物，化学式为Al(OH)3。
氢氧化铝具有较好的免疫活性增强效果，可以帮助疫苗激发更强的免疫反应。
在疫苗中，氢氧化铝通过与疫苗中的抗原结合，形成一种稳定的复合物，称为氢氧化铝疫苗佐剂。
氢氧化铝疫苗佐剂的主要作用是增强疫苗的免疫原性。
疫苗中的抗原通常是一种病原体的蛋白质或多糖，它们往往不能很好地刺激人体免疫系统产生足够的抗体。
而氢氧化铝疫苗佐剂能够与抗原结合，形成颗粒状的复合物，使抗原更容易被人体免疫系统识别和吞噬。
这种复合物能够激活免疫细胞，促使它们产生更多的抗体，从而增强疫苗的免疫原性。
除了增强免疫原性，氢氧化铝疫苗佐剂还能够延长疫苗的保护效果。
疫苗通常需要注射多次才能产生充分的免疫效果，而氢氧化铝疫苗佐剂可以延缓抗原的释放速度，使疫苗在体内长时间存在，从而延长免疫反应的持续时间。
这样一来，疫苗接种后的保护效果能够更持久，降低了疫苗接种频率和剂量，提高了疫苗的安全性和便利性。
氢氧化铝疫苗佐剂还具有一定的生物安全性。
氢氧化铝是一种无毒、无致病性的物质，被广泛应用于疫苗生产领域。
它在人体内的代谢和排泄速度较慢，能够长时间保持在注射部位，提高疫苗的免疫效果。
经过多年的临床应用和研究，氢氧化铝疫苗佐剂被证实是安全有效的。
总的来说，氢氧化铝疫苗佐剂在疫苗中起到了至关重要的作用。
它能够增强疫苗的免疫原性，延长疫苗的保护效果，并且具有良好的生物安全性。
目前，氢氧化铝疫苗佐剂已经被广泛应用于各类疫苗的制备中，成为疫苗研发领域不可或缺的一部分。
as01佐剂制备
as01佐剂制备
as01佐剂制备是指制备一种特定的佐剂，以提高某种产品的
性能或效果。
佐剂可以是化学物质、添加剂、添加物或其他物质，通常与主要成分混合使用。
制备as01佐剂的一种方法是将所需的成分按照一定比例混合，并在适当的条件下进行混合和搅拌，直至得到均匀的混合物。
具体的制备过程可以根据所需的佐剂类型和应用领域的要求来确定。
在制备as01佐剂时，需要注意以下几个方面：
1. 选择合适的成分：根据所需的佐剂性能或效果，选择适合的成分，并根据其特性和相容性进行组合。
2. 确定合适的比例：根据所需的佐剂含量和使用要求，确定不同成分的比例，确保制备的佐剂符合要求。
3. 控制制备条件：控制混合和搅拌的条件，如温度、时间、搅拌速度等，以确保成分充分混合，并得到均匀的混合物。
4. 质量控制：对制备的佐剂进行质量检查和测试，确保其符合相关的标准和要求。
总之，as01佐剂的制备是一个综合考虑成分选择、比例控制、制备条件和质量控制等因素的过程。
通过合理的制备方法和控制，可以得到符合要求的佐剂，从而提高产品的性能和效果。
制备抗原乳剂时,佐剂和抗原的常用比例
制备抗原乳剂时,佐剂和抗原的比例是至关重要的，它直接关系到乳剂的稳定性和抗原的免疫原性。
下面结合理论知识和实际经验，总结了制备抗原乳剂时常用的佐剂和抗原比例，供参考。
1. 佐剂的种类佐剂是指将抗原悬浮在乳化油中的物质，通常是亲水性较强的表面活性物质。
常见的佐剂有Tween-80、Span-80、脱脂乳粉等。
它们可以增加抗原在水相中的分散性，使得抗原悬浮在水相中的稳定性增强，从而提高了免疫原性。
2. 佐剂和抗原的比例佐剂和抗原的比例是影响乳剂质量的重要因素。
一般来说，佐剂的用量应根据实际情况来确定，常用的比例为1:1-2:1，即佐剂与抗原的质量比为1:1至2:1。
具体的比例可以根据实验需要和经验来确定，但在确定比例时应注意佐剂的浓度过高或过低都会影响乳剂的稳定性。
3. 佐剂的添加方法在制备抗原乳剂时，应首先将佐剂和抗原按照一定的比例混合均匀，然后慢慢滴加到乳化油中并边搅拌边加入，以确保佐剂和抗原能够充分混合。
另外，在加入佐剂和抗原之前，还可以预先在佐剂中加入一定比例的磷酸盐缓冲液，以调节pH值，提高乳剂的稳定性。
4. 佐剂的选择和优化在选择佐剂时，应根据抗原的性质和乳化油的特点来确定。
一般来说，亲水性较强的佐剂适用于溶解水溶性抗原，而亲油性较强的佐剂适用于溶解油溶性抗原。
在实际制备中，可以进行优化试验，通过对比不同佐剂和抗原比例的乳剂的稳定性和免疫原性来确定最佳的配方。
5. 结语制备抗原乳剂时，佐剂和抗原的比例是一个至关重要的因素。
正确选择佐剂和优化比例可以提高乳剂的稳定性和免疫原性，从而更好地发挥抗原的免疫作用。
在实际制备抗原乳剂时，应根据具体情况和实验要求来确定最佳的佐剂和抗原比例，以提高乳剂的质量和免疫效果。
6. 佐剂和抗原比例的影响因素在制备抗原乳剂时，佐剂和抗原的比例不仅受到佐剂种类和抗原性质的影响，还受到其他因素的影响。
其中包括抗原的溶解度、乳化油的性质、制备条件等因素。
抗原的溶解度对佐剂和抗原比例有着重要影响。
明矾佐剂的配置方法
明矾佐剂的配置方法
明矾佐剂是一种传统的疫苗佐剂，广泛应用于人用疫苗和兽用疫苗的生产中。
明矾佐剂具有良好的免疫增强作用，可以提高疫苗的免疫原性和免疫保护力。
下面是明矾佐剂的配置方法：
1. 准备明矾：将明矾磨成细粉，过200目筛。
2. 制备明矾佐剂：将明矾粉与生理盐水或PBS缓冲液混合，配制成一定浓度的明矾佐剂溶液。
3. 制备疫苗：将明矾佐剂溶液与疫苗抗原混合，进行免疫原性检测和疫苗制备。
4. 配制灭菌水：将灭菌水与明矾佐剂溶液混合，配制成灭菌水溶液。
5. 配制疫苗稀释液：将疫苗稀释液与灭菌水溶液混合，配制成疫苗稀释液。
6. 进行疫苗配制：将疫苗稀释液与疫苗抗原混合，进行疫苗配制。
在明矾佐剂的配置过程中，需要注意以下几点：
1. 明矾粉的细度：明矾粉的细度对佐剂的免疫增强效果有重要影响，细度越细，免疫增强效果越好。
2. 明矾佐剂溶液的浓度：明矾佐剂溶液的浓度对免疫增强效果也有重要影响，浓度越高，免疫增强效果越好。
3. 灭菌水的质量：灭菌水的质量对疫苗制备的影响很大，必须使用高质量的灭菌水。
4. 疫苗稀释液的质量：疫苗稀释液的质量对疫苗制备的影响也很大，必须使用高质量的疫苗稀释液。
总之，明矾佐剂是一种重要的疫苗佐剂，其配置方法需要严格控制，以确保疫苗的免疫原性和免疫保护力。
在疫苗制备过程中，需要严格遵循操作规程，确保疫苗的安全性和有效性。
兽医生物制品处理技术—佐剂配制技术
一、实验目的： 掌握白油佐剂的制备方法 二、实验器材： 1.共用：10号白油、Span-80、硬脂酸铝、天平、称量纸等。 2.每组所需：1个电炉（最好有石棉网）、2个玻璃烧杯、1个 玻璃捧、1个100ml量筒、1个10ml量筒等。
白油佐剂制备
三、实验方法： 1.按10号白油94ml，硬脂酸铝2g，Span-80 6ml的比例混合。 2.将白油和Span-80在电炉上微加热混合至透明。 3.然后取少量混合液加入硬脂酸铝，加热使其完全熔化。 4.再放入全量混合液中，充分混合。 5.高压蒸汽灭菌，110℃加热30min，冷却至50℃左右，再用力 振摇至透明均质状，即为白油佐剂（油相）。
➢ 例：破伤风明矾沉降类毒素 气肿疽明矾菌苗
钾明矾
常用的兽医免疫佐剂
➢ 明矾佐剂苗制备方法 取精制钾明矾配成10%溶液，高压灭菌后冷却至25℃以下， 按1%-2%加入pH8.0±0.2的灭活菌液中，充分振摇即为明矾 佐剂苗。
常用的兽医免疫佐剂
3.弗氏佐剂 ➢ 由匈牙利细菌学家Freund(1935年)
白油佐剂制备
四、注意事项： 油相制备时，温度和时间要掌握好，要使Span-80和硬脂酸 铝充分溶解。
常用的兽医免疫佐剂
1.氢氧化铝胶佐剂 2.明矾佐剂 3.弗氏佐剂 4.油乳佐剂 5.蜂胶佐.氢氧化铝胶佐剂
氢氧化铝胶又称铝胶，其佐剂活 性与质量密切相关。质优的铝胶 分子细腻，胶体状态良好、稳定 ，吸附力强，含Al（OH）3约2% （AlO3为1.3%），保存2年以上 吸附力不变。
树脂，并混入蜜蜂上颚分泌物，以及蜂蜡、花粉及其他一 些有机与无机物的一种天然物质。 蜂胶是一种蜂产品,含有多种氨基酸、酶、多糖、脂肪酸 、维生素及化学元素，是一种优良的天然药物。
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实验方法
标记：
将5mg HRP溶于1ml 0.30 M pH 8.1 NaHCO3中，加 0.1ml 1% 氟二硝基苯无水乙醇溶液，混合，加入 1ml 0.04M~0.08M NaIO4，室温轻搅30min。至黄绿色时，加 1ml 0.16M 乙 二 醇 溶 液 终 止 反 应 ， 室 温 1h 。 置 于 4℃ 0.10M pH 9.5 NaHCO3透析。然后于3ml HRP-醛基溶液 中，加入5mg抗体，室温置3h，加入5mg氢化硼钠，4℃ 过夜，0.15M pH7.4 PBS液透析过夜，离心去沉淀物。
实验结果分析和讨论
实验结果: 观察免疫效果如何？ 分析和讨论： 实验结果或失败的原因，哪些方面还存在问题？ 抗原制备是否达到要求？ 佐剂制备的情况？ 动物状态？ 采血方式？
江苏大学 邵启祥
实验二 单克隆抗体的制备
单克隆隆抗体概念
一种抗原决定簇刺激机体，由一个B淋巴细胞克隆 接受该抗原决定簇所产生的抗体称之为单克隆抗体 （Monclone antibody，McAb）。
实验器材和材料
菌种：伤寒沙门菌O901和伤寒沙门菌H901菌株。
动物：体重在2.5kg左右的健康青年新西兰家兔。
培养基：细菌普通肉汤培养基、细菌普通固体培养基。
试剂： 人IgG、羊毛脂、石蜡油、注射用卡介苗、二甲 苯、无菌生理盐水、0.5%无菌甲醛盐水、0.5%无菌石 灰酸盐水、2 % NaN3和3 %戊巴比妥钠等。
第7周 0.5ml
离心
杂交瘤融合
6 %淀粉肉汤 IF鉴定 IF鉴定
HAT筛选 脾细胞10份
有限稀释 克隆化
再次克隆化
免疫小鼠
+
50%PEG 秋水仙素鉴定 小鼠染色体
融合 sp2/0细胞1份
无血清培养基
特异性和 效价鉴定
胶体金 IgG亚型鉴定
注意事项
选择的动物状态要好；免疫后效价要高；融合效率 要比较高，筛选到阳性克隆的几率也要比较高；饲 养细胞很重要。
耗材：24孔和96孔细胞培养板、无菌毛细滴管、1ml无菌 刻度吸管。
器械：无菌直头和弯头眼科剪各3把、无菌直头和弯头眼 科镊3把。 仪器：水平低温冷冻离心机、CO2培养箱。
实验方法
红细胞免疫
洗至不溶血
IF鉴定
“O”型血
2×107/ml
腹腔注射
免疫时序 免疫剂量
第1周 0.5ml
第3周 0.5ml
混合高压灭菌
耳缘静脉
最后耳缘静脉 注射加强免疫
耳正中动脉
弗氏完全佐剂
用人IgG与不完全佐剂按 1:1体积比加入，卡介苗的 终浓度为1~20 mg/ml。
耳缘静脉采血
2 3
1 4
6 5
抗体效价滴定
推成油包水制剂
注意事项
选择合适的动物种属及品系；良好的抗原质量 和合适的剂量；合理的修饰；适当的佐剂、免疫强 度和免疫途径，有助于提高免疫效果；动物的健康 状况等。
第一单元
综合性实验
实验一 多克隆抗体制备
多克隆抗体概念
抗原通常是由多个抗原决定簇组成的，由多种抗原决定簇刺 激机体，相应地就活化多个B淋巴细胞克隆，所产生多个单克隆 抗体（McAb）的混合物，此即为多克隆抗体。
实验原理
当抗原刺激机体免疫系统，B细胞在T细胞的辅助下（多数 抗原需要T细胞参与），识别抗原的B细胞表位（T细胞识别T细 胞表位）后，T细胞和B细胞均活化，由B细胞针对抗原的B细胞 表位产生的能与抗原B细胞表位结合并发挥生物学功能的免疫球 蛋白。
实验讨论
单克隆抗体的优点和可能的应用范围。
江苏大学 邵启祥
实验三
酶标抗体的制备
实验原理
NaIO4是强氧化剂，能将HRP的甘露糖部分（与酶活性无 关的部分）的羟基氧化成醛基，然后与抗体的氨基结合， 形成酶标抗体，反应式如下：
实验器材和材料
试剂：抗人IgG抗体、HRP、0.30 M pH 8.1 NaHCO3 （现用现配）、1 %氟二硝基苯（FDNB）无水乙醇溶 液、0.08 M NaIO4、0.16 M乙二醇溶液、0.10 M pH 9.5 NaHCO3缓冲液、0.01M碳酸盐缓冲液、氢化硼钠 （NaBH4）、0.15M pH7.4 PBS缓冲液、pH7.8饱和硫酸 铵溶液及半饱和硫酸铵溶液和萘氏试剂。 仪器：搅拌器、分光光度计、普通低速冷冻离心机和高 速冷冻离心机。 材料：透析袋，大、小烧杯，试管，吸管等。
器械：细菌接种环、16号钢质注射针头（或7号留置针）、 注射器三通阀、5ml无菌玻璃注射器、兔子固定架，灭菌 三角烧瓶（200 ml）和烧杯（200 ml）、平皿（直径9 cm） 等。 其他：酒精棉、脱脂棉、塑料放血管、纱布、800ml细菌 培养用克氏培养瓶，标准麦氏比浊管和50ml圆底进口离心 管或100~500ml细菌离心瓶。 仪器：37℃恒温培养箱、37℃恒温气浴（或水浴）摇床、 低温高速大容量离心机（水平转子，至少能满足50ml离心 管的离心）。
实验方法
抗颗粒性抗原抗体制备程序
伤寒沙门菌O901、H901 O901、H901菌液
耳缘静脉注射（1×109/ml ） 18~24h后，用无菌生 理盐水菌苔洗下接种
免疫时序 免10天 1.5ml 第15天 2ml 第20天 2.5ml
18~24h后，分别用无菌0.5%石灰 酸盐水和甲醛生理盐水洗下菌苔
无菌试验（37℃恒温摇床）
耳正中动脉采血
大容量低温高速离 心机离心收集细菌 试管凝集试验鉴定
抗可溶性抗原抗体制备程序
弗氏不完全佐剂
背部多点注射
羊毛脂1份 + 石腊油5份
免疫时序 免疫剂量 第 1周 1ml， 200μg 第 3周 1ml 100μg 第 4周 1.5ml 150μg 第 5周 2ml 200μg
实验原理
采用杂交瘤技术将抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨 髓瘤细胞通过融合剂融合，杂交瘤既保持 B淋巴细胞分 泌抗体的能力，又获得了骨髓瘤细胞无限增殖的能力， 最后通过筛选获得针对某一抗原决定簇的抗体，此即为 McAb。
实验器材和材料
细胞：SP2/0细胞系、人“O”型红细胞悬液（红细胞反 复 洗涤直至不溶血为止，浓度调整至2×107/ml）。 试剂： 50 %（W/V）的聚乙二醇（PEG 1500）、 100×HT母液、100×A母液、琼脂糖、降植烷、二甲基 亚砜、Tris碱、盐酸、硫酸铵液、DEAE-纤维素、 RPMI-1640培养液和新生牛血清。 动物：采用和杂交瘤同源的8周龄的Balb/c健康小鼠，鼠 龄在；另备经产母鼠3~5只。