Cisbio成功开发出”一步法”定量检测人血清白蛋白(Albumin)
茜素红S标记分光光度法测定微量人血清白蛋白
茜素红S标记分光光度法测定微量人血清白蛋白赵丹华【摘要】研究有机染料茜素红S（alizarin red S，ARS）与牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）、人血清白蛋白（human serum albumin，HSA）的结合反应，选择实验的最佳条件：PH=5．10的B—R缓冲溶液3．00mL，4．00mL5．0×10-4mol／L茜素红S溶液．反应20min后，体系的吸光度很稳定，在入λ=420nm处有最大吸收峰，并且随着牛血清白蛋白（BSA），人血清白蛋白（HSA）的加入，茜素红S的吸收峰下降．因此以茜素红S为标记物，根据其在波长420nm处吸收峰下降的程度，可用于定量测定BSA和HSA．测量BSA的线性响应范围为0～32．0μg／mL，相关系数为0．9987，测量BSA的线性响应范围为0～28．0μg／mL，相关系数为0．9968．该方法具有较高的灵敏度和选择性，用于实际试样分析，实验结果令人满意．%The protein is a kind of important biological macromolecules in the human body. It is not merely very important and essential for maintaining the life. A acidic dye has been applied to the assay of proteins in the fields of medicine and life science. The reactions of human serum albumen （HSA） and bovine serum albumen （BSA） with alizarin red have been studied. Both BSA and HSA can form orange complexes, which decrease the absorbance. The optimum conditions of complex reactions of a new chromogenic reagent alizarin red with BSA and HSA was studied. The method was used in the photometric determination of BSA and HSA. In a buffer medium of pH 5.10, alizarin red reacts with BSA and HSA to form a complex having its absorption maxima at 420nm and the reactionssteady with 80 rain. Beefs law is obeyed in the concentration in the range of 0-32.0 μg/mL（r=0. 998 7） for BSA and 0-28.0μg/mL（r= 0. 996 8） for HSA. The BSA and HSA in human serum samples were determined, and the result is satisfactory.【期刊名称】《广东第二师范学院学报》【年(卷),期】2011(031)005【总页数】5页(P51-55)【关键词】茜素红S;牛血清白蛋白;人血清白蛋白;分光光度法【作者】赵丹华【作者单位】广东第二师范学院化学系,广东广州510303【正文语种】中文【中图分类】O657.32人体血液中的白蛋白是形成血浆渗透压的主要成分，它在维持体液的正常分布，保持血容量及血压等方面起着重要作用.同时，血浆白蛋白对人体具有营养作用.现已报道将它作为人体营养健康、疾病诊断和疗效观察的重要指标［1］.测定研究血浆中白蛋白的含量，可对人体健康和生命科学的研究提供重要的科学依据.蛋白质含量的测定方法很多，有荧光光度法［2］以及近年来新兴的共振光散射法［3］、分光光度法［4］等.目前，研究测定核酸较灵敏和较常用的手段是荧光光谱法.由于DNA内源荧光很弱，直接用其天然荧光来测定DNA受到了限制.共振光散射（RLS）法近年来得到了广泛的研究与应用.童沈阳等［5］首次将其作为一种新的高灵敏度方法应用于核酸的测定.肖锡林等［6］建立了纳克级核酸的分析方法.其中染料结合分光光度法具有简便、快速、经济、准确的特点，因而在蛋白质的定量分析中较为常用.近年来，利用某些染料作为标记物，如：乙基紫［7］、维多利亚蓝B［8］等测定DNA，取得了较好的效果.如维多利亚蓝的灵敏度高，反应快速，操作简便，是目前测定DNA较好的方法.茜素红S是由天然产物中提出的有机物质，其作为光谱探针与生物大分子作用的研究和应用中发现在一定的条件下，茜素红S能与生物大分子在一定的部位结合，生成复合物.本文采用分光光度法研究了以茜素红S作为标记物与牛血清白蛋白、人血清白蛋白的结合反应，发现在3.00 m L p H＝5.10的B-R缓冲溶液中，取5.00 m L 2.0×10-4 mol／L茜素红S，以二次蒸馏水作为参比溶液，随着BSA、HSA浓度的增加，在420 nm处有最大吸收峰，据此建立了一种测定BSA、HSA 的新方法.该方法操作简便，灵敏度高，选择性较好，用于实际样品分析，结果令人满意.仪器：721型可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）；半自动电光分析天平（上海第二分析仪器厂）；p HS-3C型酸度计（上海第二分析仪器厂）；TU-1901双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）.试剂：牛血清白蛋白溶液（BSA上海生物化学试剂公司）、人血清白蛋白（HSA上海文化科技有限公司）各100μg／m L的溶液；5.0×10-4 mol／L的茜素红S （分析纯）溶液；Britton-Robinson（B-R）缓冲溶液.所用其他试剂均为分析纯，实验用水为二次去离子水.于25 m L比色管中依次加入p H＝5.10的3.00 m L B-R缓冲溶液，4.00 m L 5.0×10-4 mol／L茜素红S，一定量的标准BSA溶液，稀释至刻度，静置20 min，于λ＝420 nm处读取吸光度A值；不加入BSA，按上述步骤做空白，测定吸光度A 0值.以二次去离子水作为参比溶液，测定吸光度值.令ΔA＝A 0-A，以ΔA作为测定BSA的信号响应.在选定的B-R缓冲溶液（p H＝5.10）的体系中，茜素红S与BSA相互作用，其UV-Vis光谱见图1.由图1可知，BSA溶液和茜素红S在420 nm处有最大吸收峰，且由于茜素红S与BSA的相互作用，导致体系吸光度发生变化，即随BSA浓度的增加，体系的吸光度显著下降，并且在420 nm处吸收峰的灵敏度最大.所以本文选择420 nm作为测定波长.2.2.1 最佳p H值的选择用不同PH值的B-R缓冲溶液作酸度影响实验，在B-R缓冲介质中不同p H值对体系复合物的影响.按照实验方法取4.00 m L 5.0×10-4 mol／L茜素红S；1.00 m L 100.0μg／m L BSA；3.00 m L B-R缓冲溶液.结果表明，当p H＝5.10时，体系的吸光度ΔA变化最大且最稳定，实验选择p H＝5.10的B-R缓冲溶液作为最佳酸度.2.2.2 茜素红S用量的选择在p H 5.10的B-R介质中，室温条件下研究了茜素红S的用量对实验的影响，实验表明，随着茜素红S用量的增加ΔA先变大后变小.当茜素红S的用量为4.00 m L时，ΔA最大，且体系稳定性好，本实验选择茜素红S用量为4.00 m L.2.2.3 缓冲溶液用量的选择在4.00 m L 5.0×10-4 mol／L茜素红S，p H 5.10的B-R介质中，在室温条件下研究了缓冲溶液的用量对实验的影响，结果表明，当缓冲溶液用量为3.00 m L 时，ΔA最大且比较稳定.本实验选择缓冲溶液用量为3.00 m L.2.2.4 放置时间选择在p H 5.10的B-R介质中，在室温条件下研究了时间对反应的影响，实验结果（如图2）表明该体系的反应速度很快，20 min后ΔA可达到稳定，并在80 min 内ΔA不变，本实验选择20 min后测定体系吸光度.2.2.5 工作曲线的绘制在确定的最佳实验条件下，改变BSA、HSA的加入量，绘制测定BSA、HSA的工作曲线，当BSA、HSA的浓度分别为在0～32.0μg／m L、0～28.0μg／m L时，体系的吸光度与BSA、HSA浓度呈良好的线性关系.其线性回归方程及相关系数分别为A＝0.372-0.006C，r＝0.9987和A＝0.373-0.005C，r＝0.9968.本实验具有较宽的线性范围，用BSA作为标准蛋白质的代用标准进行人血清白蛋白的测定.2.2.6 其他物质的干扰在确定的最佳实验条件下，当体系中含有12.0μg／m L蛋白质时，研究了各种金属离子、蛋白质及氨基酸等干扰因素对测定准确性的影响，结果见表1.试验结果表明，各种常见金属离子、及氨基酸等对BSA的测定基本没有影响.2.2.7 温度的影响由于高温下BSA、HSA会变性，所以本实验只讨论了10～40℃范围内BSA、HSA与茜素红S的反应，结果表明，在室温范围内ΔA很稳定，本实验可在室温下进行.在确定的最佳实验条件下，对人血清样品（淮北市人民医院提供）总蛋白量进行测定，获得较好的结果.结果见表2.基于茜素红S与BSA、HSA结合形成有色化合物而建立一种测定蛋白质含量的新方法，在BSA和HSA浓度分别为0～32.0μg／m L和0～28.0μg／m L内，吸光值与BSA、HSA的浓度呈良好的线性关系，该方法用于实际样品的测定，结果令人满意.【相关文献】［1］杨忠东，郭伟明，沈菲，等.检测人血清白蛋白制品中微量铝荧光分析法的建立［J］.中国生物制药品杂志，2004，17（5）：316-317.［2］宋功武，成耀鹏，何治柯，等.小蘖碱与核酸作用荧光光谱及其分析应用［J］.分析化学，1999，27（1）：44-46.［3］达毛拉·杰力里，黄承志.酚藏花红与DNA作用的共振光散射特征及微量DNA的光散射测定［J］.分析化学，1999，10（27）：1204-1207.［4］胡秋娈，李克安，童沈阳，等.氟磺酸酚与蛋白质作用的分光光度研究［J］.分析化学，1999，27（2）：166-169.［5］迟燕华，李克安，童沈阳.以锌试剂显色法测定蛋白质的研究［J］.高等学校化学学报，1998，19（6）：879-991.［6］肖锡林，王永生，李贵荣，等.甲基胺蓝共振光散射法测定纳克级脱氧核糖核酸［J］.光谱学与光谱分析，2004，2（24）：190-193.［7］李天剑，沈含熙，罗云敬.乙基紫分光光度法测定脱氧核糖核酸［J］.分析化学，1998，11（26）：1372-1375.［8］苏界殊，龙云飞，郑峰.维多利亚蓝B标记分光光度法测定DNA［J］.光谱实验室，2003，20（6）：894-896.。
血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)
血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是,最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理.一般的处理方式:1.常规分离血清,即取血后常温放置,使其凝固,然后3000 rpm 15 min离心,取上清即可。
2.测血清蛋白浓度。
3.用Laemmli buffer（蛋白裂解液）稀释至所需浓度，我一般为5ug/ul.4.加入适量loading buffer，100℃煮5分钟。
注意：有时会出现水煮后，蛋白液变得非常粘稠，这时可以在65℃煮10-20 minutes以替代沸水煮。
PS：对于目标蛋白在血清中含量很低，或者目标蛋白分子量与白蛋白或球蛋白分子量相近的情况下，必烦要去除血清中的白蛋白和/或球蛋白，以下是知名厂商G-Biosciences提供的试剂盒，使用较为简便，同时价格也不贵哦。
美国G-Biosciences-AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒血浆和脑脊髓液等样本中，包含大量的白蛋白，从而封闭掉在二维凝胶电泳中发现和鉴定其他低丰度蛋白的可能。
AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒被设计用来在这种样本中大量去除白蛋白。
这种白蛋白去除方法是基于白蛋白和Cibachron蓝色染料的结合。
AlbuminOUT™被优化从样本中去除人的白蛋白。
AlbuminOUT™使用快速离心柱方法，每个柱子含有0.2ml的染料结合树脂，从而可以结合大于2mg的人白蛋白。
AlbuminOUT™可以从5-50微升人血浆中去除大于98%的白蛋白。
离心柱形式可以在10分钟内去除白蛋白。
高结合力的蓝色染料结合树脂可以从人，猪，羊，狗，兔，大鼠和牛样本中达到瞬间的结合和去除白蛋白。
AlbuminOUT™或许也可以从其他物种中去除白蛋白。
适用于处理25或50个样本。
Figure 1: 2D analysis of whole human serum before (left) and after(right) treatment with AlbminOUT™.产品特点：●从样本中不到10分钟的时间内去除白蛋白●基于白蛋白和Cibachron蓝色染料的结合●每个柱子的结合力大于2mg的人白蛋白●从5-50微升人血浆中去除大于98%的白蛋白应用：从生物学样本比如血浆和脑脊髓液中去除白蛋白产品信息：产品货号产品名称包装786-251 AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒25 Preps 786-251T AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒 4 Preps 786-252 AlbuminOUT™白蛋白去除试剂盒50 Preps。
临床生化检验：3-血清白蛋白测定(溴甲酚绿法)
试剂与器材
R试剂: pH4.15琥珀酸缓冲液 2.4g/L聚氧乙烯十二烷基醚（Brij-35） 溴甲酚绿（BCG） 白蛋白标准液（28g/L） 分光光度计 水浴锅 病人血清
2012春季学期
样品要求
血清，采血后及时分离，避免溶血，血清在2～ 8℃稳定3天。
2012春季学期
操作步骤
取3支试管做好标记，按下表操作：
加入物
血清 蛋白标准液 蒸馏水 R试剂
B
21μl 3ml
S
21μl
3ml
U
21μl 3ml
混匀，37℃孵育1分钟后，在波长630nm处，以B管调零，读取各 管吸光度A。
2012春季学期
数据处理计算
管号 S U
/ L 28 A u As
平均A值
2012春季学期
技术指标
线性范围：5～80g/L,r≥0.99。 精密度：批内CV≤4.0%，批间相对极差＜5%。 准确度：相对误差≤10%。 空白吸光度变化率：波长630nm，光径10mm， 测得试剂吸光度变化率△A/min≤0.5。
2012春季学期
注意事项
1．BCG是一种pH指示剂，变色域为PH3.8（显黄色）～5.4（显蓝绿色 ），因此控制反应液的pH是本法测定的关键。 2．配制BCG试剂也可用其他缓冲液如枸椽酸盐或乳酸盐缓冲液。但以 琥珀酸缓冲液的校正曲线通过原点，线性好，灵敏度高，成为首选推荐 配方。
2012春季学期
血清白蛋白测定（溴甲 酚绿法）
医学检验系临床生化检验教研室
白蛋白生化特性
血清白蛋白（Albumin,Alb） pI4.7 正常人血清Alb含量为35～55g/L,占血浆蛋白的 50%～60%。 生理功能：营养价值
血清白蛋白测定及紫外分光光度计的使用
四、临床意义：
• 1、白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1，通过
计算其比值可以判定肝脏的功能情况； • 2、白蛋白降低，其比值降低或倒置： 慢性肝炎（肝细胞功能降低）、肝硬 化（肝细胞坏死、肝腹水）； • 3、球蛋白大量降低：机体免疫功能降 低。
五、方法学评价
1、操作简单、快速，受干扰因素小 2、线性范围：10～60g/L, 3、RCV＜4%（批内重复测定变异系数） 4、白蛋白的测定方法：有色氨酸含量法、 燃料结合法、电泳法、免疫化学法和电化 学测定法。
10 10
于空白管中加入蒸馏水10 μl，各管充分混匀。
2、分光光度计测定方法：波长620nm， 空白管调零，测定标准管和测定管吸光度 值，按公式计算测定结果。
计算公式：
A样 Байду номын сангаас样 C标 A标
（40g/L）
三、参考值：
总蛋白：62~82 g/L 白蛋白：35~55g/L 球蛋白：20~30 g/L 白蛋白/球蛋白=1.5~2.5/1
六、注意事项
1、应保持PH为3.8 2、BCG与多种蛋白呈颜色反应，及与a-球 蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白结合显色， 但血清中BCG在30秒内与白蛋白的反应最 快，且呈主导地位 3、实验小组分批间隔保温。
溴甲酚绿（BCG）与血清蛋白呈非特异性反 应，但是在反应的30秒钟内溴甲酚绿（BCG）与 白蛋白结合形成蓝色复合物呈特异性反应。因此 反应结束后应立刻比色测取吸光度。
二、测定方法
1、加样： 试管三只
试剂
空白管（B） 标准管（C） 测定管（U） 工作试剂（ml） 2 2 2
标 准 液（μl） 样 品（μl）
血清白蛋白（ALB）的测定 (Assays for Serum Albumin) （溴甲酚绿染色法）
安博灵(人血白蛋白)
【安博灵药物过量】 剂量过大或输注速率过快可能发生循环血容量过多。 一旦出现心血管超负荷的早期临床症状 （头痛、呼吸困难、颈静脉充血） ，或者血压升高、中心静脉压升高和肺水肿时，必须立即 停止输注并仔细监测病人的血液动力学指标。
人血白蛋白价格问题，为什么这么贵？
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价格、优惠
安博灵人血白蛋白主要用于那些疾病的治疗？
【安博灵人血白蛋白适应症】
1.失血创伤、烧伤引起的休克产生的低血容量。 2.脑水肿及损伤引起的颅压升高。 3.肝硬化及肾病引起的水肿或腹水（尤其适用于不能使用 常规脱水剂或者使用常规脱水剂后症状不能减轻的患者）。 4.低蛋白血症的防治（病因：1、营养不良；2、异常丢失， 比如肾病，烧伤；3、某些严重，危及的疾病比如严重创 伤，严重感染，蛋白都从血管跑到组织里了；4、肝功能 异常等。） 5.新生儿高胆红素血症。 6.用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治 疗和成人呼吸窘迫综合征。
1、人血白蛋白必须避光贮藏，温度不超过25℃。不可冰冻。 一旦发现如出现混浊有沉淀，这表明溶液里的蛋白质不稳定或 溶液已被污染，则不能再用。
2、人血白蛋白是玻璃瓶包装，属于易碎品，因此如果瓶子 有裂纹、瓶盖松动、过期失效等情况，就千万不能够使用。
3人血白蛋白开启后，应一次输注完毕，不得分次或给第二 人输用； 4输注过程中如过患者感到有不适反应，应立即通知医生停 止输用； 5有明显脱水者应同时补液； 6.人血白蛋白不能与血管收缩药合用；但可与葡萄糖注射液 或盐水合用。肾病患者使用人血白蛋白时不宜用生理盐水稀释。
药师温馨提示
【安博灵人血白蛋白使用禁忌】
对白蛋白有严重过敏者禁止使用人血白蛋白治疗。
【以下患者使用要格外小心】
临床医学检验临床免疫：免疫标记技术(题库版)
临床医学检验临床免疫：免疫标记技术（题库版）1、单选分离结合态与游离态放射性标记抗原不完全时会增加（）A.特异性结合量B.非特异性结合量C.敏感度D.精确度E.反应速率正确答案：B2、单选要定量检（江南博哥）测人血清中的生长激素，采用的最佳免疫检测法是（）A.免疫荧光法B.免疫酶标记法C.细胞毒试验D.放射免疫测定法E.补体结合试验正确答案：D3、单选瑞典科学家A．Tiselius首先利用U形管建立移界电泳法的时间是（）A.1920年B.1930年C.1937年D.1940年E.1948年正确答案：C4、单选在ELISA中，不是ELISA的反应过程，但却是决定试验成败的关键的是（）A.温育B.洗涤C.加样D.结果判断E.做阴阳性对照正确答案：B5、单项选择题钩状效应是指用ELISA一步法测定标本中待测抗原时，抗原浓度过（），实测值偏（）的现象，极易造成假阴性。
A.低，高B.高，高C.高，低D.低，低E.高，不变正确答案：C6、单选荧光寿命指的是（）A.荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度所用的时间B.荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而增强到一定程度所用的时间C.非荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而衰减到一定程度所用的时间D.非荧光物质被一瞬时光脉冲激发后产生的荧光随时间而增强到一定程度所用的时间E.以上都不是正确答案：A7、单选下列有关血清中酶活力测定的说法有误的是（）A.可测定底物消耗量B.可测定产物生成量C.需最适pHD.需最适温度E.与底物浓度无关正确答案：E8、单选传统的单向电泳方法最多只能分析的蛋白质种数是（）A.50B.100C.150D.200E.250 正确答案：B9、单选要使荧光强度与荧光物质的浓度成正比，应使（）A.激发光必须很强B.样品浓度应适中C.待测物吸光系数必须很大D.光源与检测器应与样品在同一线上E.液槽厚度要足够厚正确答案：B参考解析：要使荧光强度与荧光物质的浓度成正比，应使样品的浓度适中。
血清清蛋白和球蛋白测定方法及临床意义
血清清蛋白和球蛋白测定方法及临床意义血清清蛋白1.测定方法溴甲酚绿法（BCG法）：溴甲酚绿是一种阴离子染料，在pH4.2的缓冲液中，与白蛋白结合成复合物，溶液由未结合前的黄色变成蓝绿色，在628nm波长的吸光度与白蛋白浓度成正比，经与同样处理的白蛋白标准液比较，即可求得白蛋白的含量。
2.临床意义（1）清蛋白浓度增高：除严重脱水，血浆浓缩而使清蛋白增高外，尚未发现单纯清蛋白浓度增高的疾病。
（2）清蛋白浓度降低：同总蛋白浓度降低医`学教育网搜集整理。
球蛋白的含量及白蛋白与球蛋白的比例1.球蛋白的含量是通过血清总蛋白测定值减去血清清蛋白测值计算出的。
2.临床意义（1）球蛋白浓度增高：临床上球蛋白增高多见于炎症、免疫系统疾病和肿瘤。
1）细菌、病毒、寄生虫引起的急慢性感染：结核病、麻风病、疟疾、黑热病、血吸虫病、病毒性肝炎。
2）自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿热、类风湿性关节炎等。
3）多发性骨髓瘤和淋巴瘤：多发性骨髓瘤是一种单克隆疾病，它是由浆细胞恶性增殖造成的异常高的单一Ig（多见于IgA或IgG0）血症。
淋巴瘤也属单克隆疾病。
（2）球蛋白浓度降低：见于血液稀释、严重的营养不良、胃肠道疾病等。
3.清蛋白与球蛋白比值（A／G比值）A／G比值反映了清蛋白与球蛋白浓度变化的关系。
正常A／G比值为1～2／1.临床上常用A／G比值来衡量肝脏疾病的严重程度，当A／G比值小于1时，称比值倒置，为慢性肝炎或肝硬化的特征之一。
白蛋白的作用为：1.增加血容量和维持血浆胶体渗透压：白蛋白占血浆胶体渗透压的80%，主要调节组织与血管之间水分的动态平衡。
由于白蛋白分子量较高，与盐类及水分相比，透过膜内速度较慢，使白蛋白的胶体渗透压与毛细管的静力压抗衡，以此维持正常与恒定的血容量；同时在血循环中，1g白蛋白可保留18ml水，每5g白蛋白保留循环内水分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能，从而起到增加循环血容量和维持血浆胶体渗透压的作用。
人(Human)白蛋白(Albumin)ELISA试剂盒
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）白蛋白（Albumin）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被白蛋白（Albumin）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白蛋白（Albumin）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
上海笃玛生物科技有限公司试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、15、30、60、120、240ng/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
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Cisbio成功开发出“一步法”定量检测人血白蛋白（Albumin）
作者：鲁延军（luyanjun83@）
白蛋白（又称清蛋白，Albumin）是由肝脏合成，含量丰富的多功能非糖基化血浆蛋白，通常占血浆蛋白质总含量的50%以上。
白蛋白具备多种生理功能，如：维持血浆胶体渗透压、物质的结合
和转运、协调血管内皮完整性、保护血细胞，调节凝血、不激活炎症反应、器官保护、抗氧化，
损伤修复等。
因此，白蛋白是一个重要的新药开发靶点，以及有着重大意义的临床检测指标。
Cisbio China已利用HTRF技术，成功开发出“一步法”，定量检测人血白蛋白。
实验原理
该方法是采用夹心结合分析法。
分别在夹心配对的两个抗人血白蛋白抗体上标记能量供体荧光素（Eu/Tb Cryptate）和能量受体荧光素（XL665/d2），用人血清白蛋白作为标准品，制作标准曲线。
在384孔微孔板中加入10 uL样品或标准品，再加入两个检测抗体各5 uL，孵育2小时，即可上
机读数。
原理示意图
实验结果
Albumin标准曲线
稳定性测试 Z值测试应用实例
稀释线性测试
稀释倍数浓度回算
结论
•该方法操作简单：只需一步加入样品和检测试剂，孵育2个小时即可读值。
•高灵敏度和线性范围：1 ng/ml —— 1000 ng/ml。
•方法非常稳定：孵育从1小时至过夜，Z值为0.87。
•良好的样品稀释线性：R2 > 0.85。