酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化
酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化
酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化郭丽芸;刘毅;贾晓娟;李兆兰;焦庆才【期刊名称】《茶叶科学》【年(卷),期】2006(26)1【摘要】将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用本实验室筛选的有较高氨基酰化酶活性的真菌刺孢小克银汉霉9980(Cunnighamella echinulata 9980)对DL-茶氨酸进行拆分并对拆分条件进行摸索.结果表明:反应最适温度50℃,最适pH7.0,底物浓度0.5mol/L,湿菌体量4g/100 ml,拆分时间30h,拆分率可达92%.产物经JK008阳离子交换树脂氨性柱分离,L-茶氨酸收率84.3%,[α] =8.1(c＝2,H2O), 符合JP2000药典.【总页数】6页(P31-36)【作者】郭丽芸;刘毅;贾晓娟;李兆兰;焦庆才【作者单位】南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093;南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093【正文语种】中文【中图分类】Q93【相关文献】1.DL-苯丙氨酸的酶法拆分研究 [J], 何仕国;俞一军;许文松2.固定化米曲霉氨基酰化酶拆分DL-茶氨酸 [J], 吴晓燕;刘茜;焦庆才3.柱前衍生化高效液相色谱法测定酶法拆分的DL-半胱氨酸含量 [J], 段静静;彭佳敏;曹美荣;李鸣;侯洁4.酶法拆分DL-β-乙酰硫基α-甲基丙酸 [J], 高向东;顾炎;姜林海;冷渊;关阳5.固定化细胞酶法拆分DL-精氨酸 [J], 刘均忠;蒋丽丽;沈俞;刘茜;焦庆才因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
固定化细胞酶法拆分N-乙酰-D,L-3-甲氧基丙氨酸
丙氨酸 的最佳工艺条件为 ｐ ７ ０ 反应温度 ５ Ｈ＝ ． 、 Ｏ℃及底物浓度 ５０ｍｎｌＬ ０ ｍｏ Ｌ的 ｃ “和 Ｍｇ ０ ｒ ／ ．１ ｏ ｌ ／ ｏ “对氨
基 酰化 酶 有 显 著 激 活 作 用 ， ｕ 和 ｚ 对 酶 促 反 应有 明 显 抑 制 作 用 ．在 最 佳 条 件 下 ，氨 基 酰 化 酶 固定 化 细 ｃ ｎ
１２ ． Ｄ。 ３ 甲氧基 丙氨酸 的 乙酰化 Ｌ－－
称取 ２． Ｌ３甲氧基丙 氨酸 （．０ｔ ！溶 于 １０ｍＬ２ｍｏ ＬＮ Ｏ 的水 溶液 中 ，在冰水 浴条 ３６ｇＤ，一一 ０２ ｏ） ｏ ０ ｌ ａ Ｈ ／
收稿 日期 ： ０９ ｌ—９ ２０ 一１１．
皋 金 项 目 ：国家 技 术 创 新基 金 （ 准 号 ： ２ Ｊ１ －１１ ） 助 ． 批 ０ Ｃ 一３０ —６ 资 联 系 人 简 介 ： 庆 才 ， ，博 士 ，教 授 ，主要 从 事 氨 基 酸及 手 性 药 物 中 间体 研 究 ．Ｅｍ ｉ ｊ ｏ ｃ ｙｈｏｃｍ．ｎ 焦 男 －ａｌ ｉ ｑ＠ ａ ｏ．ｏ ｃ ：ａ
胞对 乙酰一一一 ３ 甲氧基丙氨酸的摩 尔转化率达 ９ ％． ６ 关键词 氨基酰化酶 ； Ｌ３甲氧基丙氨酸 ；固定化细胞 ；手性拆分 Ｄ，一．
中 图分 类 号 ０ ２．１ ６９ ７ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０ ５ － ９ （０ ０ ０ —５０ ） ２ １ ７ ０ ２ １ ）８１６ ４４ ０
１ 实 验 部分
１ １ 仪器 与试剂 ．
恒温培 养箱 （ 上海跃 进 医疗 器械一 厂 ） ＨＨ 水浴 振荡 器 （ ； ４ 常州 国华 电器有 限公 司 ） Ｐ Ｓ电子 天 ；２
平 （ 海恒平科 学仪 器有 限公 司 ） Ｅ ０２旋转蒸 发仪 （ 上 ；Ｒ ２０ 上海 亚荣生 化仪器 厂 ） ．
生物酶法合成L-茶氨酸和聚谷氨酸的高效同步分离纯化
生物酶法合成L-茶氨酸和聚谷氨酸的高效同步分离纯化忻寅强;鲁昌燕;王期;浦荷芳;殷志敏【期刊名称】《南京师大学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(034)002【摘要】In enzymatic reaction which was catalyzed by y-GGT, glutamine and ethylamine were used as substrates. The resultant consists of considerable L-theanine and PGA, mixed with multiple impurities include chlofidion, ethylamine,glutamine and glutamate. Through cation-anion tandem exchange chromatography with respective types of resin, L-theanine was effectively separated for further purification, accompanied with acquisition of valuable byproduct PGA. This study provides the evidence for large scale production of L-theanine with recombinant γ-GGT.%利用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GGT,EC 2.3.2.2)催化,以谷氨酰胺和乙胺为底物进行酶反应.反应后主要成分为L-茶氨酸和聚谷氨酸(poly γ-glutamic acid,PGA),杂质有氯离子、乙胺以及少量谷氨酰胺和谷氨酸.通过弱酸性阳离子树脂和弱碱性阴离子树脂双柱交换层析,使L-茶氨酸与聚谷氨酸、乙胺和氯离子分离,得到进一步纯化,同时可以得到极有经济价值的副产品聚谷氨酸.本研究结果为重组大肠杆菌γ-GGT应用于工业化生产茶氨酸提供了一定的参考依据.【总页数】5页(P90-93,99)【作者】忻寅强;鲁昌燕;王期;浦荷芳;殷志敏【作者单位】南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046;南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046【正文语种】中文【中图分类】Q789【相关文献】1.L-茶氨酸生物制备技术和生物功能研究进展 [J], 贲培玲;朱岩岩;殷志敏2.重组大肠杆菌高效催化合成L-茶氨酸 [J], 黄锋;唐云平;黄磊;蔡谨;徐志南3.微生物酶法合成L-半胱氨酸和L-胱氨酸 [J], 刘忠;杨文博;白钢;田旺;金永杰4.制备高效液相色谱分离纯化茶氨酸对照品 [J], 肖伟涛;朱小兰;陈波;姚守拙5.L-茶氨酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用 [J], 张成;耿照玉;赵晓惠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
茶氨酸的制备及应用研究进展)
茶氨酸的制备及应用研究进展江春柳“2孙云1岳鹏翔2(1福建农林大学园艺学院茶学系福建福州3500022大闽食品(漳州)有限公司博士后科研工作站福建漳州 363000) 茶叶含有多种活性成分，其中有三大茶叶提取物已得到公认，即茶多酚(儿茶素)、茶多糖和茶氨酸。
被称为“天然镇静剂”的茶氨酸已成为近几年国际市场上最热销的天然保健产品“新宠”之一。
茶氨酸(L．Theanine)系统命名为：N．乙基吖一L一谷氨酰胺Ⅲ一ethyl—L—glutamine)，是1950年日本学者酒户弥--fig在研究玉露茶鲜爽滋味成分的过程中，从新梢中分离鉴定出的非蛋白特征氨基酸?。
迄今为止，除在茶梅、山茶、油茶、蕈等四种天然植物中检测出其微量存在外，其他植物中尚未发现茶氨酸删。
茶氨酸占干茶总重的l％～2％，占茶树体内游离氨基酸总量的50％以上口1。
自然界存在的茶氨酸均为L型，纯品为白色针状结晶，熔点217～218℃，比旋光度【Q】％=o．70，极易溶于水，其味阈值为0．06％，具有焦糖香和类似味精的鲜爽味，能消减咖啡碱和儿茶素引起的苦涩味，是茶叶中的重要呈味物质，还可以缓解其它食品的苦味和辣味，达到改善食品风味的目的u’2。
1。
1茶氨酸的制各方法自然界中L．茶氨酸含量极少，近20年来对茶氨酸的制备开发得到了茶学、食品、精细化工及制药等领域众多研究者的关注，并通过各种途径制备和生产茶氨酸。
茶氨酸的主要制备途径有：化学合成法、微生物发酵制备法、植物组织培养法和天然茶氨酸的提取分离法。
1．1化学合成法化学方法合成茶氨酸，已有大量的研究报道和专利发表，比较成熟的主要有以下三种：(1)L．谷氨酸加热脱水生成L一吡咯烷酮酸，加铜盐后，与无水乙胺反应，最后进行脱铜反应生产L-茶氨酸。
谷氨酸的吡咯烷酮化法采用无水乙胺(沸点为17℃)为原料，在高压条件下合成茶氨酸，对生产设备、安全性都提出很高要求，且反应时间长。
(2)用N．取代的L．谷氨酸酯的乙胺解反应产生N．取代L．茶氨酸，再脱除保护基获得L一茶氨酸。
酶的提取和分离纯化-PPT课件
2.压力差破碎法
通过压力的变化使细胞破碎。常用的有高压冲 击、突然降压和渗透压差法等。
（1）高压冲击法是在结实的容器中装入菌体 细胞和冰晶、石英砂等混合物，用活塞或冲击 锤加高压冲击之，使细胞破碎。冲击压力可达 每平方厘米几百至几千kg。
15
Manton-Gaulin homogeniser valve
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11.5.1 根据溶解度不同进行的纯化
盐析法 有机溶剂沉淀法 共沉淀法 选择性沉淀法 等电点沉淀法 液液分离法
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一、盐析法
盐析法是最古老的，但也是目前仍广泛采用 的方法。
盐析法根据的原理是：球蛋白在低盐浓度的 溶液中，溶解度随盐离子强度升高而增大， 表现“盐溶(salting in)”的特性。但是当盐浓 度继续升高，并超过某一上限时，其溶解度 又会先后以不同速度下降，分别“盐析 (salting out)沉淀析出。盐析纯化法就是根据 酶和杂蛋白在高盐浓度的溶液中溶解度差别 差别而建立的一种纯化方法。
此外可通过加入噬菌体去感染细胞，或通 过电离辐射等方法，使细胞自溶。
24
丙酮干粉的制备
破细胞等处理后可将材料制成丙酮干粉(acetone powder)，一般程序是：
先将材料粉碎、分散，然后在0℃以下的低温条件 下，加入5~10倍预先冷至约-20 ℃的丙酮，迅速 搅拌均匀，随即过滤，最后低温干燥，研磨过筛。 丙酮处理一方面能有效地破坏细胞壁，另一方面 有利于除去大量的脂类杂质，同时还能使某些膜 结合酶易于溶解。此外，丙酮干粉含水量低，便 于保存。
6
酶分离纯化的工艺流程设计
设计时需要考虑的因素：
酶源材料 前期工艺过程 产品对纯度的要求 酶存在的状态 设备条件 动力、原料成本及工时费用
茶氨酸提取工艺
茶氨酸提取工艺茶氨酸是茶树的特有成分之一,是茶叶的特征氨基酸,含量为干茶重量的1%～3%。
近年来的研究发现,茶氨酸具有抑制咖啡碱引起的兴奋、舒缓神经、降血压和增强免疫力等多种保健及药用功能,开发应用前景广阔。
目前通过酶法合成生产的茶氨酸,价格昂贵;用化学合成生产的茶氨酸的安全性还有待验证。
从茶叶中直接提取茶氨酸由于它来源于天然产物,有着较好的安全性。
调查发现,茶多酚生产企业的工业废液中含有约2%左右的茶氨酸,本方法研究了从茶多酚工业废液中提取纯化茶氨酸的工艺。
1.材料与方法1.1原料与试剂茶多酚工业废液由浙江东方茶业科技有限公司提供;壳聚糖(食品级,使用时用1%HAc配成1%的溶液)购自澳兴生物科技公司;大孔吸附树脂、阳离子交换树脂732购自安徽皖东化工厂;茶氨酸标样购自Sigma公司;2,4二硝基氟苯(DNFB)购自Merck公司;其余试剂均为分析纯。
1.2仪器设备BuchiR-126旋转蒸发仪、ShimidzuUV-2550分光光度计、Orinon818酸度计、Waters液相色谱仪、Eppendorf5810R高速离心机、YZ1515恒流泵(保定兰格恒流泵有限公司)、BSZ-100分部收集器(上海沪西分析仪器厂)、玻璃色谱柱(Υ20×200mm)2．实验步骤试验方法采用茶多酚工业废液作为原料,经絮凝、吸附、阳离子树脂交换和重结晶等工艺步骤来分离纯化茶氨酸。
具体方法如下:2.1絮凝实验在烧杯中加入一定浓度的茶多酚工业废液,用1mol/L稀盐酸调节pH值。
在搅拌下缓慢加入絮凝剂,使其完全混合均匀,然后慢速搅拌养絮,直至絮凝反应结束。
以溶液的吸光值(O.D650)的变化及茶氨酸的回收率作为絮凝效果评价指标。
2.2吸附实验取10mL吸附材料于三角瓶中,加入待处理液50mL,水浴摇床中平衡2h,过滤分离去除吸附剂,取清液。
测定吸附前后溶液中茶氨酸及多酚等物质的含量,计算吸附材料的杂质吸附率及茶氨酸的保留率。
L-茶氨酸新型酶法制备及其催化工艺优化(英文)
L-茶氨酸新型酶法制备及其催化工艺优化(英文)李加友;郭丽芸;焦庆才【期刊名称】《中国生物工程杂志》【年(卷),期】2007(27)10【摘要】L-茶氨酸是茶叶中游离氨基酸的主要组成部分,关于其良好的生理活性已有广泛报道。
首次报道了来源于Cunnighamell aechinulata9980的L-氨基酰化酶用于高光学纯度的L-茶氨酸的酶法制备。
该酶在pH6.5,底物N-乙酰-DL-茶氨酸浓度为50mmol/L,且有40mmol/LCoCl2时催化效果较好。
结果表明,在上述条件下,50℃作用12h得L-茶氨酸22.5mmol/L,转化率90%。
【总页数】5页(P34-38)【关键词】L-茶氨酸;N-乙酰-DL-茶氨酸;Cunnighamella;echinulata;L-氨基酰化酶;光学拆分【作者】李加友;郭丽芸;焦庆才【作者单位】嘉兴学院生物与化学工程学院;南京大学医药生物技术国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q55【相关文献】1.PP-R聚丙烯热水管生产技术/酶法生产L-苯丙氨酸技术/大豆异黄酮生产技术/多糖生物钙剂/L-乳酸生产技术/双氯灭痛合成工艺/莼菜多糖的提取分离技术/L-苹果酸生产新工艺/毛发水解提取L-胱氨酸/用膨润土生产白炭黑新技术/ 汽车塑料燃油箱专用料 [J],2.L-丙氨酸催化加氢制备L-氨基丙醇反应优化 [J], 许伟翔;马磊3.生物酶法合成L-茶氨酸和聚谷氨酸的高效同步分离纯化 [J], 忻寅强;鲁昌燕;王期;浦荷芳;殷志敏4."一锅双酶"法制备L-天冬氨酸的工艺条件优化 [J], 刘祥涛;张瑞;冯进辉;仪宏;吴洽庆;朱敦明;马延和5.固定化酶法拆分制备L-苯丙氨酸的工艺研究 [J], 黄兴中;于文喜;杨桂珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种从酶催化反应中提取纯化茶氨酸的方法[发明专利]
![一种从酶催化反应中提取纯化茶氨酸的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3e4f279dc67da26925c52cc58bd63186bceb92fa.png)
专利名称：一种从酶催化反应中提取纯化茶氨酸的方法专利类型：发明专利
发明人：杜阳吉,许锦雄,王钰佳,曾伟山,林杰,蓝方存,陈胜城申请号：CN202111368881.9
申请日：20211118
公开号：CN114213276A
公开日：
20220322
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种从酶催化反应中提取纯化茶氨酸的方法，包括以下步骤：(1)将酶催化生成茶氨酸的反应液，经调节pH值、真空抽滤及脱色后得到澄清液；(2)将澄清液过滤得滤液，将滤液蒸干得蒸干物，将蒸干物采用乙醇水溶液进行搅拌萃取，然后热过滤，将滤液蒸干，得到低纯度茶氨酸；(3)将低纯度茶氨酸采用葡聚糖凝胶层析纯化，洗脱液经蒸干，得到粗品茶氨酸；(4)将粗品茶氨酸经重结晶处理后浓缩、干燥，制得精品茶氨酸。
该方法使用的溶剂种类少，工艺简单便于操作，适合产业化，得到的茶氨酸的产品的安全性能更高。
申请人：翁源广业清怡食品科技有限公司,广东广业清怡食品科技股份有限公司
地址：512627 广东省韶关市翁源县翁城镇翁城工业园
国籍：CN
代理机构：广州知友专利商标代理有限公司
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酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化
作者：郭丽芸， 刘毅， 贾晓娟， 李兆兰， 焦庆才， GUO Li-yun， LIU Yi， JIA Xiao-juan ， LI Zhao-lan， JIAO Qing-cai
作者单位：南京大学医药生物技术国家重点实验室,江苏,南京,210093
刊名：
茶叶科学
英文刊名：JOURNAL OF TEA SCIENCE
年，卷(期)：2006,26(1)
被引用次数：4次
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本文链接：/Periodical_cykx200601005.aspx。