定性测定的性能验证PPT课件
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临床免疫定性检测的性能验证
9,500
500
4,500
85,500
95%
1%感染率
检出(+) 未检出(－)
950
50
4,950 94,050
95%
95%
95%
950/[950+4950]=16% 9500/[9500+4500]=67.9%
85500/[85500+500]=99.4 94050/[94050+50]=99.9% %
样本的采集和保存：采集时间、保存方式 等必须保证一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI)
路漫漫其悠远
性能验证前的准备
应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、
试剂的处理和储存、合理的检测方案、对结 果合理的解释以及系统的质量控制等。 制定质量保证计划 确定患者样本的数量及强弱（评价重复性） 确定比较的方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
路漫漫其悠远
性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书 国际和／或国际标准
路漫漫其悠远
性能验证前样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴 性和阳性。
筛查试验：临床上筛查方法通常用于检测整个人
群（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况 。例如对需输血患者样本做HIV血清学试验。
定性试验质控 PPT课件
诊断试验
用来评价具有可疑给予特征（如一种感染 的特殊类型）的人。
敏感性和特异性应该处于相对平衡状态。 如果此特征对治疗或预后考虑很重要，那 么敏感性要尽可能的高；而且后续已有准 确的确证试验，可以不需要高的特异性。
感染性疾病的大多数临床试验是用于诊断。
确证试验
获得筛选或诊断试验反应性结果后，增加
临床化学仪器精密度分析（ EP5-A2 ） 定量分析方法线性评估（EP6-A） 临床化学中干扰的测试（ EP7-A2） 用患者样品进行方法对比及偏倚评估（EP9-A2） 临床实验室定量分析方法的初步评估（EP10-A3） 体外诊断实验室要求的统一（EP11-A） 定性分析性能的评价协议（EP12-A2） 实验室统计-标准差（EP13-A） 基质效应的鉴别和量化（EP14-A2） 体外诊断产品精密度、准确度的使用证实（EP15） 定量分析方法的校准确认（EP16） 检测限的评估：评价、确认和论证（EP17-A）
I/LA23-A Assessing the Quality of Immunoassay Systems: Radioimmunoassays and Enzyme,Fluorescence, and LuminescenceImmunoassays; Approved Guideline
I/LA30-P Immunoassay Interference by Endogenous Antibodies；Proposed Guideline
I/LA6-A Detection and Quantitation of Rubella IgG Antibody: Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test Products, Specimen Handling, and Use of Test Products in the Clinical Laboratory; Approved Guideline
定性实验方法学验证ppt课件
甲肝IgM定性项目方法学验证.doc
2008年3月优生仪器比对.doc
Method validation of the qualitative test
参考资料:
1.《定性实验方法学验证管理程序》KM-MP0301.20 2. User Protocaln for Evaluation of Qualitative Test Performance Performance;Approved Guideline，NCCLS-EP12-A
验证的内容: 准确度(Accuracy) 精密度(Precision) 诊断敏感性（sensitivity of diagnosis） 特异性（specificity）:
同一项目不同检测方法或仪器的比对 CUTOFF值验证
Method validation of the qualitative test
Method validation of the qualitative test
二.精密度验证:
1.批内精密度:同一份样本在同一批次内平行重复检测 10次.然后计算均值,SD和CV. 2.批间精密度:同一份样本连续检测10天,每天平行检 测双孔.然后计算均值,SD和CV.
Note:1.用S/CO比值进行统计计算.
↓
随机每8份分成一组
↓
两种方法(或两台仪器)每天平行检测一组样本
↓
将所有检测结果汇总
↓
Kappa检验,评价一致性
Method validation of the qualitative test
补充说明:关于CUTOFF值验证 定量实验但是报告定性结果的才需要做 CUTOFF值验证.(比如PCR室的乙肝 DNA定性).
定量项目分析性能验证PPT课件
数据处理
• 数据有效性判断 随机误差、操作失误、标本问题等等； 产生的有问题数据若参与计算，会使结果判读有较大偏差； 根据统计学方法找出离群值，剔除； 剔除离群值后应找出问题原因并改正，缺少的标本数应补全。
• 数据计算 借助Excel工具，行标和EP文件中都给了完整的数据统计表格形式。
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结果判读——精密度
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验证实验
• 校准：按照日常操作校准频率进行校准 or 每个检测批次进行校准 • 质控：闭环质控，每日实验样本检测前做室内质控，实验样本检测
结束后也应做室内质控。当日质控需均在控当日实验数据才有效。 • 样本检测：尽可能接近日常样本检测。
《标准操作流程— 检测系统定量实验分析性能评价/验证》
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抽样误差——确认限
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结果判读——精密度
• 确认限的计算 需要消除由于抽样误差等造成的统计学差异
1. 自由度v的计算以及假拒绝率α的选择
自由度是有关样本数的数据；假拒绝率选择后得到的为（1-α/1）区间 ，α一般取5,得到的即为95%置信区间。
2. C值的确定
由确定的自由度v和α查表得到。
3. 确认限计算
准备工作
以TSH做精密度实验为例做样本准备： 1. 说明书中声明，TSH的检测范围为0.005-100.0 uIU/mL，TSH的参考范围
为0.27-4.2 uIU/mL，2008年中国甲状腺疾病诊疗指南-甲状腺功能亢进症 诊疗指南中提出甲亢患者TSH一般小于1.0 uIU/mL。故，应挑选1.0 uIU/mL，以及接近参考范围上限4.2 uIU/mL的两水平标本。 2.普通干燥管收集，2-8℃可保存7天；-20℃可保存1个月，不可反复冻融。 3. 一次检测标本用量为50uL，每天需150uL，加上日立杯死腔量100uL，再多 预留一些，则每天至少需要300uL样本，总共需1.5mL。因标本量小，且装在 同一子弹头及日立杯中，在操作过程中应避免不必要的蒸发。（此处计算的是 最少用量，如果标本有富余应多分装一些子弹头）
定性免疫学检验的性能验证与质量控制ppt课件
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分析物浓度接近C50的定性方法精密度试验
ISO15189实验室认可系列培训讲座
进行重复性研究时，理想情况下需绘制在规定条件下候选方 法的整个不精密度曲线，然而具体操作时需要检测的样本数 量较大 可使用一个简单的方法，即为待评价的检测方法建立分析物 的临界浓度，并判定某一特定浓度范围，例如C50±20%，是 否包含了C5-C95区间。 若-20%到+20%浓度范围包含了C5-C95区间，那么20%或距离 C50更远浓度的样本将得到一致的检测结果，即在 C5-C95区 间之外的样本检测结果可认为是精密的，浓度>C95，将持续 得到阳性结果，浓度<C5，将持续得到阴性结果。
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xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
结果判断-4
用该方法检测，C50-20%的样本检测结果一致，C50+20%的样本不一定能得到一致 结果；需要用高于C50更大百分率浓度的样本（如+30%）进行补充试验。
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xx
ISO15189实验室认可系列培训讲座
检出限的验证
检测限（limit of detection）是指检测方法可检 测 出 的 最 低 被 测 量 浓 度 ， 也 称 检 测 低 限 （ lower limit of detection ） 或 最 小 检 出 浓 度 （ minimum detectable concentration），有时也称为分析灵敏 度（analytical sensitivity）。 如前所述，分析物浓度位于C5-C95区间之外（小于 C5或大于C95）时，候选方法对同一样本的重复性检 测将得到相同结果。因此，C95代表了某一试剂可以 测出的最低被测量浓度。
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定性分析调PPT课件
[Cd2+][S2-]=Ksp [S2-]=Ksp/[Cd2+]=7.1×10-23
[H+]=0.31mol/L 。 溶液的酸度不大于0.3mol/L，第二组硫化物都可 以完全沉淀出来。
.
10
第三组用溶度积最小的ZnS来计算，设[Zn2+]
＝0.1mol/L，与之平衡的[S2-]为：
[Zn2+][S2-]＝Ksp=1.2×10-23
0.2mol/LHCl。
.
12
（三）铜组与锡组 铜组(IIA)：铅、铋、铜、镉。硫化物属于碱性
，不溶于NaOH、Na2S、(NH4)2S等碱性试剂 锡组(IIB)：砷、锑、锡(IV)、汞。硫化物属于两
性，且酸性更为明显，能溶于上述几种碱性试剂。
本组硫化物与Na2S的反应是：
HgS+S2-＝HgS22As2S3+3S2-＝2AsS33Sb2S3+3S2-＝2SbS33SnS2+S2-＝SnS32-
.
3
2. 检出限量m(μg): 在一定条件下，某鉴定反应所能检出离子
的最小质量，单位：μg，记为m。检出限量 越小，反应越灵敏。又称为质量灵敏度。 3. 两种灵敏度间的换算关系
1:G=m×10-6:V m=V×106/G 表示反应的灵敏度时，要同时指出其最低 浓度和检出限量。
.
4
（二）鉴定反应的选择性 特效反应 在其他离子共存时不受干扰地鉴
过量的浓NaOH，这时只有Cd(OH)2能够沉淀，将 Cd(OH)2以稀的 甘油 —碱溶液洗净，溶于3mol/L HCl中，用水稀释，至酸度约为0.3mol/L，通人
.
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三、第二组阳离子的分析
（铜锡组、硫化氢组）
[H+]=0.31mol/L 。 溶液的酸度不大于0.3mol/L，第二组硫化物都可 以完全沉淀出来。
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10
第三组用溶度积最小的ZnS来计算，设[Zn2+]
＝0.1mol/L，与之平衡的[S2-]为：
[Zn2+][S2-]＝Ksp=1.2×10-23
0.2mol/LHCl。
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（三）铜组与锡组 铜组(IIA)：铅、铋、铜、镉。硫化物属于碱性
，不溶于NaOH、Na2S、(NH4)2S等碱性试剂 锡组(IIB)：砷、锑、锡(IV)、汞。硫化物属于两
性，且酸性更为明显，能溶于上述几种碱性试剂。
本组硫化物与Na2S的反应是：
HgS+S2-＝HgS22As2S3+3S2-＝2AsS33Sb2S3+3S2-＝2SbS33SnS2+S2-＝SnS32-
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2. 检出限量m(μg): 在一定条件下，某鉴定反应所能检出离子
的最小质量，单位：μg，记为m。检出限量 越小，反应越灵敏。又称为质量灵敏度。 3. 两种灵敏度间的换算关系
1:G=m×10-6:V m=V×106/G 表示反应的灵敏度时，要同时指出其最低 浓度和检出限量。
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（二）鉴定反应的选择性 特效反应 在其他离子共存时不受干扰地鉴
过量的浓NaOH，这时只有Cd(OH)2能够沉淀，将 Cd(OH)2以稀的 甘油 —碱溶液洗净，溶于3mol/L HCl中，用水稀释，至酸度约为0.3mol/L，通人
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三、第二组阳离子的分析
（铜锡组、硫化氢组）
定性测定的性能验证--李金明2010最新版
质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。 如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第 二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实 验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不 应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确 定原因并采取纠正措施。 CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;
定 义
阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为 阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%
阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的 样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
编制性能验证的SOP
定义
筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血 清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比 诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查 试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。 尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但 是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性 结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传 播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。
性能验证PPT课件
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性能验证的内容
定量项目验证内容
精密度（Precision）验证（包括批内和总精密度）正确度（Trueness）验证分析测量范围（AMR）验证临床可报告范围（CRR）验证自动稀释（Auto-dilution）验证参考区间（Reference Interval）验证空白限（LOB）验证检出限（LOD）验证定量检测限（LOQ）验证污染携带（Carryover）验证方法学比对（Method Comparison）分析干扰（Interference）性能评价测量不确定度（Measurement Uncertainty）评定
应用准则对方法学性能的通用要求(1)
检验程序需文件化；实验室负责人或指定的人员应在开始即对程序评审并定期评审。评审通常每年一次。评审应文件化。性能验证：定量试验：正确度、精密度、可报告范围、（携带污染率）定性试验：阴性符合率、阳性符合率、重复性、最低检出限等半定量试验：重复性生物参考区间验证及评审：20份健康人标本，生物参考区间的评审还应该有临床医生的参与。评审内容：生物参考区间的来源、针对的人群、生物参考区间验证结果、与临床诊断的符合性等。生物参考区间建立：120份健康人标本
5.3.2.7试剂和耗材-记录
应保存影响检验性能的每一试剂和耗材的记录，包括但不限于以下内容： h) 证实试剂或耗材持续可使用的性能记录。
微生物专业要求：5.3.2.3 试剂和耗材验收试验应符合如下要求： （a） 新批号及每一货次试剂和耗材使用前，应通过直接分析参考物质、新旧批号平行实验或常规质控等方法进行验证，并记录；（b） 新批号及每一货次试剂和耗材，如吲哚试剂，杆菌肽，奥普托辛，X、V、XV 因子纸片等应使用阴性和阳性质控物进行验证；（c） 新批号及每一货次的药敏试验纸片使用前应以标准菌株进行验证；（d） 新批号及每一货次的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色）应用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株进行验证；（e） 新批号及每一货次直接抗原检测试剂（无论是否含内质控）应用阴性和阳性外质控进行验证；（f） 培养基外观良好（平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度，试管培养基湿度适宜），新批号及每一货次的商品或自配培养基应检测相应的性能，包括无菌试验、生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验（适用时）、生化反应（适用时）等，应以质控菌株进行验证；（g） 一次性定量接种环每批次应抽样验证。
性能验证的内容
定量项目验证内容
精密度（Precision）验证（包括批内和总精密度）正确度（Trueness）验证分析测量范围（AMR）验证临床可报告范围（CRR）验证自动稀释（Auto-dilution）验证参考区间（Reference Interval）验证空白限（LOB）验证检出限（LOD）验证定量检测限（LOQ）验证污染携带（Carryover）验证方法学比对（Method Comparison）分析干扰（Interference）性能评价测量不确定度（Measurement Uncertainty）评定
应用准则对方法学性能的通用要求(1)
检验程序需文件化；实验室负责人或指定的人员应在开始即对程序评审并定期评审。评审通常每年一次。评审应文件化。性能验证：定量试验：正确度、精密度、可报告范围、（携带污染率）定性试验：阴性符合率、阳性符合率、重复性、最低检出限等半定量试验：重复性生物参考区间验证及评审：20份健康人标本，生物参考区间的评审还应该有临床医生的参与。评审内容：生物参考区间的来源、针对的人群、生物参考区间验证结果、与临床诊断的符合性等。生物参考区间建立：120份健康人标本
5.3.2.7试剂和耗材-记录
应保存影响检验性能的每一试剂和耗材的记录，包括但不限于以下内容： h) 证实试剂或耗材持续可使用的性能记录。
微生物专业要求：5.3.2.3 试剂和耗材验收试验应符合如下要求： （a） 新批号及每一货次试剂和耗材使用前，应通过直接分析参考物质、新旧批号平行实验或常规质控等方法进行验证，并记录；（b） 新批号及每一货次试剂和耗材，如吲哚试剂，杆菌肽，奥普托辛，X、V、XV 因子纸片等应使用阴性和阳性质控物进行验证；（c） 新批号及每一货次的药敏试验纸片使用前应以标准菌株进行验证；（d） 新批号及每一货次的染色剂（革兰染色、特殊染色和荧光染色）应用已知阳性和阴性（适用时）的质控菌株进行验证；（e） 新批号及每一货次直接抗原检测试剂（无论是否含内质控）应用阴性和阳性外质控进行验证；（f） 培养基外观良好（平滑、水分适宜、无污染、适当的颜色和厚度，试管培养基湿度适宜），新批号及每一货次的商品或自配培养基应检测相应的性能，包括无菌试验、生长试验或与旧批号平行试验、生长抑制试验（适用时）、生化反应（适用时）等，应以质控菌株进行验证；（g） 一次性定量接种环每批次应抽样验证。
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定性测定系统/试剂 性能验证
特异性 敏感性 确性 抗干扰能力
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性能验证的合格标准从何而来？
试剂盒说明书
国际和／或国际标准
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什么时候进行性能验证
筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血清 学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有高 敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比诊 断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查试 验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。
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“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的试 剂检测结果的影响（100,000人）
结果
10%感染率
1%感染率
检出 (+) 未检出 (－) 检出 未检出(－) (+)
+
9,500
500
950
50
－
4,500
85,500
4,950 94,050
敏感性
95%
95%
(TP/[TP+FN])
尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实， 但是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴 性结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液 传播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。
CLSI EP12-A2 User Protocol for . Evaluation of Qualitative Test 24 Performance; Approved Guideline
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定义
确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就是 一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验之后 的确认试验。
批内变异的验证 批间变异的验证
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32
重复性验证的质量控制
质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。
如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或 第二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。 实验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内 不应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确 定原因并采取纠正措施。
定性测定的性能验证
李金明 卫生部临床检验中心
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1
临床定性检验的报告方式
有反应、无反应、阳性、阴性 是、不是（或有、没有）
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“性能验证”？
ISO15189实验室认可的要求？ （任务？）
实验室检测临床应用的必需？
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3
高速列车性能验证
空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂的零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……
使用新的检测试剂或系统时 更换检测试剂或系统时
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临床实验室为什么更新检测试剂或 系统？新的试剂或系统
更易于操作 更高的检测性能 更经济 更能满足实验室测定要求
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性能验证前的准备
应熟悉待验证的试剂或系统 进行必要的培训，包括样本的处理和储存、试
剂的处理和储存、合理的检测方案、对结果合 理的解释以及系统的质量控制等。
样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必 须保证一致性。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
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重复性验证
CUT-OFF的重复性（同时包含 测定下限的验证）
制定质量保证计划
确定患者样本的数量及强弱（评价重复性）
确定比较的方法
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
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编制性能验证的SOP
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定义
定义
诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具 有很好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还 进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可 以稍微降低。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
特异性
95%
95%
(TN/[TN+FP])
阳性预示值 TP/[TP+FP]
9500/[9500+4500]=67.9% 950/[950+4950]=16%
阳性预示值 TN/[TN+FN]
85500/[85500+500]=99.4% 94050/[94050+50]=99.9%
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样本的准备
质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和 阳性。
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定义
临床敏感性：在患有明确临床疾病的患者中， 其检测结果呈阳性或者超过正常值范围的比率 （即出现阳性结果和确定患者患病）；注：该 临床疾病必须由不依赖于被评价试验的标准确 定。
临床特异性：在没有特定临床疾病的患者中， 其检测结果呈阴性或者在正常值范围内的比率。
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定义
阳性测定能力指数（DI（＋））：可定义为一 实验对阳性标本测定后给出阳性结果的能力 （通常称为“敏感性”）； DI（＋）=[真阳 性/（真阳性+假阴性）]×100%
阴性测定能力指数（DI（－））：则为对阴性 样本测定给出阴性结果的能力（通常称为“特 异性”）； DI（－）= [真阴性/（真阴性+假 阳性）]×100%
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定义
阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为 阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%
阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的 样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%