定性测定的性能验证--李金明2010最新版

CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
编制性能验证的SOP
定义

筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血 清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比 诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查 试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。 尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但 是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性 结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传 播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。
50
94,050
9500/[9500+4500]=67.9% 85500/[85500+500]=99.4%
950/[950+4950]=16% 94050/[94050+50]=99.9%
样本的准备

质控品：使用商品化质控物进行，包括阴性和
阳性。

样本的采集和保存：采集时间、保存方式等必 须保证一致性。

临界点（CUT-OFF）的(精密度） 重复性指的是什么？
是为正在评价的检测试剂或系统建
立分析物的临界浓度(C50)，并且
确保临界浓度±20%的范围处于
95%区间内(C95)。
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Actual Concentration
两种不同方法的不精密度曲线比较
100% 90%
Percent Positive Results
80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% C2 5 C1 5 C1 95 C2 95
Actual Concentration
验证步骤


制备足够40次重复检测的3份样本：分别为处 于临界浓度、高于临界浓度20%和低于临界浓 度20%的样本。 重复检测样本40次，确定每一份样本结果为阳 性和阴性的百分比。 评价临界浓度是否准确？评价+20至-20%的浓 度范围是否包含于、位于或者超出这种方法的 95%区间？
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定义

确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就 是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。
不精密度曲线
100% 90%
Percent Positive Results
0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% C5 C 50 Claimed Cutoff C 95
Percent Negative Results
80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0%
批内重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在一
批检测内，重复检测20次（孔）， 计算所得S/CO值的均值和SD，计 算批内CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明 的批内变异。ELISA的批内变异 CV%应≤10%。
批间重复性的验证
高、中、低三个浓度的样本，在10
天以上时间内单次（孔或管）重复 进行20批检测，计算所得S/CO值的 均值和SD，计算批间CV%。 判断结论：应≤试剂说明书所标明的 批间变异。 ELISA的批间变异CV% 应≤15%。
-20% ～ +20% 浓 度 范 围 在 用该方法检测浓度超过C50+20%的
C5-C95区间之内 样本检测结果不一致
-20%～+20%浓度范围包含 用该方法检测，C50+20%的样本检 了C5-C95区间 测结果一致
-20%～+20%浓度范围只是 用该方法检测，C50+20%的样本检 部 分 地 在 C5-C95 区 间 内 。 测结果一致。浓度-20%的样本用该 （+20%包含了C5-C95区间， 方法却不一定能得到一致结果。 但 -20% 浓 度 的 样 本 在 C5C95区间内。）
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重复性验证
CUT-OFF的重复性（同时包
含测定下限的验证） 批内变异的验证 批间变异的验证
重复性验证的质量控制
定性测定的性能验证
李金明 卫生部临床检验中心
临床定性检验的报告方式
有反应、无反应、阳性、阴性
是、不是（或有、没有）
“性能验证”？
ISO15189实验室认可的要求？
（任务？）
实验室检测临床应用的必需？
高速列车性能验证
Nhomakorabea空气动力学 速度 车体转向架运行 固定、悬挂的零部件强度 稳定性 舒适感 故障率 ……

质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。 如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第 二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实 验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不 应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确 定原因并采取纠正措施。 CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance;

如何获得系统或试剂的“临界点”

检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的 临界浓度。 如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一 系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能 够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。 这一稀释度的分析物浓度即为临界点。
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或阴性的结果时该分析物的浓 度。
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临界点（CUT-OFF)与试剂盒阳性反 应判断值（CUT-OFF值）的区别

这里的临界点指的是一个处于试剂检测临界点 的样本浓度，其一旦确定，是不变的。 试剂盒CUT-OFF值指的是一个判断某一次测 定结果的由阴性和阳性对照信号值按一定公式 计算出来的信号值，每次测定都会有所差异。
C50是否准确？
40次测试
1 阳性结果 =<13/40(32.5%) >=27/40(67.5%)
C50
不正确
2
阳性结果
（14-26）/40（35%-65%）
正确
不同C50重复检测次数与检 出阳性数的关系
阳性结果
重复性 次数 百分比 真正百分比 样本的实
检测总
次数 20 40 100 10 20 50 50% 50% 50% 30%-70% 35%-65% 40%-60%

定 义

阳性结果的可靠性（‘预示值’）：即测定为 阳性的标本实际上为阳性的可能性。 =[真阳性/（真阳性+假阳性）]×100%

阴性结果的可靠性:则为一份给出阴性结果的 样本实际上为阴性的可靠性。 = [真阴性/（真阴性+假阴性）]×100%
“预示值”对临床检验结果影响
预示值对一个有95%敏感性和95%特异性的 试剂检测结果的影响（100,000人）
际浓度
C30-C70
候选方法的-20%～+20%浓度范 围是否包含了C5-C95区间？
1 +20%
-20% 2 +20% -20% 3 +20% -20%
阳性结果=<35/40(87.5%)
阴性结果=<35/40(87.5%) 阳性结果>=36/40(90%) 阴性结果>=36/40(90%) 阳性结果>=36/40(90%) 阴性结果=<35/40(87.5%)
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定义

诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具 有很好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还 进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可 以稍微降低。