定性测定的性能验证--李金明

差值超出4s控制限。 四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势



化。 十个连续的质控测定值同时处于均值（）的同一侧。
Levey-Jennings质控图方法
也称Shewhart质控图，是由美国的 Shewhart于1924年首先提出，并用于工 业产品的质量控制。 二十世纪五十年代初，Levey-Jennings 将其引入临床检验的质量控制 。经 Henry和Segalove的改良，即为目前常 用的Levey-Jennings质控图。
每块板质控物的数量及位置
2~3份弱阳性质控 2~3份阴性质控 随机放置于血液标 本中间

常用质控规则的符号及定义
符号

定
义

12S 13S 22S R4S 的 41S 7T 变
10
一个质控测定值超出±2s控制限。 一个质控测定值超出±3s控制限。 两个连续的质控测定值同时超出+2s或－2s控制限。 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间
重复性评价

质控品：如方法学比较在10天内完成，则每一批 次都要对每份质控样本进行检测，共提供20次重 复检测结果。如果方法比较研究超过20天，则每 一批次都要对每份对照样本进行单次检测，总计 也提供20次重复结果。 如出现失控，则当次检测结果无效。在当天或第 二天安排新批次的检测以替换不合格的批次。实 验室要分析失控的原因。不合格批次在10天内不 应超过1次或20天内不超过两次。如若超出，所 在实验室应中止检测工作并咨询试剂制造商以确 定原因并采取纠正措施。
Grayzone
5% Lower 95% Interval Cutoff
5% Upper 95% Interval
结论

临界浓度如果准确，样品重复检测应获得50%的阳性和50%的阴性结 果。 如果+20%的样本获得阳性结果的次数≥95%，并且-20%的样本获得 阴性结果的次数≥95%，那么这个范围位于或超出这种方法的95%区 间。因而，距离临界浓度≥20%的样本可用此种方法获得一致的结果。
方法学比较
比较用方法结果
阳性 阳性 A C A+C 阴性 B D B+D 总数 A+B C+D A+B+C+D
待评价方 法结果
阴性 总数
敏感性=[A/（A+C）]×100%
特异性=[D/（D+B）]×100%
符合率=[（A+D）/（A+B+C+D）] ]×100%
性能验证的其他方面

批内和批间变异（ELISA批内CV ＜ 10%，批间＜15%或20%）

与临床的‚对话‛。这也是一个新的
试剂或方法或系统替代旧的试剂或方 法或系统成功应用于临床的前提。
室内质控的问题？

概念不清


不知道具体怎么做
不会写室内质控的SOP


不知道如何选择室内质控物
不会分析室内质控的结果

不愿意多‚思考‛，完成工作任务即可
定性测定的室内质控方法

非统计学方法
统计学方法
定 义

重复性：同一被测对象在多次处于不同情况下的 检测中结果的一致性；注：a)不同的情况包括： 检测的原理或方法、结果观察者、测试仪器、地 点、仪器使用状态和时间；b）重现性也用来描述 定量实验中结果的离散特征。
测定下限（Detectability）：是指超过零剂量精密度的 最低抗原浓度，可通过 t 分布（一边拖尾，因为此时 曲线只有上升趋势）计算在测定下限时的吸光度值的 均值差。 分析敏感性（Sensitivity): 是指一实验的测定反应对待 测物质浓度变化的改变，即dR/dC。
重复性评价

分析物浓度：接近临界值。不宜用阴性或强阳 性样本。 定性实验中临界点比较恰当的定义为：同样一 份样本，在多次重复实验中各有50%的几率获 得阳性或阴性的结果时该分析物的浓度。

如何获得试剂或系统的临界点

检测试剂或系统的说明书可能会注明分析物的 临界浓度。 如果临界浓度未知，则可以将阳性样本进行一 系列稀释，然后将他们进行重复检测以确定能 够获得50%阳性和50%阴性结果的那个稀释度。 这一稀释度的分析物浓度正在临界点。
CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved Guideline
定义

筛查试验：临床上，筛查方法通常用于检测整个人群
（或者人群中的特定部分）中特定指标的情况。例如对样 本做粪便隐血检测或者性病研究实验室（VDRL）梅毒血 清学试验。一般来说，这些用于筛查的定性试验必须具有 高敏感性以确保真阳性结果的检出。因此通常筛查试验比 诊断试验或确认试验会产生更多的假阳性结果。如果筛查 试验的假阳性结果所造成的社会及经济后果不是非常严重， 这种低特异性可通过特异性较好的确认试验加以弥补。 尽管阳性筛查试验结果需要确认试验来进一步证实，但 是这依然要优于假阴性筛查试验结果的出现。因为假阴性 结果会造成更严重的后果，例如疾病通过已感染的血液传 播或者延误了对于可治愈的严重疾病的治疗。

方法比较



比较用的方法：另一种定性方法（如使用者目 前正在使用的方法）、‚金标准‛方法、某种 定量方法或临床诊断。 评价用样本的要求：量要足够大；稳定；两种 方法同时进行检测。 样本数量：取决于评价者的目的。作为最低要 求，检测要持续到至少用比较方法获得50个阳 性样品。并且至少用比较方法获得50例阴性样 品以确定此种检测方法的特异性。

‚批（RUN）‛的概念

在相同的条件下（地点、仪器、试剂、人员、 时间）所进行的一组测定。
定性免疫测定质控物浓度的选择


可选择S/CO值减去精密度测定中得到的三倍 批间CV（通常的ELISA测定批间变异（CV%） 在15%左右）与该S/CO值的乘积（意即三倍 SD）仍大于1的质控血清作监测重复性的室内 质控用 计算公式：S/CO（1-3CV%）=S/CO-3SD S/CO比值可在1.5~4之间。 同时选择S/CO处于1.0~1.5左右的质控血清以 判断每次测定时试剂盒测定下限的有效性。

非统计学方法

在检测临标本的同时，检测一定数量（与临 床样本的数量相适应）的已知阳性（或存在靶 微生物或靶细胞）和阴性的质控样本 检测有效的质控判断方法：阳性检测为阳性， 阴性检测为阴性。

统计质控方法
质控物浓度的选择 每次（批）测定质控物的数量及放置 质控规则 Levey-Jennings质控图方法 ‚即刻法‛质控方法 ‚假阳性‛的统计质控方法
结 果 10%感染率 检出 (+) 未检出 (－) 1%感染率 检出 (+) 未检出(－)
+
－ 敏感性 (TP/[TP+FN]) 特异性 (TN/[TN+FP]) 阳性预示值 TP/[TP+FP] 阳性预示值 TN/[TN+FN]
9,500
4,500 95% 95%
500
85,500
950
4,950 95% 95%
定性测定的性能评价及 室内质控
李金明 卫生部临床检验中心
重庆 2010.4.23
临床检验定性测定

免疫测定：感染性疾病抗原、抗体 核酸和基因检测 微生物检验 细胞学检验

寄生虫检验
临床定性检验的报告方式

有反应、无反应、阳性、阴性 检出、未检出 是、不是（或有、没有）


什么时候进行性能验证

分析物浓度接近临界点时的重复性实验


目的：是为正在评价的检测试剂或系统建立分 析物的临界浓度，并且确保临界浓度±20%的 范围处于95%区间内。 操作步骤：（1）制备足够20次重复检测的同 一份样品，分别为处于临界浓度、高于临界浓 度20%和低于临界浓度20%的样品。(2)重复检 测样品20次，确定每一份样品结果为阳性和阴 性的百分比。(3)评价临界浓度是否准确？评 价+20至-20%的浓度范围是否包含于、位于或 者超出这种方法的95%区间？

（测定下限）

如果+20%的样本获得阳性结果的次数＜95%，并且/或-20%的样本获 得阴性结果的次数＜95%，那么这个范围在这种方法的95%区间内。 因而，距离临界浓度20%的样本用此种方法不会获得一致的结果，并 且此种方法的95%区间距离临界浓度＞20%。 在一种方法的95%区间距离临界浓度＞20%的情况下，需要做另一个 或一系列实验以确定真正的95%区间。
定义

诊断试验：通常用于临床怀疑某种特定疾病或 状况是否存在的诊断性定性试验。例如各种微 生物培养就是用于检查感染情况的诊断试验。 因临床上对治疗的及时的要求，诊断试验应具 有很好的敏感性和特异性。如果诊断试验后还 进行确认试验，那么诊断试验的特异性要求可 以稍微降低。
定义

确认试验：确认试验用于验证筛查试验或者诊 断试验结果。如果确诊试验证实了之前的检测 结果，临床医生即可作出诊断。确认试验通过 设计使其具有较高的特异性（有时甚至以牺牲 敏感性为代价）以及高阳性预测值。螺旋体抗 体荧光吸附（FTA-ABS）梅毒血清学试验就 是一种用于VDRL梅毒血清学试验等筛查试验 之后的确认试验。

质控图
Levey-Jennings质控图 基本的统计学含义

稳定条件下，在20个IQC结果中不应有多于1 个结果超过2SD（95.5%可信限）限度；在 1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限） 的结果不多于3个。 如以±3s为失控限，假失控的概率为0.3%。