细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程
细胞培养基本操作技能
细胞培养基本操作技能无菌操作基本技术1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。
实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。
实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。
实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。
勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。
容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。
对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。
操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。
5. 定期检测下列项目：5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。
5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。
实验用品1. 种类︰1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与pasteur pipet 外，其它均为塑料无菌制品。
无菌操作流程
无菌操作流程无菌操作流程是指在实验室中进行微生物培养、细胞处理等涉及无菌操作的一系列步骤。
以下是一个常用的无菌操作流程：1.准备工作。
收拾清洁实验台面，并将所需实验器材放置在无菌条件下。
2.消毒操作台面。
用70%酒精或其他合适的消毒剂将操作台面彻底消毒，以杀灭可能存在的细菌和其他微生物。
3.穿戴个人防护装备。
戴上实验室防护眼镜、口罩、手套等器材，防止细菌的介入或被人体内的细菌感染。
4.准备培养基和培养器具。
将所需培养基和培养器具（试管、平板等）放在无菌条件下，并确保其盖子或盖上塑料膜以阻挡细菌污染。
5.点火杀菌。
使用火焰托将所需培养器具（包括镊子、移液器等）进行火焰消毒，以杀灭可能存在的细菌。
6.取菌。
用无菌镊子将细菌菌落或细胞分离物取出，并尽量避免与其他物体接触。
避免取到细菌菌落外的其他物质，以防止细菌污染。
7.移菌。
将细菌菌落或细胞分离物移至预先准备好的培养基中，使用无菌的移液器按照之前的需求精确地转移或滴加细菌。
8.混匀。
将培养基中的细菌充分混匀，以保证细菌均匀分布在培养基上。
9.封闭培养器具。
将培养基的培养器具进行密封，以防止外界的细菌进入。
10.培养。
将培养器具放置在适当的温度和湿度下，在恰当的时间内培养。
11.消毒废弃物。
将无菌操作中使用过的培养器具和其他废弃物进行消毒处理，以杀死可能残留的细菌。
12.清洁操作台面。
清除实验台面上的任何待处理或已处理的物质以及实验仪器，使用适当的消毒剂进行彻底清洁。
以上是无菌操作流程的基本步骤，用于保证实验室中的微生物和细胞研究的无菌条件。
无菌操作的关键是避免外界细菌污染和对实验材料的细菌污染，从而保证实验结果的准确性和可靠性。
实施无菌操作也需要操作者具备一定的实验技巧，并且严格遵守实验室的规定和操作规程。
细胞无菌检查标准操作规程
细胞无菌检查标准操作规程标准操作规程：细胞无菌检查1. 引言细胞无菌检查是实验室进行细胞培养和实验的关键步骤。
细胞环境的无菌性是保证实验结果准确性和细胞生长的重要因素。
本标准操作规程旨在规范细胞无菌检查的操作，以确保实验结果的可靠性。
2. 器材准备2.1 离心机：用于离心培养物，以分离细胞和培养液。
2.2 高温消毒器：用于消毒培养器具和试剂。
2.3 紫外线灯：用于消毒培养箱和操作台面。
2.4 细胞培养箱：用于细胞培养的环境，保持恒定的温度和湿度。
2.5 无菌离心管和移液器：用于处理无菌液体和细胞移植。
2.6 片玻片和培养皿：用于制备细胞标本。
2.7 无菌培养物：用于细胞培养和细胞无菌检查。
2.8 无菌培养基：用于培养细胞。
2.9 无菌生理盐水：用于洗涤细胞。
3. 操作步骤3.1 消毒操作台面和培养箱：使用紫外线灯对操作台面和培养箱进行紫外线照射消毒，确保无菌环境。
3.2 滴漏法消毒培养器具和试剂：将培养器具和试剂放入高温消毒器中，设置合适的温度和时间进行高温消毒。
3.3 细胞无菌接种：将需要无菌检查的细胞接种到无菌培养基中，按照实验要求进行培养，保持适宜的温度和湿度。
3.4 细胞收获和处理：在培养达到一定密度后，使用离心机将培养物离心，收集上清液。
将上清液转移至无菌离心管中，并进行离心，去除细胞沉淀。
3.5 细胞标本制备：将细胞沉淀转移至无菌离心管中，加入适量的无菌生理盐水悬浮细胞，然后将悬浮细胞制备成片玻片或涂布于无菌培养皿上。
3.6 烘干和固定：将制备好的片玻片或培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和湿度进行烘干固定，使细胞附着于玻片或培养皿上。
3.7 染色和观察：使用适当的染色方法对细胞进行染色，并通过显微镜观察细胞状态和无菌性。
3.8 结果判断：根据染色结果和观察到的细胞状态判断细胞是否具有无菌性。
4. 注意事项4.1 操作时需佩戴无菌手套，避免污染试剂和培养器具。
4.2 使用无菌移液器和管道处理液体，避免交叉污染。
细胞培养操作步骤
细胞培养操作步骤细胞培养是一项用于研究和生产生物技术产品的基础技术。
以下是细胞培养的一般操作步骤：1.实验室准备：-消毒：在开始实验之前，对实验室进行消毒处理，确保实验环境的无菌。
-工具准备：准备好所有需要的培养器具，如离心管、试管、培养皿、吸管等。
-培养基准备：根据实验需要，准备好适当的培养基，并对其进行消毒处理。
2.细胞准备：-细胞收获：收获细胞，并将其转移到一个装有细胞培养基的培养皿中。
-细胞计数：使用细胞计数器或显微镜对细胞进行计数和分析，以确定细胞的浓度和活性。
-细胞传代：如果需要，将细胞进行传代以维持其活性和数量。
3.培养条件：-培养温度：根据细胞的要求，将培养皿放置在适当的温度控制设备中，通常为37℃。
-CO2浓度：对于一些细胞（如哺乳动物细胞），需要提供适当的CO2浓度来维持其生长和代谢。
-培养液更换：根据具体要求，定期更换培养液，以保持细胞的健康生长。
4.细胞培养：-培养基添加：向培养皿中加入适当量的培养基，以提供细胞生长和繁殖所需的养分。
-培养皿处理：将培养皿放入恒温培养箱中，确保细胞在适宜的环境中生长。
-细胞观察：定期使用显微镜观察细胞的生长情况和形态变化，以评估细胞的健康状态。
-培养皿除菌：如果培养皿被发现有细菌或真菌污染，需要将其除菌，以保证细胞的无菌状态。
5.细胞传递：-细胞解离：当细胞达到所需密度或需要进行分离时，使用适当的酶或溶液将细胞从培养皿中解离。
-细胞收获：通过离心，将细胞收集到离心管中，并进行计数和分析。
-细胞传递：将细胞转移到新的培养皿中，重新开始培养过程。
细胞培养是一项复杂而精细的操作，需要高度的无菌技术和细心的操作。
在整个过程中，需要持续监测和调整培养条件，以确保细胞的健康生长和繁殖。
此外，注意遵循实验室的安全规范，保护自己和实验室的安全。
细胞培养的成功与否，将直接影响到后续实验的结果和应用。
细胞培养无菌操作基本技术
细胞培养无菌操作基本技术细胞培养是现代生物学研究中常用的一种实验技术，能够使细胞在体外条件下生长和繁殖。
无菌操作是细胞培养过程中非常重要的一项技术手段，可以保证细胞培养环境的无菌纯净，避免细胞被外部微生物污染。
本文将介绍细胞培养中常用的无菌操作基本技术，并结合实例进行详细说明。
无菌操作基本技术主要包括以下几个方面：1.实验前准备在进行无菌操作前，首先需要准备好实验所需的培养基、培养器具和其他实验工具。
这些器具和工具需要经过高温高压灭菌处理，以确保其无菌。
此外，实验人员还需佩戴无菌手套、穿戴无菌实验服，并对实验台面进行彻底的清洁消毒，保持实验环境的无菌。
2.灭菌操作在进行无菌操作前，需要对培养器具进行灭菌处理。
常用的灭菌方法有干热灭菌和湿热灭菌两种。
干热灭菌是将培养器具置于高温烘箱中，持续加热若干小时，以达到灭菌目的。
湿热灭菌则是将培养器具置于高压高温的蒸汽中，进行高压灭菌。
此外，对于一些无法耐受高温高压的培养器具，还可使用化学灭菌方法，如使用过氧化氢和酒精进行消毒。
3.无菌操作技术在进行无菌操作时，需要遵循一定的操作规范。
首先，实验人员应将实验器具放入无菌工作台中，在UV灯的照射下进行灭菌处理。
然后，实验人员需要将自己的双手放入无菌手套中，并使用无菌皮培养工具进行操作。
接下来，需要准备好含有培养基的培养皿，并用无菌注射器将细胞转移到培养皿中。
在操作过程中，需要注意避免造成培养基的污染，尽量减少对培养基的接触时间，以防止细菌或其他微生物的污染。
4.维持无菌操作环境在进行细胞培养过程中，需要维持无菌操作环境。
实验人员应避免在实验台面上散落细胞培养基、细胞碎片或其他可能造成污染的物质。
细胞培养箱和无菌安全柜的门不可长时间打开，以防止空气中的微生物进入工作区域。
并且需要定期对无菌安全柜和细胞培养箱进行清洁和消毒。
同时，实验室人员需要经常进行手部清洁，并定期更换无菌手套和实验服，保持实验环境的无菌。
细胞培养中的无菌操作是进行细胞培养实验的基础，能够产生可靠的实验数据，并在细胞学研究中发挥重要作用。
医学免疫治疗实验室技能项操作
医学免疫治疗实验室技能项操作随着医学科技的不断进步，免疫治疗作为一种新型的癌症治疗手段，正逐渐受到人们的关注和青睐。
在医学免疫治疗的实验室中，进行各项操作是确保治疗效果的关键步骤。
本文将详细介绍医学免疫治疗实验室的技能项操作。
一、细胞培养操作细胞培养是医学免疫治疗实验室中常见的操作之一，其操作流程如下：1. 无菌操作：在无菌工作台下进行，使用无菌技术，保证培养物不受到细菌和真菌的污染。
2. 培养基配制：根据实验需求，配制不同种类的培养基，确保细胞生长所需的营养物质和环境条件。
3. 细胞接种：将细胞按照一定的比例接种到培养皿或培养瓶中，注意细胞的密度和均匀性。
4. 细胞培养：将培养皿或培养瓶置于恒温培养箱中，控制好温度、湿度和CO2浓度，促进细胞的生长和增殖。
二、免疫分析操作免疫分析是评估免疫治疗效果的重要手段，包括ELISA、流式细胞术等，其操作步骤如下：1. 样品处理：对待测样品进行处理，如血清离心、细胞裂解等，提取目标物质。
2. 试剂配置：根据实验方案，配置所需的试剂和缓冲液，保证实验的准确性和稳定性。
3. 实验操作：按照操作步骤，依次将样品、试剂和标准品加入微孔板或试管中，进行反应和洗涤。
4. 测定结果：利用光谱仪或流式细胞仪等设备，测定反应产物的光学密度或细胞表面标记物的表达情况。
三、动物实验操作动物实验是评估免疫治疗效果和安全性的重要手段，包括小鼠模型、大鼠模型等，其操作流程如下：1. 动物选择：根据实验需求，选择合适的动物模型，如裸鼠、BALB/c小鼠等。
2. 实验前准备：对动物进行适当的饲养和预处理，确保实验的稳定性和可靠性。
3. 给药操作：根据实验方案，采用适当的给药途径和剂量，给予动物免疫治疗。
4. 观察记录：观察动物的生理指标和行为表现，记录实验数据，评估治疗效果和安全性。
综上所述，医学免疫治疗实验室的技能项操作涵盖了细胞培养、免疫分析和动物实验等多个方面，需要操作人员具备扎实的实验技能和严谨的操作规范，以确保实验结果的准确性和可靠性。
无菌技术基本操作流程
无菌技术基本操作流程无菌技术是在实验室中进行微生物研究、细胞培养等实验过程中很关键的一项技术。
它的主要目的是防止实验过程中微生物的污染，保证实验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍无菌技术的基本操作流程。
1.准备工作在进行无菌操作之前，需要做一些准备工作。
首先，准备好所需的实验器具和试剂。
例如无菌培养皿、无菌培养基、无菌吸管、无菌移液器等。
此外，还需要准备好消毒剂和无菌操作台，以保持操作环境的洁净。
2.消毒操作台将操作区域清洁干净，并使用消毒剂进行彻底消毒。
消毒操作台应具备负压和UV灯等功能，以提供一个干净的工作环境。
3.个人无菌操作准备穿戴干净的实验服、手套和口罩，旨在减少身体表面和呼吸道的微生物污染。
4.消毒实验器材将要使用的实验器具进行彻底消毒。
对于旋转浓缩仪、离心机等设备，可以用70%乙醇擦拭。
对于无菌培养皿和移液器等一次性使用的实验用品，可以用紫外线灯照射一段时间。
5.准备无菌实验环境打开操作台上的风机，产生对流气流，将微生物迅速带出操作区域。
一般操作台上方都有紫外线灯，使用前将灯壳打开，按下开关将灯管照射几分钟，使其消毒。
6.无菌操作进行无菌操作的主要有三种方式：火焰消毒法、酒精灯方法和UV灯消毒法。
在进行无菌操作前，在操作区域内打开消毒灯照射10-15分钟，将使较多的空气中的细菌、病毒等死亡。
-火焰消毒法：将需要进行无菌操作的器具（如吸管、移液器等）的金属部分在火焰中烧热。
这样可以杀死表面的微生物，确保操作的无菌性。
-酒精灯方法：将需要消毒的物体，如移液器等，经过彻底清洗后，浸入酒精瓶中，在取出后挥动，以使酒精在表面挥发干净。
-UV灯消毒法：将需要消毒的物体放在培养皿中，置于紫外线灯下照射一段时间。
这种方法对于一些不能用火焰烧杀的器具也很有效。
7.进行无菌技术操作在无菌操作前，进行洁手。
先关掉台面上的操作台灯，将手放到台面上静止15分钟，然后慢慢打开；或冲个澡换干净实验服后再操作。
待UV灯照射完成后，将待消毒培养皿放在工作台上，盖紫外线杀菌器灯盖，紫外线照射一段时间，将盖子放平打开，操作即可开始。
细胞培养的准备工作
细胞培养的准备工作细胞培养是生物医学研究中常见的实验技术，它是通过在培养基中提供适当的营养物质和环境条件，使体外培养的细胞可以持续生长和繁殖。
为了保证细胞培养实验的成功进行，准备工作是至关重要的。
在这篇文章中，我们将详细介绍细胞培养的准备工作，包括实验室设备准备、培养基配制以及无菌操作等关键步骤。
希望本文能够对你有所帮助。
一、实验室设备准备在进行细胞培养实验之前，首先需要准备实验室必备的设备，包括无菌工作台、培养箱、显微镜、培养皿、移液器、离心机等。
这些设备能够提供无菌、恒温、湿度适宜的环境，为细胞的生长提供良好的条件。
1. 无菌工作台：无菌工作台是进行细胞培养实验的重要设备之一，它能够为实验人员提供洁净的操作环境，防止外源微生物对培养细胞的污染。
2. 培养箱：培养箱提供了恒温和适宜的CO2浓度环境，使细胞在体外也能够保持正常的生长状态。
3. 显微镜：显微镜用于观察培养的细胞形态和数量，帮助实验人员了解细胞培养的情况。
4. 移液器：移液器用于在无菌条件下向培养皿中加入培养基、溶液和细胞悬液，是进行细胞培养实验中必备的工具。
5. 离心机：离心机用于离心培养皿中的细胞悬液，帮助实验人员收集和分离细胞。
以上设备的准备是细胞培养实验进行的基础，它们能够帮助实验人员进行规范的细胞培养操作，保证实验结果的准确性和可靠性。
二、培养基配制培养基是支持细胞生长和增殖所必需的营养物质和生长因子的混合物，其配制的质量和无菌性直接影响着细胞培养实验的成败。
通常来说，培养基包括基本培养基和添加剂两部分。
1. 基本培养基：基本培养基是细胞培养实验中不可或缺的组成部分，它提供了细胞生长所需的营养物质和生长因子，如含有丰富氧气和CO2的DMEM培养基、含有丰富营养物质的RPMI-1640培养基等。
在配制基本培养基时，需要严格按照配方比例将粉末溶解于无菌水中，再经过滤灭菌或高压灭菌处理，最终得到无菌的培养基液体。
2. 添加剂：培养基中常加入的添加剂包括胎牛血清、青霉素/链霉素、L-谷氨酸、非必需氨基酸等，这些添加剂可以增进细胞的生长和增殖，提高细胞培养的成功率。
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细胞培养实验基础知识和相关无菌操作流程1．原代培养（primary culture）直接从有机体中取出的细胞、组织或器官开始进行体外培养直到第一次传代为止。
这种培养称之为原代培养。
2．传代培养（subculture）细胞从一个培养皿以1：2或1：2以上的比率转移或移植到另一个器皿的培养，这种培养称之为传代培养。
3．悬浮培养（suspension culture）细胞培养的一种类型。
培养时通过一特殊的装置，使细胞瓶按一定的速度不断地转动，使细胞始终处于悬浮状态中进行增殖。
4．克隆（clone）克隆指的是从一个细胞靠有丝分裂获得的一个细胞群体（population）。
5．细胞系（cell line）在第二届细胞和组织培养专题讨论会上提出细胞系的概念为“原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（lineages of cells）所组成。
如果不能继续传代或传代数有限，可称有限细胞系（finite cell line），如果可以连续传代，则可称为连续细胞系（continous cell line）。
以前认为细胞系来自细胞发生了遗传突变，并带有癌变的特点，这种细胞有可能在培养条件下无限的传下去。
这种细胞的特点是染色体为异倍体，丧失了正常细胞的“接触抑制”的特性。
6．细胞株（cell strain）细胞株的概念如下：由原代培养中，用选择或克隆代，选出具有特征标记的细胞，经传代形成细胞株，这些特性或标记在以后的培养中必须保持下去。
以前认为经体外传代培养后细胞不表现退化现象，大约可传50代以上者，其染色体维持二倍体不变，保留正常细胞的“接触抑制”等特性。
一常用设备一准备室的设备：双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品柜（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
二培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二无菌操作无菌技术是在医疗护理操作过程中，保持无菌物品、无菌区域不被污染、防止病原微生物侵入人体的一系列操作技术。
无菌技术作为预防医院感染的一项重要而基础的技术，医护人员必须正确熟练地掌握，在技术操作中严守操作规程，以确保病人安全，防止医源性感染的发生。
一、无菌技术的概念和原则（一）无菌技术的概念1.无菌技术是指在执行医疗、护理技术过程中，防止一切微生物侵入机体和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。
2.无菌物品经过物理或化学方法灭菌后，未被污染的物品称无菌物品。
3.无菌区域经过灭菌处理而未被污染的区域，称无菌区域。
4.非无菌物品或区域未经灭菌或经灭菌后被污染的物品或区域，称非无菌物品或区域。
（二）无菌技术操作原则1.环境清洁进行无菌技术操作前半小时，停止卫生处理，减少人员走动，以降低室内空气中的尘埃。
治疗室每日用紫外线灯照射消毒一次。
2.工作人员无菌操作前，衣帽穿戴整洁，口罩遮住口鼻，修剪指甲、洗手。
3.物品管理无菌物品必须存放于无菌包或无菌容器内，无菌包外注明物品名称，有效期一周为宜，并按有效期先后顺序排放。
无菌物品和非无菌物品应分别放置。
无菌物品一经使用或过期，潮湿应重新进行灭菌处理。
4.取无菌物操作者身距无菌区20cm，取无菌物品时须用无菌持物钳（镊），不可触及无菌物品或跨越无菌区域，手臂应保持在腰部以上。
无菌物品取出后，不可过久暴露，若未使用，也不可放回无菌包或无菌容器内。
疑有污染，不得使用。
5.一物一人，一套无菌物品，只供一个病人使用，以防交叉感染。
二、几种无菌技术的基本操作法（一）工作帽的应用戴工作帽可防止头发上的灰尘及微生物落下造成污染。
护理传染病人时，也可保护自己，工作帽大小适宜，头发全部塞入帽内，不得外露。
每周更换两次，手术室或严密隔离单位，应每次更换。
（二）口罩的应用戴口罩可防止飞沫污染无菌物品。
口罩应盖住口鼻，系带松紧适宜，不可用污染的手触及。
不用时不宜挂于胸前，应将清洁面向内折叠后，放入干净衣袋内。
口罩一经潮湿，则病菌易于侵入，应及时更换。
（三）洗手、刷手、消毒手1.洗手执行无菌操作、取用清洁物品之前，护理病人前后，接触污染物之后均应洗手。
方法：用肥皂搓洗手掌、手背、指间、手指及关节，以环形动作搓擦。
而后用流水冲洗双手，将皂沫全部冲净，必要时反复冲洗，最后用清洁小毛巾擦干双手。
2.涮手即利用机械及化学作用去除手上污物及微生物的方法，是做好消毒隔离、预防交叉感染的重要措施。
方法：取无菌刷蘸肥皂乳（或肥皂块），先刷指尖、然后刷手、腕、前臂、肘部到上臂下1／2段，特别要刷净甲沟、指间、腕部，无遗漏地刷洗三遍，每遍3分钟。
刷洗时，双手稍抬高。
每遍刷完后，用流水冲去肥皂沫，水由手、上臂至肘部淋下，手不能放在最低位，以免臂部的水返流到手。
刷洗毕，用无菌小毛巾依次拭干手、臂。
手、臂不可触碰其它物品，如污染必须重新刷洗。
3.消毒手消毒液泡手能有效地去除手上的微生物。
方法：刷洗后，双手及上臂下1／3伸入盛有消毒液的桶内，用无菌小毛巾轻擦洗皮肤5分钟，手不可触及桶口。
浸泡毕，拧干小毛巾，揩去手、臂、消毒液，晾干。
双手保持于胸前半伸位准备穿手术衣。
（四）无菌持物钳（镊）的类别和使用法1.持物钳（镊）的类别临床常用的持物钳（镊）有卵圆钳、三叉钳和长、短镊子。
卵圆钳：钳的柄部有两环，使用时手指套入环内，钳的下端（持物端）有两个小环，可用以夹取刀、剪、钳、镊、治疗碗及弯盘等。
由于两环平行紧贴，不能持重物。
三叉钳：结构和卵圆钳相似。
不同处是钳的下端为三叉类，呈弧形向内弯曲。
用以夹取盆、盒、瓶、罐等较重的物品。
镊子：镊的尖端细小，使用时灵巧方便。
适用于夹取棉球、棉签、针头、注射器、缝针等小物品。
2.无菌持物钳（镊）的使用法（1）无菌持物钳（镊）应浸泡在盛有消毒溶液的无菌广口容器内，液面需超过轴节以上2－3cm或镊子1／2处。
容器底部应垫无菌纱布，容器口上加盖。
每个容器内只能放一把无菌持物钳（镊）。
（2）取放无菌持物钳（镊）时，尖端闭合，不可触及容器口缘及溶液面以上的容器内壁。
手指不可触摸浸泡部位。
使用时保持尖端向下，不可倒转向上，以免消毒液倒流污染尖端。
用后立即放回容器内，并将轴节打开。
如取远处无菌物品时，无菌持物钳（镊）应连同容器移至无菌物品旁使用。
（3）无菌持物钳（镊）不能触碰未经灭菌的物品，也不可用于换药或消毒皮肤。
如被污染或可疑污染时，应重新消毒灭菌。
（4）无菌持物钳（镊）及其浸泡容器，定期消毒灭菌，并更换消毒溶液及纱布。
（五）无菌容器的使用法经灭菌处理的盛放无菌物品的器具称无菌容器。
如无菌盒、贮槽、罐等。
4.无菌容器应每周消毒灭菌一次。
（六）无菌包的使用法无菌包布是用质厚、致密、未脱脂的棉布制成双层包布。
其内可存放器械、敷料以及各种技术操作用物，经灭菌处理后备用。
1.无菌包的包扎法将物品置于包布中间，内角盖过物品，并翻折一小角，而后折盖左右两角（角尖端向外翻折），盖上外角，系好带子，在包外注明物品名称和灭菌日期。
2.无菌包的打开法取无菌包时，先查看名称，灭菌日期，是否开启、干燥。
将无菌包放在清洁干燥的平面上，解开系带卷放于包布角下，依次揭左右角，最后揭开内角，注意手不可触及包布内面。
用无菌钳取出所需物品，放在已备好的无菌区域内。
如包内物品一次未用完，则按原折痕包好，注明开包时间，有效期为24时。
如不慎污染包内物品或被浸湿，则需要重新灭菌。
取小包内全部物品时，可将包托在手上打开。
解开系带挽结，一手托住无菌包，另一手依次打开包布四角翻转塞入托包的手掌心内，准确地将包内物品放入无菌容器或无菌区域内（勿触碰容器口缘），盖好。
（七）无菌盘的铺法将无菌治疗巾铺在清洁、干燥的治疗盘内，使其内面为无菌区，可放置无菌物品，以供治疗和护理操作使用。
有效期限不超过4小时。
1.无菌治疗巾的折叠法将双层棉布治疗巾横折2次，再向内对折，将开口边分别向外翻折对齐。
2.无菌治疗巾的铺法手持治疗巾两开口外角呈双层展开，由远端向近端铺于治疗盘内。
两手捏住治疗巾上层下边两外角向上呈扇形折叠三层，内面向外。
3.取所需无菌物品放入无菌区内，覆盖上层无菌巾，使上、下层边缘对齐，多余部分向上反折。
（八）无菌溶液的倒取法取无菌溶液瓶，擦净灰尘，核对标签，检查瓶盖有无松动，瓶壁有无裂痕，溶液有无沉淀、混浊、变色、絮状物。
符合要求方可使用。
揭去铝盖常规消毒瓶塞，以瓶签侧面位置为起点旋转消毒后，用无菌持物钳将瓶塞边缘向上翻起，再次消毒。
以无菌持物钳夹提瓶盖，用另一手食指和中指撑入橡胶塞盖内拉出。
先倒少量溶液于弯盘内，以冲洗瓶口，再由原处倒出溶液于无菌容器中；倒溶液时瓶签朝上。
无菌溶液一次未用完时，按常规消毒瓶塞、盖好，注明开瓶时间。
（九）无菌手套的戴法1.戴无菌手套洗净擦干双手。
核对手套号码及有效期。
打开手套袋，取滑石粉涂抹双手，注意避开无菌区。
手套可分别或同时取出。
双手分别捏住袋口外层，打开，一手持手套翻转折部分（手套内面），取出；另一手五指对准戴上。
将戴好手套的手指插入另一只手套的翻折面（手套外面），取出，同法将另一手套戴好，戴手套时不可强拉。
最后将两手套翻折面套在工作衣袖外面。
注意手套外面为无菌区，应保持其无菌。
手套戴好后，双手置胸前，以免污染。
2.脱手套将手套口翻转脱下，不可用力强拉手套边缘或手指部分。
一无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射；3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟；4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
二实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手；2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋；3.用75％酒精棉球擦净双手。
三无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面；2.靠近酒精灯火焰操作；3.器皿使用前必须过火灭菌；4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火；5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸；6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染；三器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。