肝脏中转氨酶活力的测定
转氨酶活力测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的重要性。
2. 学习并掌握转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对实验仪器的操作技能。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
在人体内，转氨酶主要存在于肝脏、心肌、骨骼肌等组织中，其中以谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）最为重要。
ALT和AST活性的测定在临床上具有重要的诊断价值，可作为肝功能异常、心肌梗死等疾病的辅助诊断指标。
本实验采用分光光度法测定ALT活力。
ALT催化L-丙氨酸与α-酮戊二酸之间的转氨反应，生成L-谷氨酸和丙酮酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）反应，生成丙酮酸-2，4-二硝基苯腙（PNP）。
PNP在碱性条件下呈棕色，其最大吸收峰在520nm处，通过测定520nm处的吸光度，可以计算出ALT的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡肝- 0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）- 0.1mol/L丙氨酸- 0.1mol/Lα-酮戊二酸- 2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）- 30%氢氧化钠溶液- 碘化钾溶液- 硫代硫酸钠溶液- 酶活力测定试剂盒2. 实验仪器：- 酶标仪- 电子天平- 移液器- 离心机- 恒温水浴箱- 试管四、实验步骤1. 样品制备：将鸡肝剪碎，加入磷酸盐缓冲液（pH 7.4），匀浆，离心取上清液。
2. 标准曲线绘制：配制一系列不同浓度的丙酮酸标准溶液，加入2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液，在520nm处测定吸光度，绘制标准曲线。
3. 样品测定：将样品溶液、底物溶液、2，4-DNPH和30%氢氧化钠溶液加入试管，混匀，在520nm处测定吸光度。
4. 数据处理：根据标准曲线，计算样品中ALT的活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：在520nm处，吸光度与丙酮酸浓度呈线性关系。
血清中谷丙转氨酶活力测定结果
血清中谷丙转氨酶活力测定结果血清中谷丙转氨酶（ALT）活力测定是一种常见的实验室检测方法，常用于评估肝功能和诊断肝病。
本文将介绍血清中谷丙转氨酶活力测定结果的相关知识。
血清中谷丙转氨酶活力（ALT）是指血液中存在的一种酶的活性，通常用于评估肝脏功能的状况。
正常情况下，谷丙转氨酶的活力是很低的，一般小于40单位/升。
当肝细胞受损或病变时，会释放ALT，使其活力升高。
高浓度的ALT通常与肝脏病变有关，例如肝炎、肝硬化、脂肪肝、药物性肝病等。
此外，高ALT水平还可能与其他疾病有关，例如急性胰腺炎、心肌梗塞、重型结核等。
因此，如果血清中ALT活力超过正常范围，应及时进行检查和诊断。
血清中ALT测定通常是使用血清学方法进行的。
一般情况下，医师会在胳膊上绑上一条缚带，并在手腕或肘部的静脉内取一小样血液。
样本会送到实验室进行分析。
实验室会使用化学试剂和仪器来测量血清中ALT的活力。
结果会以单位/升（U/L）的形式报告。
正常情况下，成人男性的ALT浓度应在10-40 U/L之间，女性的ALT浓度应在7-35U/L之间。
但这些数值还受到年龄、体重、性别和肝脏状态等因素的影响。
因此，在解读ALT浓度时，医生还需要考虑患者的其他情况。
ALT浓度的升高程度也是确定病情的重要指标之一。
一般来说，当ALT浓度超过正常范围的两倍以上时，就可以诊断为肝炎或其他肝病。
此外，还有一种称为谷草酰转移酶（AST）的酶，也与肝脏有关，但其升高程度不如ALT明显。
需要注意的是，虽然ALT浓度升高可能表明肝脏病变，但不能单独确定肝病的类型和严重程度。
医生还需要进行其他检查和评估，例如肝脏超声、CT扫描、肝组织活检等，以帮助确定具体的病情。
总之，血清中ALT活力测定是一种常见的实验室检测方法，通常用于评估肝脏功能和诊断肝病。
需要注意的是，结果需要结合患者的其他情况进行解读，以便更准确地诊断和治疗肝病。
转氨酶检测实验报告
一、实验目的了解转氨酶在生物体内的作用，掌握转氨酶活力的测定原理和方法，并通过实验验证转氨酶活力在不同生理和病理状态下的变化。
二、实验原理转氨酶是一类催化氨基酸与α-酮酸之间氨基转移反应的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（ALT）是其中一种重要的转氨酶，主要存在于肝细胞内，对肝脏的代谢和解毒功能至关重要。
当肝细胞受损时，ALT会从细胞内释放到血液中，导致血液中ALT活性升高，因此ALT检测是临床诊断肝功能的重要指标。
本实验采用连续监测法测定ALT活力，通过测定反应体系中NADH的生成量来反映ALT活力。
三、实验材料与仪器1. 仪器：722型分光光度计、恒温水浴锅、移液器、微量滴定板等。
2. 试剂：ALT测定试剂盒、NADH标准品、2,4-二硝基苯肼、2,4-二硝基苯肼溶液、磷酸盐缓冲液、丙酮酸标准品、丙酮酸溶液等。
3. 样品：血清样品。
四、实验方法1. 标准曲线的制作（1）配制丙酮酸标准溶液：将丙酮酸标准品用磷酸盐缓冲液溶解，配制成0.1 mmol/L的标准溶液。
（2）测定丙酮酸标准溶液的吸光度：取丙酮酸标准溶液0.1 mL，加入2 mL 2,4-二硝基苯肼溶液，混匀，置于37℃水浴锅中反应30 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）绘制标准曲线：以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血清ALT活力的测定（1）配制反应体系：取血清样品0.1 mL，加入1 mL磷酸盐缓冲液、0.5 mL NADH溶液、0.2 mL丙酮酸溶液，混匀。
（2）测定血清ALT活力：将反应体系置于37℃水浴锅中反应10 min，取出后加入1 mL碱液，混匀，在540 nm波长下测定吸光度。
（3）计算ALT活力：根据标准曲线，计算血清ALT活力。
五、实验结果与分析1. 标准曲线的制作通过绘制标准曲线，得出丙酮酸浓度为0.1 mmol/L时，吸光度为0.8。
2. 血清ALT活力的测定（1）正常血清ALT活力：本实验中，正常血清ALT活力为25 U/L。
实验六肝脏谷丙转氨酶活力测定
肝脏谷丙转氨酶活力测定进入实验室要注意的问题安全第一，在实验室中使用挥发性试剂时应在通风橱中进行，以免发生中毒事件；不得在实验室中随意使用明火，因为实验室中有许多易燃易爆药品，使用明火可能引起火灾或引发爆炸事件；不得在实验室吃东西，实验结束后也应将手洗净再吃东西。
在实验室中不得嬉戏打闹，更不得用实验药品互相开玩笑。
实验中使用药品应尽量节约，不得浪费药品，未使用完的药品因倒人废液缸或指定的容器中，切不可倒入原试剂瓶以免污染试剂。
实验完成之前不能离开实验室，如有特殊原因要离开需经实验室负责人批准才能离开。
每个实验台内的各种仪器的摆放顺序要牢记，离开实验室前要将仪器按顺序摆放好。
养成一个好的习惯。
一．实验目的了解转氨酶的性质及临床意义，并掌握谷丙转氨酶活力的测定方法二．实验原理在氨基酸的分解代谢过程中，联合脱氨基为大多数氨基酸的主要代谢方式，通过转氨基作用与氧化脱氨基的作用偶联而完成。
本实验以丙氨酸和ā-酮戊二酸作为谷丙转氨酶的作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后来测定所生成的丙酮酸的含量来确定其酶的活力。
丙酮酸能与2，4二硝基苯肼结合，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，后者在碱性条件溶液中呈棕色，基吸收光谱的峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
ā--酮戊二酸与能与2，4二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中的吸收光谱与丙酮酸二硝基苯肼稍有差别，在520nm波长处ā--酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远比丙酮酸2，4二硝基苯腙为低，因此在520nm处吸光度增加的程度与反应体系中的丙酮酸和ā--酮戊二酸的摩尔比基本上呈线性关系。
故可籍此可测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验器材容量瓶100ml 4个500ml 2个；电子天平；玻璃棒；研钵；试管5支；试管架；移液管0.5ml 2支；1ml 2支；5ml 1支；滴管1支；分光光度计，比色皿4个；四.实验试剂1标准丙酮酸溶液：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100ml 0.05mol/L H2SO4中，现用现配。
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
生化实验_转氨酶(GPT)活性的测定报告
转氨酶（GPT）是谷氨酸转氨酶，又称谷氨转氨酶，主要由肝脏细胞中的静息细胞和常染色体动物的其它细胞中的活性细胞分泌，它是肝脏的指标酶，其中转氨酶（GPT）是最重要的酶。
转氨酶活性的测定主要是为了检测某种疾病的活动性，如肝炎，及药物毒性试验中检测肝脏损伤代谢的重要指标。
本实验使用 Alanine Transaminase (GPT) Activity Assay Kit（Abbexa），用于检测和定量转氨酶（GPT）。
在实验过程中，主要利用血清或其它生物体中的转氨酶GPT，将多肽乙胺将氨基酸分解，在 NADH的金属酶反应中，生成二胺，其中含有标准参照品Alanine（Ala），本实验利用GREEN技术，来测定亞胺对反应物的影响，测定未受影响与受影响后的表現，并计算转氨酶活性（GPT）。
本次实验采用SV-96酶板，大肠杆菌为来源基因组，具有特殊功能。
实验步骤是首先采用水浴加热循环，将血清样本和样本建立混合液，然后通过两个反应温度，55℃和37℃对混合液进行加热和冷冻，以确保特定的反应温度，再用混合液经过两个步骤，先利用反应磷酸化谷氨醛，磷酸化 Ala，然后利用钉牢剂脱氢酶将 Ala脱氢为丙二醛（ALT），最后利用 GREEN 技术测量脱氢后的丙二醛（ALT）产生的发光信号，计算所测得的 GPT活性。
本实验结果显示，所测转氨酶活性（GPT）的值为 6.62 U/L，数据符合相关标准，说明样本的转氨酶活性（GPT）处于正常范围，没有出现异常情况。
本次实验结果可为临床诊断提供有效的依据。
测定转氨酶活力的实验报告
测定转氨酶活力的实验报告测定转氨酶活力的实验报告引言：转氨酶是一类重要的酶，广泛存在于生物体内，参与多种生物化学反应。
通过测定转氨酶的活力，可以了解生物体内的代谢情况，对疾病的诊断和治疗具有重要意义。
本实验旨在通过测定转氨酶的活力，探究其在生物体内的作用及其相关机制。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康的小鼠作为实验对象。
2. 试剂：包括转氨酶检测试剂盒、生理盐水、麻醉剂等。
3. 仪器：分光光度计、离心机等。
实验步骤：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组小鼠经过麻醉后，采集血液样本，离心分离血清。
3. 对照组小鼠同样采集血液样本，离心分离血清。
4. 使用转氨酶检测试剂盒，按照说明书进行操作，测定血清中转氨酶的活力。
5. 使用分光光度计，测定各组样本的吸光度值，并计算相应的转氨酶活力。
6. 对实验结果进行统计学分析。
实验结果：实验组小鼠的转氨酶活力明显高于对照组小鼠。
经过统计学分析，两组之间的差异具有显著性。
讨论：转氨酶活力的测定结果表明，在实验组小鼠中，转氨酶的活力明显增强。
这可能是由于实验组小鼠受到了某种刺激，导致转氨酶的合成和释放增加。
转氨酶在生物体内参与氨基酸代谢和脂肪酸代谢等重要过程，其活力的增强可能与这些代谢通路的活跃有关。
转氨酶活力的测定对于疾病的诊断和治疗具有重要意义。
例如，肝功能异常常常伴随着转氨酶活力的改变。
通过测定转氨酶活力，可以及早发现肝脏疾病，并进行相应的治疗。
此外，转氨酶活力的测定还可以用于评估药物的肝毒性，指导药物的使用和剂量调整。
然而，需要注意的是，转氨酶活力的测定结果受到多种因素的影响。
例如，实验条件的控制、样本的保存和处理等都可能对结果产生影响。
因此，在进行转氨酶活力的测定时，需要严格控制实验条件，并进行多次重复实验，以确保结果的准确性和可靠性。
结论：通过测定转氨酶的活力，我们可以了解生物体内的代谢情况，并对疾病的诊断和治疗提供重要参考。
检测转氨酶的实验报告
一、实验目的了解转氨酶在代谢过程中的重要作用及其在临床诊断中的意义，学习转氨酶活力测定的原理和方法。
二、实验原理转氨酶是一种催化氨基酸与酮酸之间氨基转移的酶，广泛存在于生物体内。
谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）是其中两种重要的转氨酶，它们在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中起着重要作用。
当肝脏、心肌等组织发生病变时，血清中转氨酶活力常显著增加，因此在临床诊断上转氨酶活力的测定具有重要意义。
本实验采用分光光度法测定谷丙转氨酶活力。
谷丙转氨酶作用于丙氨酸-酮戊二酸后，生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。
丙酮酸2，4-二硝基苯腙加碱处理后呈棕色，可用分光光度法测定。
从丙酮酸2，4-二硝基苯腙的生成量，可计算酶的活力。
三、实验材料1. 实验试剂：丙氨酸-酮戊二酸底物溶液、2，4-二硝基苯肼、氢氧化钠、氢氧化钾、盐酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、邻苯二甲酸氢钾、硫酸铵等。
2. 实验仪器：分光光度计、移液器、容量瓶、锥形瓶、试管、试管架、烧杯、玻璃棒等。
3. 实验对象：健康志愿者血液样本。
四、实验步骤1. 准备标准曲线：将已知浓度的丙酮酸2，4-二硝基苯腙溶液分别加入不同的试管中，加入氢氧化钠溶液，用分光光度计测定吸光度值。
以丙酮酸2，4-二硝基苯腙浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 检测谷丙转氨酶活力：取一定量的丙氨酸-酮戊二酸底物溶液和血液样本，加入2，4-二硝基苯肼溶液，混合均匀。
在规定时间内用分光光度计测定吸光度值。
根据标准曲线计算谷丙转氨酶活力。
3. 数据处理：计算实验重复组的平均值，并计算标准差。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验数据，绘制标准曲线，并计算相关系数。
2. 谷丙转氨酶活力测定：根据实验数据，计算谷丙转氨酶活力。
3. 数据分析：比较不同实验组的谷丙转氨酶活力，分析实验结果。
六、实验结论本实验成功测定了谷丙转氨酶活力，结果表明，分光光度法是一种有效且可靠的测定方法。
转氨酶的测定实验报告
一、实验目的1. 了解转氨酶在生物体内的作用及其在临床诊断中的意义。
2. 学习转氨酶活力测定的原理和方法。
3. 掌握分光光度法测定转氨酶活力的操作步骤。
二、实验原理转氨酶（Transaminase）是一类催化氨基酸与酮酸之间氨基转移反应的酶。
它们在生物体内广泛存在，尤其在肝脏、心肌等组织中活性较高。
转氨酶在氨基酸的合成和分解、尿素和嘌呤的合成等中间代谢过程中发挥着重要作用。
本实验采用分光光度法测定血清谷丙转氨酶（ALT）活力。
谷丙转氨酶催化丙氨酸（Ala）与酮戊二酸（α-KG）之间的氨基转移反应，生成丙酮酸（Pyruvate）和谷氨酸（Glu）。
生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼（2，4-DNPH）作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙（2，4-DNP-Pyruvate），加碱处理后呈棕色，可通过分光光度法测定其在特定波长下的吸光度，从而计算酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 材料：血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等。
2. 仪器：分光光度计、恒温水浴锅、移液器、试管等。
四、实验方法1. 准备工作：将血清样本、底物溶液、2，4-二硝基苯肼溶液、氢氧化钠溶液、pH7.4的磷酸盐缓冲液等实验材料准备好。
2. 标准曲线绘制：以不同浓度的丙酮酸为标准品，按实验步骤进行测定，绘制标准曲线。
3. 样本测定：将血清样本按照实验步骤进行测定，计算酶的活力。
五、实验步骤1. 标准曲线绘制：a. 取一系列不同浓度的丙酮酸标准品，加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；b. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；c. 以丙酮酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样本测定：a. 取一定量的血清样本，加入底物溶液，混匀；b. 于37℃水浴中反应一定时间；c. 加入2，4-二硝基苯肼溶液，混匀；d. 加碱处理后，于特定波长下测定吸光度；e. 根据标准曲线，计算酶的活力。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据实验结果，绘制标准曲线，并计算相关系数。
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实验九肝脏中转氨酶活力的测定
一、实验目的
1. 了解转氨酶的性质和临床意义；
2. 掌握谷丙转氨酶活力的测定方法
二、实验原理
本实验以丙氨酸的氧化脱氨基为例，分别测定谷丙转氨酶，谷氨酸脱氢酶活性外，又通过抑制剂观察肝组织中的联合脱氨基作用。
在谷丙转氨酶的催化下，丙氨酸和α-酮戊二酸作用生成丙酮酸和谷氨酸。
次反应可逆，平衡点近于1.0无论正向反应或逆向反应皆可用于测定此酶的活性，既可测定所产生的氨基酸，也可以测定生成的酮酸，因此可有多种测定方法。
本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸作为谷丙转氨酶作用的底物，利用内源性磷酸吡哆醛作为辅酶，在一定条件及时间作用后测定所生成的丙酮酸的量来确定其酶活力。
丙酮酸能与2,4-二硝基苯肼结合，生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液中呈现棕色，其吸收峰为439-530nm，可用于测定丙酮酸的含量。
α-酮戊二酸也能与2,4-二硝基苯肼结合，生成相应的苯腙，但后者在碱性溶液中吸收光谱与丙酮酸二硝基苯腙有差别，在520nm波长比色时，α-酮戊二酸二硝基苯腙的吸光度远较丙酮酸二硝基苯腙为低（约相差3倍）。
经转氨基作用后，α-酮戊二酸减少而丙酮酸增加，因此在波长为520nm 处吸光度增加的程度与反应体系中丙酮酸和α-酮戊二酸的摩尔浓度呈线性关系，故可借此测定谷丙转氨酶的活力。
三、实验材料、试剂和仪器
（一）材料与试剂
猪肝脏、乙醇、0.4mol/LNaOH
标准丙酮酸溶液（1mL 相当于500μg）：准确称取纯化的丙酮酸钠62.5mg，溶于100mL 的0.05mol/L的H2SO4中，此液需临用前配制。
谷丙转氨酶底物：称取L-丙氨酸0.90g 及α-酮戊二酸29.2mg，先溶于pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液中，然后用1mol/L NaOH 调至pH7.4，再加pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲稀释至100mL，贮藏于冰箱内，可保存一周。
（试验了一下pH 接近7.5，中间未调整pH 值）
0.1mol/L 的磷酸缓冲液（pH7.4）：称取13.97gK2HPO4（如果是K2HPO4·∙H2O，则需称取18.31g）和2.69gKH2PO4 溶于1000mL 蒸馏水中。
0.02% 2,4-二硝基苯肼溶液：称取2,4-二硝基苯肼20mg 溶于少量1mol/L 盐酸中，加热溶解后，利用1mol/L 盐酸稀释至100mL。
（二）仪器/器具
电子天平、分光光度计、剪刀、移液管、组织破碎机
四、实验步骤
1. 肝匀浆制备与稀释
将猪肝用生理盐水冲洗，滤纸吸干，称取肝脏0.5g ，剪成小块，置于烧杯内，加入4.5mL 预冷的pH7.4的0.1mol/L 磷酸缓冲液，制成10%肝匀浆，冰冻保存备用。
吸取上述肝匀浆1mL ，加入预冷的pH7.4 的0.1mol/L 磷酸缓冲液49mL （即稀释50 倍）摇匀，作为实验中使用的稀释肝匀浆（室温中放置时间过久，会引起酶活性下降或失活因此需现用现配制，且放置时间不宜过久）。
2. 谷丙转氨酶活力的测定
（1）取试管4 支，分别标“测定管A”、“对照管B”、“标准管S”，“空白管”按下表进行操作。
测定管A 标准管S 对照管B
空白管O
谷丙转氨酶底物/mL
0.5
0.5
37℃ 保温5 min
稀释肝匀浆/mL
0.1
标准丙酮酸0.1
0.1
H 2O 0.1
混匀后，37℃水浴准确保温30min
0.02% 2,4-二硝基苯肼 0.5 0.5 0.5 0.5 谷丙转氨酶底物/mL
0.5
0.5
混匀后，37℃水浴准确保温20min
0.4mol/LNaOH
5.0
5.0
5.0
5.0
（2）混匀后，静置10min ，于520nm 波长处进行比色，以空白管调零，读取测定管A 、对照管B 、标准管S 的吸光度，将测定管A 吸光度减去对照管B 吸光度后与标准管S 相比算出其相当之丙酮酸含量。
（3）谷丙转氨酶活力计算：本法规定酶在37℃与底物作用30min 后，能产生2.5μg 的丙酮酸的酶量为一个谷丙转氨酶活力单位（U ）。
五、实验结果
1. 每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位：
其中，D ——每毫升稀释肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（U/mL ），即肝匀浆的比活；
A ——样品管的吸光度值；
B ——对照管的吸光度值； S ——标准管的吸光度值； 500——标准丙酮酸溶液的浓度； 2.5——谷丙转氨酶换算单位系数。
2. 每克肝脏谷丙氨酶的活力单位
测定管A 标准管S 对照管B 空白管O 520nm 吸光值
0.102
0.170
0.032
0.000
=82.353
=20588.235
六、实验分析
1、实验中的猪肝匀浆液要放置冰柜，室温放置太久酶活性会降低，会影响酶的测定。
2、溶液量取过程中产生很多误差。
3、保温完后下一步骤衔接不够紧凑，时间间隔导致温度稍有下降，造成酶活性降低。