39. 保护氨基酸检验指导书
氨基酸车间化验作业指导书
1.目的为规范化验室操作工日常操作，安全生产，杜绝污染环境，保证正常生产，特制订本规范化操作规程。
2.适用范围氨基酸车间化验室3.职责3.1氨基酸车间体系员负责《化验室作业指导书》的编制及监督实施；3.2化验室工段长负责协助车间对《化验室作业指导书》的修订，负责规程的具体实施情况监督；3.3化验室主操作保证本班组操作工按照操作规程操作；3.4化验室操作工负责执行操作规程的内容。
4设备规程4.1岗位设备明细4.2.1 PH计操作及注意事项4.2.1.1开机：电源线适配器连接DC插孔上，接通电源，端按电源开关，电源接通后进行标定。
4.2.1.2校正：仪器在连续使用时，每天要校正三次。
如果显示屏上显示“ｍｖ”，按“模式”键PH测量状态。
将用蒸馏水清洗过的电极浸入PH=7.00的缓冲液中，按“校正”键开始校正， PH计在校正时自动判断终点，此时显示屏会显示相应校正结果。
用蒸馏水清洗电极，用干净纱布或水吸干，再插入PH=9.21±0.02（或PH=4.01）的标准缓冲液中，按“校正”键，当到达终点时，显示屏上会显示相应的电极斜率和电极性能状态图标，按“读数”键保存校正结果，并退回到正常的测量状态。
仪器完成校正。
4.2.1.3测量：经过标定后的仪器可进行测量。
用蒸馏水清洗电极，用干净纱布或纸吸干，插入要测试样中，按“读数”开始测量，当到达结果时，显示屏显示结果以及电极性能状态图标，记录结果，按“读数”退回测量状态。
用蒸馏水清洗电极，用干净纱布或纸吸干，将保持湿帽套上。
4.2.1.4注意事项：A.在使用电极前应检查保湿帽中是否有少量参比缓冲液。
B.新电极在使用前须经过标准缓冲液校正方可使用。
C.仪器输入端必须保持清洁。
D.校正时检查使用的标准缓冲液与显示器上显示的标准缓冲液组是否一致。
E.此仪器能自动识别标准缓冲液，若测量偏差较大则显示出错，应重新更换标准缓冲液。
F.校正过程中，若校正出错（屏幕显示Eｒｒ2），按“校正”键重新进行校正，但若按读数则终止这次校正并返回测量状态并且这次校正的任何结果都不被保存。
39. 保护氨基酸检验指导书
保护氨基酸检验指导书发放号：编写: 审核:批准:1. 检验流程1.1 成品置于待测区1.2 检验员取样1.3 成品检测(外观、纯度、质谱、旋光、熔点、澄清度等)1.4 备注：A. 产品粉碎并包装置于待测区后，取样检测出的数据写入检验报告。
B. 研发部提供的生产过程中的图谱 (MS、HPLC) ，可做参考，有权进行复查。
2 检验项目2.1 外观：目测法（须为白色或类白色粉末或结晶性类白色粉末）2.2 光学纯度的测定2.2.1 仪器和试剂液相色谱仪、输液泵、检测器、色谱柱、记录装置、进样阀、微量注射器、超声波发生器、蒸馏水、乙晴、三氟乙酸2.2.2 分析步骤A. 称取一定量的样品溶于10ml容量瓶中，直至完全溶解，然后将其过滤。
B. 用微量注射器吸取一定量试样溶液进入色谱系统，利用梯度洗脱使样品达到分离。
C. 各组分经过紫外检测器，通过色谱工作站记录各组分的紫外吸收、并转换为电信号。
D. 在线色谱工作站记录各组分的各项参数，如保留时间、峰高、峰面积，通过面积归一法计算出各组分的百分含量。
2.2.3 注意事项A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
2.2.4 要求及规定A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
D. 尽量安排同一产品的测试使用同一分析条件，这样可加强可比性。
E. 比较数据的重复性时，安排统一产品测试的时间不要间隔很久。
F . 若单项杂质在1%±0.05%，复测确定数据的重复性。
G. 若同一批次产品分包装送样检测，混合样数据应在各分包装测试数据的范围内。
例如：分包装测试的数据分别为：98.5%、98.6%、98.7%，若混合样数据不在98.5%-98.7%范围内，则复测确定数据的重复性。
氨基酸分析仪期间核查作业指导书
1目的及范围在两次检定（校准）间隔内，进行期间核查，验证仪器设备是否保持检定（校准）时状态，确保检测结果的准确性和有效性。
本作业指导书适用于本中心所有的氨基酸分析仪。
2核查内容外观、分离度、检出限、定量定性重复性。
3核查依据3.1 氨基酸分析仪设备使用说明书。
3.2 JJG 1064-2011《氨基酸分析仪检定规程》。
4核查条件4.1环境条件4.1.1安装仪器的房间应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。
4.1.2仪器应平衡地放在工作台上，便于操作，周围无强烈的机械振动和电磁干扰，仪器接地良好。
4.1.3环境温度10~28℃，8小时内温度波动不超过±3℃，相对湿度低于85%。
4.2 电源要求4.2.1电源电压：220±22V4.2.2电源频率：50±0.5Hz4.3 仪器与试剂4.3.1秒表，分度值小于0.1s ；电子天平，最大称重200g ，最小分度0.1mg ；游标卡尺，最小分度不大于0.02mm4.3.2氨基酸标准溶液；超纯水5核查方法5.1 外观检查5.1.1 仪器表面应无破损、缺陷，各个接口连接紧密，仪器运转平稳、无异常噪声。
各功能按键和开关均能正常操作。
5.1.2 仪器上有商标，名标，型号，制造厂名，出厂编号等相关内容。
5.2 分离度核查5.2.1 按仪器推荐的测量条件设置各项参数，启动仪器稳定后，有进样系统注入氨基酸标准溶液（浓度为5nmol/mL~20nmol/mL ）做色谱分析，由色谱图测量的数据按式（1）计算苏氨酸（Thr ）-丝氨酸（Ser ）、甘氨酸（Gly ）-丙氨酸（Ala ）、亮氨酸（Leu ）-异亮氨酸（Ile ）的分离度h R 。
（1） %10000⨯-=H HH R h式中：0H ——两相邻色谱峰的平均峰高，mm ；H ——两相邻色谱峰交叉点到基线的距离，mm ；5.3 检出限5.3.1 在5.2.1的测量条件下，测量浓度为5nmol/mL 左右的氨基酸标准溶液3次，记录色谱图，有组氨酸（His ）峰高平均值和基线噪声值，按式（2）计算检出限L C 。
WB01氨基酸测定实训指导(精)
实训指导（十六）电位滴定法测定食品中氨基酸总量一、目的与要求学习电位滴定法测定食品中氨基酸总量的基本原理和操作方法。
二、原理利用氨基酸两性电解质作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定，以酸度计控制测定终点。
三、仪器与试剂1．仪器酸度计；磁力搅拌器；10mL微量滴定管。
2．试剂及材料（1）36%甲醛：应不含有聚合物。
（2）0.050mol/L 氢氧化钠标准溶液。
（3）酱油。
四、操作流程样品处理一总算含量滴定|」氨基酸态氮含量滴工空白滴定」I结果分析五、操作要点1．样品处理吸取酱油5.0mL，加水稀释并定容至100mL。
2．样品测定（1）吸取20.0mL试样，置于200mL烧杯中，加60mL蒸馏水，开动磁力搅拌器，待搅拌稳定后把酸度计的复合电极小心放入烧杯的合适位置，用氢氧化钠标准溶液滴定至酸度计指示pH8.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，按总酸计算公式，可计算总酸含量。
（2）准确加入10.00mL甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液继续滴定至pH9.2, 记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数，供计算氨基酸态氮含量用。
（3）同时量取80mL水，先用0.05mol/L氢氧化钠溶液调节至pH为8.2 （记录用去氢氧化钠标准溶液的体积，此为测总酸的试剂空白试验），再加入10.00mL甲醛溶液，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至9.2，第二次所用氢氧化钠标准溶液体积为测定氨基酸态氮的试剂空白对照。
六、结果分析1．数据记录于表16-1。
X =（匕—? ° 义 0.014 X 100—X 20 100式中 X 一样品中氨基酸态氮的含量，g/100mL ；匕——测定样品在加入甲醛后滴定至终点（pH9.2）所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL ；匕——空白试验加入甲醛后滴定至终点所消耗氢氧化钠标准溶液的体积，mL ；c ——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ；0.014 ——与1.00mL 氢氧化钠标准滴定溶液［c （NaOH ）=1.000mol/L ］相当的氮的质量，g ；按式（16-1）计算每百毫升样品中氨基酸态氮含量，结果保留两位有效数字。
boc保护氨基实验步骤
boc保护氨基实验步骤英文回答：Step 1: Preparation.Prepare the necessary materials and equipment, including Boc-protected amino acid, coupling reagent, solvent, and a suitable reaction vessel.Ensure that all equipment and glassware are clean and dry to avoid any contamination.中文回答：步骤1，准备。
准备必要的材料和设备，包括Boc保护氨基酸、偶联试剂、溶剂和适合的反应容器。
确保所有设备和玻璃器皿都干净并且干燥，以避免任何污染。
英文回答：Step 2: Deprotection of Boc group.Add the Boc-protected amino acid to the reaction vessel.Add a suitable deprotection reagent, such as trifluoroacetic acid (TFA), to remove the Boc protecting group.Allow the reaction to proceed for a specific period of time, ensuring complete deprotection of the Boc group.中文回答：步骤2，去保护Boc基团。
将Boc保护氨基酸加入反应容器中。
添加适当的去保护试剂，如三氟乙酸（TFA），以去除Boc保护基团。
让反应在特定的时间内进行，确保完全去除Boc基团。
英文回答：Step 3: Purification.After the deprotection reaction, purify the product to remove any impurities.Common purification techniques include column chromatography, recrystallization, or preparative high-performance liquid chromatography (HPLC).Monitor the purity of the product using appropriate analytical techniques, such as thin-layer chromatography (TLC) or HPLC.中文回答：步骤3，纯化。
氨基酸检验
水解法
水解法：以毛发、血粉及废蚕丝等蛋白质为原料， 通过酸、碱或酶水解成多种氨基酸混合物，经分离 纯化获得各种药用氨基酸的方法称为水解法。 目前，用水解法生产的氨基酸有L-胱氨酸、L-精氨 酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、 L-组氨酸、L-脯氨酸 及L-丝氨酸等。 水解法生产氨基酸的主要过程为水解、分离和结晶 精制三个步骤。
发酵法生产的氨基酸品种及工艺 微生物利用碳源、氮源及盐类几乎 可合成所有氨基酸。
目前绝大部分氨基酸皆可通过发酵法生产， 其缺点是产物浓度低，设备投资大，工 艺管理要求严格，生产周期长，成本高。
酶转化法
酶转化法亦称为酶工程技术，实际上是在特
定酶的作用下使某些化合物转化成相应氨基 酸的技术。 酶工程技术工艺简单，产物浓度高，转化 率及生产效率较高，副产物少。 固定化酶或细胞可进行连续操作，节省能 源和劳务，并可长期反复使用。
检测器类型： 流动相：
定氮法
样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨
（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。 经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸 至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算 得样品之氮含量。
4.碘量法或溴量法 示例一：盐酸半胱氨酸水合物的测定 示例一：L-胱氨酸的测定 5.HPLC法 示例一：三氨基酸注射液-341 示例二：六氨基酸注射液400 6.氨基酸自动分析仪
（三）治疗肝病的氨基酸及其衍生物
主要有精氨酸盐酸盐、磷葡氨基酸、谷氨 酸钠、蛋氨酸、瓜氨酸、赖氨酸盐酸盐等； （四）治疗脑及神经系统疾病的氨基酸及其 衍生物 （五）用于肿瘤治疗的氨基酸及其衍生物 （六）其它氨基酸类药物的临床应用
5 氨基酸类药物的生产方法
目前构成天然蛋白质的20种氨基酸的生 产方法有天然蛋白质水解法、发酵法、酶转 化法及化学合成法等四种。 氨基酸及其衍生物类药物已有百种之多， 但主要是以20种氨基酸为原料经酯化、酰化、 取代及成盐等化学方法或酶转化法生产。
氨基酸的检测实验报告
氨基酸的检测实验报告氨基酸检测实验报告一、实验目的：本实验旨在通过定量检测氨基酸的方法，了解氨基酸含量对生物体的影响，掌握氨基酸检测实验的基本原理、操作方法和数据处理。
二、实验原理：氨基酸是生物体中构成蛋白质的基本单元，具有重要的生理功能。
氨基酸的检测方法主要有二级碳酸酐法、二级胺法和氨基酸衍生物法等。
其中，氨基酸衍生物法是目前较常用的方法，通过将氨基酸与重氮芳烃反应生成的氨基酸衍生物，在紫外可见光谱范围内有明显的吸收峰，从而实现氨基酸的定量测定。
三、实验步骤：1. 在试管中加入适量的氨基酸样品，加入碳酸氢钠溶液调节pH值，使其在7-9范围内。
2. 加入硝酸萘溶液，溶解氨基酸样品。
3. 加入亚硝酸钠溶液，生成重氮芳烃。
待反应1-2分钟。
4. 加入硫酸溶液，调节溶液酸碱度。
5. 使用紫外可见分光光度计，选择合适波长，测量反应溶液的吸光度。
6. 建立标准曲线，通过测定不同浓度的氨基酸标准品的吸光度，利用线性回归计算出待测样品的氨基酸浓度。
四、实验结果：1. 测量标准曲线，计算出标准曲线的相关系数R^2。
2. 测量待测样品的吸光度，并利用标准曲线计算出样品中氨基酸的浓度。
五、数据处理与分析：1. 利用标准曲线中的吸光度和已知浓度的氨基酸标准品制作出标准曲线，确定氨基酸浓度和吸光度之间的线性关系。
2. 通过待测样品的吸光度值，利用标准曲线得出样品中氨基酸的浓度。
3. 计算不确定度等数据指标，评估实验结果的可靠性。
六、实验结论：通过标准曲线的测定，我们成功建立了氨基酸的定量检测方法。
通过对待测样品的测定，我们得出其氨基酸的浓度为X，证明样品中含有氨基酸。
七、实验总结：通过本次实验，我们学习了氨基酸检测实验的基本原理和操作方法，掌握了氨基酸的定量测定技术。
同时，我们也了解到氨基酸对生物体的重要性，为后续研究提供了基础。
参考文献：[1] 李教授. 无机及分析化学实验指导. 北京：化学工业出版社，2000.[2] 张博, 杨雪等. 氨基酸及氨基酸衍生物课堂实验研究. 化学实验，2018，40(4):120-123.注：以上内容仅供参考，具体实验报告应结合实际实验结果进行撰写。
氨基酸保护
Carboxylic acid protection - [Bn ester] [Pfp ester] [Me ester] [Allyl ester] [tButyl ester] [PMB ester] [MEM ester]Amine protection (carbamates) - [Fmoc] [Boc] [Cbz] [Troc]Side Chain protections- [Boc]t Bu - (tert-butyl) esterStandard Protection ProcedureTo a solution of the N-protected amino acid, DMAP (0.5 eq), and tBuOH (1.2 eq) in dry DCM at 0° under an inert atmosphere, is added EDCI (1.1. eq) and stirred for 2 h. The mixture is then stirred at room temperature until complete by TLC (usually 14 h) and concentrated in vacuo. The residue is redissolved in ethyl acetate and extracted twice with water, then twice with aqueous saturated sodium bicarbonate. The organic solution is dried (magnesium sulfate) and concentrated in vacuo. The residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary. RemovalThe compound is dissolved in formic acid and stirred at room temperature until the reaction is complete by TLC (usually 12 hours). The solution is then concentrated and coconcentrated several times with toluene. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJ. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1996, 985-993.JOC, 1982, 47, 1962-1965.Bn - (benzyl) esterStandard Protection ProcedureThe amino acid is stirred with dry THF andO-benzyl-N,N'-diisopropylisourea (see ref. for synthesis) at room temperature under an inert atmosphere until complete by TLC (usually 2 days). The mixture is cooled to -20 C and filtered. The filtrate is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amino acid derivative is dissolved in 1:1 methanol:t-butanol andPd(OH)2-C is added under a hydrogen atmosphere. The mixtureis allowed to stir until complete by TLC (usually >3 h), then filtered and concentrated. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesMacromolecules, 1978, 534-539.Allyl - (allyl) esterStandard Protection ProcedureThe compound is dissolved in dry DCM and allyl alcohol (1.1 eq) is added. The solution is stirred under an inert atmosphere at 0° and dicyclohexylcarbodiimide (1 eq) is added followed by4-N,N-dimethylaminopyridine (0.05 eq). The reaction is allowed to warm to room temperature and is stirred until complete by TLC (usually 1-2 days). Ethyl acetate is added and the resulting precipitate is removed by filtration. The filtrate is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amino acid and pyrrolidine (1.2 eq) are dissolved in methylene chloride and cooled to -15°. Triphenylphosphine (0.2 eq) andTetrakis(triphenylphosphine)palladium (0) (0.05 eq) are added and stirred under an inert atmosphere for approx. 1 h. Water and acetonitrile are added and the resulting mixture is extracted twice with petroleum ether. The acetonitrile layer is evaporated and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron, 1996, 52, 12839-12852.PfP - (pentafluorophenyl) esterStandard Protection ProcedureThe acid is dissolved in ethyl acetate and pentafluorophenol (1.2 eq) is added. The solution is cooled to 0° and DCC (1.2 eq) is added. The reaction is allowed to warm to room temperature and stir until complete by TLC (usually overnight, if not complete more DCC may be added). The solution is then filtered through celite, rinsed several times with EtOAc,and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJ. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 1996, 985-993.Me - (methyl) esterStandard Protection ProcedureThe compound is dissolved in dry MeOH and thionyl chloride (2 eq) is added drop wise at 0° under an inert atmosphere. The result is then refluxed until complete by TLC (usually >4 hours) and concentrated in vacuo. The residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary. RemovalThe ester is dissolved in methanol and 1N NaOH is added (excess). The solution is then heated to reflux and stirred until complete by TLC (usually <1 h). Glacial acetic acid is added until the mixture is neutral and then diluted with chloroform. The organic solution is extracted once with water, once with brine, dried (magnesium sulfate), and concentrated in vacuo. The residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesEur. J. Org. Chem. 1999, 1127-1135.JOC, 1995, 60, 2318-2319.PMB - (para-methoxybenzyl) esterStandard Protection ProcedureThe acid is dissolved in dry DCM and 4-methoxybenzyl alcohol (1.1 eq) is added. The solution is stirred under an inert atmosphere at 0° and dicyclohexylcarbodiimide (1 eq) is added followed by4-N,N-dimethylaminopyridine (0.05 eq). The reaction is allowed to warm to room temperature and is stirred until complete by TLC (usually 1-2 days). Ethyl acetate is added and the resulting precipitate is removed by filtration. The filtrate is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe ester is dissolved in phenol and TFA (1-2 eq) is added under an inert atmosphere at 45°. The reaction is stirred until complete by TLC (usually <2 h) and ethyl acetate/water are added. The aqueous layer is extracted2 times with EtOAc and the organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The residue is then purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron, 1996, 52, 12839-12852.Tetrahedron Lett. 1990, 31, 6661-6662.MEM - (methoxyethoxymethyl) esterStandard Protection ProcedureTo compound dissolved in a saturated aqueous sodium bicarbonate solution at room temperature, TBAI (1 eq) and methoxyethyloxymethyl chloride (1.2 eq) are added. The reaction is stirred until complete by TLC (usually 16 h) and dichloromethane is added. The organic layer is washed with water, dried (sodium sulfate), and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary. RemovalThe ester is dissolved in DCM and magnesium bromide etherate (excess) is added at room temperature under an inert atmosphere. The mixture is stirred for 48 h and water is added. The slurry is stirred vigorously for another 2 h and 1N aqueous hydrochloric acid is added until the pH is1-2. The mixture is extracted with ethyl acetate three times and the combined organic layers are dried (sodium sulfate), then concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJOC, 1994, 59, 2314-2323.Synthesis, 1979, 957-961.Boc - (t Butyloxy) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and BOC anhydride (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe compound is dissolved in 1:1 trifluoroacetic acid:water and stirred at room temperature until complete by TLC (usually <2 h). The solution is concentrated in vacuo and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesOrganic Synthesis, 1999, 76, 57-76.Novabiochem Catalog, 2002-2003, pg 2.64-2.65.Fmoc - (9-fluorenylmethyl) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and Fmoc-OSu or Fmoc-Cl (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe compound is dissolved in a solution of 20% piperidine in DMF. The mixture is stirred for 30 minutes at room temperature and concentrated in vacuo. The residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJ. Am. Chem. Soc., 1997, 4, 656-673.Novabiochem Catalog, 2002-2003, pg 2.64-2.65.Alloc - (allyl) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium carbonate (2.7 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and allyl chloroformate (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue can then be purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amine is dissolved in dry THF and dimethylmalonate (7 eq) followed by tetrakistriphenylphosphine palladium (0.02 eq) are added at room temperature under an inert atmosphere. The reaction is stirred until complete by TLC (usually 24 h) and filtered. The solution is thenchromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron, 1996, 39, 12839-12852.Tetrahedron Lett. 1986, 23, 2599-2602.Troc - (trichloroethyl) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and Troc-OSu or Troc-Cl (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 hour and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 3 with 5% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) andchromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe carbamate is dissolved in glacial acetic acid:THF 1:1 and zinc dust (excess) is added. The resulting suspension is stirred at room temperature until complete by TLC (usually <3 h). The mixture is then filtered, concentrated in vacuo and redissolved in chloroform. The solution is washed once with 5% aqueous sodium bicarbonate, dried (sodium sulfate), and concentrated in vacuo. The resulting residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesCan. J. Chem. 1982, 60, 976.Synthesis, 1983, 671.JOC, 1988, 53, 3108.Cbz - (benzylcarboxy) carbamateStandard Protection ProcedureThe amine is dissolved in water and sodium bicarbonate (2 eq) is added with stirring. The resulting solution is cooled to 5° and Cbz-OSu or Cbz-Cl (1.5 eq) is added slowly as a solution in para-dioxane (also cooled). The resulting mixture is stirred at 0° for 1 h and allowed to warm to room temperature overnight. Water is then added and the aqueous layer is extracted 2 times with EtOAc. The organic layer is back extracted twice with saturated sodium bicarbonate solution. The combined aqueous layers are acidified to a pH of 1 with 10% HCl, then extracted 3 times with EtOAc. The combined organic layers are dried (sodium sulfate) and concentrated in vacuo. The resulting residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.RemovalThe amino acid derivative is dissolved in 1:1 methanol:t-butanol andPd(OH)2-C is added under a hydrogen atmosphere. The mixtureis allowed to stir until complete by TLC (usually >3 h) then filtered and concentrated in vacuo. The resulting residue is purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesTetrahedron Lett. 1966, 7, 4765-4768.t Bu - (tert-butyl) etherStandard Protection ProcedureSee: JOC,1975, 6, 675-681 for general procedure.RemovalThe ether is dissolved in 1:1 trifluoroacetic acid:water and stirred at room temperature until the reaction is complete by TLC (usually <2 h). The solution is concentrated and purified by flash chromatography (SiO2) if necessary.ReferencesJOC,1975, 6, 675-681Novabiochem Catalog, 2002-2003, pg 2.64-2.65.。
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保护氨基酸检验指导书发放号：编写: 审核:批准:1. 检验流程1.1 成品置于待测区1.2 检验员取样1.3 成品检测(外观、纯度、质谱、旋光、熔点、澄清度等)1.4 备注：A. 产品粉碎并包装置于待测区后，取样检测出的数据写入检验报告。
B. 研发部提供的生产过程中的图谱 (MS、HPLC) ，可做参考，有权进行复查。
2 检验项目2.1 外观：目测法（须为白色或类白色粉末或结晶性类白色粉末）2.2 光学纯度的测定2.2.1 仪器和试剂液相色谱仪、输液泵、检测器、色谱柱、记录装置、进样阀、微量注射器、超声波发生器、蒸馏水、乙晴、三氟乙酸2.2.2 分析步骤A. 称取一定量的样品溶于10ml容量瓶中，直至完全溶解，然后将其过滤。
B. 用微量注射器吸取一定量试样溶液进入色谱系统，利用梯度洗脱使样品达到分离。
C. 各组分经过紫外检测器，通过色谱工作站记录各组分的紫外吸收、并转换为电信号。
D. 在线色谱工作站记录各组分的各项参数，如保留时间、峰高、峰面积，通过面积归一法计算出各组分的百分含量。
2.2.3 注意事项A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
2.2.4 要求及规定A. 氨基酸样品分析必须打空白，谱图中不允许出现未积分的小杂峰，若是空白中有的，必须以基线相减的方式处理掉；如果处理不掉，必须进行复测。
B. 基线尽量保持一条直线。
C. 谱图中不允许出现负峰。
D. 尽量安排同一产品的测试使用同一分析条件，这样可加强可比性。
E. 比较数据的重复性时，安排统一产品测试的时间不要间隔很久。
F . 若单项杂质在1%±0.05%，复测确定数据的重复性。
G. 若同一批次产品分包装送样检测，混合样数据应在各分包装测试数据的范围内。
例如：分包装测试的数据分别为：98.5%、98.6%、98.7%，若混合样数据不在98.5%-98.7%范围内，则复测确定数据的重复性。
2.3 旋光的测定2.3.1 仪器和试剂旋光仪、25ml容量瓶、电子天平、DMF、NaOH、AcOH、EtOAc、MeOH、EtOH、HCl、CHCl3等。
2.3.2 分析步骤A. 称取一定量样品，用相应溶剂溶于25ml容量瓶中至完全溶解。
B. 旋光仪开机预热20分钟。
C. 旋光仪校零，用溶剂清洗旋光测定管3-5次，装入溶剂，置于旋光仪箱内。
D. 校零,取出旋光管，记录空白值。
E. 用配好的溶液润洗旋光管3-5次，再加入溶液。
F. 再次置于旋光仪同一位置上，读数，取平均值。
2.3.3 注意事项A. 溶液或溶剂加入旋光管内读数时，管内不能有气泡。
B. 测同种样品时旋光管应放置在同一位置上。
2.3.4测量示值误差：±（0.01°+测量值×0.05%）2.4 熔点的测定2.4.1仪器和试剂：数字熔点仪、玻璃毛细管2.4.2 分析步骤A. 用玻璃毛细管取样，（颗粒状固体稍加研磨后装管）自由落体法敲击样品，使之填装结实，样品高度一般为3mm。
B. 调预制温度（低于样品熔点10度），稳定到达时，把填装好的样置入仪器，按“升温”键。
C. 测试结束，屏幕自动显示初熔值和终熔值。
d. 一次填装多根毛细管，分别测定，废弃最大值和最小值后取平均值。
2.4.3 注意事项A. 同一批号样品取样高度应一致，以确保测量结果的一致性。
B. 设定起始温度切勿超过仪器使用范围（<300℃）。
C. 线性升温速率不同，测定结果也不一致。
一般速率越大，读数值越高。
D. 测定较高熔点样品后再测较低熔点样品。
2.4.4 测量示值误差A. 小于200度范围内，±0.5℃。
B. 200℃～300℃范围内，±0.8℃。
2.5 水份的测定2.5.1 仪器和试剂：KF-1B水份测定仪、卡尔费休试剂、烧杯、微量进样器、无水甲醇、蒸馏水2.5.2 分析步骤A. 在贮液瓶中倒入适量卡尔费休试剂。
B. 加入无水乙醇（分析纯）于反应瓶中，至淹没电极裸露端。
C. 开启电源，调节搅拌器转速，仪器进入滴定状态。
D. 滴定结束后用微量进样器取蒸馏水10ul进行标定卡尔费休试剂，并输入所消耗的试剂量。
（卡氏试剂标定做2次平行样后取平均值）E. 把称好的样品滴定并输入所消耗的试剂量和样品重量。
F. 读取“百分含量”试剂。
2.5.3 注意事项A. 卡尔费休试剂具有腐蚀性，操作时应在通风的环境中进行。
B. 废液应做有害物质处理。
C. 测定酮类或醛类样品时，需要专用试剂。
D. 定期保养仪器2.6 澄清度的测定2.6.1 仪器和试剂试管、量筒、溶剂（一般为N,N-二甲基甲酰胺）、电子天平、称量纸、小勺2.6.2 分析步骤A. 称取0.3克样品，置于试管中。
B. 用量筒移取2ml溶剂加入试管中。
C. 摇均使之充分溶解，静置观察是否澄清，无黑点，无絮状物。
2.6.3 注意事项A. 样品溶解时，不能进行加热及其他外力加速其溶解。
B. 试管壁应洗干净，以免混淆视觉。
C. 澄清是指能使光线能很好通过。
2.6.4 要求及规定A. 溶液透明能透光。
B. 不要用强酸和强碱测试。
不能借助加热以及超声波。
C. 尽量首选DMF试做澄清度。
D. 在澄清度测试的溶液中（一般为2ml）发现少于等于6颗小杂点（包括：小黑点、小黄点、类似滤毛的毛状物）可以判定为合格产品。
如果重复3次测试，情况都在上述范围内，产品判定为合格产品。
并在检验报告备注栏中写明实际的测试情况。
2.7 分子量的测定2.7.1 仪器和试剂：LC-20AD泵、DGU-20A3在线真空脱气机、CTO-10Avp柱温箱、甲醇（分析醇）、乙晴(色谱纯)、蒸馏水、DMF等2.7.2 分析步骤A. 先把样品溶解，须离心分层，取上层清液，稀释。
B. 打开色谱工作站，进入操作界面后，打开CDL，BLOCK加热块进行预热，待温度到达设定的温度，然后打开氮气，高电压。
C. 编辑序列表，设定LC部分的参数及MS部分的参数，选择使用Tuning文件里的Esi文件或Apci文件，若样品为合成的保护氨基酸，还需选择扫描Positive或NegativeD. LC部分的参数设定好之后即可激活仪器，激活后待LC和MS处于进样等待状态，点击Strt键后即可进样。
E. 若样品需作LC-MS，则需改变管路，接上色谱柱，平衡后手动进样进入色谱系统。
F. 处理MS图谱时，选择TIC图谱中的某一点，观察该点分子量是否与样品理论分子量一致，若不一致，则选取另外的点观察。
点选择之后，应对TIC图谱中的分子离子峰积分，再减去空白溶剂中的杂质。
G. 图谱积分好后，进入Report，编辑报告，报告中的PDA谱与MS图尽量做到简洁，尽可能的减少图谱中的杂质峰。
H. 关机。
先关闭LC部分。
关闭时，先关周边设施，然后系统控制器，最后关电脑。
2.7.3 注意事项A. 每天做样后，须用异丙醇清洗Probe及相关部件。
B. Rotary Pump的换油周期是3000Hr。
C. 重新启动真空时，至少24Hr之后再进行分析。
D. 室内温度保持在18～28℃，湿度在40～70。
E. LC用水必须新鲜。
F. 自动进样器的清洗液原则上和流动相一致。
2.8 对应异构体光学纯度的测定2.8.1 仪器和试剂：10ml容量瓶、超声波、色谱柱：ChirobioticT、ChirobioticR和Daicel IC、微量进样器、手动进样器2.8.2 分析步骤A. 样品的制备：称取D型氨基酸5毫克、L型氨基酸5毫克、D型L型各5毫克混合物，分别加入10ml 容量瓶，用HPLC级甲醇溶解，甲醇加至10ml刻度线，超声波加速溶解，取上层清液供HPLC进样使用。
B. 待色谱柱平衡好后，用微量进样器吸取5ul待测氨基酸（D型或L型），进样分析。
C. 运行15分钟后，保存数据谱图。
D. 再次平衡色谱柱后，用清洗过的微量进样器吸取D型和L型5ul，进行分析，D型和L型完全分离。
E. 通过面积归一法对照两次数据谱图，得出D型氨基酸中含有多少L型氨基酸或者L型氨基酸中含有多少D型氨基酸。
2.8.3 要求及规定A. 21个Fmoc氨基酸，必须检测该项目。
B. 如果客户有手性要求，加测该指标。
2.9 干燥失重的测定2.9.1 仪器：真空干燥箱，干燥器，扁形称量瓶，天平2.9.2 操作步骤A. 在天平上用扁形称量瓶（保证干燥，用前最好恒重，或者平时储藏于干燥器中）称一定量的样品（做2个平行样及一个空白样），记录数据。
B. 把扁形称量瓶放入真空干燥箱，大约干燥2-3小时，取出称量瓶放入干燥器中冷却后称量，记录数据。
C. 数据处理。
2.9.3 注意事项A. 真空干燥箱的设定温度应低于样品熔点的1/2。
B 样品一定要冷却后称量（干燥器内至少冷却半小时）。
C. 拿放称量瓶时不要直接与手接触，配合干燥的纸巾拿放称量瓶。
2.10 游离氨基酸的测定2.10.1 仪器和试剂：天平，加热器，烧杯，试管，茚三酮，无水乙醇，苯酚，重蒸吡啶2.10.2 分析步骤A. 称取待测样5mg于试管中。
B. 配制三种检测试剂：a. 5g茚三酮溶解于100ml无水乙醇b. 80ml苯酚加入20ml无水乙醇混合c. 重蒸吡啶C. 在试管中加入三种检测试剂各两滴。
D. 试管放入100℃沸水中5min。
E. 取出试管，观察其颜色。
F. 与0.05%的游离氨基溶液作对照，浅了为＜0.05%（合格），深了为＞0.05%（不合格）。
2.10.3 注意事项A. 试管必须干净，否则造成颜色误差，影响检测结果B. 必须放在沸水中5分钟，时间长短颜色会有一定的误差2.11 TLC的测定2.11.1 仪器和试剂：三用紫外线分析仪，展开剂，薄层板，有机溶剂2.11.2 分析步骤：A. 点样点样用的毛细管为内径＜ lmm的管口平整的毛细管，将样品溶于有机溶剂。
用毛细管吸取样品在小心点样，如需重复点样，则应待前次点样的溶剂挥发后方可重点。
若在同一块板上点几个样，样品点间距离为5mm以上。
B. 展开展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑。
薄层的展开在密闭的容器中进行。
先将选择的展开剂放入广口瓶，再将点好试样的薄层板放入广口瓶中进行展开，点样的位置必须在展开剂液面之上，当展开剂上升到薄层的前沿（离前端5－10mm）或多组分已明显分开时，取出薄层板放平晾干，用铅笔划溶剂前沿的位置后，即可显色。
C. 显色如果化合物本身有颜色，就可直接观察它的斑点。
如果本身无色，可先在紫外灯光下观察有无荧光斑点（有苯环的物质都有），用铅笔在薄层板上划出斑点的位置；对于在紫外灯光下不显色的，可放在含少量碘缸中显色来检查色点（因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑点）。