植物细胞融合
植物细胞融合(实验)
准备仪器
准备适当的显微镜、离心 机、摇床、培养皿等实验 仪器。
分离原生质体
表面消毒
将实验材料表面消毒，以避免污染。
酶解
用适当的酶溶液处理实验材料，使细胞壁分解，释放 出原生质体。
分离
将酶解后的组织用离心机或过滤法分离出生质体。鉴定通过形态学观察、分子生 物学技术或免疫学技术等 方法对融合细胞进行鉴定。
培养与繁殖
将筛选和鉴定合格的融合 细胞进行培养和繁殖，以 备后续实验或应用。
03
植物细胞融合实验结果分 析
融合细胞的筛选结果
1 2
筛选方法
采用抗性筛选和荧光激活细胞分选（FACS）等 方法，从融合细胞群体中筛选出具有稳定融合特 征的细胞。
筛选和培育融合细胞
在融合后的细胞中筛选具有双亲遗传 特征的融合细胞，并进行进一步的培 育和筛选。
克隆和繁殖
对筛选出的融合细胞进行克隆和繁殖， 获得具有特定性状的植物个体。
02
植物细胞融合实验步骤
准备实验材料
01
02
03
选择实验材料
选择健康、无病虫害的植 物组织作为实验材料，如 根、茎、叶等。
准备试剂
植物细胞融合(实验)
目录
• 植物细胞融合实验简介 • 植物细胞融合实验步骤 • 植物细胞融合实验结果分析 • 植物细胞融合实验的应用与展望 • 结论
01
植物细胞融合实验简介
植物细胞融合的定义
01
植物细胞融合是指将来自不同植 物的细胞通过物理或化学方法诱 导融合，形成一个具有双亲遗传 特征的融合细胞的过程。
植物细胞融合技术可以用于新品种的培育和遗传改良，未来可以开展 相关研究，为育种工作提供新的工具和方法。
动物与植物之间细胞融合成功案例
动物与植物之间细胞融合成功案例
你知道吗？在科学探索的奇妙世界里，还真有动物与植物细胞融合的超酷案例呢。
比如说吧，烟草和人的细胞就有过融合实验。
科学家们就像超级魔法师一样，通过一些特殊的技术手段，让烟草细胞和人体细胞试着凑到一块儿。
这就好比把来自两个完全不同世界的小生物，一个是扎根大地的植物世界公民烟草，一个是活跃又复杂的动物世界成员人类的细胞，拉到同一个舞台上。
不过啊，这种融合可没那么简单，就像让猫和鱼和平共处还得互相融合一样困难。
科学家得克服好多好多问题，像细胞外面那层保护壳啦，细胞里面不同的“生活习惯”啦。
但不管怎么说，这个烟草和人细胞融合的例子，可是在探索生物奥秘的道路上走出了超级有趣又大胆的一步，让我们看到了不同生物之间那些神奇的可能性。
虽然这个融合的细胞可能不会像正常的动植物细胞那样正常地发展成新的生命形式，但它为我们理解细胞的工作原理、基因的交流等带来了前所未有的启发呢。
诱导植物细胞原生质体融合的方法
诱导植物细胞原生质体融合的方法
植物细胞原生质体融合就像是一场细胞界的奇妙派对！那到底咋诱导它们融合呢？嘿，物理法里的离心、振动、电刺激就像给细胞们来一场刺激的冒险。
把不同的原生质体放在一起，通过高速离心或者振动，让它们撞在一起，就像两个小伙伴在游乐场里不小心撞个满怀。
电刺激呢，就像给细胞们来一道闪电，瞬间让它们“来电”，紧密结合。
注意哦，操作的时候可得小心，别把细胞给弄伤啦！这方法安全不？放心吧！只要操作得当，那是相当安全稳定滴。
就好比走钢丝，只要技术好，就不会掉下去。
那这融合有啥用呢？用处可大啦！可以创造出具有新特性的植物呀！比如让抗病虫害的和高产的植物融合，哇塞，那不就有了既抗病虫害又高产的超级植物嘛！优势也很明显呀，能打破物种界限，就像打破了魔法的封印，让不同的植物基因可以交流融合。
就问你厉不厉害？实际案例也不少呢！比如科学家们通过原生质体融合，培育出了更耐旱的植物。
在干旱地区，这可真是救命稻草哇！所以说，植物细胞原生质体融合就是植物界的魔法棒，能创造出各种神奇的植物。
咱就得大胆地去探索，让植物世界更加丰富多彩。
观点结论：植物细胞原生质体融合超棒，值得我们大力研究和应用。
植物体细胞杂交案例
植物体细胞杂交案例
植物体细胞杂交是指通过细胞的融合而不涉及生殖细胞的杂交。
以下是植物体细胞杂交的两个案例：
1. 植物体体细胞融合杂交案例：1984年，杂交水稻技术的开
发者袁隆平首次成功地使用植物体细胞融合的方式，将稻谷和野生稻杂交。
他们从白龙江省的野生稻中提取细胞，并与栽培稻的根尖细胞融合。
通过细胞融合，他们成功地将野生稻中的抗病性和耐旱性等重要特性导入栽培稻中，创造出了高产、抗病和耐旱的杂交水稻。
2. 植物体质体细胞杂交案例：2014年，美国科学家利用植物
体细胞质体的特性，成功进行了植物体质体细胞杂交。
研究人员首先将两个不同的植物细胞的细胞质体提取出来，然后将提取的细胞质体通过融合技术进行杂交。
杂交后的细胞质体融合体被重新引入植物体内，形成了一个新的植株。
这项研究为植物体质体的利用和杂交育种提供了新的思路和方法。
这些案例展示了植物体细胞杂交在改良植物品种、提高产量和增加抗性等方面的潜在应用价值。
植物体细胞融合完成的标志
植物体细胞融合完成的标志1. 什么是植物体细胞融合？植物体细胞融合听起来有点高大上，但实际上就像是植物的“交友派对”。
想象一下，植物界的小伙伴们为了繁衍后代，决定把自己的细胞聚在一起，来个“细胞联谊”。
通过这种方式，细胞们就能交换基因，合成新的特性，结果就是你可能会看到一种全新的植物，简直就像是植物界的“变形金刚”！不过，这个过程可不是简单的“你好，我好大家好”，它可是有着明确的“完成标志”的哦。
1.1 细胞融合的过程首先，细胞融合的过程就像一场精彩的舞蹈。
两个细胞要首先互相靠近，像是两位跳舞的小伙伴，互相试探着。
然后，它们的细胞膜就像是在跳舞时的手，慢慢地靠拢，直到最后完全融为一体。
这时候，细胞核也会结合在一起，形成一个新的“家庭”。
这就像是在说：“来吧，咱们一起打造新的未来！”1.2 完成的标志那么，体细胞融合完成的标志是什么呢？首先，细胞的形态发生了变化，变得更加复杂，有时还会出现新的细胞结构，这就像是房子装修了一样，旧的墙壁不见了，新的房间出现了。
其次，基因组的重组开始了，像是在进行一场“基因换装秀”，这可不是简单的换衣服，而是彻底改变了基因的组合。
最后，当这些变化稳定下来后，我们就可以看到新植物的生长了，它们可能会长出更美丽的花朵，或者结出更美味的果实，这真是让人忍不住想叫好！2. 为什么细胞融合重要？细胞融合的重要性可不是小打小闹，而是植物界的一场“革命”。
通过细胞融合，科学家们可以创造出抗病虫害的植物，减少农药的使用，这就好比给农田装上了“护身符”。
想象一下，田里的作物不用担心虫子侵袭，丰收的景象可想而知，简直就是“好事成双”！2.1 新品种的诞生细胞融合还能够培育出新品种，像是将不同口味的冰淇淋混合在一起，最终形成一种让人惊艳的全新口味。
新植物不仅能抵御环境变化，还可能具有更高的营养价值，这样一来，咱们的餐桌上就能多出不少美味健康的选择，简直是“百利而无一害”！2.2 生态平衡的维持此外，细胞融合还有助于维持生态平衡。
植物细胞融合的方法
植物细胞融合的方法
植物细胞融合，这可真是个神奇又有趣的领域啊！就好像是一场细胞之间的奇妙舞会。
你知道吗，植物细胞融合有物理方法呢！电融合就是其中之一，就像是给细胞来一场小小的电击派对，让它们在瞬间紧密结合。
还有离心法，把细胞们放在离心机里快速旋转，仿佛让它们在疯狂的旋转中找到彼此的怀抱。
化学方法也不甘示弱呀！用一些特殊的化学试剂，就像给细胞们牵红线一样，促使它们融合在一起。
这多奇妙啊！
还有生物方法呢！病毒就像是个调皮的小精灵，能帮助细胞们实现融合。
这就好像是有个特别的媒人，在细胞间穿梭撮合。
植物细胞融合的意义可太大啦！它能创造出具有新特性的植物呀。
想象一下，通过细胞融合，我们可以得到更耐旱、更抗病的植物品种，那对于农业来说是多么了不起的事情！这不就像是给植物世界带来了一场变革吗？我们可以让不同的植物优点汇聚在一起，打造出超级植物。
植物细胞融合也为生物科学的研究打开了新的大门。
它让我们更深入地了解细胞的奥秘，探索生命的奇迹。
这难道不令人兴奋吗？它就像是一把钥匙，打开了无数未知的宝藏。
总之，植物细胞融合是个充满魅力和潜力的领域。
它让我们看到了生命的无限可能，让我们对未来充满了期待。
我们应该积极投入到这个领域的研究和探索中，为创造更美好的世界贡献自己的力量！。
植物体细胞融合技术
2.1．1植物细胞工程的基本技术--------植物体细胞融合技术学习目标1、简述植物组织培养和植物体细胞杂交技术。
2、尝试进行植物组织培养。
学习重点1、植物组织培养的原理和过程2、植物体细胞杂交的原理一、 植物体细胞杂交技术1．概念：不同种植物的 ，在一定条件下融合成 ，并把杂种细胞培育成新的 的技术。
2．过程 不同的植物体细胞果胶酶纤维素酶−−−→−不同细胞原生质体−−−→−人工诱导原生质体融合 →杂种细胞→杂种植株。
3．植物体细胞杂交步骤：(1)去掉细胞壁，分离出有活力的 ，目前最常用的去细胞壁的方法是酶解法，也就是在温和条件下用 、 去除植物细胞的细胞壁。
(2)不同植物体细胞原生质体融合，必须通过 法和 法来诱导融合。
方法有： 等促使原生质体融合。
化学法是用(PEG)作为诱导剂来诱导融合。
融合后再生出 。
(3)用植物组织培养方法进行培育，可得到杂种植株。
如图在此过程中需要注意的问题有：①植物体细胞杂交过程中，植物体细胞融合所依据的生物学原理是 ；植物组织培养的理论基础是 。
②体细胞融合成功以后，既有AB 型杂种细胞，还能形成AA 型和BB 型两种融合细胞，但只有AB 型细胞是植物体细胞杂交所形成的杂种细胞，因此在杂种细胞形成后还应有一个 过程。
③目前常用的去除细胞壁的方法是 ，保证了原生质体活性。
植物体细胞融合完成的标志是新细胞壁的形成。
④植物体细胞杂交过程仍以植物组织培养为前提，通过植物组织培养完成杂种植株的培育过程。
⑤植物体细胞杂交的最大突破是克服远缘杂交不亲和的障碍，但是目前仍有许多理论和技术问题没有解决，离推广应用仍有一定距离。
【当堂检测】 1．不能．．用于人工诱导原生质体融合的方法是 （ ） A ．振动 B ．电刺激 C ．PEG D ．重压 2．与传统的有性杂交法相比，植物体细胞杂交的最大优点是 （ ） A ．可使两个亲本的优良性状组合到一起 B ．可以克服远缘杂交不亲和的障碍 C ．可以培育出高产性状明显的新品种 D ．可以降低生成成本，提高接济效益3．植物体细胞杂交的过程实质是 （ ）A ．细胞质融合的过程B ．细胞核融合的过程C ．细胞膜融合的过程D ．细胞原生质体融合的过程 4．原生质体融合后，需诱导产生细胞壁，参与此过程的细胞器是 （ ） A ．叶绿体、高尔基体 B ．线粒体、高尔基体 C ．叶绿体、线粒体 D ．线粒体、内质网 5．高度分化的植物细胞、组织和器官进行组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误．．的是 （ ）A ．该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的B ．该愈伤组织的细胞没有全能性C ．该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞D ．该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状结构 6．以下不能．．说明细胞具有全能性的实验是 （ ） A ．胡萝卜韧皮部细胞培育出植株 B ．紫色糯性玉米种子培育出植株 C ．转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株 D ．番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株7．植物组织培养过程中的脱分化是指 （ ）A ．植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B ．未成熟的种子经过长期培养，培养出幼苗的过程C ．植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程D ．取植物的枝芽培育成一株新植物的过程8．在脱分化形成愈伤组织的过程中，下列各项为非．必要条件的是（）A．培养基需要消毒灭菌B．给予适宜的温度C．给予充足的光照D．给予适宜的养料和激素9．通过植物体细胞杂交，获得一个杂种植株需要的步骤是（）A．分离原生质体→诱导原生质体融合→组织培养→得到杂种植物B．分离原生质体→原生质体直接融合→组织培养→杂种植株C．获取细胞→原生质体融合→组织培养→杂种植株D．获取细胞→原生质体直接融合→组织培养→杂种植株10．胚状体是在植物组织培养的哪一阶段上获得的（）A．愈伤组织B．再分化C．形成完整植株D．取离体组织11．利用植物的茎尖、茎段、花药、花粉等，在无菌的条件下，放在玻璃器皿中人工配制的培养基上，使它发育成完整的植株。
植物细胞融合成功的标志
植物细胞融合成功的标志植物细胞融合成功的标志，这可是个有趣的话题哦！你知道吗，植物的世界里也有许多秘密，像一部神秘的小说，总有惊喜等着我们去发现。
想象一下，两个植物细胞就像两个小伙伴，可能在某个阳光明媚的下午，相遇了！他们互相看了看，可能心中一阵小激动，然后就开始“握手”融合了。
嘿，听上去是不是像是在讲一段友情故事？一旦细胞融合成功，首先映入眼帘的就是颜色的变化。
说真的，这可不是普通的变化哦！像是变魔术一样，一瞬间你就能看到它们变得鲜艳夺目。
你想，原本的单一颜色一下子变成了五颜六色，那种感觉就像是过年一样，喜庆得不得了。
再说了，这种颜色的变化不仅好看，更是植物健康的标志。
你知道的，颜色越鲜艳，细胞的活力越强，简直就像在说：“我在这里，充满能量！”细胞的形态也会发生大变化。
嘿，你想象一下，两种细胞结合后，它们的形态会像什么？就好比两个好朋友的结合，各自的特点融合在一起，诞生出一个全新的个体。
这个新个体就像是一种新的生物，充满了无限可能。
看看这些变化，简直让人感叹，生命的奥秘真是奇妙无比。
然后，我们不得不提的就是细胞分裂的能力。
融合成功后，新的细胞会开始像春天的花朵一样，迅速生长。
就像是孩子们在操场上追逐嬉戏，越长越大，越长越壮。
这样生长的速度，可不是开玩笑的，真的是快得让人眼花缭乱。
每当我看到植物快速生长的样子，心中总会涌起一种难以言表的欣喜，仿佛看到了生命的奇迹在眼前绽放。
植物细胞融合后，还会影响到它们的遗传特征。
嘿，这可真是科学的神奇之处！两种不同的遗传特征在这里结合，就像是两种美味的食材，碰撞出新的火花。
你可能会想，哎呀，这样的结合会不会让植物变得奇奇怪怪？其实不然！许多新品种的植物就是这样产生的，个个都散发着独特的魅力，让人忍不住想要亲近。
再说了，融合成功的细胞还会有更强的抗逆性，面对各种恶劣环境的挑战。
这就好比是在说：“来吧，恶劣的天气，我们不怕！”这份勇气让植物更加顽强，就像是那些勇敢的小战士，时刻准备迎接挑战。
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植物细胞融合
一、细胞融合的目的和意义
细胞融合能实现远缘杂交。
其意义在于打破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新种的界限，有可能形成有性杂交方法无法获得的新型杂种植物，广泛组合各种基因型，扩大了遗传物质的重组范围。
二、细胞融合（cell fusion)概念
在外力（诱导剂或促融合剂）作用下，两个或两个以上的异源细胞或原生质体相互接触，从而发生膜融合、胞质融合和核融合并形成杂种细胞的现象。
通过细胞培养技术，这个细胞有可能发育成完整的生物个体，这个杂种后代有可能兼有两个上代的一些优良性状。
三、PEG诱导原生质体融合的机理：
带有大量负电荷的PEG与水之间的氢键结合，使溶液中自由水消失，由于高度脱水引起原生质体凝集，形成大小程度不同的凝集物。
原生质体发生皱缩并大大扭曲变形，邻近原生质体之间紧密接触。
在原生质体细胞膜与膜紧密接触的部位，膜内蛋白质颗粒易位并凝聚。
接着可能是相邻的剥去蛋白质的细胞膜间的类脂质与类脂质反应。
继之，类脂质分子的扰动和重排导致接触的细胞膜局部发生融合，形成很小的细胞质桥，之后它逐渐扩大，两个原生质体最终融合。
使用化学促融剂时，Ca2+是必需的。
关于Ca2+的作用机理，有的认为是Ca2+和PO43-形成不溶于水的配合物，成为细胞间的钙桥，由此引起融合。
也有解释为Ca2+结合到带负电磷脂的电离基上，使磷脂分子在膜上相互分离，由此引起融合。
四、实验材料、试剂和仪器
1.材料：无菌烟草叶片、洋葱根尖
2.试剂
1）酶混合液，配制分两部进行：
a.将CaCl2.2H2O 7 mmol/L (1.029g/L)
NaH2PO4.2H2O 0.7mmol/L (0.1092g/L)
MES 3 mmol/L (0.585g/L？)
甘露醇0.5 mmol/L(0.0911g/L)
用重蒸馏水溶解，调pH5.6，定容为酶储备液，灭菌备用。
b.使用时再加入：
纤维素酶R-10 0.8%
果胶酶R-10 1%
(因酶制剂经过高压灭菌处理后会失活，故先将酶储液灭菌，待用时再将酶制剂
按比例加入到第一步已灭菌的酶液内。
)
2）配制CaCl2.2H2O 0.16mol/L(23.52g/L)（pH5.8-6.2 用于悬浮原生质体）
3）PEG液(用时现配)：
PEG (MW=6000) 30%（w/v) (即300g/L)
CaCl2.2H2O 0.01mol/L
KH2PO4 0.00074mol/L
山梨醇（分子式：C6H14O6）0.1 mol/L
调pH 5.8-6.2。
3.仪器
1）大型仪器：高压灭菌锅，超净工作台，离心机，倒置显微镜。
2）一般器材：
大小培养皿，小烧杯，小滴管，刻度离心管，小漏斗，不锈钢网300目
五.实验步骤
实验路线：烟草叶肉及洋葱根尖原生质体酶解分离→提纯原生质体并调整原生质体密度→PEG法使原生质体融合→倒置显微镜观察并照相
具体步骤：
1.取酶储液10ml，加入纤维素酶0.08g和果胶酶0.1g，制备酶液。
2.取材：烟草、洋葱根尖各0.7g
取洋葱根尖，并将其切成0.5cm长短大小放入小平皿中；取烟草叶片将其剪
成0.5cm2大小放入小平皿中。
3.酶解：将酶液等量加入到存有实验材料的平皿中，放入25℃培养箱酶解。
洋葱约
4h，烟草约3h。
4.观察酶解效果
5.原生质体的分离和纯化
○1酶解后，用300目铜网过滤酶液，去除未酶解的杂质，将滤液收集在10ml离心管中。
○21000转/分离心3分钟，用吸管或移液枪弃上清（注意不要把收集的原生质体吸走）。
○3用CaCl2·2H2O（约1ml）悬浮下面的原生质体（PEG法）。
○4显微镜观察提纯后的原生质体，若杂质较多可重复○1～○3操作。
6.原生质体的密度测定
用血细胞记数板记数。
每一样品测定3次，根据测定结果，将悬浮原生质体密度调整至5×105个/ml。
7.原生质体的融合
PEG法
1）配制PEG液（5ml）
30%（w/v) PEG(MW=6000) 1.5 g
CaCl2·2H2O 0.0074g
KH2PO40.0005 g
山梨醇0.0911g
调pH 5.8～6.2
2）将两种原生质体悬液等量混合
3）用刻度吸管将混合的原生质体悬液滴在直径为60mm的平皿中，每皿7~8滴，每滴约0.1ml。
然后静置10分钟，使原生质体贴在皿底上，形成一薄层（应
有3~5个平皿的重复）。
4）用吸管将等量的PEG溶液缓慢地加在原生质体液滴上，再静置10~15分钟。
此时可取一个平皿在倒置显微镜上观察原生质体间的粘连。