综述 2011 FOXl2基因的研究现状
先天性睑裂狭小综合征诊疗的研究进展
先天性睑裂狭小综合征诊疗的研究进展陈园婧【摘要】先天性睑裂狭小综合征是一种罕见的常染色体显性遗传病,致病基因为位于染色体3q23上的FOXL2基因,主要表现为上睑下垂、睑裂狭小、倒向型内眦赘皮及内眦间距增宽,还可伴发其他眼部及眼外症状,根据女性患者是否伴发卵巢功能早衰可分为两型.目前,内眦赘皮及上睑下垂矫正术为矫正眼部畸形的主要治疗方法,针对不同的严重程度可采用不同的手术方式,而手术时机及手术分期的选择仍存争议.本文就先天性睑裂狭小综合征诊疗进展做一综述.【期刊名称】《中国美容医学》【年(卷),期】2019(028)002【总页数】4页(P163-166)【关键词】先天性;睑裂狭小;上睑下垂;倒向型内眦赘皮;FOXL2基因;卵巢功能早衰【作者】陈园婧【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院北京 100144【正文语种】中文【中图分类】R777.1先天性睑裂狭小综合征又称睑裂狭小-上睑下垂-倒向型内眦赘皮综合征（blepharophimosis-ptosis-epicanthus inversus syndrome，BPES）、Komoto综合征等，1841年由Aon Ammon首次报道，1889年由Vignes详细描述[1]。
主要临床表现为双侧上睑下垂、睑裂狭小、倒向型内眦赘皮和内眦间距增宽，是一种罕见的先天性疾病，发病率约1/50 000，多为家族性，呈常染色体显性遗传，偶有散发病例，男性多于女性，致病基因是位于染色体3q23上的FOXL2基因[2]。
Zlotogora等[3]提出BPES可分为两型：Ⅰ型为四种典型眼部表现伴女性患者卵巢功能早衰(premature ovarian failure，POF)，通过患病男性传递，外显率100%；Ⅱ型为具备四种眼部表现，不伴POF，男女传代几率相等，外显率约为96.5%。
本文就近年来BPES病因、临床表现及治疗等方面的进展进行综述。
1 BPES的致病原因众多遗传学研究将BPES致病基因定位于染色体3q23上的FOXL2基因。
FOXL2与脊椎动物性别决定研究进展_鲁毅
肽段（ｎ＝１４），基 因 序 列 高 度 保 守。ＦＯＸＬ２ 核 蛋 白 包 含 Ｎ－末 端 区、ＤＮＡ 结 合 区 （ｗｉｎｇｅｄ ｈｅｌｉｘ／ｆｏｒｋ－ ｈｅａｄ结构区）、多聚 丙 氨 酸 区、Ｃ－末 端 区，其 中，Ｃ－段 区域含有大 量 与 功 能 有 关 的 基 因。ＤＮＡ 结 合 区 又 称 叉 头 结 构 区 ，含 １００ 个 氨 基 酸 ，由 ２ 个 翼 状 结 构 、３ 个ａｌｐｈａ螺旋、３个 ｂｅｔａ折叠组成。
２ ＦＯＸＬ２ 与脊椎动物性别决定的关系
ＦＯＸＬ２ 主要 在 垂 体 和 卵 巢 颗 粒 细 胞 中 表 达， 是第一个被认定在维持卵巢功能中具有重要作用的 常 染 色 体 基 因，也 是 性 别 决 定 和 分 化 的 标 记。 ＦＯＸＬ２ 参与脊 椎 动 物 雌 性 性 腺 早 期 发 育 与 分 化， 对卵巢发育和维持 卵 巢 功 能 具 有 重 要 作 用，在 性 别 决定前的生殖嵴开 始 表 达，通 过 转 录 调 节 作 用 调 节 其 目 的 靶 基 因 的 转 录 、蛋 白 表 达 ，参 与 颗 粒 细 胞 增 殖 分化，对卵 巢 发 育 和 维 持 卵 巢 功 能 具 有 重 要 作 用。 有研 究 证 明，ＦＯＸＬ２ 通 过 与 芳 香 化 酶 和 ［３］ ＳＯＸ９ 基因 作 ［４］ 用２条途径参与脊椎动物性别决定。 ２．１ ＦＯＸＬ２ 与芳香化酶途径
在脊 椎 动 物 中，性 别 决 定 与 类 固 醇 类 激 素 有 明 显的关系，而这也与 脊 椎 动 物 的 进 化 程 度 有 明 显 关 系，即进化程度越 高，类 固 醇 的 性 别 决 定 作 用 越 低， 反之，亦 然。 如 在 鱼 类、两 栖 类 中，性 腺 的 性 别 分 化 极 易 受 雌 激 素 和 雄 激 素 影 响 ，而 爬 行 动 物 、鸟 类 则 易 受雌激素影响。同 哺 乳 动 物 相 比，鸟 类 性 腺 发 育 是 易变的，更 容 易 受 到 性 激 素 尤 其 是 雌 激 素 的 调 控。 由 ＣＹＰ１９Ａ１ 基因 负 责 表 达 的 Ｐ４５０ 芳 香 化 酶 是 雌 激素合成途径中一 个 重 要 酶，用 芳 香 化 酶 抑 制 剂 处 理性腺尚未分 化 的 雌 性 ＺＷ（雌 性 异 配 型）鸡 胚，可 以 使 鸡 胚 右 侧 性 腺 发 育 成 睾 丸 ，左 侧 卵 巢 雄 性 化 ，持 久地诱导雌性向雄性的性反转 。 ［５］ 基因表达研 究 发 现，芳香化酶只在强烈的性 腺 分 化 时 期（６～６．５ｄ， ２９－３０ 期）表 达 在 ＺＷ 雌 性 性 腺。 另 外，芳 香 化 酶 只表达在雌性性腺 的 髓 质，而 其 他 类 固 醇 生 成 途 径 上 游 的 酶 类 均 表 达 在 两 性 腺 髓 质 ，由 此 推 断 ，在 雌 性 性别决定早期，Ｗ 连锁雌性 决 定 基 因 很 有 可 能 是 通 过激活 ＣＹＰ１９Ａ１ 基因表达芳香化 酶 来 决 定 雌 性 性 腺分化发育的。鸡性腺雌激素受 体 ａｌｐｈａ在 性 腺 强 烈分化时期两性性腺表达的不对称性也很好地支持 了这一推断 。 ［６］ 此 后，科 学 家 们 基 本 上 在 不 同 种 属 的脊椎动物内都发现了这种性别决定机制。
211001956_两广小花猪FOXL2基因多态性及其与几个重要经济性状的关联分析
畜牧兽医学报 2023,54(3):956-965A c t aV e t e r i n a r i a e tZ o o t e c h n i c aS i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.03.010开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):两广小花猪F O X L 2基因多态性及其与几个重要经济性状的关联分析廖伟莉1,张笑科1,曾检华2,阳林芳2,李 硕1,胡梦婷1,郭懿萱1,陈赞谋1,张 豪1,李加琪1,袁晓龙1*(1.华南农业大学动物科学学院,广东省农业动物基因组学与分子育种重点实验室,国家生猪种业工程技术研究中心,广州510642;2.广东壹号地方猪研究院有限公司,湛江524000)摘 要:旨在筛选F O X L 2(f o r k h e a db o x p r o t e i nL 2)基因与猪排卵状态和屠宰性状相关的S N P s 位点,为今后两广小花猪分子育种和遗传改良提供理论和参考依据㊂本研究以107头(365ʃ25)日龄两广小花猪为研究对象,使用靶向测序基因型检测(g e n o t y p i n g b y t a r g e t s e q u e n c i n g ,G B T S )技术定位F O X L 2基因的S N P s 位点,对排卵状态㊁乳头数和屠宰性状进行关联分析和单倍型分析㊂两广小花猪F O X L 2基因共检测到24个突变位点㊂剔除I n D e l 突变和突变频率小于1%的S N P 位点后,对得到的12个S N P s 进行关联分析,其中2个位于编码区㊁10个位于非编码区㊂单S N P 位点关联分析表明,g .79706726T>C ㊁g .79706898C>T ㊁g .79707794T>C ㊁g .79709005T>C 这4个位点对排卵状态均有显著性影响(P <0.05),对总乳头数性状无显著性影响(P >0.05)㊂g .79707040A>G ㊁g .79708079T>C ㊁g .79708152G>T ㊁g .79706726T>C ㊁g .79706898C>T ㊁g.79707794T>C 这6个S N P s 位点对骨重㊁瘦肉率㊁腿臀重㊁左胴体重性状均有显著性影响(P <0.05),其中3个S N P s 位点g .79707040A>G ㊁g .79708079T>C ㊁g.79708152G>T 对板油重性状有显著性影响(P <0.05)㊂S N P 位点单倍型组合关联分析发现,g .79706726T>C ㊁g .79706898C >T ㊁g .79707794T>C 这3个位点处于强连锁区域内(r 2>0.9)㊂H 1H 2单倍型组合(g .79706726T>C 和g .79706898C >T )对排卵状态㊁骨重㊁瘦肉率㊁腿臀重㊁左胴体重性状均有显著性影响(P <0.05),其中C C T T 单倍型个体的骨重㊁腿臀重和左胴体重性状显著高于T T C C 单倍型个体(P <0.05),C C T T 单倍型个体的瘦肉率性状显著低于T T C C 单倍型个体(P <0.05)㊂F O X L 2基因中有与排卵状态显著相关的g .79706726T >C ㊁g .79706898C >T ㊁g .79707794T >C ㊁g.79709005T >C 等S N P s 位点㊂另外,本研究发现了F O X L 2转录因子与猪屠宰性状相关的S N P s 位点,表明F O X L 2转录因子除了维持卵巢表型和功能以外,还影响猪的重要经济性状㊂本研究为F O X L 2基因在两广小花猪的选种选育中提供重要参考,为分子标记辅助选择提供理论依据㊂关键词:卵巢;屠宰性状;F O X L 2;S N P s;单倍型中图分类号:S 828.2 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)03-0956-10收稿日期:2022-08-17基金项目:广东省重点领域研发计划(2022B 020*******);财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系资助(C A R S -35);国家自然科学基金(32072694);广东省自然科学基金(2021A 1515012396);广州市科技计划项目(202002030071)作者简介:廖伟莉(1997-),女,广东梅州人,硕士生,主要从事动物遗传育种研究,E -m a i l :l a o v e l i 1028@163.c o m *通信作者:袁晓龙,主要从事动物遗传育种研究,E -m a i l :yx l @s c a u .e d u .c n A s s o c i a t i o n s b e t w e e n F O X L 2P o l y m o r p h i s ma n dS e v e r a l I m po r t a n t E c o n o m i cT r a i t s i nL i a n g g u a n g S p o t t e dP i gs L I A O W e i l i 1,Z H A N G X i a o k e 1,Z E N GJ i a n h u a 2,Y A N GL i n f a n g 2,L I S h u o 1,HU M e n g t i n g 1,G U O Y i x u a n 1,C H E NZ a n m o u 1,Z H A N G H a o 1,L I J i a q i 1,Y U A N X i a o l o n g1*(1.N a t i o n a l E n g i n e e r i n g R e s e a r c hC e n t e r f o rB r e e d i n g S w i n e I n d u s t r y ,G u a n g d o n gP r o v i n c i a lK e y L a b o f A g r o -a n i m a lG e n o m i c s a n d M o l e c u l a rB r e e d i n g ,C o l l e g e o fA n i m a l S c i e n c e s ,S o u t hC h i n aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y ,G u a n gz h o u 510642,C h i n a ;Copyright ©博看网. All Rights Reserved.3期廖伟莉等:两广小花猪F O X L2基因多态性及其与几个重要经济性状的关联分析2.G u a n g d o n g Y i h a o I n d i g e n o u sP i g R e s e a r c hI n s t i t u t eC o.L t d.,Z h a n j i a n g524000,C h i n a)A b s t r a c t:T h e p u r p o s e o f t h i s s t u d y w a s t o e x p l o r e t h e S N P s o f F O X L2g e n e a n d t h e i r e f f e c t s o n o v u l a t i o ns t a t u sa n d s l a u g h t e r i n g t r a i t s,i n o r d e rt o p r o v i d et h e o r e t i c a lb a s i sf o r m o l e c u l a r b r e e d i n g a n d g e n e t i c i m p r o v e m e n t o f L i a n g g u a n g S p o t t e d p i g s i n t h e f u t u r e.At o t a l o f107L i a n g-g u a n g S p o t t e d p i g s a t t h e a g e o f(365ʃ25)d a y sw e r e t a k e n a s t h e r e s e a r c ho b j e c t s.T h e S N P s o f F O X L2w e r ed e t e c t e du s i n gg e n o t y p i n g b y t a r g e t s e q u e n c i n g(GB T S)t e c h n o l o g y,a n da s s o c i a-t i o n a n a l y s i sa n d h a p l o t y p ea n a l y s i s w e r e p e r f o r m e d o n o v u l a t i o ns t a t u s,t e a tn u m b e r sa n d s l a u g h t e r t r a i t s.At o t a l o f24m u t a t i o ns i t e sw e r ed e t e c t e d i nt h e F O X L2g e n eo fL i a n g g u a n g S p o t t e d p i g s.A f t e r e l i m i n a t i n g S N P sw i t hI n D e lm u t a t i o na n d t h em u t a t i o n f r e q u e n c y l e s s t h a n 1%,12S N P sw e r ea n a l y z e d.A m o n g t h e m,2S N P sw e r e l o c a t e d i nt h ec o d i n g r e g i o na n d10 S N P sw e r e l o c a t e d i n t h e n o n-c o d i n g r e g i o n.T h e a s s o c i a t i o n a n a l y s i s s h o w e d t h a t t h e g.79706726 T>C,g.79706898C>T,g.79707794T>C,a n d g.79709005T>Cs h o w e ds i g n i f i c a n t e f f e c t s o no v u l a t i o n s t a t u s(P<0.05),b u t h a dn o s i g n i f i c a n t e f f e c t s o n t e a t n u m b e r s t r a i t(P>0.05). T h e6S N P s(g.79707040A>G,g.79708079T>C,g.79708152G>T,g.79706726T>C,g.79706898C>T,a n d g.79707794T>C)h a d s i g n i f i c a n t e f f e c t s o n b o n ew e i g h t,l e a nm e a t r a t e,h a m w e i g h t,a n d l e f t c a r c a s sw e i g h t(P<0.05),a n d3S N P s(g.79707040A>G,g.79708079 T>C,g.79708152G>T)d i s p l a y e d s i g n i f i c a n t e f f e c t s o n l e a f f a tw e i g h t(P<0.05).T h e a s s o c i a-t i o na n a l y s i so fh a p l o t y p ec o m b i n a t i o nf o u n dt h a t t h e3S N P s g.79706726T>C,g.79706898 C>T,a n d g.79707794T>Cw e r e s t r o n g l y l i n k e d(r2>0.9).T h eH1H2h a p l o t y p e c o m b i n a t i o n (g.79706726T>Ca n d g.79706898C>T)h a ds i g n i f i c a n te f f e c t so no v u l a t i o ns t a t u s,b o n e w e i g h t,l e a nm e a t r a t e,h a m w e i g h t,a n d l e f t c a r c a s sw e i g h t(P<0.05).T h e b o n ew e i g h t,h a m w e i g h t,a n d l e f t c a r c a s s t r a i t s o f i n d i v i d u a l sw i t hC C T Th a p l o t y p ew e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s ew i t hT T C Ch a p l o t y p e(P<0.05),a n dt h e l e a n m e a t r a t e t r a i to f i n d i v i d u a l sw i t hC C T T h a p l o t y p ew a s s i g n i f i c a n t l y l o w e r t h a nt h o s ew t i h T T C Ch a p l o t y p e(P<0.05).F o u rS N P so f F O X L2g e n ew e r e s i g n i f i c a n t l y a s s o c i a t e dw i t ho v u l a t i o ns t a t u s,w h i c hw e r e g.79706726T>C, g.79706898C>T,g.79707794T>C,a n d g.79709005T>C.I na d d i t i o n,t h eS N P s o f F O X L2 a s s o c i a t e dw i t h p i g s l a u g h t e r t r a i t sw e r e f o u n d i n t h i s s t u d y,i n d i c a t i n g t h a t F O X L2w a s n o t o n l y a s s o c i a t e dw i t ho v a r i a n p h e n o t y p ea n df u n c t i o n,b u ta l s or e l e v a n t f o r p i gg r o w t ha n dd e v e l o p-m e n t.T h i s s t u d yp r o v i d e d a n i m p o r t a n t r e f e r e n c e f o r t h e s e l e c t i o n a n db r e e d i n g o f F O X L2g e n e i nL i-a n g g u a n g S p o t t e d p i g s,a n d a l s o p r o v i d e d a t h e o r e t i c a l b a s i s f o rm o l e c u l a rm a r k e r-a s s i s t e db r e e d i n g. K e y w o r d s:o v a r y;s l a u g h t e r i n g t r a i t s;F O X L2;S N P s;h a p l o t y p e*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:Y U A N X i a o l o n g,E-m a i l:y x l@s c a u.e d u.c nF O X L2(f o r k h e a db o x p r o t e i nL2)是调控性腺向卵巢分化[1]㊁维持卵巢表型的转录因子[2-3]㊂研究表明,F O X L2缺失会导致小鼠卵巢颗粒细胞丧失特性且向雄性睾丸的支持样细胞转化,致使卵泡闭锁[4];F O X L2突变虽然不会致使性别逆转,但是会致使人的卵巢早衰[5]㊂另外,F O X L2是激活素刺激F S H-β启动子活性的必要条件[6-7]㊂卵泡刺激素(f o l l i c l e s t i m u l a t i n g h o r m o n e,F S H)是由α亚基和β亚基非共价结合产生的异二聚体糖蛋白[8],而F S H 浓度必须超过一定的阈值才能促进卵泡募集㊁生长㊁选择和优势[9]㊂可见,F O X L2对卵巢功能的维持及其排卵状态都至关重要,它的突变或者缺失会使排卵提前终止[10]㊂研究表明,F O X家族里存在大量与乳腺癌相关的转录因子,比如F O X C1[11]㊁F O X Q1[12]㊁F O X L2[13]等与乳腺癌患者的预后能力相关;F O X F2[14]㊁F O X A1[15]㊁F O X L1[16]的缺乏使得乳腺癌细胞的侵袭性增加㊂另外,国内有研究表明母猪F S H-β的基因多态性对母猪乳头数有显著759Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷效应[17],且F O X L2会调控F S H-β的活性㊂F O X O1也是F O X转录因子家族中的一员㊂F O X O1基因多态性与猪的肌肉质量以及纤维类型有关[18],是一个影响屠宰性状和肉质性状的候选基因[19-20]㊂虽然目前未见F O X L2基因与猪乳头数和屠宰性状有关的报道,但是我们推测F O X L2对母猪的乳头数和重要生产性状有关㊂两广小花猪的母性强㊁产仔数多且能稳定遗传,有较高的育种价值[21],是国家级畜禽遗传资源保护品种[22]㊂虽然两广小花猪的瘦肉率低于国外引进的杜洛克㊁大白猪和长白猪等品种,但是其肉嫩㊁肌内脂肪含量高,适口性好[23],有一定的经济价值[24]㊂因此,筛选对两广小花猪的排卵状态和屠宰性状有显著效应的分子标记位点,提供有效的分子标记手段,有助于品种选育和杂交改良,进而提高猪的经济效益㊂因此,本研究通过靶向测序基因型检测(g e n o t y p i n g b y t a r g e t s e q u e n c i n g,G B T S)技术分析F O X L2基因多态性,对两广小花猪的排卵状态和屠宰性状进行关联性分析,以期筛选与排卵状态和屠宰性状相关的S N P s位点,为今后两广小花猪的分子育种和品种改良提供参考依据㊂1材料与方法1.1材料随机选取由壹号食品某猪场提供的107头㊁(365ʃ25)日龄㊁体况良好的两广小花猪为试验对象㊂对107头母猪进行屠宰后,测定胴体的屠宰性状,鉴定母猪卵巢组织的排卵状态㊂统一取卵巢组织,浸于75%酒精中,-20ħ保存㊂使用液相探针杂交的G B T S技术定位F O X L2基因的S N P s位点,得到的S N P s位点用于后续关联分析㊂1.2方法1.2.1基因检测及注释由石家庄博瑞迪生物技术有限公司对猪13号染色体上的F O X L2基因(G e n e I D:100622956)进行引物和芯片的设计㊂基因的平均探针覆盖率为81.6%,利用G B T S技术对本试验107个样本进行检测,测序结果与猪参考基因组(S u s-s c r o f a11.1,h t t p://w w w.e n s e m b l.o r g/ S u s_s c r o f a/I n f o/I n d e x/)基因型比对分析,确定与F O X L2基因相关的24个突变位点,并利用A N N-O V A R软件[25]对检测结果进行注释㊂1.2.2屠宰性状性能及排卵状态测定试验动物在(365ʃ25)日龄时被屠宰㊂屠宰后,按照N Y/T 825 2004‘瘦肉型猪胴体性状测定技术规范“[26]进行测定㊂共有17个胴体性状被测定:瘦肉率㊁皮脂率㊁骨率㊁左胴体重㊁板油重㊁肾脏重㊁皮脂重㊁骨重㊁瘦肉重㊁腿臀重㊁头重㊁蹄重㊁右胴体重㊁胴体直长㊁胴体斜长㊁膘厚(倒数3~4肋)㊁眼肌面积(坐标法)㊂采集并观测猪两侧卵巢的排卵状态㊂根据母猪是否具有红体或黄体判断母猪排卵状态㊂如果至少一侧卵巢有红体或黄体,说明该母猪卵巢排卵状态正常;如果未出现红体或黄体,则母猪卵巢排卵状态异常㊂1.2.3S N P s基因分型及关联分析根据筛选的S N P s位点,将107头母猪进行S N P s基因分型,并对排卵状态和屠宰性状进行关联分析㊂使用H a p l o v i e wv4.2软件[27]对所有S N P s位点进行连锁不平衡分析,并构建单倍型块㊂1.3数据统计分析使用E x c e l2019软件对数据进行汇总整理,计算各S N P s位点的等位基因频率和基因型频率,以及群体遗传参数:纯合度(H o)㊁杂合度(H e)和有效等位基因数(N e)㊂使用R软件(R x644.0.3, h t t p s://w w w.r-p r o j e c t.o r g/)对个体基因型与母猪排卵状态进行χ2检验,对屠宰性状使用最小显著差数检验法(l e a s t s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e t e s t,L S D法)进行多重比较㊂试验数据用 平均值ʃ标准差 表示㊂2结果2.1F O X L2基因突变位点筛选和遗传结构分析对107份猪卵巢F O X L2基因进行测序,得到24个突变位点,包含19个S N P s,2个I n D e l突变, 3个位点同时发生了S N P s和I n D e l突变㊂剔除突变频率小于1%的9个突变位点,这些位点被认为是点突变,没有多态性㊂在此基础上,继续剔除发生I n D e l突变的3个突变位点,质控后的12个S N P s 位点如表1所示㊂g.79709005T>C㊁g.79709017 A>G位点位于编码区,其他10个S N P s位点位于非编码区㊂2.2F O X L2基因突变位点与猪排卵状态和乳头数性状的关联分析在筛选出来的12个S N P s位点中,得到如表2所示的对排卵状态有显著性影响的4个S N P s位点(P<0.05)㊂这4个位点分别为g.79706726T> C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794T>C㊁g. 79709005T>C,其中g.79709005T>C在F O X L2的编码区㊂对总乳头数性状无显著性影响(P>0.05)㊂859Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期廖伟莉等:两广小花猪F O X L2基因多态性及其与几个重要经济性状的关联分析表1F O X L2基因S N P s位点的突变频率㊁基因型频率㊁等位基因频率和群体遗传学指标T a b l e1M u t a t i o n f r e q u e n c y,g e n o t y p e f r e q u e n c y,a l l e l e f r e q u e n c y a n d p o p u l a t i o n g e n e t i c i n d e x e s o f S N P s i n F O X L2g e n eS N P s突变频率M u t a t i o nf r e q u e n c y基因型频率G e n o t y p ef r e q u e n c y等位基因频率A l l e l ef r e q u e n c y群体遗传学指标P o p u l a t i o n g e n e t i c i n d e xH o H e N eg.79706726T>C0.92C C(89)T C(9)T T(9)C T0.920.081.090.830.080.080.870.13g.79706733C>T0.76C C(81)C T(26)-C T0.760.241.320.760.240.880.12g.79706898C>T0.92C C(9)C T(9)T T(89)C T0.080.9211.90.080.080.830.130.87g.79707040A>G0.91A A(10)G G(97)-A G1010.090.910.090.91g.79707794T>C0.92C C(88)T C(9)T T(10)C T0.920.091.090.820.090.090.860.14g.79707940T>A0.08T A(8)T T(99)-T A0.930.081.080.080.930.960.04g.79708079T>C0.90C C(96)T T(11)-C T1010.90.10.90.1g.79708152G>T0.91G G(10)T T(97)-G T1010.090.910.090.91g.79708325T>C0.08T C(9)T T(98)-T C0.920.081.090.080.920.960.04g.79709005T>C0.27C C(28)T C(1)T T(78)T C0.990.011.010.260.010.730.730.27g.79709017A>G0.33A A(72)A G(2)G G(33)A G0.980.021.020.670.020.310.680.32g.79709208T>A0.31A A(9)T A(24)T T(74)A T0.780.221.290.080.220.690.20.82.3F O X L2基因突变位点与猪屠宰性状的关联分析在筛选出来的12个S N P s位点中,得到如表3所示的与屠宰性状相关的6个S N P s位点㊂g.79707040A>G㊁g.79708079T>C㊁g.79708152 G>T㊁g.79706726T>C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794T>C这6个位点对骨重㊁瘦肉率㊁腿臀重㊁左胴体重性状均有显著性影响(P<0.05),其中3个S N P s位点g.79707040A>G㊁g.79708079T> C㊁g.79708152G>T对板油重性状有显著性影响(P<0.05)㊂这6个S N P s位点在F O X L2的非编码区㊂g.79707040A>G中,G G基因型个体的板油重㊁骨重㊁腿臀重和左胴体重性状都显著高于A A 基因型个体,G G基因型个体的瘦肉率显著低于A A基因型个体;g.79708079T>C中,C C基因型个体的板油重㊁骨重㊁腿臀重和左胴体重性状都显著高于T T基因型个体(P<0.05),C C基因型个体的瘦肉率显著低于T T基因型个体(P<0.05);g.79708152G>T中,T T基因型个体的板油重㊁骨重㊁腿臀重和左胴体重性状都显著高于G G基因型个体(P<0.05),T T基因型个体的瘦肉率显著低于G G基因型个体(P<0.05)㊂g.79706726T>C中, C C基因型个体的骨重㊁腿臀重和左胴体重性状都显著高于T T基因型个体(P<0.05),C C基因型个体的瘦肉率显著低于T T基因型个体(P<0.05);g.79706898C>T中,T T基因型个体的骨重㊁腿臀959Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷表2S N P s与猪排卵状态和乳头数的关联分析T a b l e2A s s o c i a t i o na n a l y s i s b e t w e e nS N P s a n d p i g o v u l a t i o n s t a t u s a n d t e a t n u m b e rS N P s基因型G e n o t y p e 排卵状态O v u l a t i o n s t a t u s异常A b n o r m a l正常N o r m a lχ2P值P v a l u e总乳头数T e a t n u m b e r均值ʃ标准差M e a nʃS Dt值t v a l u eP值P v a l u eg.79706726T>C C C10797.50.0213.75ʃ0.694.300.64T C2713.56ʃ0.73T T4513.89ʃ0.33g.79706898C>T C C457.50.0213.89ʃ0.334.300.64C T2713.56ʃ0.73T T107913.75ʃ0.69g.79707794T>C C C10786.20.0413.74ʃ0.694.910.55T C2713.56ʃ0.73T T4613.9ʃ0.32g.79709005T>C C C5236.150.0413.74ʃ0.768.460.21T C1014ʃN AT T106813.74ʃ0.64P<0.05表示差异显著;P>0.05表示差异不显著P<0.05i n d i c a t e s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e;P>0.05i n d i c a t en o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e表3S N P s与猪屠宰性状的关联分析T a b l e3A s s o c i a t i o n s a n a l y s i s b e t w e e nS N P s a n d p i g s l a u g h t e r t r a i t sS N P s基因型G e n o t y p e板油重/k gL e a f f a tw e i g h t骨重/k gB o n ew e i g h t瘦肉率/%L e a nm e a t r a t e腿臀重/k gH a m w e i g h t左胴体重/k gL e f t c a r c a s sw e i g h tg.79707040A>G A A(10)0.93ʃ0.13b3.57ʃ0.72b33.9ʃ2.63a7.75ʃ0.84b26.34ʃ2.18bG G(97)1.07ʃ0.21a5.12ʃ1.93a31.42ʃ3.15b8.65ʃ1.01a29.19ʃ3.21a g.79708079T>C C C(91)1.07ʃ0.21a5.13ʃ1.93a31.4ʃ3.15b8.66ʃ1.01a29.21ʃ3.22aT T(11)0.94ʃ0.12b3.65ʃ0.73b33.89ʃ2.50a7.79ʃ0.81b26.42ʃ2.09b g.79708152G>T G G(10)0.93ʃ0.13b3.57ʃ0.72b33.90ʃ2.63a7.75ʃ0.84b26.34ʃ2.18bT T(97)1.07ʃ0.21a5.12ʃ1.93a31.42ʃ3.15b8.65ʃ1.01a29.19ʃ3.21a g.79706726T>C C C(89)1.07ʃ0.21a5.11ʃ1.89a31.42ʃ3.23b8.69ʃ1.00a29.27ʃ3.20aT C(9)1.06ʃ0.18a5.13ʃ2.27a31.48ʃ1.97b8.26ʃ1.00a b28.28ʃ3.16a bT T(9)0.92ʃ0.13a3.47ʃ0.68b34.14ʃ2.68a7.67ʃ0.85b26.09ʃ2.16b g.79706898C>T C C(9)0.92ʃ0.13a3.47ʃ0.68b34.14ʃ2.68a7.67ʃ0.85b26.09ʃ2.16bC T(9)1.06ʃ0.18a5.13ʃ2.27a31.48ʃ1.97b8.26ʃ1.00a b28.28ʃ3.16a bT T(89)1.07ʃ0.21a5.11ʃ1.89a31.42ʃ3.23b8.69ʃ1.00a29.27ʃ3.20a g.79707794T>C C C(88)1.07ʃ0.21a5.12ʃ1.90a31.42ʃ3.25b8.69ʃ1.00a29.28ʃ3.22aT C(9)1.06ʃ0.18a5.13ʃ2.27a31.48ʃ1.97b8.26ʃ1.00a b28.28ʃ3.16a bT T(10)0.93ʃ0.13a3.57ʃ0.72b33.90ʃ2.63a7.75ʃ0.84b26.34ʃ2.18b 同一S N P位点同列数据的肩标字母完全不同表示差异显著(P<0.05),含相同字母表示差异不显著(P>0.05)㊂下同I n t h e s a m e c o l u m n,v a l u e sw i t hd i f f e r e n t l e t t e r s u p e r s c r i p t sm e a n s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P<0.05),w h i l e v a l u e sw i t h t h e s a m e s u p e r s c r i p tm e a nn o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e(P>0.05).T h e s a m e a sb e l o w069Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期廖伟莉等:两广小花猪F O X L2基因多态性及其与几个重要经济性状的关联分析重和左胴体重性状都显著高于C C基因型个体(P< 0.05),T T基因型个体的瘦肉率显著低于C C基因型个体(P<0.05);g.79707794T>C中,C C基因型个体的骨重㊁腿臀重和左胴体重性状都显著高于T T基因型个体(P<0.05),C C基因型个体的瘦肉率显著低于T T基因型个体(P<0.05)㊂2.4F O X L2基因突变位点的连锁不平衡分析使用H a p l o v i e w v4.2软件对8个S N P s位点进行连锁不平衡分析,并构建单倍型块㊂结果见图1㊂由图1可知,g.79706726T>C㊁g.79706898C> T㊁g.79707794T>C这3个位点存在强连锁(r2> 0.9),分别命名为H1㊁H2㊁H3㊂方框根据标准的H a p l o v i e wv4.2软件配色方案进行着色B o x e s a r e c o l o r e da c c o r d i n g t o t h e s t a n d a r dH a p l o v i e wv4.2s o f t w a r e c o l o r s c h e m e图1S N P s位点连锁不平衡分析F i g.1A n a l y s i s o f l i n k a g e d i s e q u i l i b r i u mo f S N P s2.5单倍型组与卵巢发育㊁乳头数的关联分析H1H2单倍型块有3种单倍型,H2H3单倍型块和H1H3单倍型块各产生4种单倍型(表4)㊂猪卵巢排卵状态在H1H2单倍型块的3种单倍型有显著性差异(P<0.05),而乳头数性状无显著性差异㊂说明F O X L2基因中g.79706726T>C和g.79706898C>T组合的位点对卵巢排卵状态有显著性影响(P<0.05),对乳头数没有显著性影响(P>0.05)㊂表4S N P s位点单倍型块与卵巢排卵状态㊁乳头数的关联分析T a b l e4A s s o c i a t i o na n a l y s i s o f h a p l o t y p e b l o c k s o f S N P sw i t ho v a r i a no v u l a t i o n s t a t u s a n d t e a t n u m b e r单倍型块H a p l o t y p eb l o c k单倍型H a p l o t y p e排卵异常A n o v u l a t o r y排卵正常O v u l a t i o nχ2P值P v a l u e总乳头数T e a t n u m b e r H1H2C C T T(89)10797.500.0213.73ʃ0.70a T C C T(9)2713.56ʃ0.73aT T C C(9)4513.89ʃ0.33a H1H3C C C C(88)10787.600.0513.71ʃ0.64a T C T C(9)2713.84ʃ0.75aT T T T(9)4513.71ʃ0.64aC C T T(1)0113.84ʃ0.75a H2H3C C T T(9)457.600.0513.71ʃ0.64aC T T C(9)2713.84ʃ0.75aT T C C(88)107813.71ʃ0.64aT T T T(1)0113.84ʃ0.75a169Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷2.6单倍型组与屠宰性状的关联分析如表5所示,H1H2组合产生的3种单倍型中, C C T T单倍型的骨重㊁腿臀重和左胴体重性状显著高于T T C C单倍型(P<0.05),但是C C T T单倍型的瘦肉率性状显著低于T T C C单倍型(P<0.05)㊂H2H3组合和H1H3组合各单倍型个体间的板油重㊁骨重㊁瘦肉率㊁腿臀重和左胴体重性状均无显著性差异(P>0.05)㊂表5S N P s位点单倍型块与猪屠宰性状的关联分析T a b l e5A s s o c i a t i o na n a l y s i s b e t w e e nh a p l o t y p e b l o c k s o f S N P s a n d p i g s l a u g h t e r t r a i t s单倍型块H a p l o t y p eb l o c k单倍型H a p l o t y p e板油重/k gL e a f f a tw e i g h t骨重/k gB o n ew e i g h t瘦肉率/%L e a nm e a t r a t e腿臀重/k gH a m w e i g h t左胴体重/k gL e f t c a r c a s sw e i g h tH1H2C C T T(89)1.07ʃ0.21a5.11ʃ1.89a31.42ʃ3.23b8.69ʃ1.00a29.27ʃ3.20a T C C T(9)1.06ʃ0.18a5.13ʃ2.27a31.48ʃ1.97b8.26ʃ1.00a b28.28ʃ3.16a bT T C C(9)0.92ʃ0.13a3.47ʃ0.68b34.14ʃ2.68a7.67ʃ0.85b26.09ʃ2.16b H1H3C C C C(88)1.07ʃ0.21a5.12ʃ1.90a31.42ʃ3.25a8.69ʃ1.00a29.28ʃ3.22a T C T C(9)1.06ʃ0.18a5.13ʃ2.27a31.48ʃ1.97a8.26ʃ1.00a28.28ʃ3.16aT T T T(9)0.92ʃ0.13a3.47ʃ0.68a34.14ʃ2.68a7.67ʃ0.85a26.09ʃ2.16aC C T T(1)H2H3C C T T(9)0.92ʃ0.13a3.47ʃ0.68a34.14ʃ2.68a7.67ʃ0.85a26.09ʃ2.16aC T T C(9)1.06ʃ0.18a5.13ʃ2.27a31.48ʃ1.97a8.26ʃ1.00a28.28ʃ3.16aT T C C(88)1.07ʃ0.21a5.12ʃ1.9a31.42ʃ3.25a8.69ʃ1.00a29.28ʃ3.22aT T T T(1)3讨论3.1F O X L2基因对排卵状态和屠宰性状有显著的影响S N P s位点鉴于F O X L2在乳腺癌[13]㊁宫颈癌细胞[28]㊁卵巢颗粒细胞瘤[29-30]中均有报道,本研究对F O X L2基因与两广小花猪的排卵状态和乳头数进行了关联分析㊂排卵状态会限制猪窝产仔数,乳头数会影响母猪的哺乳能力且与产仔数遗传相关[31]㊂而窝产仔数和乳头数是重要的繁殖性状[32],对猪场的生产管理和效益有重要影响㊂卵泡的发育和闭锁是一个复杂的生理生化过程,F O X L2和S MA D形成复合顺式元件协同调节F S H-β的转录[33];抑制素-激活素-卵泡抑素系统通过内分泌机制调节垂体F S H的分泌[34-35],从而调控卵巢内颗粒细胞的生长和雌激素的产生[36]㊂两广小花猪的母猪初情期平均为119.1d,怀孕期平均为113.1d,三胎及三胎以上可产仔10.4头[37-38]㊂(365ʃ25)日龄的母猪生育能力正佳,卵巢应正常排卵㊂但是,通过采集母猪两侧卵巢,本研究发现有20头母猪的两侧卵巢都未见红体或者黄体的发生,这可能是母猪卵巢早衰的征兆;发现4个对排卵状态有显著性影响的S N P s位点(g.79706726T>C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794T>C㊁g.79709005T>C),其中g.79709005T>C在F O X L2的编码区㊂以上4个S N P s位点可以有效预防母猪提前终止排卵,为提高母猪利用年限和繁殖力提供新的分子标记和理论依据㊂试验表明, F O X L2免疫靶向的疫苗可抑制小鼠卵巢癌模型的肿瘤生长[39],这4个S N P s位点也为卵巢颗粒细胞瘤的免疫治疗提供新的靶点以及理论基础㊂芳香酶是雌激素局部合成的重要酶[40],绝经后乳腺癌患者中F O X L2转录因子可能会与芳香化酶的启动子区结合,从而改善有核表达病例的无复发生存率[13]㊂F O X L1在体外抑制乳腺癌的增殖㊁侵袭和迁移能力,并在体内抑制乳腺癌的生长[16]㊂但是本研究在F O X L2基因与两广小花猪乳头数的关联分析中未发现有显著性影响乳头数的S N P s 位点㊂本研究发现,F O X L2基因与猪的屠宰性状相关,在F O X L2基因与两广小花猪屠宰性状的关联269Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期廖伟莉等:两广小花猪F O X L2基因多态性及其与几个重要经济性状的关联分析分析中发现了6个显著性S N P s位点(g.79707040 A>G㊁g.79708079T>C㊁g.79708152G>T㊁g.79706726T>C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794T> C)㊂虽然g.79706726T>C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794T>C3个S N P s位点对板油重无显著影响,但是板油重㊁骨重㊁腿臀重和左胴体重4个性状在这6个S N P s的优势基因型基本一致,且该优势基因型为纯合子,在群体中频率较高㊂有利于选育,可稳定遗传㊂这4个性状优势基因型一致的原因可能是左胴体重包含了板油重㊁骨重与腿臀重㊂3.2单倍型组与猪排卵状态和屠宰性状的关联分析本研究对8个S N P s位点进行了连锁不平衡分析,其中g.79706726T>C和g.79706898C>T的S N P s位点组成H1H2单倍型组,两个S N P s位点步长为172b p㊂H1H2组合的3种单倍型块对猪排卵状态㊁瘦肉率㊁骨重㊁腿臀重和左胴体重性状均有显著性影响,C C T T单倍型个体在群体中数量最多, C C T T单倍型个体的骨重㊁腿臀重和左胴体重显著高于T T C C单倍型个体,C C T T单倍型个体的瘦肉率显著低于T T C C单倍型个体㊂H2H3和H1H3的单倍型块对猪排卵状态虽然无显著性影响,但是其P值接近0.05㊂这可能是由于本研究中的样本量不够充足导致的㊂4结论F O X L2转录因子中有与排卵状态显著相关的g.79706726T>C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794 T>C㊁g.79709005T>C的S N P s位点,这些位点可能与卵泡提前闭锁和卵泡竭耗相关㊂另外,本研究发现了F O X L2转录因子与猪屠宰性状相关的6个S N P s位点,这证实了基因多效性假说㊂其中g.79706726T>C㊁g.79706898C>T㊁g.79707794 T>C既与排卵状态有关,又与屠宰性状有关㊂表明F O X L2转录因子除了维持卵巢表型和功能以外,还和猪的生长发育息息相关㊂可为F O X L2基因在两广小花猪中的选种选育提供重要参考,为分子标记辅助育种提供理论依据㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] G A R C I A-O R T I ZJE,P E L O S IE,OMA R IS,e ta l.F o x l2f u n c t i o n s i n s e xd e t e r m i n a t i o n a n dh i s t o g e n e s i st h r o u g h o u tm o u s eo v a r y d e v e l o p m e n t[J].B M C D e vB i o l,2009,9:36.[2] S I N C L A I R A,S M I T H C.F e m a l e sb a t t l e t os u p p r e s st h e i r i n n e rm a l e[J].C e l l,2009,139(6):1051-1053.[3]徐超,李凤,郝海生,等.性别相关基因在牛早期性别发育中的表达规律研究[J].畜牧兽医学报,2017,48(10):1892-1901.X U C,L I F,HA O H S,e ta l.S e x-r e l a t e d g e n e se x p r e s s i o nd u r i n g d e v e l o p m e n to ft h ee a r l y b o v i n ef e t u s e s[J].A c t aV e t e r i n a r i ae tZ o o t e c h n i c aS i n i c a,2017,48(10):1892-1901.(i nC h i n e s e)[4] S C HM I D T D,O V I T T C E,A N L A G K,e ta l.T h em u r i n e w i n g e d-h e l i x t r a n s c r i p t i o n f a c t o r F o x l2i sr e q u i r e df o r g r a n u l o s ac e l ld i f f e r e n t i a t i o na n do v a r ym a i n t e n a n c e[J].D e v e l o p m e n t,2004,131(4):933-942.[5] MO R KL,MA A T O U KD M,M C MA H O NJA,e t a l.T e m p o r a l d i f f e r e n c e s i n g r a n u l o s a c e l l s p e c i f i c a t i o n i nt h e o v a r y r e f l e c t d i s t i n c t f o l l i c l e f a t e s i nm i c e[J].B i o lR e p r o d,2012,86(2):37.[6] B E R N A R D D J,T R A N S.M e c h a n i s m s o fa c t i v i n-s t i m u l a t e dF S H s y n t h e s i s:t h es t o r y o fa p i g a n daF O X[J].B i o l R e p r o d,2013,88(3):78.[7] B I L E Z I K J I A N L M,J U S T I C E N J,B L A C K L E R AN,e t a l.C e l l-t y p e s p e c i f i cm o d u l a t i o n o f p i t u i t a r y c e l l sb y ac t i v i n,i n h i b i n a nd f o l l i s t a t i n[J].M o l Ce l lE n d o c r i n o l,2012,359(1-2):43-52.[8] D I A S JA,U L L O A-A G U I R R EA,B O U S F I E L DGR,e t a l.E d i t o r i a lf o r t h e M C Es p e c i a l i s s u eo n N o v e le n d o c r i n e m e c h a n i s m s i n t h e r e g u l a t i o n o fr e p r o d u c t i o n [J].M o lC e l l E n d o c r i n o l,2014,382(1):385-386.[9] O D L E A K,C H I L D SG V.S MA D-F O X L2r e g u l a t i o no f F S H B:a g a m e o f h u m a n a n d m o u s e[J].E n d o c r i n o l o g y,2020,161(7):b q a a077.[10] UH L E N HA U T N H,T R E I E R M.F o r k h e a dt r a n s c r i p t i o n f a c t o r s i n o v a r i a n f u n c t i o n[J].R e p r o d u c t i o n,2011,142(4):489-495. 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All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷F O X L2c o r r e l a t e s w i t h g o o d p r o g n o s i s i n b r e a s tc a n c e r p a t i e n t s t r e a t ed w i t h t a m o x i fe n[J].I n tJO n c o l,2011,38(4):1145-1151.[14]刘昱翔.F O X A2的互作蛋白F O X P2调控乳腺癌上皮间质转化的机制研究[D].长沙:湖南大学,2021.L I U Y X.T h e s t u d y o f F O X A2-i n t e r a c t i n gt r a n s c r i p t i o n f a c t o r F O X P2i n r e g u l a t i n g t h ee p i t h e l i a l-m e s e n c h y m a l t r a n s i t i o n of b r e a s t c a n c e rc e l l s[D].C h a n g s h a:H u n a n U n i v e r s i t y,2021.(i nC h i n e s e)[15] B E R N A R D O G M,B E B E K G,G I N T H E RCL,e t a l.F O X A1r e p r e s s e st h e m o l e c u l a r p h e n o t y p eo fb a s a lb r e a s tc a n c e r c e l l s[J].O n c o g e n e,2013,32(5):554-563.[16] Z H O N G J T,WA N G H J,Y U J,e t a l.O v e r e x p r e s s i o n o f F o r k h e a d B o x L1(F O X L1)i n h i b i t s t h e p r o l i f e r a t i o na n d i n v a s i o no f b r e a s t c a n c e rc e l l s[J].O n c o l R e s,2017,25(6):959-965.[17]朱猛进,钱云,丁家桐,等.母猪F S Hβ基因多态与乳头数的关系研究[J].畜牧与兽医,2000,32(3):12-14.Z HU MJ,Q I A N Y,D I N GJT,e t a l.As t u d y o nt h er e l a t i o n s h i p b e t w e e n p o l y m o r p h i s m so fs o w s F S Hβg e n e a n dt h e i r t e a tn u m b e r s[J].A n i m a lH u s b a n d r y&V e t e r i n a r y M e d i c i n e,2000,32(3):12-14.(i nC h i n e s e)[18] R O P K A-MO L I K K,B E R E T A A,̇Z U K OW S K IK,e ta l.S c r e e n i n g f o r c a n d i d a t e g e n e s r e l a t e d w i t hh i s t o l o g i c a lm i c r o s t r u c t u r e,m e a t q u a l i t y a n dc a r c a s sc h a r a c t e r i s t i ci n p i g b a s ed o n R N A-se q d a t a[J].A s i a n-A u s t r a l a s J A n i m S c i,2018,31(10):1565-1574.[19]潘泽滚,李志雄.藏鸡F o x O1基因多态性及与屠宰和生长性状的关联分析[J].中国家禽,2022,44(4):13-21.P A N Z G,L IZ X.P o l y m o r p h i s m so f F o x O1g e n er e l a t e dt o g r o w t h a n d s l a u g h t e rt r a i t si n T i b e t a nc h i c k e n[J].C h i n aP o u l t r y,2022,44(4):13-21.(i nC h i n e s e)[20]王玲.普通牛F o x O1㊁F o x O3㊁F o x O4基因的克隆㊁表达及其对肉质性状的遗传效应分析[D].雅安:四川农业大学,2010.WA N GL.C l o n i n g,e x p r e s s i o na n d g e n e t i ce f f e c t so fb o v i n e F o x O1,F o x O3a n d F o x O4g e n e s o n m e a tq u a l i t y t r a i t s[D].Y a a n:S i c h u a n A g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y,2010.(i nC h i n e s e)[21]曾检华,李闯,韦明飞,等.两广小花猪(壹号黑猪)新品系选育进展[J].养猪,2019(4):65-68.Z E N G J H,L I C,W E I M F,e t a l.P o r g r e s s o fb r e e d i n g o n L i a n g G u a n g S m a l l-s p o t t e d P i g(Y i h a oB l a c kP i g)[J].S w i n eP r o d u c t i o n,2019(4):65-68.(i nC h i n e s e)[22]黄雅琼,江永强,梁文全,等.陆川猪的生物学特征及其优良性能的研究概况[J].家畜生态学报,2013,34(5):82-84.HU A N G Y Q,J I A N G Y Q,L I A N G W Q,e ta l.Ar e v i e wo f b i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c s a n d p e r f o r m a n c e i nL u c h u a n p i g[J].A c t aE c o l o g i a eA n i m a l i sD o m a s t i c i,2013,34(5):82-84.(i nC h i n e s e)[23]薛尚军,杨晓奋,刘宏,等.中国地方猪种的肉质特性[J].国外畜牧学-猪与禽,2011,31(2):92-94.X U ESJ,Y A N G X F,L I U H,e ta l.M e a t q u a l i t yc h a r a c t e r i s t i c s o f l o c a l p i g b r e ed s i nC h i n a[J].A n i m a lS c i e n c eA b r o a d(P i g s a n dP o u l t r y),2011,31(2):92-94.(i nC h i n e s e)[24]任红艳,胡景杰,杜生明.中国地方猪种成肌与肌内沉脂的遗传机制解析 国家自然科学基金重大项目介绍[J].畜牧兽医学报,2018,49(5):1096-1098.R E N H Y,HUJ J,D U S M.G e n e t i cm e c h a n i s m so fm y o g e n e s i s a n d i n t r a m u s c u l a r a d i p o g e n e s i s i nC h i n e s ei n d i g e n o u s p i g s i n t r o d u c t i o nt o m a j o r p r o g r a m o fT h e N a t i o n a l N a t u r a lS c i e n c e F o u n d a t i o n o f C h i n a[J].A c t aV e t e r i n a r i a e t Z o o t e c h n i c aS i n i c a,2018,49(5):1096-1098.(i nC h i n e s e)[25] WA N G K,L I M Y,HA K O N A R S O N H.A N N O V A R:f u n c t i o n a l a n n o t a t i o no f g e n e t i cv a r i a n t sf r o m h ig h-th r o u g h p u ts e q u e n ci n g d a t a[J].N u c l e i cA c i d sR e s,2010,38(16):e164.[26]中华人民共和国农业部.N Y/T825-2004瘦肉型猪胴体性状测定技术规范[S].北京:中国农业出版社,2004.T h eM i n i s t r y o fA g r i c u l t u r e o f t h eP e o p l e sR e p u b l i co fC h i n a.N Y/T825-2004T e c h n i c a lr e g u l a t i o nf o rt e s t i n g o f c a r c a s s t r a i t s i nl e a n-t y p e p i g[S].B e i j i n g:C h i n aA g r i c u l t u r eP r e s s,2004.(i nC h i n e s e)[27] B A R R E T T J C,F R Y B,MA L L E R J,e t a l.H a p l o v i e w:a n a l y s i s a n d v i s u a l i z a t i o n o f L D a n dh a p l o t y p em a p s[J].B i o i n f o r m a t i c s,2005,21(2):263-265.[28] L I U X L,M E N G Y H,WA N G JL,e ta l.F O X L2s u p p r e s s e s p r o l i f e r a t i o n,i n v a s i o n a n d p r o m o t e sa p o p t o s i s o f c e r v i c a l c a n c e r c e l l s[J].I n t JC l i nE x pP a t h o l,2014,7(4):1534-1543.[29] B E L L IM,S E C C H IC,S T U P A C K D,e ta l.F O X O1469Copyright©博看网. 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来航鸡FOXL2基因的真核表达及纯化
来航鸡FOXL2基因的真核表达及纯化刘静;韩丽;李任峰;徐萍;鲁毅;杨猛;王三虎【摘要】[目的]对来航鸡FOXL2基因进行真核表达及纯化,为其生物学功能研究奠定基础.[方法]根据GenBank已发表的来航鸡FOXL2基因序列(GenBank登录号:JF_708868.1)设计引物,以来航鸡全血DNA为模板,PCR扩增FOXL2基因,经EcoR Ⅰ和XbaⅠ双酶切后定向克隆于pPICZαA中,获得pPICZαA-FOXL2真核表达载体.将pPICZαA FOXL2转化毕赤酵母菌GS115,用甲醇进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测.[结果]克隆了918 bp的FOXL2基因;成功构建了pPICZαA FOXL2真核表达载体;实现了FOXL2基因在毕赤酵母菌GS115中的融合表达,获得了分子质量约为37 ku的重组蛋白FOXL2,经Western blotting检测其具有较好的生物学活性.[结论]成功地在毕赤酵母中表达了来航鸡FOXL2基因.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(044)007【总页数】6页(P10-15)【关键词】来航鸡;FOXL2基因;真核表达【作者】刘静;韩丽;李任峰;徐萍;鲁毅;杨猛;王三虎【作者单位】河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003;河南科技学院动物科学学院,河南新乡453003【正文语种】中文【中图分类】S832.2叉头框转录因子L2基因(Winged helix forkhead transcription factor gene 2，FOXL2)存在于细胞核内，是一个长度为2.7 kb的单外显子基因，位于3q23(3号染色体2区3带)区域，包含一个特有的forkhead DNA结构域(该结构域含有101个氨基酸，位于第54-148残基区域之间)和一个多聚丙氨酸肽段，但该肽段的功能尚不确定。
BPES综合征伴不孕症家系FOXL2基因突变检测及功能研究
BPES综合征伴不孕症家系FOXL2基因突变检测及功能研究研究背景睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征(blepharophimosis-ptosis-epicanthus inversus syndrome,BPES)的发病率为1/5,000,作为一种罕见的常染色体显性遗传病,它的主要临床表现是双侧上睑下垂、睑裂狭小、逆向内眦赘皮、内眦间距过宽等,次要表现是鼻梁扁平、低位耳等。
BPES共分为两型:Ⅰ型和Ⅱ型。
Ⅰ型表现为眼睑发育异常并且受累女性伴有不孕,Ⅱ型仅仅表现为眼睑发育的异常,男女患者生育功能未受影响。
两型的主要区别主要是Ⅰ型受累女性同时伴有不孕症,然而由于BPES Ⅰ型女性的基因型与表型并不完全一致,其所引起的女性不孕的发病机制尚不明确。
迄今为止,临床上尚未找到可靠有效的方法来治疗BPES Ⅰ型患者的不孕症。
虽然可以通过重建手术来矫正BPES患者的上睑下垂,以改善其面貌,但BPES Ⅰ型所伴发的不孕症给女性患者造成身心上的巨大痛苦。
此外,由于BPES患者尤其是Ⅰ型女性患者的临床表型变异程度较大,使得临床医生较难对该病进行准确的诊断,从而使该类患者无法得到及时有效的治疗。
更重要的是,该病具有较高的家族遗传性,根据孟德尔遗传定律计算,BPES患者子代的再发病风险约为50%,因此对BPES患者进行常规的产前遗传咨询,通过产前筛查、诊断等必要措施避免患病儿的出生就显得尤为重要。
Forkhead boxL2(FOXL2)基因是定位于染色体3q23(3号染色体2区3带)的单一外显子基因。
FOXL2基因是一个在维持卵泡发育、卵巢正常功能中发挥重要作用的常染色体基因,主要在中小卵泡期的颗粒细胞中表达,通过抑制下游靶基因CYP11A1、CYP1941、CCND2等启动子的转录活性,从而在卵泡颗粒细胞的增殖、分化、卵巢类固醇激素的生成过程中发挥重要作用。
FOXL2基因突变会导致卵巢早衰的发生。
研究表明FOXL2基因是BPES最常见的、首位致病候选基因,在BPES Ⅰ型和Ⅱ型患者中均发现有FOXL2基因突变的存在。
DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成
DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成毛岩;闫蔷;张春雪;甄鑫;曹瑞兵;颜桂军【摘要】Objective Transcription factor forkhead box L 2 (FOXL2) is a key regulator of granulosa cells (GCs) estrogen syn-thesis and function maintenance .However, the FOXL2 protein expres-sion and function regulation mechanism are unknown .We explored how DNAJB11 regulates estrogen synthesis of granulosa cells with immunoprecipitation , immunofluorescent staining and luciferase re-porter gene. Methods The expression and localization of DNAJB 11 was detected by immunohistochemistry staining in isolated mouse ovary tissues .we use immunoprecipitation , immunofluorescence staining and luciferase reporter gene assay to investigate the mechanism of DNAJB11, a member of the endoplasmic reticulum Hsp 40 /DnaJ family, regulating the estrogen synthesis in granulosa cells . Results DNAJB11 is expressed in the mouse ovary and granulosa cells .Follicle-stimulating hormone (FSH) promotes DNAJB11 ex-pression in a time and concentration dependent manner and induces endogenous DNAJB 11 protein translocation from the ER to the nu-cleus in KGN cells.Moreover, Adenovirus-mediated overexpression of DNAJB11 did not affect the proliferation of granulosa cells .How-ever, the concentration of estrogen in granulosa cells was affected by concentration -dependent and subcellular localization-dependent manner (10749±801.7 pg/mL vs 14217±1218.0 pg/mL P<0.01).Immunoprecipitation assay confirmed that DNAJB11 binds to FOXL2 in granulosa cells .Whenoverexpressed in the nucleus of granulosa cells , DNAJB11 could significantly enhance the stability of FOXL2 (P<0.05) and promote FOXL2-mediated activity of Cyp19A1 promoter (P<0.01), while the expression of DNAJB11 in the nucleus increased the expression of Cyp 19A1 protein by 1.5 times ( P<0.05) . Conclusion These results demonstrate that DNAJB 11 was a new binding molecule of transcription factor FOXL 2 and regulated FOXL 2 protein stability and transcription activity .%目的转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制.文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子.方法通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情况,含有全长DNAJB11基因cDNA序列(Ad-DNAJB11-Flag和Ad-Flag-DNAJB11)的腺病毒载体按AdMax系统(Microbix)方法进行病毒颗粒的包装.按NE-PERTM Nuclear and Cytoplasmic抽提试剂盒所述方法进行细胞核质蛋白的分离.KGN细胞感染不同浓度腺病毒(Ad-DNAJB11和Ad-LacZ),测量波长450 nm的吸光度值,进行细胞增殖检测.采用Access Immunoassay System 2化学发光自动检测系统(Beckman Coulter)检测细胞培养上清中雌二醇的浓度.采用PCR方法扩增含有人FOXL2和人DNAJB 11基因的全长cDNA序列,并分别亚克隆至pCS2-6XMT载体(Myc-FOXL2)和pFLAG-CMV2载体(Flag-DNAJB11)中.采用Lipofectamine 2000转染试剂将Myc-FOXL2和Flag-DNAJB11表达质粒瞬时转染至细胞HEK-293细胞中.收集HEK-293细胞或FSH处理的KGN细胞的裂解液,进行FOXL2和DNAJB11的免疫共沉淀实验.通过细胞免疫荧光染色和荧光素酶报告基因等实验检测内质网Hsp40/DnaJ家族成员DNAJB11调控颗粒细胞的雌激素水平.结果Western blot表明DNAJB11蛋白在人卵癌颗粒细胞KGN、小鼠原代卵巢颗粒细胞mGC以及小鼠卵巢中高表达,免疫组化染色结果亦证实DNAJB11蛋白表达于小鼠卵巢的卵母细胞质中,并在窦前卵泡、排卵前卵泡的颗粒细胞中持续表达.免疫荧光染色和Western blot分析亦表明外源性激素FSH可以诱导KGN细胞中内源性DNAJB11蛋白从内质网转移到细胞核中.腺病毒介导的DNAJB11-Flag过表达定位于细胞内质网中,但当Flag标签阻断DNAJB11信号肽功能时,外源Flag-DNAJB11过表达则定位于颗粒细胞的细胞核,内质网中DNAJB11-Flag蛋白高表达以浓度依赖的方式减少KGN细胞中雌二醇的合成,与Ad-LacZ(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)减少,KGN细胞中雌二醇的合成[(10749.0±801.7)pg/mL vs(79030.±409.5)pg/mL,P<0.01],而细胞核中高表达Flag-DNAJB11后则刺激KGN细胞中雌二醇的生成,与Ad-LacZ(MOI=50)比较,Ad-DNAJB11-Flag(MOI=50)刺激雌二醇的生成[(10749.0±801.7)pg/mLvs(14217.0±1218.0)pg/mL,P<0.01].免疫共沉淀实验表明当Myc-tagged FOXL2与Flag-tagged DNAJB11分别共转染HEK 293细胞,FOXL2与DNAJB11可以相互免疫共沉淀对方,荧光素酶报告基因实验进一步表明细胞核中表达的DNAJB11显著增强FOXL2介导的Cyp19A1启动子活性和Cyp19A1蛋白表达.结论 DNAJB11是转录因子FOXL2新的结合分子并调控FOXL2蛋白的稳定性与转录活性.【期刊名称】《医学研究生学报》【年(卷),期】2017(030)010【总页数】9页(P1013-1021)【关键词】DNAJB11;转录因子FOXL2;卵巢颗粒细胞;雌激素合成【作者】毛岩;闫蔷;张春雪;甄鑫;曹瑞兵;颜桂军【作者单位】210095 南京,南京农业大学动物医学院;210008 南京,南京大学附属鼓楼医院生殖中心;210008 南京,南京大学附属鼓楼医院生殖中心;210008 南京,南京大学附属鼓楼医院生殖中心;210095 南京,南京农业大学动物医学院;210008 南京,南京大学附属鼓楼医院生殖中心【正文语种】中文【中图分类】R714.15在卵巢内局部调节因子(生长因子和细胞因子)和/或外源激素(促卵泡刺激素和促黄体生成素)的有序更换与协同作用下，卵泡细胞有序地表达特定基因，调控卵子的生长、成熟和颗粒细胞的增殖、分化与凋亡，维持着卵泡的生长、发育、优势卵泡的选择与排卵过程。
卵巢早衰候选基因的突变研究进展
遗 传HEREDITAS (Beijing ) 28(11): 1467~1471, 2006专论与综述收稿日期: 2005-12-15; 修回日期: 2006-06-20基金项目: 湖南省科技厅基金资助项目(编号: 1013-8)[Supported by the fund of Science and Technology Department of Hunan Province (No.1013-8)] 作者简介: 谭跃球(1969－), 男, 湖南冷水江人, 遗传学博士, 副研究员。
E-mail:tanyueqiu@DOI: 10.1360/yc-006-1467卵巢早衰候选基因的突变研究进展谭跃球, 程德华, 卢光琇(中南大学生殖与干细胞研究所, 长沙410078)摘 要: 卵巢早衰病因复杂, 多数病例病因不明。
在已知的病因中, 遗传因素非常重要。
卵巢早衰不但可导致不孕症, 患者的低雌激素水平还增加了患骨质疏松症和冠心病的危险。
目前临床上的主要治疗措施包括激素替代治疗和供卵治疗不孕症等, 但效果都不理想。
鉴定卵巢早衰的致病基因是从根本上治疗和预防该病的基础。
目前已发现在X 染色体上和常染色体上多个基因与之相关, 文章综述了近年来对卵巢早衰候选基因的突变分析情况, 旨在从分子水平分析研究卵巢早衰的发病机制提供基础。
关键词: 卵巢早衰; 候选基因; 突变分析 中图分类号: Q987 文献标识码: A文章编号: 0253-9772(2006)11-1467-05Advance in Mutation Analysis of the Candidate Genes inPremature Ovarian FailureTAN Yue-Qiu, CHENG De-Hua, LU Guang-Xiu(Institute of Reproduction and Stem Cell Engineering , Xiang-Ya School of Medicine,Central South University ,Changsha, Hunan 410078, China )Abstract: Premature ovarian failure (POF) is a complicated and heterogeneous disease. In majority of cases the underlying cause is not identified. Among the known causes, genetic aberration plays very important role. POF not only causes infertility, also adds the risk of osteoporosis and coronary heart disease because of the low level estrogen. The major therapy measures in present include hormone replacement therapy and infertility treatment with donated oocytes, but the effect is not ideal. To identify the genes of POF is the basis for treating and preventing this disease. A large number of candidate genes of POF are found on X chromosome and autosomes. The present paper reviewed the advance in mutation analysis on the candidate genes of POF, which is aimed to provide a basis to explore its molecular mechanism.Key words: premature ovarian failure; candidate genes; mutation analysis正常妇女的平均绝经年龄为51岁, 一般在40~60岁之间[1]。
栉孔扇贝Foxl2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与检测
栉孔扇贝Foxl2蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备与检测刘晓玲;王振东;孙涵甜;王振华;赵振军;李忌【摘要】以栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵巢cDNA为模板,采用PCR扩增Foxl2(forkhead box l2)基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,筛选鉴定阳性克隆,经测序鉴定后提取质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以IPTG诱导Foxl2蛋白表达,用SDS-PAGE鉴定表达情况,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫新西兰白兔(New Zealand white rabbits)制备多克隆抗体,以ELISA测定抗体效价,最后用WB (Western Blot)检测抗体特异性.结果表明,重组载体转化BL21后经1.0 mmol L-1 IPTG于37℃诱导6h可产生大量Foxl2蛋白,主要以包涵体形式表达.经镍柱柱纯化可得到纯度较高的Foxl2蛋白,浓度达800 ug·mL-1.免疫新西兰白兔获得多克隆抗体,效价大于1∶128 000.WB检测显示:该抗体能特异识别扇贝卵巢中的Foxl2蛋白,同时发现Foxl2蛋白在卵巢中强表达,而在精巢中几乎不表达,揭示栉孔扇贝中该蛋白具雌性性别相关性.研究成功获得效价高且能特异识别天然Foxl2的多克隆抗体,为后续深入研究Foxl2在栉孔扇贝卵巢中的功能提供了分子工具.【期刊名称】《海洋渔业》【年(卷),期】2018(040)004【总页数】7页(P447-453)【关键词】栉孔扇贝;Foxl2蛋白;原核表达;镍柱纯化;多克隆抗体【作者】刘晓玲;王振东;孙涵甜;王振华;赵振军;李忌【作者单位】烟台大学生命科学学院,山东烟台264005;烟台大学生命科学学院,山东烟台264005;烟台大学生命科学学院,山东烟台264005;烟台大学生命科学学院,山东烟台264005;烟台大学生命科学学院,山东烟台264005;烟台大学生命科学学院,山东烟台264005【正文语种】中文【中图分类】S917.4Foxl2（forkhead box l2）是叉头框转录因子基因，研究发现其在脊椎动物卵巢中高表达，而在精巢中弱表达或不表达［1］，深入的功能研究表明，该基因参与哺乳动物卵巢功能维持［1－2］。
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医学分子生物学杂志，2011，8（4）：368⁃371 J Med Mol Biol ，2011，8（4）：368⁃371DOI ：10.3870/j.issn.1672⁃8009.2011.04.018通讯作者：杜兴贵（E⁃mail ：duxingui@ ）Corresponding author ：DU Xinggui （E⁃mail ：duxingui@ ）FOXl 2基因的研究现状雷涛1，廖世波1，段迎春2 综述 杜兴贵3 审阅1湖北医药学院第三临床学院 湖北省十堰市，4420002湖北医药学院附属十堰市人民医院妇产科 湖北省十堰市，4420003湖北医药学院病理学教研室 湖北省十堰市，442000【摘要】 FOXL 2基因为一单外显子基因，定位于染色体的3q23区域，编码一个分叉头的转录因子。
FOXL 2基因的正常表达是维持女性性别特征的极其重要的基本条件。
该基因若发生突变可导致女性性别特征呈现异常。
同时证实其是睑裂狭小、逆向内眦赘皮和上睑下垂综合征（blepharophimosis⁃ptosis⁃epicanthus inversus syndrome ，BPES ）的致病基因。
此外，FOXL 2基因发生突变与卵巢早衰（premature ovarian failure ，POF ）有关，并认为FOXL2是卵巢分化早期的调控因子。
另有资料提示FOXL 2基因突变与生殖系统肿瘤有相关性。
【关键词】 FOXL 2基因；先天性睑裂狭小综合征；基因突变；卵巢早衰【中图分类号】 R349.6Study of FOXL2GeneLEI Tao 1，LIAO Shibo 1，DUAN Yingchun 2，DU Xinggui 31the Third Clinical Department ，Hubei University of Medicine ，Shiyan ，Hubei ，442000，China 2Department of Gynecology and Obstetrics ，People ’s Hospital of Shiyan ，the Affiliated Hospital of Hubei University of Medicine ，Shiyan ，Hubei ，422000，China3Department of Pathology ，Hubei University of Medicine ，Shiyan ，Hubei ，442000，China【Abstract 】 FOXL2is a single⁃exon gene encoding a forkhead transcription factor ，which is lo⁃cated at 3q23.Normal expression of FOXL2is important to maintain female gender characteris⁃tics.Mutations in FOXL2，however ，are likely to result in abnormity of female characteris⁃tics.FOX12mutation causes BPES.Its mutations can be detected in POF patients.FOX13is consid⁃ered as an early regulator of ovarian development.In addition ，it has been suggested that mutations in FOXL2are relative to reproductive system tumors.【Key words 】 FOXL2gene ；BPES ；gene mutation ；POF FOXL 2基因是由一个2.7kb 的单外显子组成，定位于3q23（3号染色体2区3带），编码一个分叉头的转录因子。
相关研究资料显示，FOXL2是人类早期卵巢生成分化过程中重要的调控因子，通过转录调节作用，调节其靶基因的转录及蛋白表达，参与颗粒细胞增殖分化，对于正常的卵泡的发育及卵巢功能的维持有重要意义［1⁃2］。
在新近的研究中，敲除成年雌鼠的FOXL 2，可使成年雌鼠的性别发生转化［3］。
有研究表明，FOXL 2是睑裂狭小、逆向内眦赘皮和上睑下垂综合征（blepharo⁃phimosis⁃ptosis⁃epicanthus inversus syndrome ，BPES ）的致病基因［4］。
随着研究工作的深入将BPES 分为两型：Ⅰ型，由父亲传代，女性患者因卵巢功能早衰而不育，男性生育功能正常；Ⅱ型，父亲、母亲传代机会均等，男女患者均只累及眼部而可以生育，外显率约为96.5%。
在BPES Ⅰ型和Ⅱ型患者中均存在FOXL 2基因突变。
此外，还有研究发现FOXL 2基因突变与生殖系统肿瘤存在一定相关性。
1 云韵载蕴2基因与性别的相关性FOXL 2基因是目前发现的脊椎动物卵巢决定和分化的最早的标志性启动基因，在性别决定前的万方数据雌性生殖嵴上开始表达。
在雌性个体，FOXL2具有促进胚胎雌化的作用，作用类似于卵泡抑制素、Fig⁃alpha和Wnt4［1］。
在小鼠性别决定后，FOXL2表达上调并促进卵巢分化［5］。
在女性性腺分化阶段，FOXL2抑制男性基因激活的信号通路，从而起到促卵巢分化的信号分子的作用［2］，是卵巢分化必需的细胞因子。
SRY必须在某一特定行为启动窗口激活Sox9，并证实在未分化性腺FOXL2和Sox9处于同一区域［4］，但是个体细胞仅表达FOXL2或Sox9，二者并不同时表达。
敲除成年雌鼠的FOXL2基因，直接导致睾丸特定的基因包括决定性的SRY靶向基因Sox9表达的上调，可引起卵巢中的颗粒细胞和卵泡膜细胞转变为支持细胞样的细胞和睾丸间质细胞样的细胞，其可以分泌雄激素，并与拥有睾丸及性染色体为正常XY的成年雄鼠表型极其相似［3］。
胚胎期随着FOXL2的缺失，早期的睾丸发生决定基因（如Inhbb、Dhh和Sox9）和一些卵巢基因表达失调［7］。
在缺失FOXL2时，基因表达影响大部分功能，正好与缺失Wnt4基因的卵巢相反，进一步说明了这两种基因在卵巢发育中有互补的作用。
胚胎期卵巢的分化是通过R⁃spondin1和Wnt4对Sox9积极的抑制实现的，而在成年后，卵巢功能的维持是通过FOXL2对Sox9积极的抑制实现的［3］。
在敲除FOXL2的小鼠中，DMRT1表达大量上调，而在鸡中DMRT1是睾丸分化所必须的，敲除DMRT1后导致雄性小鸡雌化，并伴FOXL2的上调［8］。
虽然，目前大量研究表明FOXL2在卵巢向睾丸转变中的重要作用，但这一效应仅由FOXL2引起，抑或还存在与FOXL2同等重要的基因？这仍不清楚。
2 FOXL2基因突变与BPES2001年，Crisponi等［9］首先用STS（sequence⁃tagged site）制作了与BPES连锁的多态性微卫星标记的YAC（yeast artificial chromosome）图谱，定位克隆了该基因，并证明FOXL2为BPES的候选基因。
研究表明，人和小鼠的FOXL2基因产物的一致性>95%。
FOXL2的表达与胚胎眼睑的发育是一致的，相关小鼠的基因表达研究表明，FOXL2于视杯周围的间质表达，在发育的眼睑突出的嵴上表达最高，在晶状体纤维中也有低水平的表达。
随后，Baron等［10］通过对人以及鱼、鼠、山羊等的研究进一步证明，FOXL2基因涉及发育进程多样性，在哺乳动物早期眼睑发育间质FOXL2基因有显著表达，提示其参与眼睑的早期发育。
Raile等［11］对一个患有BPES伴随巨大卵巢囊肿和卵巢功能障碍的16岁女孩进行检测，发现了FOXL2基因的一个新的杂合突变，在一个等位基因上检测到一个框内突变（904~939dup36），他们的结论是FOXL2突变可以导致睑裂狭小和上睑下垂。
通过对FOXL2基因编码区突变产生蛋白进行分类的研究表明，FOXL2基因存在两个突变热点：30%的FOXL2突变导致聚丙氨酸扩增，13%为新的移码突变［12］。
研究者进一步提出：突变导致聚丙氨酸扩张与BPESⅡ型有关，而突变导致编码蛋白质在聚丙氨酸区前有截断的发生BPESⅠ型的可能性高。
而那些包含有完整的聚丙氨酸肽段和Forkhead的突变，蛋白无论是截短的还是延长的，都可导致两型小睑裂综合征，其功能还不能准确预测。
3 FOXL2基因突变与卵巢早衰卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）是指女性40岁前因某种原因引起的闭经、不育、雌激素缺乏、以及促性腺激素水平升高为特征的一种疾病，占妇女总人数的1%~3%［13］。
POF可能是一种潜在的多基因遗传病，与X染色体异常、X 连锁基因突变、常染色体基因异常有关。
Govoroun等［14］克隆了鸡FOXL2基因的开放读码框（cFOXL2），并研究了卵巢发育期和成熟期FOXL2的表达来检测鸟类中FOXL2在卵巢分化和功能中的作用。
他们提出FOXL2在鸟类中是一种卵巢发育的早期调控因子，并和芳香酶的转录调节有关。
对小鼠实验表明，FOXL2mRNA在成年鼠的卵泡细胞中高表达。
Schmidt等［15］进一步证实鼠类中的FOXL2基因对卵巢的维持和颗粒细胞的分化是必需的。
在FOXL2突变的小鼠，颗粒细胞不能完全转换成立方形，从而导致次级卵泡的缺失和卵母细胞闭锁，进而影响卵巢功能。
FOXL2基因的表达对卵巢滤泡细胞的发育和维持有积极的意义［10］。
Pisarska等［16］通过对小鼠的研究发现，野生型的FOXL2可抑制类固醇激素合成快速调节素（steroidogenic acute regulatory，StAR）基因启动子的活性。
StAR在类固醇合成过程中起调节作用，其产物负责胆固醇由线粒体外膜转运至内膜，是类固醇激素合成的关键步骤。
FOXL2可与StAR转录起始位点上游95bp处结合，抑制StAR转录与蛋白合成，从而抑制颗粒细胞孕酮的合成。
FOXL2突变基因可产生与野生型基因相反的产物，导致对StAR基因的抑制消失，表达增加，出现卵巢功能障碍。
Nallathambi等［17］描述了一个纯合FOXL2基·963·医学分子生物学杂志，2011，8（4）：368⁃371 J Med Mol Biol，2011，8（4）：368⁃371万方数据因突变导致带有5′残基的（FOXL2⁃Ala19）聚丙氨酸扩张。
同时，一些研究者证明了FOXL2聚丙氨酸扩张导致长度依赖性蛋白质异常定位和聚集，并证实FOXL2突变的妇女的卵巢早衰是由于蛋白质聚丙氨酸扩张造成的，但其作用机制仍不清楚［18⁃19］。