细菌的接种和注意事项终极版
细菌、酵母菌、霉菌和放线菌接种方法和形态观察
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。
由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。
细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察一、微生物的接种技术1 目的1.1学习掌握微生物的几种接种技术1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节2 基本原理将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。
接种的关键是严格进行无菌操作。
常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。
3 实验材料3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管3.4 仪器与其他用品酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。
4 操作步骤4.1 斜面接种法斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。
通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。
操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。
4.1.1准备工作将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。
4.1.2接种环灭菌右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。
镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。
4.1.3拔管塞和烧烤试管口用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。
4.1.4接种环冷却和取菌将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。
细菌培养与接种技术课件
演讲人
01 细菌培养技术 02 细菌接种技术
03 细菌培养与接种的应用
目录
1 细菌培养技术
培养基的选择
01
02
营养成分：选 择含有丰富营 养成分的培养 基，如蛋白质、 碳水化合物、 维生素等
酸碱度：选择 适合细菌生长 的酸碱度，如 中性或弱碱性
03
渗透压：选择 与细菌细胞渗 透压相近的培 养基，以保持 细菌细胞的正 常生长
2
接种：将细菌接种到培养基上，如划线法、涂布法等
3
培养：将接种后的培养基放入培养箱中，设定合适的温度、湿度和时间
4
观察：定期观察细菌的生长情况，如菌落形态、颜色等
5
收获：当细菌生长到一定数量时，可进行收获，如离心、过滤等
6
保存：将收获的细菌进行冷冻保存，如-80℃冰箱保存
2 细菌接种技术
接种方法的选择
02
04
细菌培养与接 种在生物制药 中的其他应用
03
细菌培养与接 种在抗生素生 产中的作用
环境监测
细菌培养与接种技术
01
在环境监测中的应用
细菌培养与接种技术
04
在环境评估中的应用
细菌培养与接种技术在
02
环境污染检测中的应用
03
细菌培养与接种技术菌培养与接种 的应用
微生物检测
2019
检测方法：培 养法、PCR法、
免疫法等
2021
检测结果：指导 生产、质量控制、
风险评估等
01
02
03
04
应用领域：食品、 药品、环境、生
物技术等
2020
检测目的：确 定微生物种类、
香菇菌棒开放式接种技术要点！
香菇菌棒开放式接种技术要点！
一、接种场地选择
1.选择避风、清洁、干燥、密封性好、附近50米内无杂菌污染源的房间为开放式接种场所。
2.接种室须在菌棒搬入前一天打扫干净并消毒。
二、菌棒处理
1.常压灭菌，在100℃温度下保持14小时以后，将无机械破损的菌棒移至接种室，并盖上薄膜，以防灰尘及杂菌孢子降落。
2.菌棒堆放在接种室中间，堆高不宜超过1.2米。
3.待菌棒冷却至25℃以下，采用气雾消毒剂消毒2小时后，方可接种。
三、接种程序
1.将菌种、接种工具等用75%酒精消毒后备用。
2.用消菌剂或多菌灵配制的药剂涂擦接种部位。
3.在涂擦处打孔，每段菌棒打3-4个孔，孔深4-5厘米，不能打穿。
4.将生产种掰成块塞入孔内，接种块和菌棒要结合紧实，但不能挤压，防止杂菌从空隙侵入。
5.温度升至25℃时，揭开薄膜进行通风、换气，及时翻堆，防止高温烧菌。
四、注意事项
1.接种须选择在低温、晴朗、干燥的天气进行。
温度高于20℃，下雨多雾、刮风时接种，对成活率有一定影响。
2.接种场地必须清洁、干净、卫生。
3.菌种人员的手及打孔机械须用75%的酒精消毒。
细菌接种培养方法
细菌接种培养方法
细菌接种的技术过程主要包括消毒准备、转接细菌、接种培养基、观察结果和清理工作。
具体内容如下：
- 消毒准备：在进行细菌接种前，要确保实验台面、操作者双手、接种环、接种针等工具的清洁、无菌。
- 转接细菌：将携带细菌的接种环或接种针在新的无菌培养基上接种，可以采用直线涂布、环形涂布、刻线等方法。
- 接种培养基：将接种好的培养基放入恒温培养箱培养。
通常需要培养18-24小时，以观察细菌的生长情况。
观察时应记录菌落数量、形态、颜色等特征。
- 清理工作：实验结束后，需要对实验台面和使用的器具进行清洁、消毒。
将已使用的培养基放入高压灭菌锅进行灭菌，待完全冷却后再处理。
在操作过程中要保持良好的实验习惯，避免污染和交叉感染。
细菌接种技术
（一）平板划线接种法（又称分离培养法）平板划线接种法为最常用的分离培养细菌的方法，通过平板划线后，可使细菌分散生长，形成单个菌落，有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌。
平板分离划线的方法较多，其中以分区划线法与曲线划线法较为常用。
其目的都要使细菌呈现单个菌落生长，便于同杂菌菌落鉴别。
现只介绍分区划线法。
1、右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，挑取大肠杆菌（或葡萄球菌）培养物少许。
2、左手斜持琼脂平板，皿盖留在桌上，于火焰近处将菌涂于琼脂平板上端，来回划线，涂成薄膜（约占平板总表面积的1/10），划线时接种环与平板表面成30~40º角，轻轻接触，以腕力在平板表面行轻快地滑移动作，接种环不应划破培养基表面。
3、烧灼接种环，杀灭环上残留细菌，待冷（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从薄膜处取菌作连续平行划线，约占平板表面1/5左右，再次烧灼接种环，等三次平行划线……以同样方法作第四次，第五次划线，将平板表面划完。
4、划线完毕，盖上平皿盖，底面向上，用标签或腊笔注明菌名检验号码，接种者信息等，置37℃孵育培养24小时后观察结果。
（二）纯培养细菌接种法（斜面培养基接种法：用于培养，保存菌种及其它实验用）1、取一支斜面培养基及一支纯菌种管，并排倾斜放在左手四指中拇指压住并以手掌支住两试管底部。
右手将白金环于火焰上灭菌、冷却。
并拔起两试管的棉塞。
（勿放置桌上，如棉塞太紧时应预先松动）。
2、试管口部于火焰上往返通过2~3次灭菌，将灭菌白金环伸入有菌试管中，取少量细菌（一般应从斜面底部沾取），然后小心移至准备接种的试管中。
3、接种方法是自管底向上连续平划线，若以保存菌为目的时可自管底上划一粗直线即可。
4、取出接种环，将试管上部再经火焰灭菌，塞好棉塞，接种环灭菌后放回原处。
5、若自平皿培养物中取菌时，只应沾取一个单个菌落。
6、接种菌应作好标记，标明菌种名称，日期等，置37℃温箱中培养，次日观察结果。
实验微生物接种技术讲解
实验微生物接种技术讲解实验微生物接种技术讲解微生物包括：细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生生物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，与人类关系密切。
以下是小编为大家整理的实验微生物接种技术讲解，仅供参考，希望能够帮助大家。
实验微生物接种技术讲解1一、目的：学习微生物工作的基本接种方法，建立纯培养技术中的“无菌”概念，掌握无菌操作技术。
二、原理：所谓接种就是将一定量的纯种微生物在无菌操作条件下转移到另一已灭菌，并适宜于该菌生长繁殖所需的培养基上的过程。
本实验要求严格进行无菌操作，一般是在无菌操作台或在实验室内火焰旁进行。
根据不同的实验目的和培养方式，可以采用不同的接种工具和接种方法。
三、实验材料：斜面培养基、液体培养基、平板培养基、记号笔、酒精灯、接种针、消毒酒精、涂布棒等。
四、操作步骤（一）无菌操作菌种分离或移接工作应在无菌环境中进行，接种室、接种箱或超净工作台是常用的接种环境。
用前先清洁好卫生，再进行消毒处理。
可用紫外线灯和甲醛熏蒸的双重作用，或用3%来苏尔及其他表面消毒进行喷雾。
操作者的手应先用肥皂洗净，再用酒精棉球消毒；整个操作过程都要靠近酒精灯火焰；接种工具在用前和用后必须在灯焰上灭菌；棉塞不得乱放，操作中只能夹在手上；不能有跑、跳等力度大的动作，以免引起空气大振动而增加染菌机会。
（二）接种方法（1）斜面接种：从已长好微生物的菌种管移接到另一斜面管的方法。
此法用于好气性微生物的接种。
左手持菌种管和斜面管，使斜面向上，并尽量放平。
用右手先将棉塞拧转松动，再拿接种环，用右手的小指、无名指和手掌拨下棉塞并夹紧，同时将管口在火焰上燃烧一圈，接种环灼烧灭菌后插入管内，冷却、挑菌，立即转入斜面管底部，沿斜面划曲线或直线。
图1.斜面接种示意图（2）液体接种：由斜面菌接种到液体培养基（如试管或三角瓶等）中的方法。
操作与上法基本一致，只是在将接种环送入液体培养基中时使环在液体与管壁接触的地方轻轻磨擦，使菌体分散，然后塞上棉塞，再轻轻摇动均匀，即可培养。
细菌的接种和注意事项终极版
细菌的接种和注意事项终极版细菌接种是一种常见的实验操作，用于研究和培养细菌。
以下是关于细菌接种的一些步骤和注意事项的终极版指南：1.材料准备：-细菌菌株：选择适合实验目的的细菌菌株。
-培养基：根据细菌菌株的需求选择适当的培养基。
-培养皿：使用无菌培养皿，可选择琼脂平板、琼脂深培养皿等。
-培养物：如有需要，在培养基中添加辅助物质，比如抗生素或指示剂。
2.预热培养基：将培养基固化前，预热至适当温度。
通常细菌培养在37℃下进行，但有些菌株可能需要其他温度。
3.移取细菌菌株：使用无菌技术，在细菌菌株的菌落上用无菌环、无菌韦尔霉漆或无菌吸管取少量菌落。
避免直接触碰无菌环或吸管头，防止外界污染。
4.接种培养基：轻轻划过培养基表面，或者按照实验需要，在培养基中刺激性划痕或钻洞。
5.培养皿封闭：用适当的培养基盖住培养皿，或者用无菌胶带封闭培养皿。
6.培养条件：将培养皿放入恒温培养箱中，根据所需的生长条件设置温度、湿度和光照。
细菌在不同条件下生长的要求会有所差异。
7.检查培养情况：按照实验需要，可以每天或每隔一段时间检查培养皿的状态。
细菌菌落的颜色、形状和大小可以提供一些信息。
8.储存细菌：如果需要储存细菌，将培养皿存放在适当的环境中。
常见的储存方法包括冷藏、冷冻和在琼脂中保存。
接种细菌时需要注意的事项：1.无菌操作：确保操作环境和工具都是无菌的，避免细菌的外源性污染。
使用消毒剂清洁工作台面，佩戴手套，避免呼吸到培养物中。
2.预防交叉污染：每次接种前，使用酒精灯、火焰笔或紫外灯对工具进行消毒。
不同菌株间的接种不要重复使用同一工具。
3.避免快速暴露：开启培养皿盖子的时候，要快速打开并迅速接种，避免细菌的暴露时间过长。
4.温度和时间：根据细菌的生长条件和实验目的，选择合适的温度和时间进行培养。
5.安全措施：对于可能带有致病性的细菌菌株，要采取相应的安全措施，如佩戴手套、戴口罩、穿戴防护服等。
7.废物处理：将使用过的培养皿、工具和材料分类，正确处置。
一文搞定细菌的接种方法（值得收藏）
⼀⽂搞定细菌的接种⽅法（值得收藏）常⽤的细菌接种⽅法有平板划线分离法、斜⾯接种法、穿刺接种法、液体和半固体接种法、涂布接种法等。
⼀、平板划线分离法平板划线分离法:是指把混杂在⼀起的微⽣物或同⼀微⽣物群体中的不同细胞⽤接种环在平板培养基表⾯，通过分区划线稀释⽽得到较多独⽴分布的单个细胞，经培养后⽣长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微⽣物的纯种。
有时这种单菌落并⾮都由单个细胞繁殖⽽来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微⽣物样品在固体培养基表⾯多次作“由点到线”稀释⽽达到分离⽬的的。
为⽅便划线，⼀般培养基不宜太薄，每⽫约倾倒20ml培养基，培养基应厚薄均匀，平板表⾯光滑。
划线分离主要有分区划线法和连续划线法两种（如图1， A、B）。
图1分区划线法是将平板分四区，故⼜称四分区划线法。
划线时每次将平板转动60~70°划线，每换⼀次⾓度，应将接种环上的菌烧死后，再通过上次划线处划线；另⼀种连续划线法是从平板边缘⼀点开始，连续作波浪式划线直到平板的另⼀端为⽌，当中不需灼烧接种环上的菌。
1）连续划线法将琼脂平⽫半开盖倒置于培养箱内⾄⽆冷凝⽔，接种环于酒精灯外焰烧⾄红透，接种棒也要充分灼烧，最后再集中烧接种环⾄红。
轻轻摇匀待接种试管，左⼿⼿⼼托待接种试管底侧部，右⼿执接种环，右⼿⼩指拔下试管塞，于酒精灯附近将接种环伸进试管，稍候，再插⼊待接接种液中，蘸⼀下，取满⼀环，抽出、烧塞、盖盖、放回试管架。
或将接种环通过稍打开⽫盖的缝隙伸⼊平板，在平板边缘空⽩处接触⼀下使接种环冷却，然后以⽆菌操作接种环直接取平板上待分离纯化的菌落。
于靠近酒精灯处打开平⽫盖约30°，右⼿将环伸进平⽫，将菌种点种在平板边缘⼀处，轻轻涂布于琼脂培养基边缘（如图2），抽出接种环，盖上平⽫盖，然后将接种环上多余的培养液在⽕焰中灼烧，打开平⽫盖约30°伸⼊接种环，待接种环冷却后，再与接种液处轻轻接触，开始在平板表⾯轻巧滑动划线，接种环不要嵌⼊培养基内划破培养基，线条要平⾏密集，充分利⽤平板表⾯积，注意勿使前后两条线重叠，划线完毕，关上⽫盖。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌
在巧克力平板上生 长，菌落为灰白色， 扁平，半透明的小 菌落
卫星现象：
当流感嗜血杆菌与 金黄色葡萄球菌一 起培养时，靠近葡 萄球菌菌落附近可 见到流感嗜血杆菌 菌落较大，远离葡 萄球菌的菌落较小， 称为卫星现象种环
• 1.要充分灭菌接种环，以免污染其 标本 。
• 2.要适当冷却再取标本，以免带不 出标本中的菌种。
取标本
• 1.蘸取标本时应适量，以免标 本太少漏检。 • 2.液体标本，如尿液，应注意 混匀。
接种
1.细菌的接种方法有很多，如平板划线
法、斜面接种法、穿刺接种法，等等。 但我们用的最多的是： ★平板划线法—意义
＋
B群
Opt实验
杆菌肽实验
11
葡萄球菌与链球菌的鉴别：
• 1.涂片—涂片革兰染色，葡萄球菌呈葡萄串 样，链球菌呈链状。 • 2．M-H试验—当染片不能区别时，接种到 M-H平板，长成菌落之后，可挑单个菌落 做触酶试验，+是葡萄球菌，－是链球菌。
肠球菌
肠球菌属特点：Ｇ+，成圆球形或椭圆形，单 个，成对，或短链，均可。 在血平板上可形成灰白色不透明表面光滑， 0.5~1.0mm大小的菌落，可有溶血现象。
根据在血平板上溶血分为以下三种：
甲型（α 型）溶血性链球菌，又称草绿色 链球菌，菌落周围有草绿色溶血环，致病力弱， 是条件致病菌。 乙型（β 型）溶血性链球菌，产生强烈的 溶血毒素，在血平板上可使菌落周围出现2～ 4mm的无色透明溶血环。 丙型（r-）链球菌，菌落周围无溶血环，又 叫不溶血性链球菌，通常不致病。
迁徙生长
嗜麦芽假单胞菌
菌落特点： G-杆菌，细长略 弯曲。不透明， 灰黄色菌落，在 血平板上可产生 氨味。本菌氧化 酶阴性，与大多 数假单胞菌不同。
铜绿假单胞菌
在普通琼脂培养基 上能产生水溶性绿 色素，使整个培养 基变为绿色 菌落灰绿色、半透 明、大而扁平、表 面湿润、边缘不齐； 有金属光泽；有生 姜样芳香气味；菌 落周围有宽大的兰 绿色透明溶血环。 铜绿假单胞菌
指把混杂在一起的微生物，用接种环在平板 培养基表面，通过分区划线，稀释得到较多 的独立分布的单个菌落，即将样本在固体培 养基表面多次做由点到线稀释而达到分纯的 目的。
一区：所占区域大约是平板面 积的 ★ 1/5~1/4 二区：由一区向 二区带出三四条 平行线
三区：由二区引出三四次，但 三区面积最大
表葡特点
1. 正常存在于人体皮肤、黏膜表面，多
见于院内感染，如体内异物留置，静 脉导管等 血浆凝固酶，阴性 3. 2. 表葡形态同金葡相似，但是为白色、 3.扁平菌落，无溶血环
链球菌
常见的链球菌主要有化脓性链球菌、草绿 色链球菌、肺炎链球菌 。 根据抗原结构不同可以把链球菌分为A、 B、C、D等二十个群，但对人类有致病性的 大多数属于A群，少量属于B群。
以粪肠球菌和屎肠球菌为常见：
阿拉伯糖 屎肠球菌 阳性 粪肠球菌 阴性
山梨醇 阴性 阳性
阴性杆菌
• 大肠杆菌：G-杆
菌，有鞭毛、菌毛， 无芽胞。菌落 2~3mm,圆形凸起， 灰白湿润，光滑半 透明，边缘整齐。 某些菌落可产生有 透明溶血环。
鲍曼不动杆菌
菌落特点： 圆形、凸起光滑、边 缘整齐不透明、灰白 色 有粘性的菌落 多数菌落不溶血 在中国兰上为粉红色 菌落
常见细菌的鉴别及其特点
阳性球菌
• 葡萄球菌---金黄色葡萄球菌
金葡特点
1. 是人类化脓性感染最常见的病原菌， 可以引起局部感染，也可以引起全身感 染。 2. 血浆凝固酶，阳性。 3. 血平板上呈黄色菌落，大而凸起，表 面光滑，有β溶血环。 4. G+阳性球菌，葡萄状排列，无芽孢，无 荚膜。
• 葡萄球菌---表面葡萄球菌
肺炎克雷伯杆菌
菌落特点：
较大菌落、凸 起、灰白色黏 液型、 相邻菌落容易 发生融合 可挑出长丝状 细丝
变形杆菌
菌落特点：
G-，两边钝圆，有明显 的多形性，呈球形或丝 状，无芽胞无荚膜，有 鞭毛，运动活泼。普通 变形杆菌和奇异变形杆 菌的大多数菌株呈迁徙 扩散生长，迅速弥漫。 波纹状薄膜布满整个培 养基表面。
• CO2在细菌培养中 的意义
在细菌室的培养箱上有一个CO2的 开关，为什么要用CO2呢？
• 1有些细菌在初次分离培养时，需要5﹪-10﹪ 的CO2。因为细菌在生长过程中能够分解培养 基中的某些含氮物质产生氮，对该菌有杀灭作 用，而CO2能中和细菌产生的氮，以减少对细 菌的毒性。如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、牛 布鲁菌等。 • 2.为细菌提供碳源，促进细菌的生长。如肺炎 链球菌，草绿色链球菌。
肺炎链球菌
菌落特点：在血平板上
0.5～1.5mm,灰白色半透 明，表面光滑，扁平， 周围环绕草绿色溶血环， 培养放置24h以上的菌落， 还会因为产生自溶酶的 作用，而致菌落中央塌 陷而边缘隆起，呈脐窝 状。
肺炎链球菌、Ａ群、Ｂ群的区分：
Ｏpt试验
＋ －
抑菌环>14, 鉴定为肺链
杆菌肽试验
＋ －
Ａ群 CAMP试验