免疫组化染色机种类介绍
手工免疫组化法与自动免疫组化染色机方法评估
手工免疫组化法与自动免疫组化染色机方法评估
王秋苹
中日友好医院病理科
免疫组织化学染色是通过抗原修复，使组织细胞中的抗原充分暴露出来，根据抗原抗体特异性结合的原理，利用酶标二抗及底物显色系统对组织细胞内的特定抗原或抗体进行定位、定性、定量检测。
目前其染色方法有手工法和自动染色机法两大类，这里通过ＥＲ、Ｋｉ－６７、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＣＤ２０、Ｐ５０４Ｓ、ＥＭＡ抗体的染色对此两种方法进行评估。
１．材料和方法
’Ｔ＇ｌ‘＾－／．‘Ｕ＿Ｌ，Ｖ ５素复染、返幽抽Ｈ舛山
自动免疫组化机染：睁操作差异比较见君
ｂ奎●强●．痞组也相。
另外，苟考虑，起虱下，可以通仪也可有哥种程序适斥。
病理免疫组化染色机
病理免疫组化染色机病理免疫组化染色机，这可真是个不太常见但却极其重要的“家伙”。
记得有一次，我跟着医院病理科的医生们去参观学习。
一走进那间实验室，最先吸引我目光的就是那台病理免疫组化染色机。
它静静地待在角落里，看起来普普通通，可医生们却告诉我，它可是整个病理诊断过程中的得力“助手”。
这台机器的外观并不花哨，方方正正的，有点像个加大版的微波炉。
但可别小瞧了它，它的内部构造和工作原理那可复杂着呢！免疫组化染色是病理诊断中非常关键的一步。
医生们从患者身上取下的组织样本，会被送到这里进行染色处理。
就好像给这些组织“化妆”一样，让隐藏在其中的病变细胞能够清晰地显现出来。
这台机器工作的时候可认真了，它会按照设定好的程序，一步一步地进行操作。
先把样本放进去，然后加入各种试剂，再控制温度、时间等等条件。
整个过程就像是一场精心编排的舞蹈，每个动作都精准无误。
我好奇地问医生：“这机器就不会出错吗？”医生笑着说：“它也有‘发脾气’的时候，要是试剂加错了，或者样本处理不当，它可就罢工啦！”有一次，因为一个小护士在准备样本的时候不小心弄错了步骤，结果放进机器里之后，染出来的效果一塌糊涂。
大家不得不重新准备样本，重新染色，浪费了不少时间和精力。
从那以后，每次操作大家都格外小心，生怕再惹这台“宝贝机器”不高兴。
病理免疫组化染色机的出现，大大提高了病理诊断的效率和准确性。
以前，靠人工染色，不仅费时费力，还容易出现误差。
现在有了它，医生们能够更快地得出诊断结果，为患者的治疗争取更多的时间。
它就像是一位默默无闻的幕后英雄，虽然不被患者所熟知，但却在为医疗事业默默地贡献着自己的力量。
总之，病理免疫组化染色机虽然看起来其貌不扬，但在医疗领域中却发挥着不可或缺的作用。
它让病理诊断变得更加准确、高效，为患者的健康保驾护航。
相信随着科技的不断进步，这台机器也会不断升级换代，为我们带来更多的惊喜和便利！。
四种全自动免疫组化仪染色结果的比较分析
临床与实验病理学杂志 J Clio Exp Pathni 2426 Nov ；36( 1))-269 -网络出版时间：2422 - 2 - 73 13：43 网络出版地址：htt p s ：//7ks. c/di. 4eOVcms/Ve/W/34. 1473. R. 22221123. 0947.027. ht/i四种全自动免疫组化仪染色结果的比较分析高丽丽-,脱颖* 2 3,周建文2,张芬芬2,梁英杰2,朱长乐接受日期：2027 -09 -08基金项目上海市浦东新区人民医院重点学科建设(PDRYZDXK2712-61 -、浦东新区重要薄弱学科(Pwzbr2017X2)作者单位/上海市浦东新区人民医院病理科，上海202992中山大学附属第一医院病理科，广州3120803南京中医药大学附属医院病理科，南京42002作者简介:高丽丽，女，主管技师。
E-mail ： ****************朱长乐,男,主任技师,通讯作者° E-mail : zhuchatle2008@关键词：全自动免疫组化仪；Ki-67； CWponU ； CKpaw ； CD5 ；BCLA中图分类号:R 365 文献标志码:B文章编号 202) -7309(2424)1 - -1360 -47dol ：14.1 3 3 - 5/j. c/dk /cep. 2424. 1 - . 029免疫组化技术已成为临床病理诊断中常规检测手段之一，特别是在判断肿瘤组织的起源、分类以及良、恶性肿瘤的 鉴别诊断等方面发挥重要作用。
但在实际工作中，因工作环境、检测方法及个人操作差异等因素影响染色结果的准确性 和稳定性。
全自动免疫组化仪的应用对免疫组化标准化染 色起到了推动作用，可以有效解决人为因素对染色结果的影响4-「4°本实验对四种全自动免疫组化仪检测五种抗体染色的结果进行比较,优化染色流程，最终达到一致性高的检 测结果。
免疫组化染色机种类介绍
自动化免疫组化染色机种类介绍免疫组化的传统技术正在受到新的快速高敏的新技术的挑战，一方面是新试剂的推出，如SP、EPOS、Envision和CSA，另一方面是自动免疫组化染色机的问世。
免疫组化技术正进入一个新的发展阶段。
从先进国家免疫组化规范化或标准化的进程来看，自动免疫组化染色机的应用几乎贯穿始终，早在20世纪末已得到极大的普及，然而国内的自动免疫组化染色机应用则在近几年才得以发展。
浙江省肿瘤医院作为省内较早应用的少数单位之一，在自动化免疫组化染色的使用和质量控制方面获得些许经验，在此做简单的介绍交流。
自动化免疫组化染色技术是由电脑控制整个染色程序的免疫组化染色机，具有自动加抗体、自动冲洗、显色、复染及预处理等功能，有全自动和半自动、封闭型和半开放型之分。
根据不同仪器大小，每次染色20～240张切片不等，整个染色程序约需60～90min左右，它不仅可以应用于免疫组化染色，某些仪器还可应用于组织化学染色、特殊染色及原位分子杂交染色。
目前较为理想的仪器为Roche公司、Lecia公司及Thermo公司的产品等。
下面对不同机型的自动免疫组化染色机的特点分述如下。
Thermo公司的LabVision Autostainer该机型属开放式半自动系统类型，用户可任意编辑所需试剂及模板，内建试剂兼容性检测。
切片特殊染色模板可任意调整试剂量、孵育时间。
体系开放保证可适就性强，即可同时运行不同检测试剂盒和不同的染色程序及不同厂商生的的一抗。
使用单一探头，探头材料为特氟伦包被不锈钢，检测探头交叉污染残留物 <10-6 ，且分样精度>99%(总体积)。
联合使用配套的抗原修复仪，可实现脱蜡与抗原修复一步完成。
DAKO公司的 Autostainer 系LabVision Autostainer贴牌产品，配合使用DAKO的Flex检测系统可获得极为敏感的免疫组化结果。
早期的Biogenex i6000TM全自动染色仪亦属该类型产品，不同的是其加样头采用标准的Tip头加样，完全避免交叉污染的风险。
罗氏全自动免疫组化染色仪特点
罗氏全自动免疫组化染色仪特点1.高度自动化：罗氏全自动免疫组化染色仪具有高度自动化的特点，可以实现全自动的样本处理和染色过程。
仪器内置有全自动开盖、载玻片、烘干、染色和封盖装置，减少了人工操作环节，降低了错误和污染的风险。
2.多功能：该仪器可应用于不同类型的免疫染色实验，包括IHC、ISH、FISH等多种实验方法。
不同的染色方法和反应试剂可以预先设定，根据实验需要进行选择，灵活性强。
3.高效节省：罗氏全自动免疫组化染色仪能够同时处理多个样本，大大提高了实验的效率。
仪器内设置了多个样本位，可以一次性装载多个样本，减少了样本处理的时间。
同时，该仪器还具有节约试剂的特点，只需少量的试剂就可以完成染色实验，降低了实验成本。
4.精确可靠：罗氏全自动免疫组化染色仪能够精确控制染色过程的温度、时间和试剂浓度等参数，保证了实验的准确性和可靠性。
仪器内置的温度控制系统能够精确控制染色温度的稳定性，保证了染色的一致性。
同时，仪器还具有自动报警和故障检测功能，能够及时发现和解决问题，确保实验的顺利进行。
5.操作简便：罗氏全自动免疫组化染色仪采用人机界面操作，操作界面友好、直观，操作简单方便。
仪器内置有预设的染色程序和实验参数，只需选择相应的程序，输入相关参数，按下开始按钮即可开始实验。
同时，仪器还能够记录实验过程的详细信息，包括温度、时间和试剂使用量等，方便用户进行结果验证和数据分析。
6.安全可靠：罗氏全自动免疫组化染色仪在设计上重视用户的安全和实验的可靠性。
仪器内置有安全装置，如电子锁和自动切断电源等，确保仪器在实验过程中稳定运行。
同时，仪器还能够自动监测和记录实验室环境条件，如温度和湿度等，避免因环境变化对实验结果产生影响。
总结起来，罗氏全自动免疫组化染色仪具有高度自动化、多功能、高效节省、精确可靠、操作简便和安全可靠等特点。
这些特点使得该仪器成为免疫组化染色实验的理想选择，能够提高实验效率、准确性和可靠性。
徕卡全自动免疫组化染色机和试剂介绍
4.用蛋白封闭剂进行封闭处理（时间约为5分钟），后用PBS清洗玻片。
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PS1
56C6 MTB1
Y (T-细胞)
Y (所有) Y (Langerh.)
CD2
CD4 CD5 CD7 CD8
NCL-L-CD2-271
NCL-L-CD4-1F6 NCL-L-CD5-4C7 NCL-L-CD7-272 NCL-CD8-4B11
AB75
1F6 4C7 272 4B11
Y (Act T-细胞)
区域
免疫组化
检测系统及辅助试剂
范围
抗体, 单/多克隆
IHC 试剂盒, 修复酶/试剂等
原位杂交ISH
微生物/病毒 流式细胞 免疫组化 设备(VBS)
ISH mRNA探针
一些重要的产品 如： NCL-HPp 小范围的特殊产品 Bond-X, Bond-maX, PelorisTM, AutoStainer RSt
乳腺癌标记
• • • • • • ER PR Ki67 CerbB-2 P53 P63 耐药性标记 TOPO2 MGMT TS ERCC1
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ER
PR
Ki67
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诊断重要性 确定乳腺肿瘤是否为激素依赖型. 评估乳腺肿瘤内分泌治疗和预后的重要参数.
CK5 CK（34BE12,P504S) CK(AE1/AE3)
CK7 CK20 CK5/6/8/18
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罗氏全自动免疫组化染色仪特点
暂时罗氏独有的SISH技能战北京金菩嘉的FISH技能二者辨别如下：之阳早格格创做由于FISH要领中的荧光简单淬灭，死存时间短，不利于病理科存档.不相映的仪器完毕齐自动检测，对于支配人员技能央供下，荧光隐微镜代价下贵；但是技能启展较早，有较好的商场声毁.SISH与暂时应用的FISH要领对于比其截止切合率大于98％；可用仪器齐自动完毕检测；支配相对于简朴；不需特殊隐微镜；截止可少久死存；将是已去分子病理死少的沉面，暂时罗氏可提供Her2战EGFR探针，可共时战17号染色体正在共一弛片子上隐色，已去会有TOP2，MIT等百般新的探针提供给临床.FISH：荧光本位纯接，需用荧光隐微镜瞅察.SISH：银染本位纯接，可用光教隐微镜瞅察.●Benchmark XT 仪器介绍Benchmark XT病理检测系统是罗氏于2008年推出的最新式齐自动多功能的构制病理检测系统，具备以下劣势：➢使用于免疫组化战本位纯接技能免疫构制化教技能与本位纯接技能是连年去病理诊疗死少进步的检测技能；为临床真止个体化及分子靶背治疗提供有力的支援.➢具备最好检测本能，包罗以下指标：1.下敏捷度2.下特同性检测3.下宁静性4.齐液体试剂5.条形码技能6.博利的喷射荡涤7.多喷头调配器8.博利液体启盖膜技能（LCS）9博利气氛涡流混匀技能10.博利Themopad 温控技能11.检测规划百般化及本性化（为各厂家最齐齐的）12.博利的脱蜡液1.仪器不妨启展哪些新名目？会对于教科死少战临床诊疗有哪些指挥效用？仪器除了办理惯例IHC的处事，还不妨举止基果检测ISH，如鼻吐癌战Bukitt’s淋巴瘤的EBER，宫颈HPV 6战16型检测, 乳腺癌her2/new基果检测等.那些基果检测暂时对于临床的靶背治疗有指挥效用，共时正在病人癌前预测圆里有代价，值得推广.2.新的广东省免疫组化支费是几钱、银染本位纯接支费是几钱？新的广东省免疫组化支费，大概是200元安排/项；银染本位纯接支费大概是2200元安排/项.3.该设备可给医院战科室办理哪些问题？缩小免疫组化染色处事中脚工支配戴去的缺面，使支配步调尺度化，支缩真验时间，普及科室处事效用，可谦脚科室免疫组化品量统制.谦脚免疫组化需要及分子病理名脚段启展，为临床真止个体化及分子靶背药物治疗提供有力的支援.环保的试剂有益于病理技能人员身体健壮，落矮医院处理兴液的成本.Roche Benchmark XT与Leica Bond-Max对于比表。
免疫组化染色机的用途
免疫组化染色机的用途1. 简介免疫组化染色是一种常用的实验技术，用于检测和定位细胞或组织中特定蛋白质的存在和表达水平。
免疫组化染色技术结合了免疫学和组织学的原理，通过使用特异性抗体与目标蛋白质结合，并使用染色剂标记抗体，可在显微镜下可视化目标蛋白质的位置和表达强度。
免疫组化染色机是一种自动化设备，用于快速、准确地进行免疫组化染色实验。
它能够提高实验效率、减少操作时间，同时保证实验结果的一致性和可靠性。
2. 原理免疫组化染色机主要包括自动涂片仪、自动孵育仪和自动显微镜等部分。
其工作原理如下：自动涂片仪自动涂片仪是免疫组化染色机的关键部件之一。
它通过将抗体溶液均匀地涂布在载玻片上，使抗体能够与待检测的组织或细胞充分接触。
自动涂片仪具有精确的涂布控制系统，可以根据实验要求调整涂布厚度和涂布速度。
它还可以通过使用多个通道同时进行涂布，提高实验效率。
自动孵育仪自动孵育仪用于在特定的温度和湿度条件下，促进抗体与目标蛋白质的结合反应。
它可以根据实验要求设定不同的温度和时间参数，并具有快速加热和快速冷却功能，以提高实验效率。
自动孵育仪还可以自动化地进行洗涤步骤，以去除非特异性结合物和杂质。
这些洗涤步骤通常使用缓冲液、盐水和洗涤剂等溶液进行。
自动显微镜自动显微镜是免疫组化染色机中另一个重要的组成部分。
它能够对染色后的载玻片进行高分辨率成像，并通过图像处理软件对图像进行分析和定量。
自动显微镜具有高速扫描功能，可以快速获取大量的图像数据。
它还具有自动对焦、自动曝光和自动图像拼接等功能，可以提高图像质量和实验效率。
3. 应用免疫组化染色技术在医学研究、临床诊断和药物研发等领域有着广泛的应用。
免疫组化染色机的使用可以提高实验效率和准确性，加快科学研究的进程。
医学研究在医学研究中，免疫组化染色技术常用于检测和定位特定蛋白质的表达。
通过对不同样本进行免疫组化染色，可以比较不同条件下蛋白质表达的差异，进而探索其在生理和病理过程中的功能。
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自动化免疫组化染色机种类介绍
免疫组化的传统技术正在受到新的快速高敏的新技术的挑战，一方面是新试剂的推出，如SP、EPOS、Envision和CSA，另一方面是自动免疫组化染色机的问世。
免疫组化技术正进入一个新的发展阶段。
从先进国家免疫组化规范化或标准化的进程来看，自动免疫组化染色机的应用几乎贯穿始终，早在20世纪末已得到极大的普及，然而国内的自动免疫组化染色机应用则在近几年才得以发展。
浙江省肿瘤医院作为省内较早应用的少数单位之一，在自动化免疫组化染色的使用和质量控制方面获得些许经验，在此做简单的介绍交流。
自动化免疫组化染色技术是由电脑控制整个染色程序的免疫组化染色机，具有自动加抗体、自动冲洗、显色、复染及预处理等功能，有全自动和半自动、封闭型和半开放型之分。
根据不同仪器大小，每次染色20～240张切片不等，整个染色程序约需60～90min左右，它不仅可以应用于免疫组化染色，某些仪器还可应用于组织化学染色、特殊染色及原位分子杂交染色。
目前较为理想的仪器为Roche公司、Lecia公司及Thermo公司的产品等。
下面对不同机型的自动免疫组化染色机的特点分述如下。
Thermo公司的LabVision Autostainer
该机型属开放式半自动系统类型，用户可任意编辑所需试剂及模板，内建试剂兼容性
检测。
切片特殊染色模板可任意调整试剂量、孵育时间。
体系开放保证可适就性强，即可同时运行不同检测试剂盒和不同的染色程序及不同厂商生的的一抗。
使用单一探头，探头材料为特氟伦包被不锈钢，检测探头交叉污染残留物 <10-6 ，且分样精度>99%(总体积)。
联合使用配套的抗原修复仪，可实现脱蜡与抗原修复一步完成。
DAKO公司的 Autostainer 系LabVision Autostainer贴牌产品，配合使用DAKO的Flex检测系统可获得极为敏感的免疫组化结果。
早期的Biogenex i6000TM全自动染色仪亦属该类型产品，不同的是其加样头采用标准的Tip头加样，完全避免交叉污染的风险。
Lecia公司的Bond-Max
该机型属半开放式全自动系统类型，仅针对一抗完全开放，用户可以根据个人的偏好使用任何品牌的一抗。
独有的检测系统内包含专利的Compact Polymer技术（紧凑型聚合物）相比传统方法而言，信号放大作用、穿透力能力更强。
该检测系统类似于增强型的Polymer技术，可以使阳性显色密度更高，背景更清晰。
独特的Covertile专利技术在玻片表面增加一个塑料罩，为免疫反应提供一个封闭的孵育环境，防止试剂挥发，既确保样品的安全也进一步节省抗体的实用。
Covertile会轻轻将液滴铺散到玻片的规定区域，确保试剂均匀分布到组织的表面，既可防止组织的损伤，又使抗体的作用更均匀，染色结果更可靠。
尤其是独特的温控技术可实现每张切片独立温控，提供最佳的反应动力学环境。
免疫组化的所有步骤从烤片、脱蜡、抗原修复、阻断、标记一炕、标记二抗、显色直到复
染都可以由Bond-Max自动完成，真正实现全自动操作。
由于Lecia公司收购了Novocastra 试剂公司，该平台可能最优化组合两者的优点，有利于最大限度降低假阳性或假阴性以提高诊断质量。
Roche公司的Benchmark Ultra
该机型亦属半开放式全自动系统类型，该免疫组化和原位杂交染色仪由Ventana Medical Systems公司（美国亚利桑那州，Tucson）生产并提交。
该成熟的临床检测用仪器及相关试剂，已获美国FDA或欧洲CE相关认证，并于2009年获医疗设计杰出奖。
该平台需配备原厂的相关试剂，仪器和试剂同属一套系统，更加保证了结果的准确性和溯源性。
较有特色的是具有专利液体封盖膜技术（LCS），可有效防止试剂挥发，防止干片，提供稳定反应环境，保证染色均一。
并且专利空气涡流混匀技术，可保证组织全层覆盖，试剂充分混匀，避免“边缘效应”及“阶梯效应”。
类似的专利Thermopad温控技术也可实现每张切片独立温控，提供最佳的反应动力学环境。
尤为可贵的是可支持多种实验方案（IHC, ISH, SISH, IF），是目前可实现较为齐全的多样化及个性化方案的检测平台。
综上，从大多数仪器的特点来看，自动免疫组化染色机规范了免疫组化染色的操作步骤和方法，方法稳定，结果重复性较佳；部分机型由于使用了增敏试剂，提高了敏感性；
由于采用独特的抗体覆盖系统，抗原抗体反应较为均匀，反应时间相应缩短；缓冲液的均一稳定洗涤，降低了非特异性背景染色；自动控制各种抗体和试剂加样，减少了人工操作。
现代化的病理科实验室对效率、成本、效益、质量和结果重复性等方面的要求愈来愈高，解决方案就是免疫组化试剂的标准化和染色的自动化。
需要指出的是，国内往往仅局限于使用自动化免疫组化染色仪器，而非从整体上构架建立一套完整的自动化免疫组化染色网络系统。
因此，建立在自动化免疫组化染色基础上的质量控制尚显稚嫩，从病理诊断医师发出指令直至完成制片并形成反馈，实现信息流的网络化管理将是未来的方向。
再者，冰冷机器背后人的因素永远是最根本的要素。
仪器的正确使用，离不开使用者的维修与保养。
比如仪器放置环境的温度，不间断电源的配备。
使用前检查缓冲液、蒸馏水、一抗和检测系统是否足量。
严格按照程序要求清洗机器的加样系统及液流系统等等，对确保免疫组化结果的稳定性极为重要。
做好IHC并非易事，自动化也好手工操作也好，其基本的要素是一致的。
IHC所用抗体是最核心的试剂。
抗体的质量直接影响免疫组织化学的结果评估，甚至影响诊断。
因此，在选择抗体时，应严格认真选择所用抗体，应选择有良好资质的经销商和厂家的产品；应该有规范的抗体贮存方法和防污染措施。
新近购入的抗体和不同批号的抗体必须有探索最佳染色条件的预实验。
对于每一种抗体均应有阴性和阳性对照。
同时，应根据其特点确定抗原修复的方法，既保证能充分暴露所要检测的抗原，又要避免过度修复而导致假阳性结果。
在染色方法的选择上，也应该考到内源性物质(生物素、过氧化物酶、碱性磷酸酶等)的干扰。
只有在各个环节、细节都认真研究，然后以常规的形式相对固定下来，才能确保IHC的结果可靠。
也就是说，IHC的从业人员和实验室应逐渐建立认证制度。
目前的临床病理诊断已离不开免疫组织化学技术，而没有免疫组织化学技术亦很难说有现代的临床诊断病理学。
另外，随着法制观念的普及和增强，患者的法律意识和维权意
识亦不断增强，分子病理学的飞速发展也在给我们带来方便的同时，使得标准化的问题变得更为迫切。
这就要求我们的各项工作要规范化，要有严格的质量控制和高度的自动化。
相信随着自动免疫组化染色仪器及试剂成本价格的下降，必将在各大医院得到推广应用，从而推动病理科实验室现代化的进程。
（学习的目的是增长知识，提高能力，相信一分耕耘一分收获，努力就一定可以获得应有的回报）。