无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验
无菌模拟灌装试验报告
无菌模拟灌装试验报告一、试验目的本试验旨在验证无菌模拟灌装工艺的可行性，确保产品在灌装过程中不受到污染。
二、试验装置和材料1.试验装置：包括模拟灌装设备、无菌隔离操作台、培养箱等。
2.材料：试剂瓶，注射器，无菌器具，无菌培养基等。
三、试验步骤1.准备工作a.检查试验设备是否清洁完整，灌装装置是否进行过无菌处理。
b.准备所需的无菌材料和培养基，确保无菌状态。
c.对试验人员进行洗手、穿戴无菌服装等无菌操作准备。
2.模拟灌装操作a.将试剂瓶放入无菌隔离操作台中。
b.打开无菌操作台的无菌室，取出无菌注射器。
c.将无菌注射器插入模拟灌装设备中，调整灌装速度和灌装容量。
d.操作人员向试剂瓶内注射无菌培养基，确保无菌操作。
e.停止模拟灌装设备的运行。
f.将模拟灌装装置的灌装采样口取出，送入无菌培养基中进行培养。
3.培养基培养a.将采样口的培养基培养于37℃下，并定期观察培养基的生长情况。
b.观察培养基是否有细菌生长，如有则说明模拟灌装过程存在污染。
四、试验结果经过培养一定时间后，观察到培养基中出现了细菌生长。
根据菌落的数量和类型，可以判断模拟灌装过程中存在细菌污染。
五、试验分析1.可能的污染原因a.灌装设备未进行充分的无菌处理，造成细菌污染。
b.操作人员的操作技术不熟练，未能保证无菌操作的完整性。
c.无菌材料的质量不符合标准，存在细菌污染。
2.解决方案a.对灌装设备进行充分的无菌处理，确保设备的无菌性。
b.加强对操作人员的培训，提高无菌操作技术。
c.对无菌材料的供应商进行验证，确保无菌材料符合标准。
六、试验结论通过本次试验发现在模拟灌装过程中存在细菌污染的问题，但可以通过加强设备无菌处理、操作人员培训和供应商验证等措施解决。
本试验报告可作为无菌模拟灌装工艺改进的依据，以确保产品在灌装过程中不受到污染，保障产品质量和安全。
七、试验建议在进行下一次无菌模拟灌装试验时，建议加强管理控制，确保试验中的环境无菌，并提前进行试验装置的验证，以减少可能的污染风险。
无菌药品生产工艺-验证
清洗介质－水（溶解度较大物质）
－化学清洗剂、重铬酸钾硫酸液清洗，然后用注射用水冲洗，测溶液残留物。
－1～2％过氧化氢冲洗，然后再用注射用水冲洗，测内毒素
－2%NaOH清洗后，用水冲后再用2％酸冲洗，最后用注射用水冲洗，测内毒素 清洗介质－醇（溶解度小，难溶物质）
配制工艺设备与管道系统的清洁验证
运行时洁净区对灭菌机不宜有正压（难以达到高温）；关机时反之，以保持洁净度
01
02
洗涤与干热灭菌验证
工艺与设备验证确认
标准：溶液污染瓶的洗涤效率＝
01
减少量>3（对数单位） 洗涤内包材的主要目标为去除热原
02
玻璃瓶洗涤效果验证
03
工艺与设备验证确认
01
原理：使微生物氧化分解
02
除热原工艺条件较杀孢子程序苛刻
2
器械灭菌，湿热，干热灭菌
3
液体原料的除菌：0.22微米滤膜。关键在于过滤器完整性。
4
灭菌工艺确认
工艺与设备验证确认
去除方法：超滤（液体原料）、高温（大于180℃）、酸碱处理（重铬酸钾硫酸溶液等） 、注射用水洗涤（胶塞处理） 、活性炭吸附等
无菌药品细菌内毒素控制
工艺与设备验证确认
洗瓶有强排风除湿，预热段有若排风除湿，影响洁净室压差
洁净（无菌）衣的洗涤与消毒灭菌确认
液体消毒剂灭菌 －室内地面、墙面、天棚、门窗 －设备、用具、操作台、桌椅表面 －设备搬入过程的消毒
无菌1万级区域灭菌方法
01
02
卫生管理系统的验证
气体消毒剂灭菌（无菌室内空间） －甲醛气体 －石碳酸与乳酸混合气体（1：1） －戊二醛气体 －气化双氧水 －臭氧 －紫外线
培养基模拟灌装试验(07.7.7)
转入20～25℃至少培养7天。 在第三天和第七天至少观察培养基样品微 生物的生长情况一次，并且在检测期间的 最后一天至少再观察一次。
培养基模拟灌装试验（MFT）
结果的分析
对微生物污染的样品应进行鉴别试验，鉴别的内容
至少应包括菌落、细胞形态学及革兰染色特性等。 不成功（染菌）原因 （1）环境？（生产？检验？储存？） （2）设备？ （3）物料？ （4）转移过程的容器？ （5）水？ （6）检测?
培养基模拟灌装试验（MFT）
环境验证
（1）HVAC系统的微生物、尘粒验证 （2）洁净区压差验证 （3）洁净区风速验证 （4）B级背景下A级单向层流验证
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌生产设备的灭菌验证
（注意：模拟分装设备应在无菌效期内进行） （1）灭菌设备如隧道烘箱、干热灭菌柜、湿 热灭菌柜灭菌效果验证 （2）直接接触无菌药品的设备、容器、管道 灭菌效果验证 （3）除菌过滤器除菌效果验证
生产环境变更 生产工艺变更 主要设备变更 主要关键岗位生产人员变更 阳性试验变更 阳性试验变更
培养基模拟灌装试验（MFT）
无菌原料药和无菌制剂（非最终灭菌制剂） 生产出现如下情况
长期停产后复产 新生产线投产前 染菌事故复产
培养基模拟灌装试验（MFT）
六. 培养基灌装试验（MFT）样品的培养 和结果分析 样品的培养
培养基模拟灌装试验（MFT） 一、定义
MFT——Media Fill Test 英文的缩写。中文意思为： 培养基灌装试验 MFT——是用于证明无菌产品的生产过程在确定的环 境、人员、工艺、物料、设备和监控条件下，是否能 有效地防止微生物污染，保证所提供产品的无菌可靠 性的一种方法。 MFT是用一种模拟替代物质来模拟整个无菌生产过 程，在所得的模拟产品中加注培养基，再对所得的全 部培养基样品进行无菌培养。 培养基模拟试验是无菌生产工艺的验证手段，是任何 非最终无菌药品生产必须进行的一项验证。
无菌工艺验证培养基模拟灌装试验(葛均友)
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
干预举例—冷冻干燥工艺 冷冻干燥工艺
设备组装 加入胶塞 取出卡住的胶塞 取走倒下的玻瓶 手工装载到冻干机 放置热电偶
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不同区域玻瓶破碎 设备故障 更换灌装针头 灌装针头位置调整 自动称量故障 自动加塞故障
环境监测-放置和取走培养皿 操作人员进出及更衣
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
3、验证与确认 验证与确认
稳定的产品质量
性能确认及工艺验证（PQ/PV）
可靠的设备性能
运行确认（OQ）
材质与安装质量
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安装确认（IQ） 安装确认 设计确认（DQ） 设计确认
用户需求与设计
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
验证开始前的准备工作
设备设施确认
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
2010版GMP附录一 附录一：无菌制剂
培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。批量较小的 培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性 产品，培养基灌装的数量应至少等于产品的批量 培养基灌装的数量应至少等于产品的批量。培养基模拟灌装 试验的目标是零污染，应遵循以下要求 应遵循以下要求： （1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品 不得检出污染品； （2）灌装数量在5000至10000支时 支时： 有1支污染，需调查，可考虑重复试验 可考虑重复试验； 有2支污染，需调查后，进行再验证 进行再验证。 （3) 灌装数量超过10000支时： ： 有1支污染，需调查； 有2支污染，需调查后，进行再验证 进行再验证。 （4）发生任何微生物污染时， ，均应进行调查。
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国家大容量注射剂工程技术研究中心
培养基模拟灌装(小容量注射剂)无菌生产工艺验证方案
分发部门：培养基模拟灌装（小容量注射剂）无菌生产工艺验证小组一、概述厂区无菌操作生产线，按2010版GMP及其附录要求进行设计，是专用于小容量注射剂非最终灭菌产品生产使用。
某某产品因无法进行F0≥8分钟湿热灭菌，以达到SAL≤10-6，但处方可以通过微生物滞留过滤器过滤，故采用除菌过滤和无菌工艺相结合的灭菌方法。
无菌生产工艺是制药领域中最难的工艺之一，确保产品无菌是该工艺最大的难点，减少无菌工艺药品污染风险的两项重要措施为：①人员的培训 ②无菌工艺验证。
按SFDA 化学药品注射剂基本技术要求：培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作的一种系统验证，是判断无菌保证水平的关键手段。
故在正式生产前必须按某某产品生产工艺进行培养基模拟灌装验证。
1 本次验证关键生产工艺流程图2 验证原理将培养基暴露于设备、容器密封系统的表面和关键环境条件中，并模拟实际生产完成工艺操作。
对装有培养基的密闭容器进行培养以检查微生物的生长并评价结果，确定实际生产中产品污染的可能性。
对于失败的验证进行菌种分析并调查，确认并解决可能造成失败的原因后，重新进行验证。
3验证次数按2010版GMP 附录1要求因该生产线为新建厂区设施，为培养基模拟灌装试验的首次验证，故需进行连续三个批次的验证活动。
二、验证目的1通过该工艺验证活动证明新设计厂房采用既定的无菌生产工艺能保证产品的无菌要求； 2通过该工艺验证活动证明无菌操作相关人员资格，降低人员带入无菌的风险； 3通过该工艺验证活动确保生产符合现行GMP 法规要求。
三、验证范围和实施时间1本验证方案适用于厂区小容量注射剂车间无菌生产线正式投入使用前某某品种小容量注射剂无菌生产工艺培养基模拟灌装验证活动；2计划验证实施时间为2013年3月~4月连续三个批次。
四、验证小组和职责1 验证小组根据验证的内容和验证管理文件要求，成立验证小组，验证小组成员见下表，小组人员应在最终验证报告中签名确认。
无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验
13 | Nanjing, the People’s Republic of China, 16-20 November 2009
培养基灌装方案
关键因素: 培养基(3/3)
如果培养基中含有动物源性成分，可能导致朊蛋白污染。那么很重要 的是，培养基供应商能够提供证明，确认相关物质来源于没有牛海绵 状脑病（BSE-free）的国家 。
培养基灌装的原则
在无菌生产工艺中，最大的风险来源于洁净室中人员的操 作，所以操作人员必须参加培养基灌装试验。 操作人员需要什么样的资质？以及什么时候可以确认操作 人员的合格性？
在无菌灌装操作中，应进行环境监测。 是否需要额外的监测措施？
SFDA GMP 检查员高级研讨会－无菌药品生产
6 | Nanjing, the People’s Republic of China, 16-20 November 2009
SFDA GMP 检查员高级研讨会－无菌药品生产
19 | Nanjing, the People’s Republic of China, 16-20 November 2009
培养基灌装方案
关键因素: 灌装的持续时间
即使使用最精确的模型模拟实际生产运行，其他的因素也需要考虑，以确保 其合理性。 通常情况，培养基灌装的时间应该足够长，能够包括所有的必需的干扰、生 产中断，以及反应出潜在的人员疲劳，一个典型的培养基灌装可以至少是3-4 小时。 一次理想的培养基灌装应该灌装比实际产品生产时更多的数量（所有的批次 均应大于5000个单位）。对于非常大的批量或较长的生产过程，通常使用一 些空白样品（空的或者灌水）以维持模拟试验的动态环境。这些技术可以应 用于持续多个工作日的工艺验证，用于验证可以批准的最长的生产周期。
无菌生产工艺验证—培养基模拟灌装试验浅析
2.2 多产品简化试验思路
一条灌装线生产多个产品时，根据下列因素可被划分为不同的类型组：
⑴ 灌装工艺。⑵ 不同的容器、密封方式。由此选出两个或更多个下列方面能 涵盖所有其他的相关产品：⑴ 容器的大小、开放或密封的设计。⑵ 灌装线的 速度和干预；⑶ 涉及的操作人员数量。⑷ 储存容器的形式、转移的方式等。 自包装容器代表性选择方面，对于多规格、容器形状不同的灌装生产线，
6. 培养基配制
一般将大豆胰蛋白胨培养基（TSB）配制成3%的溶液，并用湿热蒸 汽灭菌（121℃、15分钟），冷却后的培养基用已清洁灭菌的园筒过滤
器（装入已灭菌的0.22um滤芯）过滤于已清洁灭菌的储罐中（过滤过
程应遵守无菌操作）。 培养基在灌装前保存在储罐中的时间也应挑战至少最长工艺允许 时间。所有在这一段可能进行的操作，如取样、过滤器的完整性试验 等也按实际模拟。 配制用于验证分装生产线的培养基溶液体积应满足灌装所设定的 灌装瓶数需要的量。
应对不同大小、形状的容器进行评估；多数可选用最大敞口直径的容器和最 低生产线速度；有时也应选择容易倒落的小型容器用来代表最差情况，因可 能需要更多的人工干预；当不能兼顾时，应考虑选取有代表性的几种容器进 行培养基模拟灌装试验。
2.3 最差条件设计
2.3.1储存时间的设计
灌装设备、部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌装前能够放置
9.15
10.51 11.84 13.15 14.43
15.7
16.96
10.培养基灌装试验的合格标准
10.培养基灌装试验的合格标准
10.3 合格标准
目前，国际上认可的培养基灌装试验合格标准（允许最大污染率）如下表：
批灌装数量 允许阳性数量 2996～4742 0 4743～6294 1 6295～7751 2 7752～9151 3
无菌生产工艺验证07.26
34
北京齐力佳
最差条件设计
如何确定在模拟试验中进行的干预操作
关键干预必须在试验中模拟 非关键干预可以分类，以一种最差情况代表同区域内的其他干预
35
北京齐力佳
最差条件设计
干预次数的确定
确定10批中灌装单元的数量 计算出正常生产与模拟灌装数量的比例 确定在10批中每一区域内的干预的平均执行次数 使用同一比例加上安全限度计算出模拟试验中的干预次数
培养基模拟试验的初始验证每班次需要连续进行3 次合格 试验。此模拟试验应在规定的时间间隔以及空调净化系统、设 备、生产工艺及人员有重大的变更后重复进行。培养基模拟试
验通常按生产工艺每班次半年进行1 次，每次至少一批。
---摘自新版GMP
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北京齐力佳
模拟试验的次数和频次
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
新建的无菌工艺生产线，必须经至少连续三批合格的培养基灌装 试验后方可证明被验证工艺的可靠性；
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北京齐力佳
灌装体积和速度
灌装体积
为了保证有足够数量的培养基与容器的内表面充分接触，便 于观察到微生物的生长状况，在灌装培养基时，每个容器的 灌装体积不得少于其总容积的三分之一，（可以将容器单元 倒转或彻底旋转混匀 ）。
同样，灌装体积也不宜过大，保证容器内有足够的氧气支持 微生物生长。
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北京齐力佳
试验的批量
批量设计原则
培养基灌装容器的数量应足以保证评价的有效性。对批量 比较小的产品而言，培养基灌装的数量应至少等于产品的 批量。 ---摘自新版GMP
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无菌工艺验证-培养基模拟灌装试验培养基灌装试验方案LuiaStoppa
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
Nanjing,thePeople’RepublicofChina–16-20November2022培训目的评估无菌生产模拟试验(培养基灌装或肉汤灌装)
了解在培养基灌装试验方案设计过程中的关键点，以符合法规要求学会如何对失败进行评估，以及可能带来的后果在团队中进行讨论
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2|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培训目的
无菌生产工艺:
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3|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装的原则为什么无菌工艺的验证必须符合制药行业的规范？“无菌药品”的含义是“没有活体微生物”在无菌检测过程中，实际上并没有对每个产品进行检测，所以应采取所有努力减少污染的风险(洁净厂房、HVAC、压差、清洗程序、监测计划)
尽管采取这些措施，但污染永远是一个潜在的风险，因为无菌工艺操作是在一个受控但是非灭菌的环境中进行的，并且样品取样数量太小，所以只有严重污染才可能被发现。
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4|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
培养基灌装的原则制药相关法规:-法规：FDA“,无菌生产工艺生产无菌药品的行业指南–cGMP”-EUGMPPartI附录1–-PIC/SPI007-2“无菌生产工艺验证指南”虽然培养基灌装试验必须复制无菌生产条件，但是模拟试验与药品实际生产过程采取完全相同的方式是不可能的。
什么培养基？灌装多少数量？多长时间？
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5|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
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6|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装的原则通常情况下，应该包括产品实际操作过程中可能发生的“最差条件”
必须考虑可能采取那些干预措施
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7|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022模拟试验:液体无菌灌装生产线压盖机
压塞机
清洗设备隧道烘箱无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
8|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022灌装设备
模拟试验:培养基
灌装方案需要考虑的关键因素:试验的数量和频率培养基(产品的替代品)灌装的数量容器(玻璃瓶)体积灌装体积生产速度(或灌装速度)灌装过程的持续时间工作班次监测措施干预措施–常规的和非常规的培养方法可接受
标准无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
9|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022模拟试验:培养基灌装方案
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10|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:试验的次数和频率培养基模拟试验的初始
验证，至少需要成功的连续进行3次独立的模拟试验(建议在不同的工作
日进行试验)。
首次验证后，培养基模拟试验通常每年进行2次。
当生产
线发生变更，并且经过评估可能对无菌生产工艺有潜在危险时，应当进行
额外的培养基灌装试验。
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11|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:培养基(1/3)培养基必须适应广谱微生物的
生长，包括需氧菌、酵母菌和霉菌(非选择性培养基)。
推荐使用大豆消化
酪素琼脂培养基(SCD),以及大豆胰蛋白胨肉汤(TSB).如果产品在缺氧条件、通常在氮气保护下灌装时，需要使用厌氧培养基:液体硫乙醇酸盐培养基(FTM).
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12|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:培养基(2/3)培养基必须适应微生物的生长(促生长试验)。
被试验的微生物可以从药典(美国、欧盟、日本)中选择。
另外推荐使用1~2种最常见的环境分离菌。
通常情况，在培养结束后，一
些玻璃瓶(从生产开始、中间、结束时取样)进行微生物接种，接种量
<100CFU,分别培养3天(细菌)和5天(酵母菌和霉菌)。
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
13|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
14|Nanjing,thePeople’Republico fChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:灌装数量灌
装的数量应该能够真实的反应批量；但允许根据需要，采取最低灌装数量，前提是应足以反应操作员工疲劳时对产品质量潜在的影响，并且足以体现了尽可能发生的干预措施。
一些法规中建议应该根据批量确定灌装的数量。
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
15|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:容器体积(1/2)应该考虑到灌装容器的极端尺寸。
最大的容器(通常由于充填体积较大而导致最小的充填速度)通常开口较大，所以从环境中微生物侵入的潜在风险是最大的。
最小的容器(通常由于充填体积较小而导致最大的充填速度)体现了最大的操作难度；小的容器更容易破碎，稳定性差，在设备中更容易破裂或堵塞。
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
16|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022培养基灌装方案关键因素:容器体积(2/2)在最初的验证中，可以二次选用最大的容器，第三次选用最小的容器。
在日常的评估中，其它规格尺寸的容器也应该包括在验证计划中。
不能使用琥珀色的容器，而应该使用透明的容器，保证可以目视检测到微生物的生长。
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
17|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
培养基灌装方案关键因素:灌装体积培养基灌装体积不需要与现实中常规的灌装体积一致。
应确定足够的灌装体积，保证可以充分接触到容器密封部位的表面(当它倒置和旋转时),并且足以目视检测到微生物在培养后的生长情况。
较小的容器不能灌装的太满，因为容器上部的空间中应保持足够的空气，以支持需氧微生物的生长(通常应该保留25%的空间)。
无菌药品生产-SFDAGMP检查员高级研讨会
18|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-20November2022
培养基灌装方案关键因素:生产线(或灌装)速度培养基灌装的速度，应符合实际生产的灌装速度范围。
如果超过了限度，应该进行评估。
每次模拟试验中确定的速度应该是符合要求的。
较高的生产速度，可以适用于生产过程中经常受到干扰或手工操作较多的生产工艺。
较低的生产速度，可以应用于在无菌区域中无菌部件长时间暴露的生产工艺。
在灌装生产线的起始验证中，一次可以选用最低速度，另外二次可以选用最高速度。
在生产线的日常评估中，模拟试验的速度应该进行变换。
无菌药品生产-SFDAGMP 检查员高级研讨会19|Nanjing,thePeople’RepublicofChina,16-
20November2022。